荧光定量PCR法检测外周血淋巴细胞中EB病毒DNA含量对鼻咽癌诊断及预后的价值

目的　评价外周血淋巴细胞中EB病毒DNA含量对鼻咽癌诊断及预后的价值。方法　采用荧光定量PCR方法检测 52例鼻咽癌患者和 127例非鼻咽癌患者外周血淋巴细胞中EB病毒DNA含量。结果　鼻咽癌患者中EB病毒DNA的阳性率为 55 76% (29 /52),对照组阳性率为 8 66% (11 /127),阳性率差异有显著性P<0. 01。早期(Ⅰ、Ⅱ期)鼻咽癌患者EB病毒DNA含量与晚期 (Ⅲ、Ⅳ期 )比较有显著性差异(P<0 05)。结论　荧光定量PCR方法检测外周血淋巴细胞中EB病毒DNA含量在鼻咽癌的诊断上有极高价值,可作为判断疗效及监测病情的一种有效手段。     

胃癌发生发展及预后与幽门螺杆菌相关性分析及幽门螺杆菌筛查的临床意义

目的 探讨幽门螺杆菌感染与胃癌的发生发展及预后的关系,以及幽门螺杆菌筛查的临床意义.方法 收集138例胃癌患者的组织石蜡标本,同时选择相应的癌旁组织40例作为对照组,应用实时荧光定量PCR法检测组织中幽门螺杆菌的相对感染量.结果 40例癌旁组织HP相对感染量为(5.32±1.96),138例胃癌组织HP相对感染量(13.07±6.11),两者相比差异具有统计学意义(P＜0.05).胃癌患者的1年、2年、3年生存率与HP相对感染率呈负相关,HP相对感染率越高,则胃癌患者生存率越低,差异具有统计学意义(P＜0.05).患者的年龄、浸润程度、淋巴结转移、TNM分期以及HP相对感染量与胃癌患者的预后呈正相关.HP感染阳性率男性患者为43.8％,女性患者为41.1％,差异不具统计学意义;年龄≤50岁HP阳性率为40.4％,年龄＞50岁HP阳性率为59.6％,差异具统计学意义(P＜0.05).结论 幽门螺杆菌感染在一定程度上影响胃癌的发生发展及预后,临床上对幽门螺杆菌筛查具有重要意义.     

血液病患者巨细胞病毒和EB病毒定量检测的临床价值

目的 评价实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）对血液系统疾病患者巨细胞病毒（CMV）和EB病毒（EBV）感染的早期诊断价值.方法 应用实时荧光定量PCR检测271例血液系统疾病患者和28名健康对照者血液中CMV DNA和EBV DNA的含量.结果 28名健康对照者CMV DNA和EBVDNA均阴性.271例患者中147例检测EBV,阳性率为24.5％（36/147）;124例检测CMV,阳性率为4.8％（6/124）,DNA介于102～ 106基因拷贝/ml,治疗有效者EBV DNA和CMVDNA均迅速下降,1～3周后转阴.结论 实时荧光定量PCR动态监测血液系统疾病患者CMV DNA和EBV DNA水平对CMV和EBV感染的早期诊断和疗效判断具有重要意义.     

血浆EBV DNA定量分析在监测鼻咽癌患者复发和转移中的价值

目的 探讨血浆EB病毒DNA(EBV DNA)含量在监测鼻咽癌患者放疗后复发和转移中的临床价值.方法 采用荧光定量PCR方法 检测81例放疗后随诊的鼻咽癌患者血浆EBV DNA含量,比较缓解组与复发、转移组血浆EBV DNA差异.结果 放疗后缓解组患者血浆EBV DNA阳性率为15.7%,中位拷贝数为0 copy/ml;放疗后复发或转移组患者血浆EBV DNA阳性率93.3%,中位拷贝数6 432 copies/ml,差异均有显著性(P<0.001).结论 血浆EBV DNA定量检测有可能成为监测鼻咽癌患者放疗后复发、转移的肿瘤标记物.     

幽门螺杆菌联合血清胃蛋白酶对胃癌的诊断价值

目的探讨幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)联合血清胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)对胃癌的诊断价值。方法选择诊治的胃部疾病患者189例,其中胃癌患者39例(观察组),胃炎患者150例(对照组),检测2组的Hp阳性率,同时检测血清PGⅠ、PGⅡ含量并判断诊断价值。结果观察组与对照组的Hp阳性率分别为82.1%和40.0%,观察组显著高于对照组(P<0.05)。观察组的血清PGⅠ和PGⅡ阳性率为92.3%、100.0%,显著高于对照组的44.0%和28.7%(P<0.05)。在观察组中,PGⅡ的诊断敏感性最高(96.0%),PGⅠ的诊断特异性最高(32.0%)。结论Hp联合血清PG对胃癌的早期诊断具有很好的临床应用价值,能反映胃部疾病患者癌变的可能。     

荧光定量PCR技术检测浆膜腔积液中CEA-mRNA对恶性肿瘤的诊断价值

目的 :通过定量检测浆膜腔积液中CEA mRNA的拷贝数 ,探讨其对恶性积液的诊断价值。方法 :采用荧光定量RT PCR技术分别检测经临床证实的 3 1例恶性浆膜腔积液和 2 8例良性浆膜腔积液样本中CEA mRNA拷贝数 ;所有病例均行脱落细胞涂片检测。结果 :3 1例恶性积液样本中CEA mRNA阳性率为 74 2 % ( 2 3 /3 1) ,CEA mRNA拷贝数在 1 2 2 693 7 5 /mL中位数为 76拷贝 /mL ,脱落细胞检测阳性率为 3 8 7% ( 12 /3 1) ;良性浆膜腔积液样本中CEA mRNA阳性率为 14 3 % ( 4 /2 8) ,拷贝数在 1 1～ 5 7/mL ,中位数为 2 3拷贝 /mL。结论 :荧光定量PCR技术检测积液中CEA mRNA的拷贝数对恶性积液有较高的敏感性 ,有临床实用价值     

血浆EB病毒DNA检测对鼻咽癌诊断的价值研究

目的探讨血浆EB病毒水平对鼻咽癌的诊断价值。方法收集112例鼻咽癌初诊患者外周血,分离血浆,应用荧光定量PCR法检测EB病毒DNA。结果血浆中EB病毒DNA阳性率与患者性别无相关性。30-60岁鼻咽癌患者血浆中EB病毒DNA阳性率明显高于60岁以上者(P<0.05)。鼻咽癌患者血浆EB病毒DNA阳性率为74.11%,随着鼻咽癌患者临床分期增加,血浆中EB病毒DNA阳性亦增强。结论血浆EB病毒DNA水平与鼻咽癌患者临床分期呈正相关关系,血浆EB病毒DNA的检测可以辅助鼻咽癌的诊断。     

胃癌中DNA 聚合酶β的突变及与幽门螺杆菌感染的关系

目的:研究胃癌组织中DNA聚合酶β基因(polβ)的突变情况及与幽门螺杆菌感染的关系。方法:提取总RNA反转录合成cDNA,经PCR扩增后以SSCP检测其变异情况。用PCR方法检测胃癌及癌旁组织标本中幽门螺杆菌的感染情况。结果:32例胃癌组织标本中有7例polβ-SSCP异常,突变率为21.9%;而对应的32例癌旁组织PCR-SSCP结果中未见异常。H.Pylori-DNA阳性的15例,H.Pylori-DNA阳性率为46.9%(15/32);对应癌旁组织的检测结果与胃癌组织完全一致。polβSSCP阳性的标本H.Pylori-DNA也阳性。结论:胃癌组织存在polβ基因突变;这种基因突变可能与胃癌的发生、发展相关。幽门螺杆菌的感染与胃癌组织polβ突变可能存在一定的相关关系。     

血浆Ras相关区域家族蛋白1A基因甲基化在肝细胞癌分子诊断中的价值

目的:建立一种可检测微量DNA标本中DNA甲基化的甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法,并运用该技术探讨血浆Ras相关区域家族蛋白1A(Ras association domain family1A,RASSF1A)基因甲基化检测在肝细胞癌(hepatocellutar carcinoma,HCC)非侵入性诊断中的价值。方法:用MSRE HhaⅠ消化DNA样品,再用qPCR技术分析酶切结果,建立检测RASSF1A基因甲基化的MSRE-qPCR方法。以45例肝组织(20对HCC患者手术切除肿瘤标本及匹配非癌组织和5例正常肝)为材料,测试该方法的应用价值;运用亚硫酸氢盐测序PCR(bisulf ite sequencing PCR,BSP)技术进行进一步验证,并与甲基化特异性PCR(methylation specif ic PCR,MSP)方法相比较。再运用该技术检测150例血浆标本(包括72例HCC患者、37例肝硬化或慢性肝炎等良性病变患者和41例健康对照)的RASSF1A基因甲基化状态,并分析其与HCC患者临床病理参数的关系。结果:MSRE-qPCR法可定量检测低至1%以下的RASSF1A甲基化片段。20例HCC组织中有14例(70%)发生RASSF1A高甲基化,对应非癌组织中RASSF1A甲基化阳性率为25%,而5例正常肝组织均为阴性。MSRE-qPCR结果经BSP验证无误,且与MSP检测结果具有较好的一致性。HCC患者血浆RASSF1A甲基化阳性率(47/72,65.3%)显著高于健康对照(1/41,2.4%)和肝良性病变组(3/37,8.1%),差异均有统计学意义(P<0.0001)。联合检测血浆RASSF1A甲基化与血清AFP可显著提高HCC诊断效率。结论:建立的MSRE-qPCR方法要求样本少、操作简便、成本低廉,可定量检测RASSF1A基因甲基化水平。血浆RASSF1A甲基化分析对于HCC的非侵入性诊断具有重要价值。     

鼻咽癌患者血浆EB病毒DNA水平与肿瘤复发的关系

目的 :探讨鼻咽癌患者放射治疗后血浆EB病毒 (EBV)DNA水平与肿瘤复发的关系。方法 :11例临床缓解期患者和 9例临床复发患者分别抽血 3ml。所有的标本均采用荧光定量PCR的方法 ,在PE770 0型检测仪上定量检测血浆标本中EB病毒DNA的含量。结果 :肿瘤复发组 89% ( 8/ 9)的患者血浆中可检测到高拷贝数的EB病毒DNA ,中位浓度为4 70 0 0 0 (copies/ml) ,在临床缓解组患者中 ,仅 9% ( 1/ 11)的患者血浆中可检测到较高拷贝数的EB病毒DNA ,中位浓度为 0(copies/ml)。两组阳性率及中位浓度的比较均有显著性差异 (P <0 0 0 1)。结论 :鼻咽癌患者血浆EBVDNA水平与肿瘤复发关系密切 ,值得进一步研究。     

人胎盘型谷胱甘肽S转移酶在胃癌组织中的表达与基因甲基化关系的研究

目的：研究胃癌组织中ＧＳＴ－π的表达与其基因甲基化状态的关系。方法：应用Ｓ－Ｐ法检测１１６例胃癌和５３例胃癌前病变的ＧＳＴ－π表达和限制性内切酶及ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹方法检测１４例胃癌及其相应正常胃粘膜ＧＳＴ－πＤＮＡ５′端调控区ＣＣＧＧ特定位点的甲基化水平。结果：ＧＳＴ－π阳性率,正常胃粘膜１０％（４／３９）,胃癌７７％（８９／１１６）,肠上皮化生７６％（１９／２５）,不典型增生８９％（２５／２８）。ＧＳＴ－π在胃癌及癌前病变中的表达较正常胃粘膜增高（Ｐ＜００１）。胃癌组织中ＧＳＴ－π基因较正常胃粘膜呈现高度去甲基化（Ｐ＜００１）,胃癌ＧＳＴ－π基因５′端调控区低甲基化与其ＧＳＴ－π表达增加呈相关性（Ｐ＜００５）。结论：ＧＳＴ－π在胃癌及癌前病变中的表达与胃癌的发生发展密切相关,ＧＳＴ－π可作为胃癌的肿瘤相关抗原;ＧＳＴ－π基因５′端调控区低甲基化可能是ＧＳＴ－π高表达的分子机理。     

CD44v6在胃癌中的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系

背景与目的:目前认为CD44v6在胃癌组织中有较高的表达率,并公认幽门螺杆菌(Helicobactor pylori,HP)感染为Ⅰ类胃癌致癌原,但迄今未见CD44v6与HP关系的文献报道。本文旨在探讨CD44v6在胃癌中的表达及其与HP感染的关系。方法:选取胃癌组织56例、癌旁非癌组织56例、非典型增生胃粘膜32例。CD44v6检测采用RT-PCR与Southern blot法;HP检测采用快速尿酶法与Warthin-Starry银染色;同时用ELISA测定56例胃癌患者血清中HP cagA抗体。结 果:胃粘膜HP阳性组中,转移性胃癌和非转移胃癌的CD44v6表达率分别达100％(12/12)和90.5％(19/21),明显高于癌旁非癌胃组织的48.6％(24/35)与非典型增生胃粘膜的23.6％(6/23);转移性胃癌与非转移胃癌的CD44v6表达率比较无显著差异(P>0.25),非典型增生胃粘膜与胃癌、癌旁非癌胃组织比较有非常显著性差异(P<0.005)。胃粘膜HP阴性组:在转移性胃癌、非转移胃癌、癌旁非癌组织和非典型增生CD44v6表达率分别是66.7％,51.4％,38.1％和18.1％,各组比较均无显著性差异。CD44v6表达与HP感染有密切关系(P<0.01)。肠型胃癌CD44v6表达与HP感染高于弥漫型胃癌(P>0.05)。胃癌患者血清HP cagA抗体阳性率高于胃癌组织HP感染率(P>0.05)。结论:CD44v6在胃癌中有较高的阳性率,与HP感染密切相关,可作为     

幽门螺杆菌感染与胃腺上皮细胞增生关系的研究

 目的:研究幽门螺杆菌(HP)与胃腺上皮细胞增生的关系, 方法:经PCR检测和组织病理学观察138例胃粘膜活检标本, 采用SP免疫组化染色观察PCNA表达和Feulgen二染色测定细胞核DNA含量。 结果:细胞核DNA含量在慢性浅表性胃炎(CSG)和慢性萎缩性胃炎(CAG)中, 有HP感染与无HP感染比较, 二倍体和近二倍体细胞减少, 增殖倍体增加。 PCNA表达在CSG和CAG中, 有HP感染与无HP感染比较阳性细胞数和均值增加。 结论:HP感染与胃腺上皮细胞的增生程度有密切关系。     

错配修复基因hMSH2和hMLH1在胃癌组织中的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系

胃癌是一种多因素相关疾病,幽门螺杆菌(helicobactor pylori,HP)感染是导致胃癌发生的原因之一,但其分子机制不明。错配修复基因是保证DNA复制高保真度的重要基因,与消化道肿瘤发生具有密切关系。本研究通过检测HP感染和非感染胃癌组织及癌旁粘膜组织和慢性浅表性胃炎粘膜组织中错配修复基因hMSH2和hMLHl蛋白的表达,探讨hMSH2、hMLHl基因在胃癌发生中的作用和HP致癌的可能机制。     

Hp感染与胃癌及癌前病变中p53、bcl-2、c-myc基因表达关系的研究

目的：研究幽门螺杆菌（Hp)感染的胃癌及癌前病变患者胃粘膜p53,bcl-2,c-myc基因的表达，以探讨Hp在胃癌发生，发展过程中的作用机制，方法：应用免疫组化方法测定60例胃癌组织，18例异型增生，29例肠上皮化生，35例萎缩性胃炎，29例浅表性胃炎组织中Bcl-2,c-myc基因蛋白表达情况，PCR／SSCP测定p53基因第5－8外显子突变，Hp阳性由快速尿素酶法和HE染色确定，结果：胃癌组Hp阳性41例，阴性19例，在胃癌组织中p53,bcl-2,c-myc基因阳性表达分别为38例（63．3％），38例（63．3％），18例（30．0％），p53,c-myc基因在胃癌中阳性表达率显著高于异型增生（P＜0．05）,bcl-2在异型增生组织中的阳性表达率与胃癌，肠上皮化生相比无显著性差异（P＞05），p53,bcl-2,c-myc基因表达与胃癌分期，淋巴结转移均无显著性关系（P＞0．05），但bcl-2与胃癌类型，分化程度显著相关（P＜0．05），每一种病变类型Hp阳性组p53,bcl-2,c-myc基因蛋白的阳性表达率均高于Hp阴性组，两者之间有显著性差异（P＜0．05），结论：Hp感染者具有更多肿瘤生物学行为，可以引起抑癌基因p53第5－8外显子突变，癌基因c-myc，凋亡调节基因bcl-2表达增加,Hp可能为促癌剂，在胃癌的发生发展中起一定作用。     

Gadd45α在不同幽门螺杆菌感染状态胃癌中的差异表达及临床意义

目的：通过分析Gadd45α在幽门螺杆菌（HP）阳性和阴性胃癌组织中的差异表达来探讨其对胃癌发生的意义,为胃癌的临床诊断和治疗提供理论依据。方法：采用免疫组化方法对选取的70例不同HP感染状态的胃癌及56例癌旁正常组织的石蜡标本中Gadd45α蛋白的表达情况进行检测,分析Gadd45α蛋白的阳性表达与胃癌各项临床病理指标的关系;并分别采用Western blot、反转录PCR（RT-PCR）方法检测选取的8对胃癌活体标本中Gadd45α蛋白及mRNA的表达情况。结果：免疫组化检测结果显示,Gadd45α蛋白在HP+胃癌、HP-胃癌和HP+癌旁组织中的表达率分别是77.5%、46.67%和34.21%,其差异有统计学意义（P<0.05）;Gadd45α蛋白在胃癌组织中表达阳性率为64.29%（45/70）,与肿瘤大小相关。胃癌组织中Gadd45α蛋白的表达与HP感染状态呈正相关（r_s=0.318）,经Spearman秩相关分析提示有统计学意义（P<0.05）。Western blot和RT-PCR法检测结果显示,在HP+胃癌组织活体标本中Gadd45α的蛋白和mRNA表达水平大多高于相应的非癌组织。结论：Gadd45α蛋白在胃癌（尤其HP+胃癌）中高表达,其表达水平与胃癌（尤其HP+胃癌）的发生、发展关系密切,对其表达水平的检测有益于胃癌的早期诊断及其预后的早期预测。在胃癌组织中,Gadd45α蛋白与HP的表达具有正相关性,提示两者在胃癌的发生、发展过程中有一定的相互作用,通过对HP+胃癌患者的抗HP治疗可能影响患者的预后。     

High JC virus load in gastric cancer and adjacent non-cancerous mucosa

The JC virus (JCV) infects a large proportion of the worldwide population and approximately 90% of adults are seropositive. Recent reports have described the possibility of its oncogenetic role in several malignancies. The aim of the present study was to assess the oncogenetic significance of JCV for gastric cancer. Twenty-two sample pairs of fresh tumor and adjacent non-cancerous tissue (ANCT) as well as 10 normal gastric mucosa specimens were investigated on the basis of nested polymerase chain reaction (PCR) followed by Southern blotting, DNA direct sequencing, real-time PCR, in situ PCR and immunohistochemistry. The T antigen sequence was detected in 86.4% of gastric cancers and ANCT, and in 100% of the normal mucosa samples, as for virus capsid protein, 54.1%, 68.1% and 70%, respectively. A generally low incidence was noted for agnoprotein. The JCV DNA load was approximately 10-fold higher in both gastric cancers and paired ANCT (4784 +/- 759 and 5394 +/- 1466 copies/microg DNA, respectively) than in normal gastric tissue (542.4 +/- 476.0 copies/microg DNA, P < 0.0001). In situ PCR revealed sporadic JCV genome-positive cancer cells and foveolar epithelial cells. T antigen protein expression assessed by immunohistochemistry was detected only in one case (1/22; 4.5%), probably because the half life of T antigen might be short. It was concluded that the gastric epithelium in most Japanese people is infected with JCV at a low rate but levels of infection are increased markedly in both cancer cells and ANCT, indicating that multiplication of JCV copies might be a risk factor and a background for gastric carcinogenesis.     

DETECTION OF LOSS OF HETEROZYGOSITY IN THE RB GENE IN THE PATIENTS WITH GASTRIC CARCINOMA WITH PCR—VNTR

Retinoblastoma susceptibility gene (RB) was the first tumor suppressor gene found and cloned. It was believed that the deletion and inactivation of RB gene played an important role in the multistep process of outgrowth and progression of gastric carcinoma[1]. In previous research the mutation of RB was usually detected with PCR-RFLP, which needs purified DNA and is difficult in separating fragments with less difference. We presented a simple and rapid technique based on PCR and agaros…     

河北省赞皇县居民胃癌高发与幽门螺旋菌感染的相关性研究

本研究应用Ｗａｒｔｈｉｎ－ｓｔａｒｒｙ染色对４１４例取自河北省胃癌死亡率较高的赞皇县山区居民（３７．８／１０万）胃窦部小弯侧近幽门处之胃粘膜进行了幽门螺旋菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，Ｈｐ）的检测。检出率为３７．５％，在此基础上汇集了国内３个省共４个县受检人群的检出率进行回归统计，结果其相关系数高达０．９６３，Ｙ＝１．３７Ｘ—１１．９１，Ｐ＜０．０５。表明人群中的ＨＰ的检出率与胃癌年死亡率之间高度相关，可视为胃癌病因研究的线索。