抗大田软海绵酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析

目的制备了赤潮毒素大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单克隆抗体,并分析其免疫学特性。方法用人工抗原大田软海绵酸-小牛血清蛋白偶联物(OA-BSA)免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术经初筛、复筛和亚克隆,筛选到1株可稳定分泌抗OA单克隆抗体的杂交瘤细胞株3H4。对抗体效价、亚型、特异性、敏感性进行免疫学鉴定与分析。结果抗体亚型为IgG2b;腹水效价为1∶1.28×106;50%抑制质量浓度为2.852 ng/ml;最低检测限为0.45 ng/ml;电泳结果显示抗体,由1条重链和1条轻链组成;与OA同系物PTX1、GYM、SPT1、YTX交叉反应率为0。结论制备的OA单抗效价和特异性均较好,可用于OA的免疫学检测。     

阪崎肠杆菌单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的:制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法:采用灭活的阪崎肠杆菌菌体为抗原,免疫BALB/c小鼠,取血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,mAb亚类检测试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型,通过Western blot和间接ELISA法鉴定该单克隆抗体的特性、效价及mAb相对亲和力。结果:获得2株能稳定分泌抗阪崎肠杆菌mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1H7、2B12,抗体Ig亚类分别为IgG1和IgG2b;交叉反应显示单抗具有良好的特异性;ELISA分析表明制备的单抗效价在1×107～2×107,相对亲和常数达109L/mol,染色体鉴定分别为104和106条,符合杂交瘤细胞的特性。结论:抗阪崎肠杆菌单克隆抗体的成功制备为其快速检测方法的建立奠定了基础。     

抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析

目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株。大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应。结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖。结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段。     

高亲和力抗IBDV单克隆抗体的产生与免疫学鉴定

目的：生产高亲和力的抗ＩＢＤＶ不同抗原决定簇的单克隆抗体,为ＩＢＤ的快速检测准备试剂。方法：用ＩＢＤＶ抗原诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生最强最适当的反应,将免疫脾细胞与ＮＳＯ瘤细胞融合,通过对大量的杂交细胞培养上清进行检测和鉴定,筛选出分泌高亲和力单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果：获得分泌高亲和力单克隆抗体的杂交瘤２１株,其中４株ＹＮＺ－１、ＹＮＺ－１２、ＹＮＺ－１８和ＹＮＺ－２６的间接ＥＬＩＳＡ效价分别为     

幽门螺旋菌单克隆抗体的免疫学特性分析

幽门螺旋菌单克隆抗体的免疫学特性分析赵满仓，刘菊林，贾艳岩，马蕾（中国人民解放军第四六七医院，石家庄０５００８１）ＨＰ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｎ，ＨＰ）是导致慢性Ｂ型胃炎和消化性溃疡的主要致病因素［１］，并与胃癌的发生密切相关，现已被ＷＨＯ...     

抗土霉素单克隆抗体的制备及其特性分析

目的:制备抗土霉素(OTC)的单克隆抗体(mAb),对其特异性和竞争ELISA的实用性进行分析。方法:通过碳二亚胺法和羰基二咪唑法分别将OTC与载体蛋白(BSA、OVA)偶联制备免疫原和检测抗原,用杂交瘤技术制备mAb,鉴定mAb的特异性并用于竞争ELISA效果分析。结果:获得1株能稳定分泌抗OTC的mAb杂交瘤细胞株,mAb腹水的ELISA效价为3×104,土霉素竞争ELISA检测下限为1mg/L。结论:抗OTC的mAb具有抗原结合特异性,可用于OTC竞争ELISA免疫学检测。     

抗淋球菌PIA单克隆抗体的制备和应用分析

用淋球菌全菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，以纯化ＰＩＡ做ＥＬＩＳＡ间接法筛选，获得５株稳定分泌抗ＰＩＡ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。５株ＭｃＡｂ中３株为ＩｇＭ类（２Ｈ１１，４Ｈ８，４Ｅ１０），另２株分别为ＩｇＧ１（１Ｃ２）和ＩｇＧ２ｂ（５Ａ５）亚类。２Ｈ１１和１Ｃ２为高亲和力抗体，１Ｃ２与５Ａ５识别的抗原表位相同。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明，５株ＭｃＡｂ均能     

hAR-N单克隆抗体免疫学特性的研究及其应用

前列腺癌组织中雄激素受体 (ＡＲ)含量与术后采用抗雄激素疗法的反应程度、术后复发、转移率的发生密切相关〔1〕。ＡＲ的检测方法多为免疫组化法〔2〕。其所需试剂———ＡＲＭｃＡｂ国内尚无 ,为此我们研制ＡＲＭｃＡｂ。以美国Ｚｙｍｅｄ公司ＡＲ多抗为标准对自制ＡＲＭｃＡｂ性能进行鉴定 ,以便为临床和科研工作提供性能稳定可靠、质优价廉的免疫试剂。材料与方法动物 :ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ,雌性 ,6～ 8周龄 ,购自北京医科大学动物实验中心。抗原 :ｈＡＲ Ｎ段 2 0个氨基酸合成肽 (该区具有高亲水性 ,与其它类固醇激素具有很少同源性 )由北…     

抗人载脂蛋白E单克隆抗体制备及免疫学特性的研究

应用人血清纯化的ApoE免疫BALB/C小鼠,其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,获得3株分泌抗人ApoE单克隆抗体的杂交瘤细胞株(E6C3,E4C2和E3C3),对其免疫学特性进行了研究。腹水效价为8×10~(-5)～2×10~(-6),与其它载脂蛋白没有交叉反应,制备免疫亲和层析柱纯化了ApoE,单抗相加试验和双抗体夹心试验证明,两株MeAb识别ApoE的两个不同抗原决定簇,抗体亚型均为IgG_1型。应用ELISA双抗体夹心法测定了人血清ApoE含量。     

乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备鼠抗人乙醛酸还原酗羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体（mAb）并进行初步鉴定。方法：将正常成人肝组织匀浆离心并分离出肝脏胞质总蛋白，用肝脏胞质总蛋白免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备mAb，并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特异性鉴定，通过免疫沉淀联合质谱和Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原。结果：通过间接ELISA筛选获得杂交瘤细胞株ADB291，其分泌的mAb Ig亚类（型）为IgG1（κ），Western blot结果显示该mAb识别相对分子质量（Mr）为35000的蛋白；对免疫沉淀获得的相应抗原回收、酶切、质谱鉴定为GRH—PR。同时应用mAb ADB291对人肝脏cDNA表达文库（Uni-ZAP XR）进行筛选，筛选所获得的阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为GRHPR；阳性克隆转化表达后的Western blot结果确认该抗体识别肘，35000的表达蛋白。结论：mAb ADB291特异识别的抗原为GRHPR，该mAb在GRHPR的功能研究和二型原发性尿草酸盐过多遗传疾病的临床诊断等方面具有应用价值。     

副溶血弧菌TDH单克隆抗体的研制与性质鉴定

目的:制备副溶血弧菌耐热直接溶血毒素TDH单克隆抗体,并分析其免疫学特性。方法:用纯化的TDH毒素蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法进行阳性细胞筛选,有限稀释法进行亚克隆。并对该单克隆抗体进行了分子量大小、效价、亚类、特异性和亲和力分析。结果:筛选出一株能够稳定分泌TDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为T9H4,其免疫球蛋白亚型鉴定为IgG1,亲和力常数可达2.19×109L/mol,并表现出较强的特异性。抗体纯化后效价达1∶1 024 000,SDS-PAGE电泳结果显示单抗蛋白重链分子量约为50 kD和轻链23 kD。结论:成功获得一株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,为开发免疫学快速检测方法提供重要实验基础。     

Passive immunization with monoclonal antibody against a 70-kDa putative adhesin of Sporothrix schenckii induces protection in murine sporotrichosis

Cell-mediated and innate immunity are considered the most important mechanisms of host defense against fungus infections. However, recent studies demonstrated that specific antibodies show different degrees of protection against mycosis. In a previous study, antigens secreted by Sporothrix schenckii induced a specific humoral response in infected animals, mainly against the 70-kDa molecule, indicating a possible participation of antibodies to this antigen in infection control. In the present study, an IgG1 mAb was produced against a 70-kDa glycoprotein of S. schenckii in order to better understand the effect of passive immunization of mice infected with S. schenckii. Results showed a significant reduction in the number of CFU in organs of mice when the mAb was injected before and during S. schenckii infection. Similar results were observed when T-cell-deficient mice were used. Moreover, in a second schedule treatment, the mAb was injected after infection was established, and again we observed a significant reduction in CFU associated with an increase of IFN-gammaproduction. Also, the 70-kDa antigen is shown to be a putative adhesin present on the surface of this fungus. In conclusion, we report for the first time the protective effect of a specific antibody against S. schenckii.     

人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的研制

目的获得针对人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体。方法hCG蛋白免疫Balb／c小鼠,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞NS-1按8：1比例融合,间接ELISA法筛选阳性克隆,有限稀释法进行克隆化培养;制备腹水抗体;采用间接ELISA法鉴定抗体亚型和测定抗体效价。结果得到6株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株;抗体经鉴定均为IgG1、κ型,效价均达10^-5以上。结论所获得的6株杂交瘤细胞株均有较强稳定分泌抗-hCG单克隆抗体的能力。这为有关hCG的检测、hCG本身相关研究以及避孕疫苗的研制打下了基础。     

抗11β-羟类固醇脱氢酶1的单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人11β-羟类固醇脱氢酶1(homo sapiens hydroxysteroid 11-beta dehydrogenase 1,HSD11B1)的单克隆抗体(mAb)并初步鉴定其特性.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀、Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原.结果:通过间接ELISA筛选获得1株可稳定分泌抗人HSD11B1 mAb的杂交瘤细胞系.其分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),Western blot结果显示该mAb可以特异地识别相对分子质量(Mr)为35 000的蛋白;应用mAb CBF245对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAP XR)进行筛选,阳性噬菌斑测序结果显示5个阳性克隆插入序列均为HSD11B1.结论:mAb BAD062特异地识别抗原HSD11B1,该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化和免疫沉淀实验,为HSD11B1的研究提供了有力的工具.     

Comparison of carbohydrate and peptide biotinylation on the immunological activity of IgG1 murine monoclonal antibodies

When the classical amino acid esterification procedure was used for the biotinylation of the IgG1 monoclonal antibody J28 it resulted in a loss of immunological activity. This antibody recognizes the fetoacinar pancreatic (FAP) antigen and the decrease in reactivity was directly proportional to the molar biotin/antibody ratio indicating substitutions at or near the antibody combining site. This effect was specific to J28 since the IgG1 Mab F22 which recognises the same antigen was not damaged by this procedure. Active Mab J28 conjugates were obtained using biotinylation via oligosaccharide moieties. The biotinylation efficiency using this method was dependent on the previous degree of antibody periodate oxidation and the maximal substitution was 3 mol biotin per mol of antibody. Using these conditions the sensitivity of the biotinylated J28 for the FAP antigen was similar to that obtained when using non-substituted antibody in the two antibodies technique.     

抗人NGAL单克隆抗体的制备及其定量检测方法的建立

目的获得抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)特异性单克隆抗体并建立双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法。方法通过杂交瘤技术制备了抗人NGAL高亲和力高特异性单克隆抗体,筛选能够结合天然NGAL的单克隆抗体并建立双抗体夹心ELISA系统。以重组人NGAL为检测对象,对系统线性范围、灵敏度、精密度和准确度(回收试验)进行全面分析和评价。通过对肾病患病组和对照组尿液标本检测初步研究其在临床上的分析性能。结果获得了8株能稳定分泌抗人NGAL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,筛选得到F2和G2两株单克隆抗体可用于双抗夹心ELISA免疫检测。本方法线性范围为0～40 ng/ml,灵敏度为4.8 ng/ml,批内变异CV≤10.04%,批间变异CV≤9.76%,平均回收率为101.9%。临床标本检测显示肾病组与对照组有显著差异(P<0.01)。结论本研究制备了高亲和力特异性单克隆抗体并建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法灵敏度、精密度和准确性良好,能够检测体液标本中的天然NGAL蛋白,检测结果与临床基本符合,为其临床应用和推广奠定了基础。