补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响

目的研究补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响.方法取二次酶消化法培养的胎鼠颅骨第三代成骨细胞,随机分为5组,即:细胞对照组、空白血清组、含药血清组、原药组、阳性对照药α D3组,分别加入普通细胞培养液、含空白血清及不同浓度补肾活血中药含药血清、补肾活血中药原药液、阳性对照药(αD3)的条件培养液,分别在培养第3天和第6天进行各试验组成骨细胞碱性磷酸酶及骨钙蛋白分泌量测定,观察补肾活血中药含药血清及原药液对成骨细胞活性的影响.结果含药血清组成骨细胞活性指标碱性磷酸酶(ALP)值在培养第3天均低于空白血清组,且与含药血清浓度呈负相关关系;第6天,含药血清组各浓度组ALP值明显升高,均显著高于空白血清组,ALP值与含药血清浓度存在正相关关系;空白血清组ALP值在培养第6天时下降,其均值低于培养第3天ALP值.培养第3天及第6天,各浓度原药组ALP值均高于细胞对照组及αD3组;ALP值与原药浓度呈正相关关系.含药血清组及中药原药组骨钙素(OC)含量显著高于空白血清及其他各对照组.结论补肾活血中药含药血清及原药能够直接作用于体外培养的成骨细胞,促进成骨细胞增殖,增强其分泌活性;可延长成骨细胞活性分泌期,使其活性分泌高峰后移而峰值升高,增加其活性分泌总量.     

四种中药对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化功能的影响

目的:观察中药海螵蛸、骨碎补、三七、阿胶含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化功能的影响。方法:应用MTT法观察海螵蛸、骨碎补、三七、阿胶对体外培养成骨细胞增殖功能的影响,ELISA法观察海螵蛸、骨碎补、三七、阿胶对体外培养成骨细胞ALP含量的影响。结果:在成骨细胞的增殖方面,海螵蛸、三七含药血清对成骨细胞增殖有抑制作用,骨碎补、阿胶对成骨细胞增殖没有明显促进作用。在对成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)的作用方面,海螵蛸、骨碎补对体外培养大鼠成骨细胞内ALP的合成有抑制作用;三七没有明显作用;阿胶有明显的促进作用。结论:4种中药对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化功能的影响各不相同。海螵蛸对体外培养大鼠成骨细胞的增殖、分化功能有抑制作用;骨碎补对体外培养大鼠成骨细胞的增殖无明显作用,对其分化功能有抑制作用;三七对体外培养大鼠成骨细胞的增殖有抑制作用,对其分化功能作用不明显;阿胶对体外培养大鼠成骨细胞的增殖无促进作用,但能促进体外培养大鼠成骨细胞的分化功能。     

不同中药含药血清对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:研究中药骨康及其中补肾、健脾、活血各成分吸收后不同血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌白介素-6(1L-6)的影响。方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,然后以中药骨康及其中补肾、健脾、活血成分吸收后血清,加入体外培养成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞增殖,ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果:发现中药骨康吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,补肾成分吸收后血清亦能促进成骨细胞的增殖和分化,健脾、活血各成分吸收后血清对成骨细胞无明显影响,同时,中药骨康及其中补肾成分含药血清可作用于成骨细胞,使分泌其IL-6的能力下降。而中药骨康含药血清的作用明显优于补肾成分含药血清的作用。结论:中药骨康及其中补肾成分含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化从而促进骨形成,同时可抑制成骨细胞分泌IL-6,健脾、活血二法是补肾法的良好补充。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.方法:将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组,通过体外分离和培养成骨细胞体系,运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果:成骨细胞在10%的血清中培养7天时,用分光光度计测定ALP活性,发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性,骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128.1%和129.1%.结论:中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性.     

健骨康胶囊配方血清药理学筛选研究

目的:研究健骨康胶囊不同配方不同浓度含药血清对体外培养大鼠成骨细胞活性和及成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:以健骨康胶囊不同配方口服吸收后的血清,加入体外培养大鼠成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞活性,比色法测定培养ALP活性。结果:健骨康胶囊不同配方中药吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,提高成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,以配方2药物灌胃后10%药物血清浓度最佳。结论:健骨康胶囊药物血清体外具有抗骨质疏松症作用;健骨康胶囊配方2为优选方。     

巴戟天多糖含药血清对体外成骨细胞DKK-1表达的影响

目的探讨巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖、分化及DKK-1蛋白表达的影响。方法源于大鼠颅盖骨的原代成骨细胞中加入不同浓度的巴戟天多糖含药血清进行干预。MTT法观察巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖的影响,用硝基苯磷酸盐(P-nitrophenyl phosphate,PNPP)偶氮法观察含药血清对成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,用蛋白印记法观察含药血清对成骨细胞DKK-1蛋白表达的影响。结果巴戟天多糖含药血清可使体外培养成骨细胞的增殖率明显提高(P<0.01),并能提高成骨细胞ALP活性(P<0.01)。此外,巴戟天多糖含药血清可以下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达。结论巴戟天多糖含药血清可促进成骨细胞的增殖能力和ALP活性,并可通过下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达影响骨代谢。     

骨碎补总黄酮含药血清对成骨细胞增殖、分化、周期及调亡的影响

目的:观察含骨碎补总黄酮大鼠血清对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化、周期及凋亡的影响.方法:取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞.应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法(PNPP)及流式细胞术观察不同浓度的含骨碎补总黄酮大鼠血清在不同时段对体外培养成骨细胞的光密度D(λ)值、碱性磷酸酶(ALP)活性及细胞周期和凋亡的影响.结果:不同浓度的骨碎补总黄酮大鼠含药血清均可促进成骨细胞增殖、分化,使处于DNA合成期细胞比例增加,使早期和晚期凋亡细胞比例减少,与对照组比较均具有统计学意义(P＜0.05). 结论: 骨碎补总黄酮含药血清具有促进体外成骨细胞增殖、分化,抑制成骨细胞凋亡的作用,即具有抗骨质疏松活性.     

补肾壮骨中药对模拟微重力成骨细胞的影响

目的:探讨补肾壮骨中药对模拟失重条件下体外培养成骨细胞的影响,拟在细胞水平上揭示该方对抗骨丢失的机制.方法:分离培养乳鼠颅骨成骨细胞,置回旋器30 r/min,连续回旋模拟失重,体外含药血清干预3 d,观察该方对失重成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)生成及细胞凋亡的影响.结果:与正常对照组比较,失重模型组成骨细胞在回旋3 d细胞培养液中的ALP活性和BGP活性均显著降低(P＜0.05);成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05).与失重模型组比较,中药含药血清组ALP活性和BGP活性均明显升高,其中含药血清20%浓度组差异显著(P＜0.05);成骨细胞凋亡率均减少,含药血清10%,和20%浓度组差异显著(P＜0.05).结论:该方能改善模拟失重条件下成骨细胞的功能,减少成骨细胞凋亡,缓解其分化抑制状态,促进骨基质的形成和成熟.     

补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖的影响

目的:观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖的影响.方法:制备补肾健脾活血方中药含药血清,取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞,用MTT检测成骨细胞增殖率.结果:补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率形成,且与含药血清浓度呈正相关.结论:补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖,并能促进成骨细胞对骨机质的功能.     

丹仙康骨胶囊对培养成骨细胞增殖分化的影响

目的 :为了解补肾活血中药丹仙康骨胶囊对体外培养成骨细胞的作用。方法 :应用MTT ,对硝基苯磷酸盐法及骨钙素含量放免测定法 ,观察丹仙康骨胶囊对成骨细胞增殖与分化作用的影响。结果 :丹仙康骨胶囊刺激成骨细胞增殖 ,提高ALP活性及骨钙素含量。结论 :丹仙康骨胶囊具有刺激体外成骨细胞增殖分化的功能     

补肾活血方对成骨细胞增殖等生物学特性影响的实验研究

目的:观察中药补肾活血方对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化、矿化的的影响.方法:取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞.应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法(PNPP)及茜素红染色方法观察补肾活血方对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化结节形成的影响.结果:补肾活血方具有刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性及矿化结节形成的数量的作用(P＜0.01或P＜0.05).结论:补肾活血方具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化作用.     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组，通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：成骨细胞在10％的血清中培养7天时，用分光光度计测定ALP活性。发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性，骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128．1％和129．1％。结论：中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性。     

补肾强筋胶囊对成骨细胞缺氧诱导因子1α的影响

目的:探讨补肾强筋胶囊含药血清对成骨细胞缺氧诱导因子1α(HIF1-α)的影响。方法:制备补肾强筋胶囊大鼠含药血清,成骨细胞株hFOB1.19培养并分为常规组、对照组、低浓度组及高浓度组,常规组用21%O2培养,其余三组用2%O2培养,其中对照组加入空白血清,低浓度组和高浓度组分别加入低浓度和高浓度补肾强筋胶囊含药血清,MTT法检测成骨细胞增殖,并检测各组ALP活性,Western blot检测各组HIF1-α。结果:MTT检测成骨细胞增值率低于常规对照组,差异有统计学意义(P0.01);高浓度组、低浓度组OD值与低氧对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);常规对照组ALP活性与低氧对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);高浓度组与低浓度组均比低氧对照组的ALP活性高,差异有统计学意义(P0.05);在低氧环境下,加入补肾强筋胶囊含药血清后,高浓度组及低浓度组其HIF-1α的表达较低氧对照组降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论:补肾强筋胶囊含药血清可促进低氧环境下成骨细胞的增殖,降低HIF1-α含量。     

中药复方含药血清对回转模拟失重成骨细胞影响的观察

目的:观察中药复方含药血清对模拟失重条件下体外培养成骨细胞的影响,探讨该方对抗骨丢失的部分作用机理.方法:分离乳鼠颅骨成骨细胞,体外培养后,随机分为5%,10%,20%浓度的空白血清对照组和5%,10%,20%空白血清回转组和5%,10%,20%含药血清回转组,连续回转48h模拟失重,观察该方对大鼠成骨细胞增殖、Ⅰ型胶原合成、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)生成的影响.结果:5%和10%空白血清回转组成骨细胞增殖比正常重力组明显降低(P＜0.05);与10%空白血清回转模拟失重组相比,10%含药血清回转组可显著促进细胞增殖(P＜0.05).正常重力组与回转模拟失重组Ⅰ型胶原含量比较差异无统计学意义(P＞0.05);与5%和10%空白血清回转模拟失重组相比,5%和10%含药血清回转组均能明显促进成骨细胞Ⅰ型胶原合成(P＜0.05).与5%正常重力组相比,5%空白血清回转组成骨细胞ALP活性明显降低(P＜0.05);与5%和20%空白血清回转模拟失重组相比,5%和20%舍药血清回转组能明显提高成骨细胞ALP活性(P＜0.05).与10%、20%空白血清组相比,10%、20%空白血清回转组成骨细胞BGP含量明显降低(P＜0.05);而中药复方含药血清对其模拟失重成骨细胞BGP活性没有显著影响(P＞0.05).结论:该方能改善模拟失重条件下成骨细胞增殖,分化成熟,增加胶原蛋白合成,从而实现对抗失重骨丢失的效果.     

补肾活血中药对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的观察补肾活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞培养体系;收集补肾活血中药的含药血清,用10%含药血清代替10%的血清,绘制生长曲线,观察补肾活血中药含药血清促进骨髓间充质干细胞体外增殖的作用。结果所培养的大鼠骨髓细胞在表型表达和细胞形态上具备MSC特征,补肾活血中药含药血清组增长速度比空白对照组明显加快,并与剂量呈正比。结论补肾活血中药含药血清能促进干细胞在体外增殖。     

纳米钙补肾中药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响

用血清药理学方法探讨纳米钙补肾中药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响.按照随机对照原则设立7个实验组:假手术组、模型空白组、中药复方小剂量组、中药复方中剂量组、中药复方大剂量组、骨疏康颗粒组、牡蛎碳酸钙咀嚼片组,在相同条件下分别制备含药血清和对照血清.采用多次胶原酶消化法获得足够数量的成骨细胞进行实验研究.用MTT法观察各组不同浓度血清在不同作用时间段对成骨细胞增殖的影响.采用SPSS 10.0软件进行均数比较和多元线性分析.结果表明,3个中药复方组均能促进成骨细胞增殖,其中20%血清浓度下中剂量中药复方增殖作用最为明显,有显著的统计学意义(P＜0.01).表明血清浓度与成骨细胞增殖率有较强的相关关系.     

菟丝子含药血清对成骨细胞代谢调控的影响

目的探讨菟丝子含药血清对体外培养大鼠成骨细胞代谢调控的影响。方法采用血清药理学方法制备菟丝子含药血清;采用改良的组织块法体外培养大鼠成骨细胞;分别用5%、10%、15%、20%菟丝子含药血清诱导培养成骨细胞24h、48h、72h后,MTT法检测大鼠成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)的活性;培养48h后用RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)mRNA的表达。结果 5%和10%菟丝子含药血清在48h和72h能显著促进成骨细胞增殖并提高ALP活性;在48h时10%菟丝子含药血清可促进COL-ⅠmRNA的表达。结论 10%菟丝子含药血清能够明显促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,表明其具有促进成骨作用。     

超临界流体萃取补肾活血方产物GC/MS分析及诱导成骨细胞增殖研究

目的:研究超临界流体萃取选择性萃取补肾活血方产物的化学组成及体外诱导成骨细胞增殖的活性。方法:采用多元超临界流体萃取补肾活血方,采用气相色谱-质谱联用(GC/MS)表征各萃取产物的化学组成,并以体外培养原代大鼠颅成骨细胞为模型,研究各萃取产物含药血清诱导成骨细胞增殖的活性。结果:补肾活血方经超临界流体萃取得到SFEI和SFEII两个产物,GC/MS分析显示两个萃取产物挥发性组分的化学组成极为相似,为倍半萜和醛类化合物,但组成比例不同;体外研究显示SFEI与SFEII高、中、低剂量组含药血清均可显著诱导成骨细胞增殖(P0.05),且SFEI中剂量组、SFEII低剂量组促成骨细胞增殖作用显著强于醇-水提取物组和阳性对照药组(P0.05)。结论:超临界流体可萃取选择性萃取补肾活血方中的挥发性和脂溶性成分,且该萃取物具有体外诱导成骨细胞增殖的活性。     

补肾活血方对大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的观察中药补肾活血方对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响。方法取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞：应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法（PNPP）及茜素红染色方法观察不同浓度补肾活血方对体外培养成骨细胞在24、48、72h不同时段的增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性及矿化结节形成的影响。结果不同浓度的补肾活血方均可促进成骨细胞增殖率提高,以中、高浓度组的作用较为明显（P〈0．01）;不同浓度补肾活血方可使ALP活性增强（P〈0．01）;中、高浓度组补肾活血方矿化结节数量,显著多于对照组（P〈0．01）。结论补肾活血方具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化的作用。     

复方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响

目的：观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响。方法：制备补肾健脾活血方复方中药含药血清，取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞，用MTT法检测成骨细胞增殖率，用茜素红染色法显示矿化结节的形成。结果：补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率和矿化结节形成数，且与含药血清浓度呈正相关。结论：补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖，并能促进成骨细胞对骨机质的矿化功能。