转化生长因子β1对培养的瘢痕成纤维细胞挛缩功能的作用

目的：研究转化生长因子β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞诱导肌动蛋白(α-actin)和粘连蛋白(FN)表达的作用，探讨TGF-β1与烧伤瘢痕挛缩的关系。方法：采用细胞培养、ELISA法、免疫组化、图像分析技术，观察在不同TGF-β1含量作用下，瘢痕成纤维细胞α-actin和FN表达的情况。结果：不同含量TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达α-actin和FN的作用不同，以10～50M／L的TGF-β1作用最有效；与对照组相比，实验组的成纤维细胞表达更明显，差异均有显著性意义。结论：TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞α-actin和FN的表达增加可能与烧伤瘢痕挛缩有关。     

转化生长因子-β1对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3,7mRNA表达的影响

目的探讨转化生长因子-β 1( TGF β 1)对瘢痕疙瘩成纤维细胞 (KFB)Smad3,7 mRNA表达的影响,以进一步明确 TGF β 1在瘢痕疙瘩的发生、发展过程中的重要作用.方法用 RT-PCR法分别检测 TGF β 1 不同含量( 0, 5, 50, 500 pmol/L;Smad3 mRNA 24 h, Smad7 mRNA 90 min)和 TGF β 1( 500 pmol/L)作用不同时间( Smad3 mRNA 1, 2, 4, 24, 48 h; Smad7 mRNA 0.5,1,1.5,2,4,24 h)对 Smad3,7mRNA表达的影响.结果不同含量 TGF β 1刺激 KFB后 ,随 TGF β 1含量的增加 ,Smad3 mRNA水平逐渐下降,并呈含量依赖性.与 Smad3相反, 5 pmol/L TGF β 1就能使 Smad7 mRNA水平明显升高 2.6倍( 46± 7, 对照组 13± 7, t=6.150, P=0.0005),并随 TGF β 1剂量加大而略有改变,说明 KFB的 Smad7 mRNA表达对 TGF β 1的刺激非常敏感.用 TGF β 1刺激细胞后, Smad3 mRNA水平随作用时间延长而逐渐下降,到作用 48 h后下降到最低( 53± 9,对照组 18± 8, t=6.011, P=0.0005),显示出时间依赖性;而 Smad7 mRNA在细胞受到 TGF β 1刺激后 120 min即达到对照组的 2.5倍( 73± 11,对照组 53± 9, t=5.215, P=0.003) ,24 h后回落到正常对照水平.结论 TGF β 1能使 KFB细胞 Smad3 mRNA发生配体依赖性的下调,而使 Smad7 mRNA表达迅速增加.     

转化生长因子β1Ⅱ型受体对增生性瘢痕成纤维细胞的影响

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)Ⅱ型受体同源序列多肽的生物学功能及其对增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响.方法根据TGFβ1Ⅱ型受体的氨基酸序列人工合成一段短肽,以增生性瘢痕成纤维细胞为靶细胞,分别于蛋白水平和mRNA水平检测该短肽对TGFβ1所诱导的细胞胶原合成的拮抗作用.结果该短肽可以明显抑制TGFβ1所诱导的增生性瘢痕成纤维细胞的胶原合成量及细胞内Ⅰ型前胶原mRNA的表达.结论该短肽可能作为TGFβ1 Ⅱ型受体的竞争性拮抗剂,抑制或降低了该生长因子对细胞的刺激作用.     

转化生长因子β1Ⅱ型受体对增生性瘢痕成纤维细胞的影响

目的：探讨转化生长因子β1(TGFβ1)Ⅱ型受体同源序列多肽的生物学功能及其对增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响。方法：根据TGFβ1Ⅱ型受体的氨基酸序列人工合成一段短肽，以增生性瘢痕成纤维细胞为靶细胞，分别于蛋白水平和mRNA水平检测该短肽对TGFβ1所诱导的细胞胶原合成的拮抗作用。结果：该短肽可以明显抑制TGFβ1所诱导的增生性瘢痕成纤维细胞的胶原合成量及细胞内Ⅰ型前胶原mRNA的表达。结论：该短肽可能作为TGFβ1Ⅱ型受体的竞争性拮抗剂，抑制或降低了该生长因子对细胞的刺激作用。     

转化生长因子-β3对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用

背景哺乳类动物有3种TGF-β异构体即TGF-β1,β2,β3,这3种异构体各自具有独特而不同的生物学作用,TGF-β1是明显的促瘢痕形成因子,而TGF-β3可减少TGF-β1,β2的产生,从而减少细胞外基质(ECM)合成,因此,TGF-β3有可能是人体内天然的抗瘢痕形成因子.目的通过外源性TGF-β3对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)生长增殖及Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达的影响,了解其生物学行为,为临床治疗提供理论依据.设计随机对照实验研究.地点和对象汕头大学医学院第二附属医院整形烧伤外科完成,对象为新鲜无菌增生性瘢痕组织,来源于本科收治及门诊手术的增生性瘢痕患者6例,男3例,女3例;年龄5～45岁.干预6例增生性瘢痕成纤维细胞体外培养,分为4组,实验组又分为5,10,50 mg/L组分别加TGF-β3 5,10,及50 mg/L,对照组加入FBM1.5 mL,采用MTT比色法测定TGF-β3对HSFB增殖活性的影响,3H-脯氨酸掺人法测定其胶原合成,免疫组化检测Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达情况.主要观察指标TGF-β3对HSFB体外增殖,HSFB Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达的影响,TGF-β3作用后HSFB胶原合成情况.结果转化生长因子β3可抑制HSFB细胞增殖,作用120 h后实验组细胞密度分别为(6.34±0 51),(6.01±0.38),(5.24±0.65)×105/瓶,明显低于对照组(10.69±0.76)x105/瓶(F=102.432～163 024,P＜0.01);转化生长因子β3可抑制胶原蛋白合成,实验组(10,50mg/L组)脯氨酸含量分别为(164.01±70.27),(151 02±49 85)min-1明显低于对照组9231.56±67.83)min-1(q=32.124,31.021,P＜0.01);下调TGF-β1蛋白及Ⅰ型胶原蛋白表达;而对Ⅲ型胶原影响较小.结论TGF-β3可抑制HSFB细胞增殖,下调TGF-β1蛋白表达,减少胶原合成,显示其具有抗组织纤维化的作用,具有临床应用价值.     

重组核心蛋白多糖对转化生长因子β1刺激人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的作用

目的：观察重组核心蛋白多糖(decorin，DCN)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的作用，以探讨DCN抑制增生性瘢痕形成的机制。方法：实验于2004-01／10在广州市创伤研究所和上海市烧伤研究所完成。分离培养人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞，将5μg／LTGF—β1或同时与2mg／L重组DCN加入培养液中；培养12，24，48h用MTT法测定细胞增殖速度；培养24h用流式细胞仪检测细胞周期，并收集细胞培养上清，放射免疫方法检测Ⅰ，Ⅲ型前胶原蛋白(PCⅠ，PCⅢ)含量。结果：TGF-β1促进正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞增殖、增加S期百分比、高PCⅠ，PCⅢ蛋白含量及两者比例(P&;lt;0.05或P&;lt;0．01)；同时加入TGF-β1和重组DCN，正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞增殖速度，S期百分比，PCⅠ，PCⅢ蛋白含量及两者比例均低于TGF-β1组(P&;lt;0．05或P&;lt;0．01)，且与空白对照组比较差异无显著性意义(P&;gt;0.05)。结论：DCN具有抑制TGF-β1刺激正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成的作用，这种作用可能是其抑制瘢痕增生和促进癜痕成熟的机制之一。     

转化生长因子-β1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3和Smad7 mRNA表达的调控机制

目的研究转化生长因子-β 1(TGF-β 1)影响瘢痕疙瘩成纤维细胞( KFB) Smad3,7mRNA表达的调控机制.方法用放线菌酮( CHX)和放线菌素 D预处理 KFB,以分别阻断 KFB内源性蛋白质的合成及 mRNA合成.采用逆转录 PCR法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞 Smad3,7 mRNA表达水平.结果经 CHX预处理后, KFB的 Smad3 mRNA表达轻度上调,并完全抑制了 TGF-β 1对 KFB Smad3 mRNA的下调作用,而 CHX预处理对 KFB的 Smad7 mRNA表达及 TGF-β 1上调 Smad7 mRNA的作用并无明显影响.经放线菌素 D预处理后,随 TGF-β 1作用时间延长, KFB的 Smad3 mRNA表达水平无明显下降.结论 TGF-β 1对 KFB Smad3 mRNA表达的调控过程可能还需要细胞合成其他蛋白的参与;但对 Smad7 mRNA表达的调控则不需要细胞合成其他蛋白参与, KFB细胞中的 Smad7可能也是活化的 Smads的直接靶基因.     

转化生长因子-β3对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用

背景：哺乳类动物有3种TGF-β异构体即TGF-β1，β2，β3，这3种异构体各自具有独特而不同的生物学作用，TGF-β1是明显的促瘢痕形成因子，而TGF-β3可减少TGF-β1，β2的产生，从而减少细胞外基质(ECM)合成，因此，TGF-β3有可能是人体内天然的抗瘢痕形成因子。目的：通过外源性TGF-β3对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)生长增殖及Ⅰ，Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达的影响，了解其生物学行为，为临床治疗提供理论依据。设计：随机对照实验研究。地点和对象：汕头大学医学院第二附属医院整形烧伤外科完成，对象为新鲜无菌增生性瘢痕组织，来源于本科收治及门诊手术的增生性瘢痕患者6例，男3例，女3例；年龄5～45岁。干预：6例增生性瘢痕成纤维细胞体外培养，分为4组，实验组又分为5，10，50mg／L组分别加TGF-β3 5，10及50mg／L，对照组加入FBM 1．5mL，采用MTT比色法测定TGF-β3对HSFB增殖活性的影响，^3H-脯氨酸掺入法测定其胶原合成，免疫组化检测Ⅰ，Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达情况。主要观察指标：TGF-β3，对HSFB体外增殖，HSFB I，Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达的影响，TGF-β3作用后HSFB胶原合成情况。结果：转化生长因子胁可抑制HSFB细胞增殖，作用120h后实验组细胞密度分别为(6．34&;#177;0．51)，(6．01&;#177;0．38)，(5．24&;#177;0．65)&;#215;10^5／瓶，明显低于对照组(10．69&;#177;0．76)&;#215;10^5／瓶(F=102．432～163．024．P&;lt;0．01)；转化生长因子β3可抑制胶原蛋白合成，实验组(10，50mg／L组)脯氨酸含量分别为(164．01&;#177;70．27)，(151．02&;#177;49．85)min^-1明显低于对照组9231．56&;#177;67．83)min^-1(q=32．124，31．021，P&;lt;0．01)；下调TGFβ1蛋白及Ⅰ型胶原蛋白表达；而对Ⅲ型胶原影响较小。结论：TGF-β1可抑制HSFB细胞增殖，下调TGF-β1蛋白表达，减少胶原合成，显示其具有抗组织纤维化的作用，具有临床应用价值。     

转化生长因子—β1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3和Smad7 mRNA表达的调控机制

目的 研究转化生长因子—β1(TGF—β1)影响瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)Smad3，7mRNA表达的调控机制。方法 用放线菌酮(CHX)种放线菌素D预处理KFB，以分别阻断KFB内源性蛋白质的合成及mRNA合成。采用逆转录PCR法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3，7mRNA表达水平。结果 经CHX预处理后，KFB的Smad3 mRNA表达轻度上调，并完全抑制了TGF—β1对KFB Smad3 mRNA的下调作用，而CHX预处理对KFB的Smad7 mRNA表达及TGF—β1上调Smad7 mRNA的作压并无明显影响。经放线菌素D预处理后，随TGF—β1作用时间延长，KFB的Smad3 mRNA表达水平无明显下降。结论 TGF—β1对KFB Smad3 mRNA表达的调控过程可能还需要细胞合成其他蛋白的参与；但对Smad7 mRNA表达的调控则不需要细胞合成其他蛋白参与，KFB细胞中的Smad7可能也是活化的Smads的直接靶基因。     

重组核心蛋白多糖对转化生长因子β1刺激人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的作用

目的:观察重组核心蛋白多糖(decorin,DCN)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的作用,以探讨DCN抑制增生性瘢痕形成的机制。方法:实验于2004-01/10在广州市创伤研究所和上海市烧伤研究所完成。分离培养人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞,将5μg/LTGF-β1或同时与2mg/L重组DCN加入培养液中;培养12,24,48h用MTT法测定细胞增殖速度;培养24h用流式细胞仪检测细胞周期,并收集细胞培养上清,放射免疫方法检测Ⅰ,Ⅲ型前胶原蛋白(PCⅠ,PCⅢ)含量。结果:TGF-β1促进正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞增殖、增加S期百分比、升高PCⅠ,PCⅢ蛋白含量及两者比例(P<0.05或P<0.01);同时加入TGF-β1和重组DCN,正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞增殖速度,S期百分比,PCⅠ,PCⅢ蛋白含量及两者比例均低于TGF-β1组(P<0.05或P<0.01),且与空白对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:DCN具有抑制TGF-β1刺激正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成的作用,这种作用可能是其抑制瘢痕增生和促进瘢痕成熟的机制之一。     

转化生长因子β调节体外培养人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA的表达

目的:观察转化生长因子β对体外培养人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响。方法:实验在青岛海慈医疗集团检验科完成。选择2005-02/03在青岛海慈医疗集团骨科住院的无其他疾患的骨折患者3例,年龄30～50岁,经患者知情同意后,取其髂骨松质骨,剪碎,Ⅳ型胶原酶消化后,将骨片贴于25cm2培养瓶,加入MEM培养液约15d后,可见细胞游出,约25d达汇片,胰酶消化,按1×106个细胞接种培养后第2天,换含1g/LBSAMEM培养液继续培养24h后,加入10ng/L转化生长因子β干预培养0,3,6,12,24h,或在转化生长因子β作用峰值时,分别给予不同浓度(0,5,10,25ng/L)干预,抽提总RNA,采用半定量反转录-聚合酶链反应和Northernblot法检测干预后成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达水平。结果:①半定量反转录-聚合酶链反应检测转化生长因子β对体外培养成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响:与0ng/L对照组相比,5,10和25ng/L转化生长因子β干预后结缔组织生长因子mRNA表达水平显著升高(P<0.01),呈明显剂量依赖关系;10ng/L转化生长因子β干预6h时转化生长因子β上调作用达高峰(P<0.01),然后下降,至24h时转化生长因子β对结缔组织生长因子的上调作用基本消失(P>0.05)。②Northernblot法检测转化生长因子β对体外培养成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响:与0ng/L对照组相比,10和25ng/L转化生长因子β干预后结缔组织生长因子mRNA表达水平显著升高(P<0.01),但无明显剂量依赖关系(P>0.05);10ng/L转化生长因子β干预6h时转化生长因子β上调作用达高峰(P<0.01),然后下降,至24h时转化生长因子β对结缔组织生长因子的上调作用基本消失(P>0.05)。结论:转化生长因子β可呈剂量依赖性上调人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA的表达。     

转化生长因子β调节体外培养人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA的表达

目的：观察转化生长因子β对体外培养人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响。方法：实验在青岛海慈医疗集团检验科完成。选择2005—02／03在青岛海慈医疗集团骨科住院的无其他疾患的骨折患者3例，年龄30～50岁，经患者知情同意后，取其髂骨松质骨，剪碎，Ⅳ型胶原酶消化后，将骨片贴于25cm^2培养瓶，加入MEM培养液约15d后，可见细胞游出，约25d达汇片，胰酶消化，按1&;#215;10^6个细胞接种培养后第2天，换含1g/L BSA MEM培养液继续培养24h后，加入10ng／L转化生长因子β干预培养0，3，6，12，24h，或在转化生长因子β作用峰值时，分别给予不同浓度（0，5，10，25ng／L）干预，抽提总RNA，采用半定量反转录-聚合酶链反应和Northern blot法检测干预后成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达水平。结果：①半定量反转录-聚合酶链反应检测转化生长因子β对体外培养成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响：与0ng／L对照组相比，5,10和25ng／L转化生长因子β干预后结缔组织生长因子mRNA表达水平显著升高（P〈0．01），呈明显剂量依赖关系；10ng／L转化生长因子β干预6h时转化生长因子β上调作用达高峰（P〈0．01），然后下降，至24h时转化生长因子β对结缔组织生长因子的上调作用基本消失（P〉0．05）。②Northern blot法检测转化生长因子β对体外培养成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响：与0ng／L对照组相比，10和25ng／L转化生长因子β干预后结缔组织生长因子mRNA表达水平显著升高（P〈0．01），但无明显剂量依赖关系（P〉0．05）；10ng／L转化生长因子β干预6h时转化生长因子β上调作用达高峰（P〈0．01），然后下降，至24h时转化生长因子β对结缔组织生长因子的上调作用基本消失（P〉0．05）。结论：转化生长因子β可呈剂量依赖性上调人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA的表达。     

补肾中药密骨片对成骨细胞生长因子转化生长因子β1 mRNA表达的影响

背景：补肾中药密骨片可有效防治骨质疏松，但其具体的药理学机制仍不是很清楚。转化生长因子β1是调节骨吸收与骨形成的重要耦联因子。 目的：探讨补肾方对成骨细胞转化生长因子β1mRNA表达的影响。设计：随机分组设计，对照实验。单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院骨伤科研究室。材料：实验于2003—05／2004—04在华中科技大学同济医学院附属协和医院中西结合骨代谢实验室完成。动物：选择出生一两天清洁级SD大鼠16只。实验药：密骨片药液在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨伤科研究室制备，主要成分为淫羊藿、杜仲、胡桃肉、干地黄、淮牛膝等；阳性对照药：重组碱性成纤维细胞生长因子由北京邦定公司提供。阴性对照组分为探针阴性对照和抗体阴性对照。 方法：将体外分离培养的新生SD大鼠的颅骨成骨细胞加入100，1000，5000，10000mg／L补肾中药密骨片药液及阳性对照药5μg/L重组碱性成纤维细胞生长因子。24h后，利用自行制备的地高辛标记的鼠转化生长因子β1 cDNA探针进行成骨细胞的核酸分子原位杂交分析，以其细胞内杂交阳性颗粒的平均光密度值代表转化生长因子β1 mRNA的表达水平。在200倍视野下，每组随机选取40个成骨细胞，用TJTY-300型全自动图像分析仪测定细胞内杂交颗粒的平均光密度值（A）。主要观察指标：各组成骨细胞转化生长因子β1mRNA表达。结果：全自动图像分析显示，5000，10000mg／L密骨片药液组的细胞转化生长因子β1mRNA表达分别是阴性对照组的1．18倍和1．30倍，差异有显著性[5000，10000mg／L密骨片药液组、阴性对照组的细胞内杂交颗粒的平均光密度值似）分别为0．21367&;#177;0．01500，0．23703&;#177;0．02173，0．18127&;#177;0．01528，P〈0．05和P〈0．01]，5μg/L重组碱性成纤维细胞生长因子组的细胞内杂交颗粒的平均光密度值（A）（0．25445&;#177;0．02081）虽高于5000，10000mg／L密骨片药液组，但差异无显著性（P〉0．05）。 结论：补肾中药密骨片可刺激成骨细胞转化生长因子β1的分泌和合成，从而促进骨形成和抑制骨吸收。     

补肾中药密骨片对成骨细胞生长因子转化生长因子β1 mRNA表达的影响

背景:补肾中药密骨片可有效防治骨质疏松,但其具体的药理学机制仍不是很清楚。转化生长因子β1是调节骨吸收与骨形成的重要耦联因子。目的:探讨补肾方对成骨细胞转化生长因子β1mRNA表达的影响。设计:随机分组设计,对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨伤科研究室。材料:实验于2003-05/2004-04在华中科技大学同济医学院附属协和医院中西结合骨代谢实验室完成。动物:选择出生一两天清洁级SD大鼠16只。实验药:密骨片药液在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨伤科研究室制备,主要成分为淫羊藿、杜仲、胡桃肉、干地黄、淮牛膝等;阳性对照药:重组碱性成纤维细胞生长因子由北京邦定公司提供。阴性对照组分为探针阴性对照和抗体阴性对照。方法:将体外分离培养的新生SD大鼠的颅骨成骨细胞加入100,1000,5000,10000mg/L补肾中药密骨片药液及阳性对照药5μg/L重组碱性成纤维细胞生长因子。24h后,利用自行制备的地高辛标记的鼠转化生长因子β1cDNA探针进行成骨细胞的核酸分子原位杂交分析,以其细胞内杂交阳性颗粒的平均光密度值代表转化生长因子β1mRNA的表达水平。在200倍视野下,每组随机选取40个成骨细胞,用TJTY-300型全自动图像分析仪测定细胞内杂交颗粒的平均光密度值(A)。主要观察指标:各组成骨细胞转化生长因子β1mRNA表达。结果:全自动图像分析显示,5000,10000mg/L密骨片药液组的细胞转化生长因子β1mRNA表达分别是阴性对照组的1.18倍和1.30倍,差异有显著性[5000,10000mg/L密骨片药液组、阴性对照组的细胞内杂交颗粒的平均光密度值(A)分别为0.21367±0.01500,0.23703±0.02173,0.18127±0.01528,P<0.05和P<0.01],5μg/L重组碱性成纤维细胞生长因子组的细胞内杂交颗粒的平均光密度值(A)(0.25445±0.02081)虽高于5000,10000mg/L密骨片药液组,但差异无显著性(P>0.05)。结论:补肾中药密骨片可刺激成骨细胞转化生长因子β1的分泌和合成,从而促进骨形成和抑制骨吸收。     

转化生长因子β_1对坐骨神经移植后免疫耐受的影响

背景:转化生长因子β_1是一种强效细胞生长增殖调节蛋白,在移植免疫的抗排斥反应、移植物血管病发展中扮演重要角色.目的:观察经冷冻处理异体神经移植后,局部注射转化生长因子β_1对移植免疫排斥反应的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-06/2008-06在哈尔滨医科大学动物实验中心完成.材料:受体为清洁级SD大鼠60只,分为3组:自体神经移植组、异体神经移植组、转化生长因子β_1质粒+异体神经移植组,每组20只.供体为40只Wistar雄性大鼠.pAdTrack-CMV-TGF-β_1质粒、pAdEasy-1-Bj51833细胞由哈尔滨医科大学附属四院骨科实验室惠赠.方法:取供体大鼠40只作双侧股后外侧纵切口,分离显露坐骨神经,切取双侧整段坐骨神经,置于无菌冷冻管中保存1周,备用.手术显微镜下将受体鼠自骨二头肌与半腱肌和半膜肌间隙剪开结缔组织,显露坐骨神经,从犁状肌孔下0.5 cm处整齐剪下长约1 cm的坐骨神经.自体神经移植组、异体神经移植组选择粗细相等、已预制冷冻的自体及异体神经移植;转化生长因子β_1质粒+异体神经移植组异体神经移植后于大鼠局部肌肉及神经两断端内注射pAdTrack-CMV-TGF-β_1质粒40 μg/只.主要观察指标:术后3,6,9周各组大鼠运动神经传导速度、病理学和轴突计数检查.结果:转化生长因子β_1质粒+异体神经移植组运动神经传导速度高于新鲜异体神经移植组(P < 0.01),与自体神经移植组比较差异无显著性意义.自体神经移植组、转化生长因子β_1质粒+异体神经移植组术后9周轴突计数较新鲜异体神经移植组高(P < 0.01).转化生长因子β_1质粒+异体神经移植组光镜及电镜可见神经纤维走行正常,排列完好,神经纤维可见血管增生,髓鞘结构较好,神经纤维内见有大量再生髓鞘,许旺细胞明显增多,胞质较发达,大量粗面内质网,线粒体结构清晰,再生的轴突内微丝密集排列,与自体神经移植组接近.异体神经移植组光镜及电镜可见神经纤维数量少、排列紊乱,髓鞘轴突变性明显,大部分神经纤维脱髓鞘崩解,轴突消失,未见再生的神经纤维.结论:局部注射转化生长因子β_1质粒联合冷冻处理的冷藏异体神经移植可以协同减轻移植后产生的免疫排斥反应.     

Dilinoleoylphosphatidylcholine prevents transforming growth factor-beta1-mediated collagen accumulation in cultured rat hepatic stellate cells

Polyenylphosphatidylcholine (PPC), a mixture of polyunsaturated phosphatidylcholines, protects against alcoholic and nonalcoholic liver fibrosis in baboons and rats, respectively. In this study, we assessed the antifibrogenic action of dilinoleoylphosphatidylcholine (DLPC), the main phosphatidylcholine species of PPC, against transforming growth factor-beta1-mediated expression of alpha1(I) procollagen, tissue inhibitor of metallopreoteinase-1 (TIMP-1) and matrix metalloproteinase-13 (MMP-13) in cultured rat hepatic stellate cells (HSCs). In primary culture-activated HSCs, TGF-beta1 up-regulated the alpha1(I) procollagen mRNA level with a concomitant increase in type I collagen accumulation in culture media. Whereas TIMP-1 mRNA levels and TIMP-1 accumulation in media were also increased by TGF-beta1, MMP-13 mRNA expression and MMP-13 concentration in media were not altered. DLPC fully blocked TGF-beta1-induced increase in alpha1(I) procollagen mRNA expression and decreased collagen accumulation in media. Whereas TIMP-1 mRNA level and TIMP-1 accumulation in media were decreased by DLPC, MMP-13 mRNA expression and MMP-13 concentration in media were not changed by this treatment. Palmitoyl-linoleoylphosphatidylcholine (PLPC), the second most abundant component of PPC, had no effect on the concentrations of collagen, TIMP-1, and MMP-13 in HSC culture. We conclude that DLPC prevents TGF-beta1-mediated HSC fibrogenesis through down-regulation of alpha1(I) procollagen and TIMP-1 mRNA expression. The latter effect leads to a decreased accumulation of TIMP-1 that, in the presence of unchanged MMP-13 mRNA expression and MMP-13 concentration, results in a larger ratio of MMP-13/TIMP-1 concentrations in the culture media, favoring collagen degradation and lesser collagen accumulation. This effect of DLPC may explain, at least in part, the antifibrogenic action of PPC against alcoholic and other fibrotic disorders of the liver.     

Increased plasma transforming growth factor-beta1 in migraine

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Migraine is characterized by the peripheral and central sensitization of pain perceptive neural systems, and neurogenic inflammation is a key step in the development of migraine headache. We focused on transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1), which is a multifunctional proinflammatory cytokine. To address the possibility of TGF-beta1 involvement in migraine, we investigated the plasma level of TGF-beta1 in patients with migraine headache during headache-free periods. Subjects and METHODS: Sixty-eight subjects with migraine participated: 23 with migraine with aura (MWA) and 45 without aura (MWoA). We recruited 58 healthy subjects without headache as controls. In addition, we examined 12 subjects with episodic tension-type headache. Platelet poor plasma (PPP) was obtained from subjects during headache free-periods. TGF-beta1 levels in PPP were determined by enzyme-linked immunosorbent assay. RESULTS: The TGF-beta1 level in PPP was 2.62*+/- 0.23 (mean +/- SE) ng/mL in migraine, 2.08 +/- 0.20 ng/mL in tension-type headache, and 1.80 +/- 0.09 ng/mL in controls (P= .007, ANOVA; *P < .01, post hoc tests vs. the controls). CONCLUSION: TGF-beta1 in PPP was significantly increased in patients with migraine during headache-free periods. TGF-beta1 may play some role in the development of migraine headache.     

血管内皮生长因子和转化生长因子β1在儿童过敏性紫癜中的作用探讨

目的探讨过敏性紫癜(HSP)患儿血清血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子β1(TGFβ1)水平的变化及其在HSP发病中的作用。方法采用双抗体夹心ELISA方法检测20例急性期HSP患儿及15例正常儿童血清VEGF和TGFβ1水平。结果急性期HSP患儿血清VEGF和TGFβ1水平(533.85±127.63)ng/L,(84.25±19.32)ng/m l明显高于正常对照组(68.93±19.16)ng/L,(65.95±17.38)ng/m l,差异有显著性意义(P<0.01)。结论VEGF和TGFβ1可能参与了HSP的发病过程,可能是介导HSP血管炎症损伤过程中的重要细胞因子,为进一步认识HSP发病机制提供了实验依据。     

肺纤维化模型大鼠肺组织中转化生长因子β1及转化生长因子β1mRNA的表达及黄芪莪术合剂的干预效应

目的:分析中药黄芪莪术合剂对博莱霉素所致大鼠肺间质纤维化的干预作用。方法:实验于2002-10/2003-02在天津中医药大学动物实验室完成。①健康SD大白鼠60只,正常饲养1周后,随机分为正常对照组6只、模型组18只、黄芪莪术合剂组18只、强的松组18只。②经气管滴入博莱霉素复制肺纤维化大鼠模型,黄芪莪术合剂组给予40.5mg/L黄芪莪术合剂,强的松组给予0.63g/L强的松盐水溶液,均采用灌胃方式给药,每次1.5mL,1次/d。正常对照组、模型组给予等量生理盐水。③模型组、黄芪莪术合剂组、强的松组分别于造模第3,7,21天每组6只麻醉下取右肺下叶组织后处死,正常对照组于第3天麻醉下取右肺下叶组织后处死。④采用免疫组织化学方法和原位杂交方法检测肺组织转化生长因子β1及转化生长因子β1mRNA的表达。结果:进入结果分析大鼠55只,中途脱落5只。①转化生长因子β1表达:造模第3,7,21天模型组高于正常对照组(P<0.01),黄芪莪术合剂组和强的松组明显低于模型组(P<0.01～0.05)。造模第3,21天强的松治疗组低于黄芪莪术合剂治疗组(P<0.05)。②转化生长因子β1mRNA表达:造模第3,7,21天模型组高于正常对照组,黄芪莪术合剂组和强的松组明显低于模型组(P<0.01);第7天时,强的松治疗组低于黄芪莪术合剂治疗组,第21天时黄芪莪术合剂治疗组低于强的松治疗组,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:中药黄芪莪术合剂具有显著抑制博莱霉素致大鼠肺纤维化的作用,抑制转化生长因子β1及转化生长因子β1mRNA的表达是其可能的机制之一。     

Medical applications of transforming growth factor-beta

Transforming growth factor-beta (TGF-beta) proteins and their antagonists have entered clinical trials. These multi-functional regulators of cell growth and differentiation induce extracellular matrix proteins and suppress the immune system making TGF-betas useful in treatment of wounds with impaired healing, mucositis, fractures, ischemia-reperfusion injuries, and autoimmune disease. In diseases such as keloids, glomerulonephritis and pulmonary fibrosis, excessive expression of TGF-beta has been implicated as being responsible for accumulation of detrimental scar tissue. In these conditions, agents that block TGF-beta have prevented or reversed disease. Similarly, in carcinogenesis, blocking TGF-beta activity may be valuable in stimulating an immune response towards metastasis. As these blocking agents receive approval, we will likely have new therapies for previously recalcitrant diseases.