华蟾素对MG-63骨肉瘤细胞杀伤作用的实验研究

目的探讨华蟾素（cinobufagin）对人骨肉瘤细胞株MG-63的促凋亡作用。方法采用MTT比色法、透射电镜观察、原位末端标记tunnel法、流式细胞仪检测等方法,观察和检测华蟾素对MG-63的促凋亡作用。结果华蟾素对MG-63骨肉瘤促凋亡作用明显,且呈现时间和浓度依赖性。华蟾素将MG-63细胞阻断在S期,可诱导骨肉瘤细胞凋亡。与甲氨蝶呤对照组相比,不同浓度下华蟾素对MG-63细胞促凋亡作用更显著。结论华蟾素对MG-63骨肉瘤促凋亡明显。华蟾素可用于骨肉瘤治疗。     

mTOR抑制剂FIM-A对人骨肉瘤细胞株MG-63的抑制作用及其机制

目的： 观察新型哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalia target of rapamycin,mTOR）抑制剂含磷西罗莫司衍生物FIM-A对人骨肉瘤MG-63细胞增殖及凋亡的影响。 方法： 不同浓度（1×10-9~1×10-5 mol/L） FIM-A处理MG-63细胞后,采用CCK-8法检测MG-63细胞的增殖,流式细胞术检测MG-63细胞周期和凋亡情况,ELISA法检测血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial cell growth factor,VEGF）和低氧诱导因子（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）的分泌量,RT-PCR和Western blotting分别检测FIM-A对MG-63细胞中mTOR、p70核糖体S6激酶（p70S6 kinase protein,p70s6k）及4E结合蛋白1（4E-binding protein 1,4E-BP1）mRNA和蛋白表达的影响。 结果： 与人成骨hF-OB1.19细胞相比,人骨肉瘤MG-63细胞中mTOR、p70s6k及4E-BP1 mRNA的表达水平明显升高（P<0.05）。FIM-A可有效抑制MG-63细胞的增殖（P<0.05）,且呈剂量依赖性（r=0940, P<0.01)。1×10-6 mol/L FIM-A 处理24 h后与对照组相比,G0/G1期MG-63细胞比例明显增加\[（56.4±3.2）% vs （43.4±6.9）%,P<0.05\],而MG-63细胞的凋亡率没有明显改变。不同浓度FIM-A作用24 h后,MG-63细胞中HIF-1α和VEGF表达均明显低于对照组（P<0.05）,且具有剂量依赖性（HIF-1α,r=-0.988, P<0.01; VEGF, r=-0.998, P<0.01)。同时,FIM-A对MG-63细胞中mTOR（r=-0.919,P<0.01）、p70s6k（r=-0.843,P<0.01）及4EBP1（r=-0.818,P<0.01）蛋白的磷酸化也具有浓度依赖性抑制作用。 结论： FIM-A能抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,并阻滞细胞周期于G0/G1期,其机制可能与影响mTOR信号通路蛋白磷酸化有关。     

蛋白酶体抑制剂联合TRAIL杀伤骨肉瘤细胞的研究

目的观察蛋白酶体抑制剂与肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)对骨肉瘤细胞株MG-63的杀伤作用。方法骨肉瘤细胞株MG-63分别经蛋白酶体抑制剂Z-LLL-CHO和(或)TRAIL作用24h,采用MTT法检测细胞毒性作用,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,并镜下观察细胞形态学改变。结果0.5μmol/L的Z-LLL-CHO与500ng/ml的TRAIL合用于MG-63细胞24h后,细胞存活率为61.6%±1.3%,明显高于单用Z-LLL-CHO(0.5μmol/L)时的96.6%±0.2%及单用TRAIL(500ng/ml)时的89.5%±0.7%(P<0.01)。流式细胞术、电镜及荧光显微镜观察证实,协同性杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现。结论蛋白酶体抑制剂能增强TRAIL杀伤骨肉瘤细胞和诱导骨肉瘤细胞的凋亡。     

华蟾素和顺铂对骨肉瘤MG-63细胞联合杀伤作用的研究

目的：探讨比较华蟾素（ cinobufagin ）协同顺铂（ cisplatin ）对人骨肉瘤细胞株 MG-63的杀伤作用。方法体外培养骨肉瘤细胞株 MG-63细胞,取对数生长期细胞进行实验;采用 MTT 比色法测定MG-63细胞的生长抑制作用并计算细胞抑制率;流式细胞仪检测骨肉瘤细胞的凋亡率和细胞周期,观察细胞凋亡率的变化情况和药物对细胞周期的抑制作用;原位末端标记法（ TUNEL ）观察骨肉瘤细胞的凋亡情况并检测细胞凋亡率;相差显微镜观察骨肉瘤细胞生长状况及形态学上的改变。结果华蟾素和顺铂均对骨肉瘤细胞有生长抑制作用,华蟾素组、顺铂组及华蟾素＋顺铂组在药物浓度不同时对骨肉瘤细胞的生长抑制作用各不相同,在药物浓度低于80μg/ml时,各实验组药物对细胞的生长抑制作用随药物浓度的增加而上升;当药物浓度达到80μg/ml时,华蟾素组和顺铂组药物对骨肉瘤细胞的生长抑制作用不再增加,但华蟾素＋顺铂组药物对细胞的生长抑制作用在药物浓度达到160μg/ml时,抑制作用仍强于其浓度为80μg/ml时。各实验组在药物浓度相同时华蟾素＋顺铂对骨肉瘤细胞的生长抑制作用明显强于单独应用华蟾素或者顺铂。结论华蟾素＋顺铂对骨肉瘤 MG-63细胞的联合杀伤作用明显强于单独应用顺铂或者华蟾素;在抑制骨肉瘤 MG-63细胞生长方面,华蟾素协同顺铂对细胞的杀伤作用效果显著,并且具有时间和浓度依赖性。     

大蒜素对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响

目的观察大蒜素对人成骨肉瘤细胞株MG-63增殖和凋亡的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的MG-63细胞,倒置显微镜下观察MG-63细胞的形态学变化,采用CCK-8法检测大蒜素对MG-63细胞增殖抑制能力,吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色及Annexin V-FITC标记流式细胞术检测细胞凋亡情况以及对MG-63细胞周期影响。结果大蒜素可抑制人成骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖,具有明显剂量和时间依赖性,10 μg/ml大蒜素可明显诱导MG-63细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论大蒜素能够诱导MG-63细胞凋亡,阻滞细胞周期,抑制细胞增殖。     

miRNA-9对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的作用及其机制

目的：通过提高骨肉瘤MG-63细胞miRNA-9的表达,探讨miRNA-9对MG-63细胞增殖及凋亡的影响及可能的作用机制。方法：MG-63细胞随机分为实验组、阴性对照组和空白组。实验组转染miR-NA-9（ Oligo）,阴性对照组转染阴性对照核苷酸序列（ microRNA negative control sequence）,空白组不做转染。qRT-PCR检测细胞miRNA-9、CXCR4的表达。CCK-8法检测3组细胞的增殖;流式细胞术比较3组细胞的凋亡水平。结果：与阴性对照组和空白组相比,转染组细胞中miRNA-9表达升高;miRNA-9高表达的骨肉瘤细胞增殖速率降低、细胞凋亡率增加、CXCR4 mRNA转录水平下调,差异有统计学意义。结论：CXCR4基因参与miRNA-9抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖过程,同时促进细胞凋亡。     

黄芩苷对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的:检测黄芩苷对骨肉瘤MG-63细胞增殖活性、凋亡指数、超微结构以及Survivin、VEGF、CAS-3蛋白表达水平的影响,评估黄芩苷对骨肉瘤的治疗学效应,并探讨其分子生物学机制。方法:骨肉瘤MG-63细胞培养成功后,分别采用0、50、100、200μg/ml浓度黄芩苷作用于骨肉瘤MG-63细胞。MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡指数,透射电镜检测细胞超微结构改变,Western blot法检测Survivin、VEGF及CAS-3蛋白的表达。结果:MTT结果显示,黄芩苷对MG-63细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。流式细胞仪检测结果显示,治疗组中MG-63细胞凋亡指数显著高于对照组。透射电镜观察细胞超微结构,可见黄芩苷对MG-63超微结构有明显的影响。Western blot分析显示,随着黄芩苷浓度的增加,Survivin及VEGF蛋白的表达逐渐下降,而CAS-3表达增加,呈剂量依赖性。结论:黄芩苷可抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过抑制肿瘤新生血管形成或通过调控CAS-3的表达、下调Survivin信号通路来完成的。     

低氧状态瘦素对骨肉瘤MG-63细胞增殖与抗凋亡影响

目的 瘦素(Leptin)作为一种脂肪细胞分泌的激素,在低氧条件下对肿瘤细胞具有促进生长、血管生成、侵袭转移等作用.本研究体外观察Leptin对低氧状态下人骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的相关机制.方法 将骨肉瘤MG-63细胞分为4组,分别在常氧、常氧联合100 μg/L Leptin、低氧、低氧联合100μg/L Leptin下培养.蛋白质印迹法检测MG-63细胞中低氧诱导因子HIF-1α和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Caspase-3的表达;流式细胞技术检测各组细胞凋亡;采用MTT比色法测定细胞增殖率.结果 低氧联合Leptin组细胞增殖活性明显强于常氧组、低氧组和低氧联合Leptin组.低氧联合Leptin组的HIF-1α和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平明显高于其他组,促凋亡蛋白Pax、caspase-3表达明显低于其他组,差异有统计学意义(P＜0.001).析因分析结果显示,低氧(P＜0.001)和Leptin(P＜0.001)的主效应均可以使HIF-1α表达增加,但其交互作用对其无明显意义,P=0.109;低氧(P=0.001)和Leptin(P＜0.001)的主效应同样可以使Bcl-2表达增加,但其交互作用对其无明显意义(P=0.1472);低氧(P＜0.001)和Leptin(P＜0.001)的主效应及交互作用效应(P=0.002)对于凋亡相关蛋白Bax均有显著影响;低氧(P＜0.001)及Leptin(P＜0.001)的主效应及交互作用效应(P＜0.001)对于凋亡相关蛋白caspase-3均有显著影响.流式细胞仪检测结果显示,常氧组凋亡率为(6.50±0.35)％,常氧联合Leptin组凋亡率为(2.50±0.46)％,低氧组为(3.10±0.31)％,低氧联合Leptin组为(1.60±0.15)％,组间比较差异有统计学意义,P＜0.001.MTT法检测常氧组、常氧联合Leptin组、低氧组、低氧联合Leptin组MG-63细胞增殖率分别为0.35±0.02、0.59±0.03、0.58±0.02和0.65±0.04.低氧联合Leptin组增殖率显著高于其他3组,P＜0.001.结论 低氧状态下Leptin能促进骨肉瘤MG-63细胞的增殖,促进抗凋亡蛋白表达,并抑制促凋亡蛋白表达.     

PKC-δ在TRAIL与阿霉素联合诱导骨肉瘤细胞株MG-63凋亡中的作用

目的 初步观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与低剂量阿霉素(ADM)联合应用对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞凋亡的影响,探讨蛋白激酶C-δ (PKC-δ)在其中的作用,并用PKC激活剂佛波脂(PMA)和PKC-δ特异性抑制剂Rottlerin对这一凋亡过程的影响来探讨PKC-δ在其中的作用.方法 倒置相差显微镜观察TRAIL与ADM联合应用后MG-63细胞凋亡形态的变化,同时逆转录-聚合酶链反应法检测PKC-δ的mRNA表达变化.流式细胞仪(FCM)检测PMA和Rottlerin作用联合组细胞后凋亡率的变化.结果 5μg/ml的ADM与500ng/ml的TRAIL联合作用24h后,部分MG-63细胞变圆、悬浮,可见大小不等的细胞碎片.TRAIL和ADM联合应用组PKC-δ的mRNA的表达明显增加,与单用组和对照组有显著性差异(P＜0.01).Rottlerin与联合用药作用12h后细胞的凋亡率降低,PMA则能使凋亡率增加(P＜0.01).结论 TRAIL与低剂量ADM联合作用可以促进MG-63细胞凋亡.Rottlerin能抑制TRAIL和ADM联合诱导MG-63细胞凋亡,PMA则起促进作用,PKC-δ可能参与了该凋亡过程并起促进作用.     

洛铂对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的 探讨洛铂对骨肉瘤MG-63细胞增殖与凋亡的作用及其机制。方法 取对数生长期的MG-63细胞进行实验,分为对照组和实验组 (加入不同浓度洛铂: 2、4和8 μg/ml)。采用噻唑盐（MTT）比色法、流式细胞技术(FCM)检测洛铂对MG-63细胞的形态改变、生长及增殖抑制、细胞周期阻滞和细胞凋亡诱导等作用,并绘制不同浓度时MG-63细胞的生长曲线,应用Western blot的方法分析洛铂对MG-63细胞的Bcl-2蛋白表达的影响。结果 洛铂能够抑制MG-63细胞的生长、增殖并诱导其凋亡,并呈浓度和时间依赖效应。Western blot检测结果显示洛铂可使MG-63细胞Bcl-2蛋白表达下降。结论 洛铂能显著抑制MG-63细胞增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期变化,可能与调节 MG-63细胞Bcl-2蛋白的表达有关。     

塞来昔布对骨肉瘤MG-63细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 研究选择性COX-2抑制剂塞来昔布对骨肉瘤MG-63细胞迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其相关机制。 方法 将培养的MG-63细胞分为5组：试验组(分别以25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L 塞来昔布和50μmol/L塞来昔布+10μg/L PGE2处理)和对照组,采用MTT法、迁移试验、Transwell小室侵袭试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)研究不同浓度塞来昔布对骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移能力、侵袭能力以及基质金属酶(MMPs)表达量的影响。 结果 MTT法显示塞来昔布作用24h对MG-63细胞增殖无明显影响,作用48h可显著抑制MG-63增殖,且呈现剂量效应关系;迁移试验和侵袭试验表明塞来昔布可抑制MG-63细胞迁移和侵袭,并具有剂量效应关系;酶联免疫吸附试验检测塞来昔布可降低MG-63细胞MMP-2和MMP-9的分泌量,这些抑制效应不能被PGE2完全逆转。 结论 选择性COX-2抑制剂塞来昔布可抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移和侵袭,这种抑制效应可能是通过减少肿瘤细胞MMP-2和MMP-9的表达来实现的,其机制有部分非COX-2依赖途径存在。     

microRNA-192 抑制物对骨肉瘤细胞系SOSP_9607增殖和凋亡的影响*

目的：探讨miR-192 抑制物对于骨肉瘤细胞系SOSP_ 9607细胞增殖和凋亡的影响。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡和周期。将SOSP_ 9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-192 抑制物（hsa-miR-192 inhibitors ）抑制SOSP_ 9607细胞内miR-192 的活性。结果：与对照组相比,实验组显著抑制SOSP_ 9607细胞的增殖,有明显的剂量依赖性（P<0.01）。 随着浓度从50nmol/L 逐渐增加至200nmol/L ,抑制率逐渐增高（P<0.01）。 与对照组相比,实验组细胞周期G0/G1 细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S 期细胞比例显著减少（P<0.01）。 实验组凋亡率（13.6 ± 2.1）% 与阴性对照组凋亡率（7.1 ± 0.5）% 相比明显增高（P<0.01）。 结论：miR-192 抑制物通过抑制SOSP_ 9607细胞中miR-192 的活性对SOSP_ 9607细胞的增殖和凋亡发挥重要作用,可能成为骨肉瘤生物治疗的新靶点。     

1，6二磷酸果糖增强蛋白酶体抑制剂对人乳腺癌细胞MCF-7的抑瘤效应

目的探讨抑制蛋白酶体活性是否可以诱导人乳腺癌细胞MCF-7的自我吞噬,1,6二磷酸果糖对自我吞噬的影响及自我吞噬对细胞增殖的作用。方法采用MTT法检测细胞增殖,蛋白质印迹检测自我吞噬相关蛋白LC3的表达。结果蛋白酶体抑制剂硼替佐米以剂量依赖方式抑制MCF-7细胞的增殖并诱导细胞的自我吞噬,但是,当1,6二磷酸果糖与硼替佐米联合应用后,可逆转硼替佐米诱导的自我吞噬并增强硼替佐米对MCF-7细胞的增殖抑制。结论蛋白酶体活性的抑制可诱导人乳腺癌细胞MCF-7的自我吞噬代偿性激活,1,6二磷酸果糖可抑制激活的自我吞噬,其与硼替佐米的联合应用可增强其抑瘤效应。     

Correlation between E-Cadherin-Regulated Cell Adhesion and Human Osteosarcoma MG-63 Cell Anoikis

Purpose: The aim of this study was to investigate the relationship between cell adhesion and anoikis evasionamong human osteosarcoma cells (MG-63), and to further study the molecular mechanisms. Materials andMethods: Human osteosarcoma cells (MG-63) were assessed for apoptosis, and caspase-3, E-cadherin andβ-catenin expression in EDTA and control non-EDTA groups. Results: MG-63 cells were predominantlyaggregated when in suspension, and the suspended cells were more dispersed in the EDTA group. Followingculture in suspension for 24 h, 48 h, or 72 h, the rates of apoptosis were 34.88%±3.64%, 59.3%±7.22% and78.5%±5.21% in the experimental group and 7.34%±2.13%, 14.7%±3.69%, and 21.4%±3.60% in the controlgroup, respectively. Caspase-3 expression progressively increased and E-cadherin and β-catenin were decreasedin the experimental group, whereas there was no change in the control group. Conclusions: MG-63 cells couldavoid anoikis through cell adhesion, and E-cadherin might play a role in this process.     

苦参碱和顺铂联合应用对人骨肉瘤细胞株MG-63增殖抑制作用的研究

[目的]观察苦参碱和顺铂单药及联合应用对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖的抑制作用。[方法]采用MTT法（四甲基偶氮唑蓝比色法）,利用中效原理判断药物联合应用的效应。[结果]苦参碱与顺铂联合应用对骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖抑制作用加强,低浓度（≤1．0mg／ml）苦参碱与顺铂联合应用时两者为拮抗作用,〉1．5mg／ml苦参碱与顺铂合用时为相加作用。在苦参碱浓度〉2．0mg／ml联合用药的抑制率接近95％。顺铂以20μg／ml的浓度作用于MG-63细胞48h．增殖抑制率是86．7％,而顺铂以5μg／ml的浓度与2mg／ml的苦参碱联合作用48h,增殖抑制率是92．6％,说明苦参碱和顺铂联用可使顺铂在小剂量时即有较好的杀伤作用。[结论]苦参碱和顺铂联合应用可使顺铂在小剂量时有较好的作用,从而避免了顺铂的毒副作用。     

低频电磁场对骨肉瘤细胞MG-63多药耐药性产生的影响

[目的]研究低频电磁场协同化疗药物对骨肉瘤细胞MG-63增殖的抑制作用及其对肿瘤细胞多药耐药性的影响。[方法]采用MTT法则定阿霉素联合磁场组(实验组)及单纯使用阿霉素组(对照组)两组细胞生长的抑制率,流式细胞仪测定各组细胞凋亡率,免疫组化法测定两组细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达情况。[结果]实验组的抑制率以及凋亡率明显高于对照组,实验组的P-gp阳性率低于对照组(24.5%vs.58.3%),两者存在显著性差异(P<0.05)。[结论]低频电磁场可以加强化疗药物对MG-63肿瘤细胞增殖的抑制作用,并且可以抑制肿瘤细胞多药耐药性的产生。     

As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87作用的体外研究

目的　观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人膀胱癌细胞株BIU 87的作用 ,并探讨其作用机制。方法　采用四氮唑蓝(MTT )法检测As2 O3 不同浓度、不同作用时间对BIU 87细胞株的生长抑制率 ;流式细胞术 (FCM )检测不同浓度As2 O3 作用 72h后细胞中凋亡相关蛋白Fas、bcl 2的表达及细胞周期变化。结果　As2 O3 可有效抑制BIU 87细胞株的生长 ,具有浓度、时间依赖性特点。Fas、bcl 2的表达与As2 O3 浓度增高分别呈正、负相关 (P <0 .0 5 ) ,且随As2 O3 浓度增高Fas、bcl 2的表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。随As2 O3 浓度增高细胞周期被阻滞在G0 /G1期。结论　As2 O3 可有效抑制人膀胱癌BIU 87细胞株的生长增殖 ,阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡可能起了重要作用