萘哌地尔抗大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的研究萘哌地尔(naftopidil,Naf)对去甲肾上腺素(noradrenalin,NA)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响并探讨其机制。方法培养的VSMCs经NA诱导其增殖,分别用MTT比色法和细胞计数法检测Naf对VSMCs增殖的影响;荧光法测定细胞内钙浓度([Ca2+]i)及Real-TimeRT-PCR检测c-myc、c-fos、高血压相关基因(hypertension related gene-1,HRG-1)mRNA的表达。结果萘哌地尔(10-7～10-6mol·L-1)能够抑制NA诱导的VSMCs增殖,并明显降低VSMCs[Ca2+]i,降低c-myc、c-fos mRNA表达,增加HRG-1 mRNA的表达。结论萘哌地尔明显抑制NA诱导的VSMCs增殖,作用机制可能与其降低VSMCs[Ca2+]i、拮抗NA上调c-myc、c-fos mRNA的表达和拮抗NA下调HRG-1 mRNA的表达有关。     

萘哌地尔衍生物YMⅢ抗AngⅡ诱导SHR血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察萘哌地尔衍生物YMⅢ对血管紧张Ⅱ(AngⅡ)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,并初探其作用机制。方法以组织块贴壁法培养SHR VSMC,应用MTT比色法、3[H]-TdR参入法、流式细胞技术、电镜技术和real time RT-PCR分别观察VSMC在AngⅡ刺激下的细胞增殖、DNA合成、细胞周期、细胞超微结构和Agt、c-myc基因表达的变化,及观察YMⅢ对上述指标的影响。结果 AngⅡ1μmol.L-1明显促进VSMC增殖和DNA合成;而YMⅢ0.01、0.05、0.10μmol.L-1可呈浓度依赖性地抑制AngⅡ所致VSMC增殖活性、DNA合成、细胞周期增殖指数的升高,改善细胞超微结构,并使AngⅡ升高的Agt、c-myc mRNA表达下调。结论 YMⅢ可明显抑制AngⅡ诱导的SHR VSMC增殖,作用机制可能与其抑制Agt、c-myc mRNA表达,从而抑制细胞DNA合成和细胞周期的进展有关。     

Urocortin抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖活力的机制研究

目的：探讨Urocortin抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖活力的机制。方法：分离和培养大鼠血管平滑肌细胞，并加入不同浓度的Urocortin以及其他药物培养，运用肌’法考察Urocortin对血管平滑肌细胞增殖活力的抑制作用及相关机制。结果：Urocottin能够浓度依赖性地降低大鼠血管平滑肌细胞增殖活力，且能显著抑制L-型钙通道激动剂Bay K8644对细胞活力的增强作用。结论：Urocottin可能通过阻断厶型钙通道而浓度依赖性地抑制血管平滑肌细胞的增殖活力。     

萘哌地尔衍生物YMⅢ对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其机理研究

目的：本实验旨在观察萘哌地尔衍生物YMⅢ对体外培养的自发性高血压大鼠（SHR）及Wistar大鼠胸主动脉平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响，为该药的开发研究提供基础资料。方法：（1）将SHR及Wistar大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行体外培养，以SHR胸主动脉平滑肌细胞为研究对象，以Wistar大鼠作对照。（2）应用四甲基偶氮唑盐（MTT）微量酶反应法检测细胞增殖活性；real-time PCR技术检测其对Agt、     

黄芪抑制血管平滑肌细胞增殖及其作用机制

目的 观察黄芪(AS)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,了解黄芪是否通过刺激VSMC产生一氧化氮(nitric oxide,NO),使细胞周期停滞于G0／G1期,从而抑制平滑肌细胞增殖。方法 [3H]-胸腺嘧啶核苷酸([3H]-TdR)掺入测定VSMCDNA合成,流式细胞仪检测细胞周期情况,硝酸还原酶法测定细胞培养上清中NO水平。结果 黄芪以剂量依赖关系抑制血清诱导的VSMC[3H]-胸腺嘧啶核苷酸掺入,使G0／G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,黄芪刺激VSMC后,细胞培养上清中NO水平呈剂量依赖上升。结论黄芪能抑制VSMC增殖,使细胞周期停滞于G0／G1期,这一过程可能与黄芪刺激VSMC产生NO有关。     

调脂合剂对血脂代谢紊乱型大鼠血管平滑肌细胞增殖的干预作用

目的研究血脂水平与血管平滑肌细胞增殖(VSMC)增殖之间的关系,探讨动脉粥样硬化(AS)发病的可能机制,为临床开发调脂药物提供依据.方法将40只Wister大鼠分为调脂合剂组,空白对照组,模型组,辛伐他汀组四组,喂饲高脂饲料造模,调脂合剂组用降脂合剂(1.1ml/100mg体重/d,1ml含生药0.85g)灌胃,辛伐他汀组用西药辛伐他汀(1.0ml/100g体重/每天,1ml含药0.17mg)(浙江新昌京新制药有限公司,批号:0001175)灌胃,以上各组共灌胃10周,自由饮水,于实验第77天全部处死取材.分别检测各组的总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量,用PCNA标记法检测VSMC增殖率.结果模型组的TC水平明显高于其他三组(P＜0.01),LDL-C的含量空白对照组和模型组差异有显著性.模型组的PCNA阳性细胞率明显高于其他三组(P＜0.01).经相关性分析显示,模型组VSMC增殖率与血清TG、TC含量呈正相关,其相关系数分别是r=0.786,r=0.696,经检验具有显著性(P＜0.01).结论血脂异常可以刺激VSMC的增殖,并且VSMC的增殖率与血脂水平呈正相关.AS的预防主要通过抑制VSMC的增殖和向内膜下迁移.中药调脂合剂疗效可靠,经济实用.     

川芎嗪抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖的作用

目的探讨川芎嗪对大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖的影响。方法采用酶消化法和改良组织块法培养原代大鼠气道平滑肌细胞。MTT法检测血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)与川芎嗪共同处理的大鼠ASMCsA490的吸光度值,以观察川芎嗪对PDGF诱导的细胞增殖的抑制作用。Western blot检测ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达水平。结果 MTT法检测,与各对照组比较,给予12.5、25、50、100和200μmol.L-1浓度川芎嗪处理6、12、24、36和48h后,各浓度组川芎嗪处理的细胞平均抑制率均增加,P<0.05,其中以200μmol.L-1在48h时效果最明显,P<0.01。川芎嗪(200μmol.L-1)与PDGF(20pg·L-1)共同处理30min和60min后,p-ERK1/2蛋白表达水平均明显降低。结论川芎嗪对增殖的ASMCs有抑制作用,可能与抑制ERK1/2的信号通路活化有关。     

多沙唑嗪抑制人血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的探讨多沙唑嗪对人血管平滑肌细胞(VSMCS)增殖的抑制作用。方法将0.1、1、10、25μmol/L的多沙唑嗪(Doxazosin,Dox)作用于体外培养的VSMCS,采用氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入的方法检测细胞的增殖。结果在1、10、25μmol/L的Dox作用下,VSMCS的3H-TdR的掺入量分别为(983±58.7)cpm、(730±54.9)cpm、(500±64.1)cpm,显著低于对照组的(1270±96.5)cpm(P<0.01),并表现为剂量依赖性(P<0.01)。结论多沙唑嗪能够抑制人VSMCS的增殖,对经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)后再狭窄可能有防治作用。     

NO介导黄芩苷抑制血管平滑肌细胞增殖的作用

目的探讨黄芩苷(Ba)对高糖高胰岛素模拟胰岛素抵抗(IR)状态下人胸主动脉平滑肌细胞(HASMCs)增殖的影响及其与NO的关系。方法组织贴块法培养HASMCs,以高糖高胰岛素培养基模拟胰岛素抵抗。分别设对照组、L-NAME组、不同剂量的Ba组和不同剂量Ba合用L-NAME组。MTT法测定细胞增殖;硝酸还原酶法测定NO含量;NOS试剂盒测定T-NOS活性。结果高糖高胰岛素促进HASMCs的增殖。10-5mol·L-1Ba促进正常培养细胞的增殖,而10-4mol·L-1Ba明显抑制细胞的增殖;高、低剂量的Ba均可抑制模拟IR培养的HASMCs增殖,且高剂量Ba作用更强。HASMCs经模拟IR培养,其培养液中NO含量和总NOS活性均下降,高、低剂量Ba能够增加NO含量、增强总NOS活性,而加用L-NAME可减弱该作用。结论 Ba抑制正常及IR培养的HASMCs增殖,可能与调节NOS活性及NO含量有关。     

金粉蕨素抑制大鼠主动脉平滑肌增殖作用及机制

目的 :观察金粉蕨素对牛血清刺激的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 ,以终浓度为 10 %的新生牛血清 (NCS)作为刺激因素 ,用噻唑蓝 (MTT)比色法和细胞计数法观察细胞增殖状况 ,用流式细胞仪分析细胞周期 ,用Westernblot实验测定蛋白表达。结果 :与 10 %牛血清组相比 ,不同浓度金粉蕨素组的MTT测定值与细胞数目均明显下降 (P <0 .0 5 ) ,其下降幅度呈浓度依赖性 ;10 μmol·L-1时达峰值 (P <0 .0 1) ;细胞周期分析显示 ,金粉蕨素组G1期百分比 (85 .1% )高于10 %牛血清组 (70 .0 % ) ,而S期比例 (4 .3% )低于10 %牛血清组 (16.4 % ) ;Westernblot结果显示给药组P ERK1 2蛋白表达明显低于同时间点牛血清组。结论 :金粉蕨素能阻止细胞周期由G0 G1期向S期推进 ,抑制血管平滑肌细胞增殖 ,此作用与其抑制ERK1 2磷酸化、影响MAPK ERK通路激活有关。     

辣椒素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨辣椒素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖和迁移的影响。方法 体外构建自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞系,分别采用20 μmol·L^-1辣椒素（高剂量组）、10 μmol·L^-1辣椒素（中剂量组）、5 μmol·L^-1辣椒素（低剂量组）和1 μmol·L^-1厄贝沙坦（厄贝沙坦组）直接处理细胞或特异性阻断CD36的表达后,再分别用20 μmol·L^-1辣椒素（高剂量组）、10 μmol·L^-1辣椒素（中剂量组）、5 μmol·L^-1辣椒素（低剂量组）和1 μmol·L^-1厄贝沙坦（厄贝沙坦组）处理细胞,采用MTT法检测VSMCs增殖情况,Boyden趋化小室检测VSMCs迁移情况,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blotting）检测平滑肌22a蛋白（smooth muscle 22a,SM22a）和调宁蛋白（Calponin）mRNA和蛋白的表达水平。结果 辣椒素和厄贝沙坦分别处理VSMCs后,与对照组相比,高、中、低剂量辣椒素组和厄贝沙坦组细胞增殖率和迁移率均有所降低,SM22a和Calponin的表达上调;与厄贝沙坦组相比,高剂量辣椒素组SM22a和Calponin的表达有所上调,中、低剂量辣椒素组SM22a和Calponin的表达均有所下调。特异性阻断CD36的表达后,与对照组相比,高、中、低剂量辣椒素组和厄贝沙坦组细胞增殖率降低,迁移率进一步降低,SM22a和Calponin表达上调;与厄贝沙坦组相比,高、中、低剂量辣椒素组SM22a的表达均有所上调,高、中、低剂量辣椒素组Calponin的表达有所下调。结论 高、中、低剂量辣椒素能够通过上调SM22a和Calponin的表达,抑制CD36的表达,来促进自发性高血压大鼠VSMCs由未分化表型向分化表型转化,从而抑制VSMCs的增殖及迁移和高血压血管重构的发生,促进其动脉管壁恢复正常的生理功能,有助于降低血压。     

Quercetin Glucuronide Inhibits Cell Migration and Proliferation by Platelet-Derived Growth Factor in Vascular Smooth Muscle Cells

Many epidemiologic studies have reported that dietary flavonoids provide protection against cardiovascular disease. Quercetin, a member of the bioflavonoids family, has been proposed to have anti-inflammatory, anti-atherogenic, and anti-hypertensive properties leading to the beneficial effects against cardiovascular diseases. Recent studies demonstrated that orally administered quercetin appeared in plasma as glucuronide-conjugated forms in rats and humans. Therefore, we examined the effect of chemically synthesized quercetin glucuronide on platelet-derived growth factor (PDGF)-induced cell migration and kinase activation in cultured rat aortic smooth muscle cells (RASMCs). PDGF-induced RASMC migration was inhibited by quercetin 3-O-β-D-glucuronide (Q3GA). Q3GA also attenuated PDGF-induced cell proliferation in RASMCs. PDGF activated extracellular-signal regulated kinase (ERK) 1/2, c-Jun N-terminal kinase (JNK), p38 mitogen-activated protein (MAP) kinase, and Akt in RASMCs. PDGF-induced JNK and Akt activations were suppressed by Q3GA, whereas ERK1/2 and p38 MAP kinase activations were not affected. We also confirmed that PDGF-induced JNK and Akt activations were inhibited by antioxidants, N-acetylcysteine and diphenyleneiodonium chloride, in RASMCs. These findings suggest Q3GA would be an active metabolite of quercetin in plasma and may possess preventing effects for cardiovascular diseases relevant to vascular smooth muscle cell disorders.     

吡格列酮和罗格列酮对脂多糖诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察胰岛素增敏剂——噻唑烷二酮类(TZD)药物吡格列酮和罗格列酮对脂多糖(LPS)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)异常增殖的影响。方法:组织块贴壁法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞;LPS(0.1,1,10mg·L-1)干预血管平滑肌细胞不同时间(0,12,24,48,72h)后,分别用吡格列酮和罗格列酮与10mg·L-1LPS共同孵育72h,四甲基偶氮咗盐微量酶比色(MTT)法检测血管平滑肌细胞增殖。结果:10mg·L-1LPS孵育72h导致血管平滑肌细胞增殖程度最明显(P<0.01);吡格列酮和罗格列酮可明显抑制LPS诱导的血管平滑肌细胞增殖。结论:噻唑烷二酮类代表药吡格列酮和罗格列酮均对LPS诱导的血管平滑肌细胞异常增殖具有抑制作用,该类药物可能在治疗心血管疾病方面有较好的应用前景。     

甲基莲心碱对人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及表型调节的影响

目的研究甲基莲心碱对人脐静脉平滑肌细胞增殖及表型调节的影响。方法以0.1,0.5,1.0,5.0μmol·L-1甲基莲心碱处理平滑肌细胞,采用MTT法和流式细胞术观察甲基莲心碱对人脐静脉血管平滑肌细胞增殖的影响。用免疫印迹法检测收缩型平滑肌细胞特异性标志物SM1,calponin 1和α-actin蛋白的表达。结果甲基莲心碱（0.1~5.0μmol·L-1）处理12,24,48 h后,人脐静脉血管平滑肌细胞的增殖具有明显的抑制作用,并具有剂量依赖关系和时间依赖关系。在缺乏甲基莲心碱的干预下,血管平滑肌细胞SM1,calponin 1和α-actin蛋白表达减少,在用0.5,5.0μmol·L-1甲基莲心碱处理48 h后,可显著逆转SM1,calponin 1和α-actin蛋白表达的减少,且具有剂量依赖性。结论甲基莲心碱具有抑制血管平滑肌细胞增殖及表型转化的作用,可用于防治动脉粥样硬化和再狭窄。     

水蛭素对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

目的 探讨水蛭素对高磷诱导的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）钙化的影响及机制。方法 采用β-甘油磷酸诱导体外培养的大鼠VSMCs,建立钙化模型,加入不同浓度水蛭素进行干预,实验设置5个组：对照组、钙化组、低浓度水蛭素组、中浓度水蛭素组、高浓度水蛭素组。通过茜素红S染色及细胞内钙含量检测各组细胞钙化情况;用qRT-PCR及Western blotting检测各组细胞α-SMA、RUNX2、BMP2的mRNA和蛋白表达量及细胞内碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性以测定各组细胞转分化情况。结果 与对照组比较,高磷诱导的钙化组中茜素红S染色可见明显橘红色钙化结节,钙含量检测显示细胞内钙含量明显增加（P<0.01）,细胞内ALP活性升高（P<0.01）,α-SMA的mRNA及蛋白表达量降低（P<0.01）,RUNX2、BMP2的mRNA及蛋白表达量升高（P<0.01）。与钙化组比较,水蛭素组茜素红S染色结果显示的橘红色钙化结节呈浓度依赖性减少,细胞内钙含量及ALP活性呈浓度依赖性降低（P<0.05或P<0.01）,α-SMA的mRNA及蛋白表达量呈浓度依赖性升高（P<0.05或P<0.01）,RUNX2、BMP2的mRNA及蛋白表达量呈浓度依赖性降低（P<0.05或P<0.01）。结论 水蛭素通过抑制高磷诱导大鼠VSMCs转分化来减轻VSMCs的钙化,其机制可能与上调α-SMA的表达,下调ALP活性、RUNX2及BMP2的表达有关。     

TPA基因体外转染对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨组织型纤溶酶原激活因子(tPA)基因体外转染对鼠血管平滑肌细胞(VSMC)黏附、增殖和迁移的影响,为tPA基因在预防移植血管再狭窄中的应用奠定理论基础。方法通过阳离子质体介导,将tPA基因转染体外培养鼠血管平滑肌细胞,RT-PCR、Western-Blot及ELSIA检测转基因平滑肌细胞基因表达,底物发色法检测转基因VSMC纤溶活性变化,MTT、细胞黏附、细胞迁移实验等方法,检测体外转染tPA基因对血管平滑肌细胞黏附、增殖和迁移的影响。结果RT-PCR和Western-Blot检测到转基因血管平滑肌细胞tPA基因转录及蛋白表达,转基因组、载体组和空白对照组tPA含量分别为(518.38±125.32)ng/106cells/24h、(12.53±4.27)ng/106cells/24h和(13.21±5.02)ng/106cells/24h,转基因组明显高于各对照组;转基因组tPA活性为(26.6±7.02)IU/106cells/24h,而载体组和空白对照组没有检测出tPA活性。转基因平滑肌细胞和对照组相比,其细胞的增殖、黏附和迁移能力没有明显变化。结论转tPA基因血管平滑肌细胞纤溶活性增高,但对血管平滑肌细胞的黏附、增殖和迁移能力没有影响。     

小檗胺对血管平滑肌细胞钙动力学影响

本文以Fluo-3/AM 荧光技术和激光扫描共聚焦显微镜检查法, 研究小檗胺 (Ber) 对培养家兔胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)内游离钙 ([Ca 2 ]i ) 的影响结果表明：在胞外钙 ([Ca 2 ]o ) 为?.0 mmol·L -1 条件下，Ber 抑制60 mmol·L -1 KCL1 mmol·L -1 哇巴因Ouabain 30 mmol·L -1 去甲肾上腺素 ( NE ) 1 mmol·L -1 5-羟色胺5-HT 和30 mmol·L -1 三磷酸腺苷 (ATP)引起的 [Ca 2 ]i 升高，而且荧光强度达峰时间亦延长。在无胞外钙条件下，Ber 对咖啡因 (Caffeine)引起的[Ca 2 ]i 升高没有作用。结论：Ber 抑制电压依赖性钙通道 (VDCC) 和受体调控性钙通道 (ROCC) 激活引起的外钙内流，对Caffeine 引起的内钙释放没有影响。Ber 可抑制Ouabain 诱导的细胞内钙升高。     

三七总皂苷对血小板衍生生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究三七总皂苷（TPNS）对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞（tASMC）增殖的抑制作用及机制.方法 将SD大鼠tASMC进行体外培养,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测TPNS对PDGF诱导平滑肌细胞增殖的影响,采用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载的平滑肌细胞测定细胞内游离钙浓度.结果 PDGF能诱导血管平滑肌细胞增殖（P〈0.01）,并使细胞内游离钙浓度增高（P〈0.01）,TPNS能抑制该作用（P〈0.01）.结论 TPNS可能通过抑制细胞内游离钙离子浓度的升高来拮抗PDGF诱导的平滑肌细胞增殖.     

蒺藜皂苷对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察蒺藜皂苷（GSTT）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及相关因素的影响。方法采用培养的牛VSMC,以血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）为刺激因子,应用MTT法检测细胞增殖;以H2O2为刺激因子,应用激光扫描共聚焦显微镜检测VSMC内钙离子浓度;应用硝酸还原酶法检测培养的牛血管内皮细胞NO释放量。结果GSTT能明显抑制AngⅡ刺激的VSMC增殖,具有剂量依赖性;GSTT也能抑制H2O2所致的VSMC内钙离子浓度升高,使血管内皮细胞释放的NO明显增多。结论GSTT能抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,此作用可能与抑制活性氧激活钙离子信号转导途径、增加血管内皮细胞NO含量等因素有关。     

动脉粥样硬化兔血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道NO直接激活研究

目的:研究NO是否可以直接激活VSMC BKCa以及AS时血管平滑肌细胞BKCa对NO的反应性是否发生改变,为治疗AS提供新思路.方法:3月龄新西兰兔20只,雌雄各半,随机分为实验组(AS组)和对照组(正常组),每组10只.实验组兔喂高脂饲料8周以建立AS模型,对照组兔喂普通饲料8周.以ISMN为外源性NO供体,应用单通道膜片钳技术检测NO对兔VSMC BKCa的直接激活作用及两组兔对NO的反应性差别.结果:在inside-out patches(膜电位 40 mV)下,ISMN显著增加BKCa通道开放事件数,缩短Tc,增加Po,且具有浓度依赖性.10-6 mol·L-1的ISMN(膜电位 40 mV)可分别使AS组和对照组BKCa的Po增加4.917±1.475倍和9.616±3.227倍(P＜0.01).结论:NO对VSMCBKCa有直接激活作用,但在AS时VSMC BKCa对NO的激活敏感性是降低的.