脑膜瘤FHTT基因杂合性丢失的研究

目的 研究人脑脑膜瘤与FHTT基因的关系.方法 有目的地选取FHIT基因上D3S1234、D3S1300、D3S4103三个微卫星多态标记位点,采用PCR扩增、凝胶电泳、银染等方法,检测脑膜瘤FHIT基因杂合性丢失情况.结果 27例标本中,信息个体26例,杂合性丢失合计频率为26.9%.结论 脑膜瘤中FHIT基因杂合性丢失是易发事件,支持FHIT基因是重要候选抑癌基因的观点.     

FHIT基因与脊索瘤的相关性研究

目的：探讨脆性组氨酸三联体（fragile histidine triad,FHIT)基因在脊索瘤发生中的作用。方法：选择FHIT基因内3个微卫星移态标记对18例脊索瘤进行杂合性丢失（loss of hetorozygosity,LOH)和微卫星不稳定性分析（microsatellite instability,MI)。结果：在18例脊索瘤标本中，LOH的总发生率为44．4％，其中在D3S 1300，D3S4130和D3S1234的LOH发生率为37．5％、26．7％、23．1％。MI总发生主为33．3％，3个位点的MI发生率分别为25％、13．3％、15．4％，微卫星多态分析表明，FHIT基因在脊索瘤中既存在杂合性丢失，又存在微卫星不稳定现象。结论：FHIT基因参与了脊索瘤的发生，可能是脊索瘤候选抑癌基因之一。     

子宫内膜癌患者FHIT、SLIT2、EDNRB基因杂合性丢失

目的：探讨子宫内膜癌患者FHIT、SLIT2、EDNRB基因3个微卫星位点D3S1287、 D4S1593、D13S160杂合性丢失（loss of heterozygosity,LOH）,以确定侯选的抑癌基因。方法：应用PCR-变性 PAGE-银染方法分别对35例子宫内膜癌患者癌组织及相对应的正常子宫内膜组织在FHIT、SLIT2、EDNRB基因3个微卫星位点D3S1287、D4S1593、D13S160 行LOH检测。结果：LOH总检出率为54.3%,D3S1287、D4S1593、D13S160位点分别为34.5%、20.5%、19.3%。FHIT、SLIT2、EDNRB基因的3个微卫星位点发生LOH率与子宫内膜癌手术-病理分期无明显相关性。结论：子宫内膜癌患者肿瘤组织在FHIT、SLIT2、及EDNRB基因的微卫星位点D3S1287、D4S1593、D13S160 均有LOH。FHIT、SLIT2及EDNRB基因为抑癌基因,其失活可能与子宫内膜癌的发生有关。     

FHIT基因与宫颈癌的相关性研究

目的：探讨FHIT基因在宫颈癌发生中的作用及与宫颈癌的临床分期和组织分化程度间的关系。方法：选择FHIT基因的2个微卫星多态标记对42例宫颈癌进行杂合性丢失（LOH）和微卫星不稳定性（MI）分析。结果：在D3S1234和D3S1300座位上，LOH频率分别为52．5％（21／40），70．8％（17／24），MI频率分别为22．5％（9／40）、20．83％（5／24）。FHIT基因改变与宫颈癌的临床分期和组织分化程度无关。结论：FHIT基因参与了宫颈癌的发生。对于宫颈癌的诊断和筛查可能具有实用价值。     

FHIT基因与宫颈癌的相关性研究

目的　探讨 FHIT基因在宫颈癌发生中的作用及与宫颈癌的临床分期和组织分化程度间的关系。方法　选择 FHIT基因的 2个微卫星多态标记对 4 2例宫颈癌进行杂合性丢失 (L OH)和微卫星不稳定性 (MI)分析。结果　在 D3S12 34和 D3S130 0座位上 ,L OH频率分别为 5 2 .5 % (2 1/ 4 0 )、70 .8% (17/ 2 4 ) ,MI频率分别为2 2 .5 % (9/ 4 0 )、2 0 .83% (5 / 2 4 )。FHIT基因改变与宫颈癌的临床分期和组织分化程度无关。结论　 FHIT基因参与了宫颈癌的发生。对于宫颈癌的诊断和筛查可能具有实用价值     

FHIT基因在食管鳞癌中表达的变化及机制

目的探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）基因在食管鳞癌中表达的变化及可能机制。方法用微卫星分析方法观察了80例食管鳞癌中FHIT基因的缺失情况，并用RT—PCR方法分析了其中20例食管鳞癌FHITmRNA表达的变化。用免疫组化SABC法分析了另外65例食管鳞癌及对应癌旁组织FHIT蛋白表达。结果FHIT基因旁，侧微卫星杂合性丢失（LOH）在食管鳞癌频发；750o的病例FHIT mRNA表达下调且多发生于LOH的病例，但LOH发生与mRNA表达下调并不完全一致。FHIT蛋白在食管鳞癌和癌旁组织的表达并无显著差异。结论食管鳞癌中FHIT基因等位丢失是食管鳞癌FHIT基因表达失调的主要机制，FHIT基因在基因组水平和蛋白水平的改变并非完全一致。     

鼻咽癌组织RASSF1A基因的表达

目的探讨RASSF1A基因在鼻咽癌发病过程中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链技术在4种鼻咽癌细胞株、32例鼻咽癌组织和16例正常鼻咽部组织中检测RASSF1A基因的表达,并分析鼻咽癌组织在3p21.3 D3S4604微卫星多态性位点的等位基因杂合性丢失状况。结果RASSF1A基因在4种鼻咽癌细胞株中低表达,32例鼻咽癌组织的RASSF1A基因表达显著低于16例正常鼻咽部组织(P=0.001);43.75%(14/32)的鼻咽癌组织在3p21.3 D3S4604位点发生了杂合性丢失。鼻咽癌RASSF1A基因表达与性别、年龄、颈部淋巴结转移、TNM临床分期、D3S4604位点杂合性丢失和血清EB病毒VCA/IgA抗体滴度无显著相关性,但伴远处转移的鼻咽癌组织的RASSF1A表达显著低于无远处转移的鼻咽癌(P=0.014)。结论RASSF1A基因的表达下调可能是鼻咽癌发病过程中的晚期事件,3p21区域可能还存在与鼻咽癌发生密切相关的抑瘤基因。     

鼻咽癌组织RASSFIA基因的表达

目的 探讨RASSFIA基因在鼻咽癌发病过程中的作用。方法 采用逆转录—聚合酶链技术在4种鼻咽癌细胞株、32例鼻咽癌组织和16例正常鼻咽部组织中检测RASSFIA基因的表达。并分析鼻咽癌组织在3p21.3D3S4604徽卫星多态性位点的等位基因杂合性丢失状况。结果 RASSFIA基因在4种鼻咽癌细胞株中低表达，32例鼻咽癌组织的RASSFIA基因表达显著低于16例正常鼻咽部组织(P=0．001)；43．75％(14／32)的鼻咽癌组织在3p21．3D3S4604位点发生了杂合性丢失。鼻咽癌RASSF1A基因表达与性别、年龄、颈部淋巴结转移、TNM临缶床分期、D3S4604位点杂合性丢失和血清EB病毒VCA／IgA抗体滴度无显著相关性，但伴远处转移的鼻咽癌组织的RASSFIA表达显著低于无远处转移的鼻咽癌(P=0．014)。结论 RASSFIA基因的表达下调可能是鼻咽癌发病过程中的晚期事件，3p21区域可能还存在与鼻咽癌发生密切相关的抑瘤基因。     

FHIT基因的MSI、LOH及甲基化修饰与胃癌关系的研究

目的检测胃癌脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的微卫星不稳定(MSI)、杂合性缺失(LOH)以及甲基化状态,探讨FHIT基因在胃癌发生、发展中的作用。方法采用D3S1300作为微卫星标记,应用聚合酶链反应(PCR)以及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)检测胃癌组织和正常胃黏膜FHIT基因MSI和LOH;应用甲基化特异性PCR(MSP)检测胃癌组织和正常胃黏膜FHIT基因的甲基化状态。结果胃癌组织中FHIT基因D3S1300位点MSI和LOH发生率分别为23.7%和28.8%,MSI和LOH存在明显正相关(P<0.05,r=0.76);胃癌组织中FHIT基因甲基化阳性率为51.4%,FHIT基因MSI、LOH与甲基化均与胃癌患者的年龄、性别、Lauren分型、Borrmann分型、淋巴结转移以及TNM分期无关(P>0.05),但LOH与浸润程度有关(P<0.05),胃癌FHIT基因甲基化与MSI和LOH均不存在明显正相关(P>0.05,r=0.12和0.13)。结论 FHIT基因MSI、LOH及甲基化修饰在胃癌发生、发展中均起重要作用。     

食管鳞状细胞癌5q23．1-q23．2杂合性丢失的研究

【目的】分析食管癌5号染色体长臂上5q23．1-q23．2区域的杂合性丢失，为食管癌候选抑癌基因定位缩小范围。【方法】用PCR银染技术，检测50例配对食管鳞状细胞癌标本6个微卫星标记的杂合性丢失情况。【结果】在检测的微卫星标记中，D5S471和D5S592杂合性丢失率高达47％和41％。【结论】D5S471和D5S592附近可能存在食管癌的候选抑癌基因。     

肺增生病变FHIT基因微卫星不稳定和杂合性丢失的研究

目的检测FHIT基因在肺癌支气管上皮增生病变和肺炎支气管上皮增生病变是否存在差异,试图确定发生“真正癌变”的癌前病变,为肺癌前病变的风险性预测提供实验依据。方法采用聚合酶链反应银染技术结合二核苷酸(CA)n重复序列出现多态性,评价杂合性丢失(LOH)和微卫星不稳定(MI)。分析82例肺癌增生病变和57例肺炎增生病变的FHIT基因微卫星位点的LOH和MI现象。结果联合检测微卫星位点D3S1234、D3S1300、D3S1481、D3S1313的FHIT基因阳性率(LOH和MI总发生率),在肺癌组的各级增生病变均明显大于肺炎组的相应各级增生病变,有显著性差异(P<0.01)。肺癌组基底细胞增生、鳞状上皮化生、轻-中度不典型增生FHIT阳性率分别为33%(4/12) 、54%(7/13)、70%(7/10);肺炎组相应增生病变分别为7%(1/14)、12%(2/16)、18%(2/11)。在肺癌组,4个位点的FHIT阳性率比较,分别为41%(34/82)、37%(30/82)、38%(31/82)、34(28/82),无显著性差异(P>0.05)。4个微卫星位点在肺癌增生组的LOH发生率均明显大于MI发生率(P<0.01)。结论FHIT基因的LOH现象普遍存在于癌旁支气管上皮各级增生病变中,明显高于肺炎支气管上皮增生病变,表明肺癌前病变确实存在差异。此结果为FHIT基因作为判断“真正癌前病变”的检测指标提供了实验依据。     

食管鳞癌MLH1基因杂合性丢失分析

目的 hMLH1是位于3p23-21．3上的一个DNA错配修复基因，有研究认为MLH1的缺失较为多见，本研究旨在了解食管鳞癌中MLH1基因杂合性丢失情况。方法 用微卫星分析法检测食管鳞癌中MLH1基因丢失情况。结果 66．7％的受检食管鳞癌在MLH1基因内STS标志D3S1611位点表现为杂合性丢失。结论 食管鳞癌中MLH1存在较高的等位基因丢失，MLH1可能是食管鳞癌基因改变的靶点。     

血浆游离FHIT基因杂合性缺失在非小细胞肺癌中的临床意义

目的 探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血浆及组织中杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)的特点,检测血浆游离FHIT基因的LOH在NSCLC研究中的临床意义.方法 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-银染法检测69例NSCLC患者(手术前、后)血浆和新鲜癌组织标本中FHIT基因的3个微卫星位点D3S1300、D3S1234、D3S4103的LOH,并进行比较;15例肺良性病变患者静脉血、组织标本及5例健康志愿者的静脉血标本作对照.对应的组织病理切片进行FHIT蛋白的免疫组化染色.结果 NSCLC患者术前血浆和组织FHIT基因的3个微卫星位点上LOH阳性率分别为53.6%(37/69例)、72.5%(50/69例),其共同检出率达74.0%(37/50例).肺良性病变及健康人血浆中未检出该基因突变,两组相比差异有显著性意义(P<0.05).不同病理类型的肺癌患者手术前后血浆FHIT基因LOH之间差异无统计学意义(P＞0.05);有淋巴结转移的肺癌患者与无淋巴结转移者相比,血浆更易检测到FHIT基因的LOH,差异有统计学意义(P<0.05);不同临床分期患者术前血浆FHIT基因LOH之间差异无统计学意义(P＞0.05),而术后同一患者血浆FHIT基因的LOH的检出率差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化染色发现在78.3%(54/69)NSCLC患者肿瘤组织中检测出FHIT蛋白表达缺失,而在FHIT蛋白表达缺失的54例肿瘤组织中,有39例患者血浆FHIT基因存在1个或2个上述微卫星位点的LOH.结论 NSCLC患者血浆与肿瘤组织中FHIT基因LOH有较高的一致性变化;LOH可能是NSCLC肿瘤组织FHIT蛋白表达下调的重要机制之一,血浆FHIT基因的LOH检测对于评估肺癌的预后、转移具有潜在的价值和广阔的应用前景.     

中国南方食管鳞癌D5S107和D5S408杂合性丢失与微卫星不稳定性

【目的】研究中国南方食管癌高发地区（潮汕地区）食管鳞癌5号染色体长臂（5q）部分微卫星标记的杂合性丢失（LOH）和微卫星不稳定（MSI），为食管鳞癌相关抑癌基因的定位提供依据。【方法】采用PCR银染技术，检测58例配对食管鳞状细胞癌标本多个微卫星标记（D5S107；SHGS31088；D5S816；D5S625和D5S408）的杂合性丢失和微卫星不稳定。【结果】SHGS31088，D5S816和D5S625杂合性丢失率和微卫星不稳定都较低：而D5S107和D5S408的杂合性丢失率分别为48．5％和34．3％，微卫星不稳定率分别为9．1％和5．7％。【结论】中国南方食管鳞癌D5S107和D5S408的杂合性丢失率较高，提示在D5S107和D5S408附近可能存在食管癌相关基因。5q区域5个微卫星标记的微卫星不稳定发生率都较低，提示微卫星不稳定在中国南方食管癌发生过程中可能不占主导地位。     

胃癌组织中琥珀酸脱氢酶基因周围微卫星杂合性丢失的研究

①目的研究胃癌组织中由核DNA编码的琥珀酸脱氢酶（SDHD）基因位点的改变情况。②方法选取与SDHD基因紧密连锁的3个微卫星D11S5017、D11S1347和D11S1328,通过PCR—SSLP的方法检测了35例新鲜胃癌组织中3个微卫星位点的杂合性丢失（LOH）情况。③结果胃癌组织中,D11S5017位点LOH检出率为12．0％,D11S1347位点LOH检出率为10.0％,D11S1328位点LOH检出率为14．3％。3个位点LOH总检出率为19．4％。④结论在胃癌组织中存在着在SDHD基因LOH的现象,说明了它可能是胃癌中的一种特殊类型的肿瘤抑制因子。     

中国南方食管鳞癌D5S107和D5S408杂合性丢失与微卫星不稳定性

 【目的】研究中国南方食管癌高发地区（潮汕地区）食管鳞癌5号染色体长臂（5q）部分微卫星标记的杂合性丢失（LOH）和微卫星不稳定（MSI），为食管鳞癌相关抑癌基因的定位提供依据。【方法】采用PCR银染技术，检测58例配对食管鳞状细胞癌标本多个微卫星标记（D5S107；SHGS31088；D5S816；D5S625和D5S408）的杂合性丢失和微卫星不稳定。【结果】SHGS31088，D5S816和D5S625杂合性丢失率和微卫星不稳定都较低；而D5S107和D5S408的杂合性丢失率分别为48.5%和34.3％，微卫星不稳定率分别为9.1％和5.7％。【结论】中国南方食管鳞癌D5S107和D5S408的杂合性丢失率较高，提示在D5S107和D5S408附近可能存在食管癌相关基因。5q区域5个微卫星标记的微卫星不稳定发生率都较低，提示微卫星不稳定在中国南方食管癌发生过程中可能不占主导地位。     

食管鳞状细胞癌 5q23.1-q23.2杂合性丢失的研究

[目的] 分析食管癌 5号染色体长臂上 5q23.1 q23.2区域的杂合性丢失,为食管癌候选抑癌基因定位缩小范围.[方法] 用 PCR银染技术,检测 50例配对食管鳞状细胞癌标本 6个微卫星标记的杂合性丢失情况.[结果] 在检测的微卫星标记中,D5S471和 D5S592杂合性丢失率高达 47%和 41%.[结论] D5S471和 D5S592附近可能存在食管癌的候选抑癌基因.     

FHIT基因杂合性丢失及微卫星不稳定性与宫颈癌发生发展的关系

目的探讨FHIT基因杂合性丢失(LOH)及微卫星不稳定性(MI)在宫颈癌发生发展中的作用。方法选择FHIT基因的两个微卫星多态标记对60例浸润性宫颈癌及35例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织进行LOH和MI检测。结果在D3S1234和D3S1300座位上,浸润性宫颈癌的LOH发生率分别为45.0%(27/60)、38.3%(23/60),MI频率分别为18.3%(11/60)、11.7%(7/60)。CIN的LOH频率分别为42.9%(15/35)、37.1%(13/35)。MI频率分别为11.4%(4/35)、8.6%(3/35)。宫颈癌及CIN在两个位点的LOH和MI无统计学差异(P>0.05);两位点的LOH阳性率在宫颈癌组织高中分化与低分化之间有统计学差异(P<0.05);双座位的LOH及MI在宫颈癌有无淋巴结转移间有统计学差异(P<0.05);高级别CIN(CIN及原位癌)患者的LOH和MI的发生率高于低级别CIN(CIN、)。结论FHIT基因的改变是CIN发生过程中的较晚期事件;FHIT基因的LOH对于宫颈癌的筛查、早期诊断及判断预后可能具有临床实用价值。     

食管癌HSD17B4基因表达及其杂合性丢失分析

目的探讨HSD17B4基因在食管癌中的变化及其可能的意义.方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),分析HSD17B4基因mRNA表达状态,同时运用PCR银染技术,检测HSD17B4基因内微卫星标记D5S1384在食管癌组织基因组DNA水平的缺失.结果40例食管癌及其癌旁组织标本微卫星标记D5S1384分析发现,26例为信息个体,12例肿瘤组织存在D5S1384的杂合性丢失,丢失率为46.2%.HSD17B4基因mRNA表达下调的比例为62.5%(25/40).结论HSD17B4可能是5q23区域内的候选食管癌抑制基因.     

人肝癌p57^kip2基因表达缺失与杂合性缺失的关系研究

目的通过对p57^kip2 mRNA表达水平下降的人体肝癌进行杂合性缺失研究,探讨肝癌发生有关基因调控的分子机制．方法对人肝细胞肝癌及癌周肝组织各30例,正常肝组织对照20例,共80例标本,采用原位杂交检测p57^kip2 mRNA的表达,并运用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法和基因分型对30例肝癌组织及其癌周肝硬化组织p57^kip2基因所在染色体区域的10个微卫星位点（D11S1397,D11S1318,D11S4046,D11S922,TH01,D11S2359,D11S1760,D11S1338,D11S569和D11S1397）进行杂合性缺失检测,同时分析了p57^kip2 mRNA表达与杂合性缺失之间的关系．结果原位分子杂交检测正常肝组织未见p57^kip2 mRNA表达,癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率均为26．7％（8/30）．杂合性缺失检测结果显示在10个微卫星位点中,仅有TH01（7／30,23．3％）、D11S2359（5／30,16．6％）和D11S569（1／30,3．3％）3个位点有杂合性缺失;p57^kip2 mRNA和蛋白表达缺失主要与TH01位点相关．结论p57^kip2 mRNA和蛋白表达异常提示其可能在原发性肝癌的发生发展中起重要作用．与p57^kip2基因同一区域的10个微卫星位点不是p57^kip2基因LOH和MSI的频发位点,但p57^kip2 mRNA表达缺失与TH01位点的杂合性缺失相关．