2-甲氧基雌二醇诱导MUTZ-1细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株MUTZ-1细胞凋亡及其对细胞端粒酶活性表达的影响，以及细胞凋亡和端粒酶活性之间的相关性。方法采用不同浓度的2-ME处理MUTZ-1细胞，用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的改变；用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附试验（TRAP-ELISA）检测细胞端粒酶活性变化。结果1、2和4μmol／L2-ME分别作用MUTZ-1细胞12h，流式细胞术检测出G0／G1期和S期细胞逐渐减少，G2／M期细胞明显增多（P〈0．05），细胞被阻滞于G2／M期；1和2μmol／L 2-ME作用MUTZ-1细胞12h，两组凋亡率均无明显增加（P〉0．05）；1、2和4μmol／L2-ME作用MUTZ-1细胞36h时，凋亡率为（12．87±0．86）％～（21．82±1．71）％，2-ME诱导细胞凋亡具有时间和剂量依赖性；2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡的同时伴随着端粒酶活性下调，且随着2-ME浓度增加和作用时间延长，端粒酶活性抑制作用增强；端粒酶活性下调与G2／M期细胞数呈负相关（r=-0．979，P=0．021），与细胞凋亡率呈负相关（r=-0．970，P=0．030）。结论2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡并抑制其端粒酶活性可能是其抗肿瘤的机制之一。     

2-甲氧基雌二醇诱导骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞凋亡机制的研究

为了研究2-甲氧基雌二醇（methoxyestradiol,2-ME）诱导骨髓增生异常综合征-难治性贫血伴原始细胞增多型（MDS-RAEB）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的机制,将不同浓度的2-甲氧基雌二醇分别与MUTZ-1细胞在体外培养,同时设二甲亚砜和空白对照组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定2-ME对MUTZ-1细胞的生长抑制率,瑞氏-姬姆萨染色后观察2-ME引起细胞的形态学改变,流式细胞术分析细胞周期和凋亡率的变化,贝克曼全自动生化分析仪（synchron clinical system LX20）检测培养上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LD）的变化,DNA凝胶电泳验证2-ME诱导的细胞凋亡。结果表明：2-ME对MUTZ-1细胞的增殖具有明显的抑制作用,该细胞凋亡率明显升高,并呈现时间和剂量依赖性,经统计学处理与对照组相比较有显著性差异（P〈0.05）。4μmol/L2-ME作用MUTZ-1细胞12小时后,细胞呈现典型的凋亡细胞形态特征;2-ME作用24小时后MUTZ-1细胞出现G2/M期阻滞;培养上清液中LD含量与对照组相比明显升高,差异具有显著性（P〈0.05）;4μmol/L2-ME作用MUTZ-1细胞48小时后,DNA凝胶电泳可见明显的DNA梯形条带。结论：2-ME对骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1有较强的抗肿瘤效应,可能与细胞G2/M期阻滞引起的细胞凋亡有关;2-ME是一种有发展潜力的治疗骨髓异常综合征的药物。     

荧光探针JC-1检测骨髓增生异常综合征细胞凋亡早期线粒体膜电位的变化

目的探讨荧光探针JC-1在检测细胞凋亡早期线粒体膜电位（△ψm）中的应用。方法2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞凋亡，利用新型荧光探针JC-1标记MUTZ-1细胞，在FACS Calibur流式细胞仪（FCM）上检测细胞内JC-1荧光强度的变化；在荧光显微镜下观察和计数细胞内JC-1荧光颜色的改变。结果对照组MUTZ-1细胞线粒体△ψm维持较高，JC-1在线粒体内形成聚合物，发出橘红色荧光；用药组MUTZ-1细胞线粒体△ψm下降，JC-1聚合物分解成单体，发出绿色荧光。MUTZ-1细胞线粒体△ψm的下降随着时间延长而逐渐增强，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）；随着药物浓度的增加，细胞线粒体△ψm下降增强，在4μmol／L时线粒体△ψm下降达到最大值，以后线粒体△ψm下降趋势减缓。结论荧光探针JC-1结合FCM和荧光显微镜可以准确、直观地检测凋亡早期线粒体△ψm的变化，为2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡机制的研究提供了重要手段。     

Mcl-1和Bax基因在2-甲氧基雌二醇诱导骨髓增生异常综合征细胞凋亡中的调控作用

本研究探讨bcl-2基因家族成员调控2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导骨髓增生异常综合征（MDS）细胞凋亡的机制。用2一ME预处理MUTZ—1细胞,荧光比色法检测凋亡信号蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性,用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测凋亡相关基因-髓细胞白血病基因-1（mcl-1）和bcl-2相关X蛋白（bax）mRNA的表达。结果表明：与对照组相比,2-ME增强MUTZ-1细胞内caspase-3活性,并呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）;随着2-ME浓度的增加,细胞内mcl—1mRNA表达下降（P〈0．05）,且mcl-1mRNA表达量与相应时间点caspase-3活性呈负相关（r=-0．992,P〈0．01）,而baxmRNA表达没有明显变化（P〉0．05）。结论：2-ME可能通过下调mcl-1表达和增强caspase-3活性的途径来调控MDs细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导MUTZ-1细胞凋亡的端粒酶调控研究

为了研究三氧化二砷（As2O3）诱导人类骨髓增生异常综合征难治性贫血伴原始细胞过多型（MDS—RAEB）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的端粒酶调控机制，采用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附试验（TRAP—ELISA）检测端粒酶活性；RT—PCR法检测端粒酶逆转录酶（hTERT）、TRF1（TTAGGG repeat binding factor 1）、TRF2（TTAGGG repeat binding factor 2）、bcl-2、bax等基因mRNA水平的表达；磷脂酰丝氨酸（PS）转位等方法检测细胞凋亡，结果表明：1—8μmol／L As2O3诱导MUTZ-1细胞凋亡呈时间、浓度依赖关系。在该浓度范围内，As2O3可下调细胞端粒酶活性。且端粒酶活性下调与凋亡细胞阳性率呈明显负相关（r=一0．938，P=0．018）。MUTZ-1细胞经As，01作用后，hTERT基因mRNA表达下调，并与端粒酶活性变化呈正相关（r=0．783，P=0.022），但As2O3对TRF1及TRF2基因mRNA表达没有明显影响.MUTZ-1细胞端粒酶活性受抑制同时，伴有bcl-2 mRNA表达下调及bcl-2／bax比值下降结论：As2O3可能通过抑制细胞端粒酶活性及hTERT表达，诱导MUTZ-1细胞凋亡。As2O3抑制MUTZ-1细胞端粒酶活性可能是诱导该凋亡机制之一。     

M-FISH用于骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1复杂核型的检测分析

本研究的目的是观察伴有5号染色体缺失的MDS细胞株MUTZ-1细胞的遗传学变化.首先采用R显带技术对染色体标本进行核型分析,再以vysis Spectra VysionTMM-FISH作为探针,检测并分析其复杂异常核型.结果表明M-FISH分析显示有明显的高频率染色体的易位、插入、断裂与重接、缺失、数目增多;染色体分析揭示核型为50,xx,der(1)t(1;2),ins(1;14),+der(2)t(2;19),der(3)t(3;5),der(3)(3522),5q-,der(6)t(3;6),der (7)(18717),+8,+der(9)t(1;9),der(10)t(1;10),+11,+12,der(?13)(101358),der(14)t(8;14),der(14)t(14,15),der(15)t(15;21)×2,+17,+18,-21,-22.结论MDS细胞株MUTZ-1在M-FISH检测下有显著复杂的核型变化;M-FISH能增加高度复杂的异常染色体检测的准确性,有助于MDS的诊断和预后评估.     

维生素K2诱导人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞凋亡机制的研究

为了研究维生素K2（VK2）诱导人骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的作用机制，采用流式细胞术Annexin—V^FITC／PI双染分析细胞凋亡率和PI染色分析细胞周期的改变。用RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、survivin和促凋亡基因bax的表达，用发光比色法检测caspase-3活性。研究结果显示：细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长逐渐增高并呈明显的时间浓度依赖性（P〈0．05），且随着药物浓度的增加和作用时间的延长S期和G2期细胞逐渐减少（P〈0．05），G0／G1期细胞逐渐增多（P〈0．01），细胞被阻滞在G0／G1期，并且在G0／G1期前出现明显的亚G1峰，即凋亡峰；抗凋亡基因bcl-2、survivin的表达随着VK2浓度的增高明显下调（P〈0．05），而促凋亡基因bax表达无明显变化（P〉0．05）；caspase-3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。结论：VK2主要是通过激活caspase-3途径诱导MUTZ-1细胞发生凋亡，同时抗凋亡基因bcl-2、survivin在细胞凋亡过程中也起重要作用。     

三氧化二砷及2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系CZ-1细胞凋亡通路的影响

多发性骨髓瘤（MM）是一种多发生于老年人的恶性血液系统疾病，随着社会人口的老龄化及诊断水平的不断提高，其发病率呈逐渐增高的趋势，提高治疗安全性的方案将会改善多发于老年人的MM的预后。我们以骨髓瘤细胞系CZ-1细胞为研究对象，观察了三氧化二砷（As2O3）和2-甲氧基雌二醇（2ME2）对CZ-1细胞凋亡通路的不同影响，试图为MM的治疗找寻新的治疗靶点。     

藤黄酸对MUTZ-1细胞生长抑制作用及其机理研究

本研究旨在探讨藤黄酸对高危组骨髓增生异常综合征（MDS）细胞的生长抑制作用及其机制。以人MDS-RAEB细胞株MUTZ-1细胞为研究对象,采用MTT法测定增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期变化,用RT-PCR检测bax／bcl-2基因表达。结果表明,藤黄酸对MUTZ-1细胞有生长抑制作用,在0．2-0．8μg/ml浓度范围内随着药物浓度的增加MUTZ-1细胞的增殖抑制率增高;流式细胞学检测发现,藤黄酸浓度0、0．4、0．6、0．8μg／ml引起的MUTZ-1凋亡率分别为（5±0．5）％、（13±0．5）％、（37±0．7）％和（56±0．6）％,而且凋亡率随着药物浓度增加而增加（P〈0．05）。bcl-2基因表达程度随藤黄酸剂量增加而减弱,而baxmRNA表达无明显变化。结论：藤黄酸通过诱导MUTZ-1细胞凋亡、下调bcl-2基因表达而抑制该细胞生长,这可能是藤黄酸抗肿瘤的主要机制之一。     

2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系增殖与凋亡的影响

为了探讨2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系增殖及凋亡的影响,并观察其与地塞米松、反应停、三氧化二砷、唑仑膦酸钠等药物联合时的协同作用,采用台盼蓝染色法检测细胞活力,应用BrdU掺入法检测浆细胞标记指数(PCLI),DNA片段原位末端标记(TUNEL法)检测凋亡细胞.药物协同作用判断标准按金氏公式计算Q值.结果表明,7株骨髓瘤细胞系NCI-H929、HS-sultan、KM3、SK0-007、CZ-1、U266、LP-1经1、4、8、12、16 μmol/L 2-甲氧基雌二醇分别作用12、24、36和48小时后细胞活力明显受抑制,呈现时间剂量依赖性,经统计学分析,差异显著(P＜0.05).各细胞系对2-甲氧基雌二醇敏感性不同,其IC50介于(20.8±0.27)μmol/L与(34.1±0.57)μmol/L之间.1、4、8、12、16 μmol/L 2-甲氧基雌二醇分别作用12、24、36和48小时可诱导骨髓瘤细胞系凋亡,凋亡率介于9%-33%之间,呈现时间和剂量依赖性,经统计学分析,差异显著(P＜0.05).经12 μmol/L 2-甲氧基雌二醇作用24小时后浆细胞标记指数(PCLI)由作用前平均(30.14±4.28)%下降到作用后的(14.71±6.27)%,差异显著(P＜0.05).2-甲氧基雌二醇与药物联合作用后计算Q值介于1.13-1.43之间,具有协同作用.结论2-甲氧基雌二醇可抑制骨髓瘤细胞生长,并可诱导骨髓瘤细胞凋亡,与地塞米松、反应停、三氧化二砷、唑仑膦酸钠联合使用具有协同作用.     

Ultraviolet light-emitting diode irradiation induces reactive oxygen species production and mitochondrial membrane potential reduction in HL-60 cells

ObjectiveUltraviolet light-emitting diode (UV LED) irradiation at 280 nm has been confirmed to induce apoptosis in cultured HL-60 cells, but the underlying mechanisms remain unclear. This study aimed to investigate the effects of 280 nm UV LED irradiation on reactive oxygen species (ROS) production and mitochondrial membrane potential (MMP) in HL-60 cells.MethodsHL-60 cells were irradiated with 0, 8, 15, or 30 J/m² of 280 nm UV LED and incubated for 2 hours. The intracellular ROS levels were assessed using the fluorescent probe 2ʹ-7ʹ-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) and a fluorescence plate reader. MMP was determined by flow cytometry using 5,5ʹ,6,6ʹ-tetrachloro-1,1ʹ,3,3ʹ-tetraethylbenzimidazol-carbocyanine iodide (JC-1) staining. The apoptosis-related proteins Bax and Bcl-2 were evaluated by western blot.ResultsUV LED irradiation at 280 nm induced a dose-dependent increase in ROS production and loss of MMP, and it activated apoptosis at irradiation doses of 8 to 30 J/m². These results were consistent with a previous apoptosis study from the authors’ group.ConclusionEnhanced ROS production and mitochondrial depolarization are two distinct but interacting events, and both are involved in UV LED-induced apoptosis in HL-60 cells.     

雷帕霉素诱导骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞凋亡及机制研究

为了观察雷帕霉素(RAPA)对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系MUTZ-1增殖的抑制、凋亡作用并探讨其相关的机制,用MTT法检测RAPA对MUTZ-1细胞增殖的影响;流式细胞术分析MUTZ-1细胞Annexin V/PI、caspase3、细胞周期、PTEN、p-Akt和p-mTOR蛋白的表达。结果表明,RAPA能显著抑制MUTZ-1细胞增殖,呈剂量和时间的量效关系(24、48和72小时的r=0.67,0.61和0.72)。RAPA作用MUTZ-1细胞24-72小时,G0/G1期细胞较对照组明显增高(p0.01),随着药物浓度增加而增多(r=0.94、0.93和0.92),细胞周期阻滞在G0/G1期。Annexin V+PI-细胞较对照组增多(p0.01),且随着浓度的增高而增多(r=0.91、0.94和0.96)。PTEN表达荧光强度与对照组比较显著增高(p0.01),随着药物浓度增高表达增强(r=0.93),p-Akt和p-mTOR表达的荧光强度与对照组比较显著降低(p0.05),随着药物浓度增高而表达减低(r=0.95和0.91)。结论:RAPA与靶分子mTOR作用,抑制PTEN/PI3K-Akt/mTOR信号转导通路,诱导MUTZ-1细胞凋亡。     

Scavenging rate constants of hydrophilic antioxidants against multiple reactive oxygen species

Scavenging rate constants of eight hydrophilic antioxidants, including caffeic acid, chlorogenic acid, genistein, glutathione, N-acetylcysteine, rutin, trolox, and uric acid against multiple ROS, namely superoxide anion, hydroxyl radical, singlet oxygen, and alkoxyl radical were determined with the electron spin resonance method. Direct flash photolysis measurement of the second-order rate constant in the reaction of alkoxyl radical plus the spin trap 5,5-dimethyl-pyrroline N-oxide made it possible to evaluate scavenging rate constants in antioxidants. The magnitudes of scavenging rate constants were notably dependent on the character of each ROS and the overall rate constants were highest in hydroxyl radical scavenging and the lowest in superoxide anion. The highest scavenging rate constant against superoxide anion was obtained by chlorogenic acid (2.9 × 10⁵ M⁻¹ s⁻¹) and the lowest was by N-acetylcysteine (5.0 × 10² M⁻¹ s⁻¹). For singlet oxygen, the highest was by glutathione (9.4 × 10⁸ M⁻¹ s⁻¹) and the lowest was by uric acid (2.3 × 10⁶ M⁻¹ s⁻¹). All other numbers are listed and illustrated. Redox potential measurements of the antioxidants indicated that the antioxidants are likely to react with superoxide anion and singlet oxygen through electron transfer processes.     

纳米三硫化二砷对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1作用的实验研究

目的 探讨纳米三硫化三砷(As2S3)与传统剂型As2S3对人骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株MUTZ-1的生长抑制作用及其可能的机制.方法 用MTT法比较两种剂型的As2S3对MUTZ-1细胞的生长抑制作用;透射电子显微镜技术分析细胞形态和超微结构的变化;流式细胞术分析细胞凋亡和周期的改变;发光比色法分析caspase-3活性.结果 2、4、8、16 μmol/L两种剂型As2S3分别处理MUTZ-1细胞48 h后,纳米As2S3对细胞的抑制率分别为48.9%、75.9%、89.4%和96.5%,而传统剂型As2S3组分别为14.5%、25.4%、34.7%和51.5%,两组相比差异有统计学意义(P值均<0.01);纳米As2S3组细胞凋亡率分别为(12.9±1.9)%、(19.2±2.2)%、(30.1±2.5)%和(45.9±2.3)%,而传统剂型As2S3组分别为(5.3±1.8)%、(11.1±2.6)%、(19.3±2.3)%和(25.5±2.5)%,两组相比差异也有统计学意义(P值均<0.01);纳米As2S3组G2/M期细胞比例、caspase-3活性明显高于传统剂型As2S3组(P<0.01),且以上各指标均呈浓度-时间依赖性.结论 两种剂型As2S3对MUTZ-1细胞均有生长抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与G2/M期细胞阻滞以及caspase-3活化有关;与传统剂型的As2S3相比,纳米As2S3有更强的抗肿瘤作用.     

活性氧在高糖诱导人腹膜间皮细胞产生IL-8、MCP-1中的作用

目的 研究高糖对培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMC)产生趋化蛋白IL-8(白介素-8)、MCP-1(单核细胞趋化蛋白-1)的影响以及内源性活性氧(过氧化氢)在其中的作用。方法 分别用不同浓度的葡萄糖、高渗甘露醇、葡萄糖加抗氧化剂(丙酮酸)刺激细胞,用半定量RT-PCR的方法测定趋化蛋白的基因水平,用ELISA的方法测定蛋白水平。结果 高糖可以使HPMC产生IL-8、MCP-1增加,且呈浓度依赖性,而高渗甘露醇的作用则不明显;高糖中加入抗氧化剂(丙酮酸)后,IL-8的表达下降,而MCP-1的表达未见明显的改变。结论 高糖可以使HPMC表达IL—8、MCP-1增加,从而在透析液生物不相容性及腹膜纤维化中起作用;在IL-8的产生中,内源性的活性氧可以作为信号传导分子,起到一定的作用。丙酮酸能够通过对抗内源性氧化应激,对HPMC具有保护作用。