乳腺癌发生模型MCF10 抑癌基因NOEY2启动子区甲基化及mRNA表达

DNA甲基化是常见的表观遗传学变化。越来越多的证据表明,抑癌基因启动子区CpG岛甲基化可使其转录沉默,从而解除其抑癌作用,导致肿瘤的发生和发展。NOEY2是近年来发现的抑癌基因,表达于正常乳腺导管上皮细胞和卵巢生发上皮细胞,但在乳腺癌和卵巢癌细胞中表达显著减少或不表达。在本实验中检测乳腺癌发生模型MCF10中不同阶段的细胞系NOEY2基因启动子区CpG岛Ⅰ甲基化状态,并与mRNA表达水平进行比较,以研究乳腺癌的发生机制和早期诊断。     

乳腺癌发生过程中NOEY2基因启动子区甲基化及mRNA表达

目的 探讨乳腺癌发生过程中抑癌基因NOEY2启动子区甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法 应用甲基化特异性PCR及双亚硫酸钠基因测序技术检测MCF10模型中乳腺增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCFIODCIS．com、浸润癌细胞系MCF10CA1a、MCF10CA1d、MCF10CA1h及正常乳腺组织中NOEY2基因启动子区CpG岛Ⅰ甲基化状态,然后用RT-PCR和实时PCR技术检测上述样品的mRNA表达水平。结果 MCF10模型的增生细胞系、癌前细胞系、导管内癌细胞系、浸润癌细胞系均发生该基因启动子区CpG岛Ⅰ高度甲基化;与正常乳腺组织相比,上述细胞系mRNA表达显著减少。结论 NOEY2基因启动子区高度甲基化及相应的mRNA表达减少是乳腺癌发生过程中的早期事件,与乳腺癌发生有关,可能成为早期诊断乳腺癌的潜在分子生物学标记。     

乳腺癌发生模型MCF10各阶段细胞系中TIMP3基因启动子区甲基化分析

目的探讨抑癌基因TIMP3失活与乳腺癌发生和进展的关系。方法用甲基化特异性PCR技术和亚硫酸盐测序技术检测乳腺癌发生模型MCF10的增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCF10DCIS.com、浸润癌细胞系MCF10CA1a和转移癌细胞系MCF10CA1d、MCF10CA1h中TIMP3启动子区甲基化状态。结果甲基化特异性PCR分析显示,在上述各细胞系中,TIMP3启动子区均呈高度甲基化状态。亚硫酸盐测序显示,在上述各细胞系中,测序区内的68个CG位点几乎全部发生了甲基化,且甲基化累及了绝大部分等位基因。结论TIMP3基因启动子区甲基化在乳腺癌的发生和进展中起重要作用,可能成为早期诊断乳腺癌和判断乳腺癌预后的分子生物学标记。     

胃癌相关抑癌基因甲基化研究进展

DNA甲基化是一种表观遗传修饰,它与肿瘤的发生关系密切。DNA甲基化是基因表达调控的一种方式。抑癌基因启动子高甲基化可以使其表达失活,导致肿瘤发生。胃癌的发生与多基因异常表达密切相关,其中抑癌基因甲基化是胃癌发生发展的重要机制之一。     

散发性乳腺癌及乳腺不典型导管增生组织BRCA1基因启动子区甲基化分析

目的 了解散发性乳腺癌及癌旁增生组织、乳腺不典型导管增生组织BRCA1基因启动子区甲基化状态,探讨其与乳腺癌发生的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)结合巢式PCR技术,研究23例散发性乳腺癌及其癌旁增生组织、6例乳腺不典型导管增生组织及5例健康成人女性外周血淋巴细胞中BRCA1基因启动子区甲基化状态.结果 5例健康成人女性外周血淋巴细胞均表现BRCA1基因启动子区甲基化阴性;23例原发性乳腺癌组织中,BRCA1基因启动子区CpG岛甲基化率为65.22%(15/23);癌旁增生组织检出CpG岛甲基化者11例,甲基化率为47.83%(11/23),且均为癌组织阳性患者;6例乳腺不典型导管增生组织中,BRCA1基因启动子区CpG岛甲基化阳性者2例,甲基化率为33.33%(2/6);统计学检验结果表明,乳腺癌、癌旁增生组织之间,BRCA1基因启动子区甲基化阳性率无显著差异.结论 BRCA1基因启动子区CpG 岛甲基化是散发性乳腺癌发生过程中的早期事件,可能在乳腺癌发生中和乳腺增生病癌变过程中起重要生物学作用.     

DNA脱甲基制剂处理乳腺癌细胞可在DNA超甲基化区域解除Pol Ⅱ阻遏

抑癌基因失活在肿瘤形成过程中发挥着重要作用,后天修饰(比如DNA的甲基化)常导致转录抑制。Tao等的研究发现,RNA多聚酶Ⅱ阻遏(Pol Ⅱ stalling)参与了以DNA超甲基化为特征的乳腺癌细胞特定基因的沉默。他们研究了乳腺癌细胞多     

乳腺癌相关基因启动子甲基化的研究进展

表基因的改变是乳腺癌发生发展过程中非常重要的机制。DNA甲基化是一种表观遗传修饰,是基因表达调控的一种方式。目前,已发现许多肿瘤相关基因启动子区CpG岛的甲基化异常与乳腺癌的发生密切相关。该文就乳腺癌相关基因甲基化的研究进展作一综述。     

MicroRNA在乳腺癌中的作用

MicroRNA是一种小分子RNA,在基因的转录后调控中发挥着重要作用。研究证实microRNA与乳腺癌之间有很强的相关性。它能够通过抑制雌激素受体、抑制乳腺癌干细胞以及作用于乳腺癌相关蛋白等多种方式抑制乳腺癌的发生,同时它在乳腺癌的发生及其转移中也可起到一定的促进作用。本文对一些乳腺癌相关的microRNA及其作用作一综述。     

乳腺癌发生模型MCF10各细胞系中APC基因启动子区甲基化及mRNA表达检测

目的探讨乳腺癌发生模型MCF10中抑癌基因APC启动子区甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）及双亚硫酸钠基因测序技术检测MCF10模型的乳腺增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCF10DCIS.com、浸润癌细胞系MCF10CA1a、MCF10CA1d、MCF10CA1h及经典乳腺癌细胞系MCF-7和正常乳腺组织中APC基因启动子1A甲基化状态,然后用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和实时PCR技术检测上述样品的mRNA表达水平。结果在MCF10模型的增生细胞系、癌前细胞系、导管内癌细胞系、浸润癌细胞系中,APC基因启动子1A处于低甲基化状态;与正常乳腺组织相比,各细胞系APC基因mRNA表达无明显减少,MCF10AT、MCF10CA1d、MCF10CA1h、MCF10DCIS．com的mRNA表达分别减少0．27、0．96、1．78、2．70、2．03倍,MCF10A和MCF-7分别增加0．02和0．33倍）。结论MCF10模型中乳腺癌的发生发展过程与APC基因启动子区异常甲基化无关。     

PTEN抑癌基因在乳腺癌中的研究进展

乳腺癌是我国女性常见的一种恶性肿瘤,迄今其发生发展的分子机制还不完全清楚。PTEN基因是1997年发现并被克隆的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,大量的研究表明,乳腺癌的发生常伴有PTEN蛋白的表达缺失或减弱,提示该基因的突变失活与乳腺癌的发生、发展及预后密切相关。本文就抑癌基因PTEN与乳腺癌的关系研究进展加以综述。     

DNA甲基化在肿瘤诊断和治疗中应用的研究进展

DNA甲基化是重要的表遗传学修饰方式.启动子区异常高甲基化是抑癌基因表达失活的主要机制之一,与肿瘤的发生密切相关.现重点将DNA异常甲基化研究在临床肿瘤诊断、治疗以及监测等方面的应用及意义作一综述.     

PTEN抑癌基因在乳腺癌中的研究进展

乳腺癌是我国女性常见的一种恶性肿瘤，迄今其发生发展的分子机制还不完全清楚。PTEN基因是1997年发现并被克隆的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，大量的研究表明，乳腺癌的发生常伴有PTEN蛋白的表达缺失或减弱，提示该基因的突变失活与乳腺癌的发生、发展及预后密切相关。本文就抑癌基因PTEN与乳腺癌的关系研究进展加以综述。     

MTA1在乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-435s细胞系的表达及与ERα甲基化的关系

目的用去甲基化药物5-Aza-d C处理雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)启动子甲基化的乳腺癌细胞系,探讨ERα启动子甲基化与MTA1在乳腺癌发生发展中的可能机制。方法用去甲基化药物5-Aza-d C逆转MDA-MB-231和MDA-MB-435s的ERα启动子甲基化,甲基化PCR验证其甲基化状态,用RT-PCR和Western blot研究去甲基化后MTA1 m RNA和蛋白表达情况,Transwell检测去甲基化后细胞侵袭能力的改变。结果在MDA-MB-231和MDA-MB-435s细胞系中,去甲基化药物5-Aza-d C逆转ERα启动子甲基化后,MTA1m RNA和蛋白表达水平下调,细胞侵袭能力下降。结论乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435s中ERα甲基化与MTA1表达存在相关性。     

miR-24在肿瘤中的作用

MicroRNA(miR)是一种非编码蛋白的小分子单链内源性RNA,microRNA与组织器官的生长发育、细胞增殖、细胞分化与凋亡、肿瘤的发生发展具有密切的联系。而miR-24作为microRNA家族中重要的一员,在肿瘤患者的病灶组织或血液中,miR-24参与了细胞癌变的过程,并且在不同病理类型的恶性肿瘤中存在有促癌或抑癌的作用,例如,在肝癌、乳腺癌、肺癌、唾液腺腺样囊性癌、神经胶质瘤等肿瘤中,miR-24起到了促癌作用,在喉癌、鼻咽癌、结肠癌、子宫内膜癌、宫颈癌等肿瘤中,miR-24起到了抑癌作用,而在胃癌中,miR-24通过作用于不同的靶基因分别起到了促癌或抑癌的作用。     

DAPK1基因启动子甲基化与乳腺癌临床病理特征的关系

目的：研究乳腺癌组织中死亡相关蛋白激酶（death-associated protein kinase 1,DAPK1）启动子甲基化状态及其与临床病理特征之间的关系,并探讨该甲基化状态与DAPK1 mRNA表达的相关性。方法：应用甲基化特异性PCR法检测人乳腺癌组织和相应癌旁正常乳腺组织中DAPK1启动子甲基化状态,分析其与患者临床病理特征的关系,并结合半定量RT-PCR法的检测结果加以分析。结果：43例乳腺癌标本中DAPK1启动子甲基化阳性率为44.1%（20/43）,DAPK1启动子甲基化状态与年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、ER状态、PR状态、Her2状态无关（P〉0.05）,而与有无淋巴结转移、P53是否阳性有关（P〈0.05）。DAPK1启动子甲基化标本中的DAPK1mRNA表达水平低于未甲基化标本,两者差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：乳腺癌中DAPK1基因启动子区高甲基化与其mRNA失表达有关,在乳腺癌发生、发展中可能起重要作用,有可能作为乳腺癌诊断和预后分析的检测指标之一。     

结直肠腺瘤中DNMT3B表达及RASSF1A甲基化分析

目的探讨DNA甲基转移酶的表达及抑癌基因RASSF1A的甲基化及两者表达与较大结直肠腺瘤(colorectal adenoma,CA)的关系。方法选取20对直径≥10 mm的CA患者组织及对应瘤旁组织作为对照,分别使用Real-time PCR和Western blot技术检测DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA和蛋白表达变化,应用亚硫酸氢盐限制性酶切分析(COBRA)技术分析重复序列LINE-1甲基化水平,应用甲基化特异性PCR(MS-PCR)技术分析抑癌基因RASSF1A的甲基化水平。结果与对照组相比,CA中DNMT3B的mRNA和蛋白水平升高,DNMT3B的活性显著升高。CA组织中LINE-1甲基化水平降低,肿瘤抑制基因RASSF1A的启动子甲基化水平升高,且表达降低。结论 DNMT3B过表达可能在CA的发生、发展中起重要作用,具体机制可能与降低整体甲基化水平和升高抑癌基因RASSF1A甲基化水平有关。     

DNA甲基化及其抑制剂研究进展

甲基化是真核细胞DNA正常的修饰方式,它由DNA甲基转移酶催化发生,但异常甲基化是肿瘤发生的重要因素,例如,甲基化引起C→T突变,高甲基化抑制抑癌基因表达等,因此,以5氮杂脱氧胞苷为代表的DNA甲基转移酶抑制剂是一类前景看好的癌变抑制药,本全面总结了甲基化影响的基因,现有研究开发的甲基化抑制剂类型,以及甲基转移酶结构和DNA甲基化检测方法等。     

NDRG-1基因甲基化与乳腺癌发生的关系

目的 对NDRG-1基因启动子区甲基化状态进行研究,探讨NDRG-1基因甲基化在乳腺癌发生中的作用.方法 采用双色荧光杂交微阵列基因芯片技术对33例乳腺癌样本和癌旁组织样本进行NDRG-1基因启动子区甲基化状态研究.结果 33例肿瘤样本和癌旁组织样本中NDRG-1基因启动子区CpG位点均有不同程度的甲基化,肿瘤组织中NDRG-1基因启动子区CpG位点甲基化率显著高于相应的癌旁样本组织(t=14.12,P＜0.05).结论 DNA甲基化作为NDRG-1基因的重要调控机制,NDRG-1基因启动子区过甲基化可能在乳腺癌的发生过程中起重要作用.     

内皮素-3基因表达和启动子甲基化与乳腺癌的相关性研究

目的:检测分析内皮素-3(EDN-3)基因表达及其启动子甲基化在乳腺癌患者各种临床状态的变化。方法:采用实时定量PCR(RT-PCR)和甲基化PCR(MS-PCR)方法检测54例乳腺癌患者(实验组)及60例体检健康女性(对照组)外周血中EDN-3mRNA表达及其启动子甲基化发生率,比较以上两指标变化在乳腺癌患者不同临床状态的统计学差异。结果:实验组EDN-3mRNA表达较对照组显著降低,差异有统计学意义(t=-7.84,P0.01),但这种降低在患者不同年龄、不同肿瘤组织类型和大小、有否区域淋巴结转移及远处转移之间差异均无统计学意义(P0.05)。实验组EDN-3启动子甲基化检出率为55.56%(30/54),对照组未检出甲基化,差异有统计学意义(χ2=45.238,P0.01);EDN-3启动子甲基化在上述不同临床状态时的差异亦无统计学意义(P0.05)。结论:EDN-3mRNA转录下调和启动子甲基化可能与乳腺癌的发生有关,与患者临床病理状态无关。     

乳腺癌患者血清sCD146与组织MCAM基因甲基化状态和临床病理特征的关系

目的 探讨乳腺癌患者血清可溶性CD146[又称为黑色素瘤细胞粘附分子(MCAM)](sCD146)水平与肿瘤组织MCAM基因甲基化状态及患者临床病理特征之间的关系.方法 收集2019年5月至2020年5月在我院确诊并接受手术治疗的148例原发性乳腺癌患者的新鲜肿瘤组织和癌旁组织以及术前血液样本,另收集30例健康体检人群的血液样本作为正常对照组.采用甲基化定量PCR技术(qMSP)确定组织中MCAM基因甲基化程度,并采用ELISA法检测血清sCD146水平.用Pearson法分析乳腺癌患者两项指标之间的相关性.结果 对于乳腺癌患者,血清sCD146水平高于正常对照组人群(P<0.05),且乳腺癌组织MCAM基因甲基化程度的中位数明显低于相应的癌旁组织(P<0.05).血清sCD146水平与肿瘤组织中MCAM基因甲基化程度呈负相关性(r=-0.461,P<0.001).此外,血清sCD146水平与肿瘤组织中MCAM基因甲基化程度与肿瘤T分期、分级、Ki-67表达及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达有关(P<0.05).而且三阴性乳腺癌患者血清sCD146水平和组织MCAM基因低甲基化率最高,显著高于Luminal A型和Luminal B-HER2-型(P<0.05).结论 乳腺癌患者血清sCD146水平较健康对照人群普遍升高,以三阴性乳腺癌患者升高最明显,这可能与肿瘤组织中MCAM基因发生去甲基化有关;而且血清sCD146水平也随着肿瘤T分期和组织学分级增加而逐渐升高.