X射线对人肺癌A549细胞Bmi-1表达的影响

目的：研究X射线照射对人肺癌A549细胞株中Bmi-1 mRNA和蛋白表达的影响。方法：用不同剂量（0、2、4、6Gy）的X射线照射体外培养的人肺癌A549细胞株,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测照射0、6、12、24、48和72 h后Bmi-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,2、4、6 Gy X射线照射A549细胞后48 h内Bmi-1 mRNA表达升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）;（2 Gy 48 h组除外）,2 Gy组照射后6 h、4 Gy组12 h、6 Gy组24 h升高最显著（P〈0.05）。照射后48 h内蛋白表达升高（4Gy除外）,48 h后蛋白表达逐渐下降,至72 h时接近未照射组水平。各时间点（除4 Gy 48 h和72 h外）的蛋白表达与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：在本实验条件下,2～6 Gy剂量X射线照射48 h内可使人肺癌A549细胞Bmi-1表达升高,之后表达逐渐降低。     

沉默泡膜蛋白1对SW480细胞增殖与侵袭影响的研究

目的 泡膜蛋白1(vacuole membrane protein-1,VMP1)是近年来新发现的一个重要功能的抑癌基因.为明确VMP1在结直肠癌中的功能和意义,本研究通过慢病毒载体沉默结直肠癌细胞系SW480中VMP1基因的表达,探讨VMP1基因沉默后对结直肠癌细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用.方法 应用RT-PCR及蛋白质印迹法检测5种结直肠癌细胞系中VMP1的表达状况;设计人VMP1基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染VMP1高表达的结直肠癌细胞系,运用蛋白质印迹法鉴定其对VMP1基因的沉默效果;VMP1基因沉默后,通过MTT法和软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞技术检测细胞凋亡;运用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力.结果 VMP1在5种细胞系中存在差异性表达.具有低转移潜能的HT-29和SW480细胞与具有高转移潜能的LoVo、RKO和SW620细胞相比,有更高的VMP1表达水平,其中mRNA表达差异有统计学意义,t=3.88,P=0.005;而蛋白表达差异有统计学意义,t=14.29,P＜0.001.选取低转移细胞株中VMP1表达相对较高的SW480细胞作为研究对象,构建VMP1 shRNA慢病毒载体沉默SW480细胞中VMP1的表达.蛋白质印迹结果提示,VMP1稳定沉默的SW480细胞构建成功.在稳定沉默VMP1基因后,MTT法显示SW480细胞的增殖速度在24和48 h显著升高,F值分别为79.77和12.35,P值分别为＜0.001和0.025.软琼脂克隆形成实验结果显示,SW480细胞的集落数目显著增多,F=75.23,P＜0.001.二者均表明SW480细胞增殖能力增强.流式细胞技术检测显示,VMP1基因沉默后可抑制SW480细胞凋亡,F=84.44,P＜0.001.Transwell迁移实验结果显示,VMP1沉默后SW480迁移能力增强,F=155.90,P＜0.001.结论 VMP1基因可能与结直肠癌的细胞增殖、凋亡与转移有关,进而参与了结直肠癌的发生、发展.     

结直肠癌与其淋巴结转移癌及结直肠癌细胞上皮-间质转化的对比研究

背景与目的:对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的研究虽有大量文献报道,但研究数据仍有争议.本研究旨在探讨淋巴结转移的结直肠癌与结直肠癌细胞系SW480、SW620的EMT特征差异.方法:Real-time RT-PCR检测结直肠癌细胞系SW480和SW620 E-cadherin和vimentin的mRNA表达:免疫组织化学法检测30例配对结直肠癌及其转移淋巴结的石蜡组织标本中E-cadherin和vimentin的表达,HE染色观察30例配对结直肠癌及其淋巴结转移癌组织形态以及SW480和SW620的细胞形态.结果:SW480与SW620中E-cadherin和vimentin的mRNA表达差异有统计学意义(P=0.037),均以后者为高;E-cadherin和vimentin在结直肠癌与其淋巴结转移癌组织中的表达差异无统计学意义(P=0.108;P=0.660).部分淋巴结转移癌中E-cadherin的表达高于结直肠癌(4/30),且vimentin表达比结直肠癌弱,甚至表达缺失(6/30);结直肠癌与其淋巴结转移癌组织具有相似的形态学特征;SW480和SW620两者形态类似.结论:结直肠癌对比其淋巴结转移癌、SW480对比SW620发现EMT特征无显著差异,推测是由于淋巴结转移癌和SW620发生TEMT.     

高迁移率族蛋白B1介导癌症相关成纤维细胞促进结直肠癌转移的机制研究

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)介导癌症相关成纤维细胞(CAFs)活化在结直肠癌转移中的作用。方法 从结直肠癌及癌旁组织中,分离提纯癌旁正常成纤维细胞(NFs)和CAFs,分别与人结直肠癌细胞SW480共培养,划痕实验和Transwell侵袭实验检测NFs和CAFs对SW480迁移、侵袭的作用。免疫组化法检测HMGB1在结直肠癌、癌旁正常结直肠组织中表达。蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测NFs、CAFs中HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平。ELISA法检测上清液中HMGB1表达。应用小干扰RNA (siRNA)技术抑制CAFs细胞内HMGB1基因表达,qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测阴性对照转染组(CAFs-siNC组)与HMGB1-siRNA转染组(CAFs-siHMGB1组)中HMGB1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因和蛋白的表达情况,2组细胞分别与SW480细胞共培养后,划痕实验和Transwell侵袭实验验证HMGB1表达对SW480迁移和侵袭的影响。结果 NFs与SW480细胞共培养迁移率为(25.51±46.96)%,侵袭细...     

辐射对巨噬细胞系RAW264.7基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的观察不同剂量γ-射线(0、5、10、20 Gy)照射小鼠巨噬细胞系RAW264.7后对基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。方法应用不同剂量γ-射线(0、5、10、20 Gy)照射体外培养的巨噬细胞系RAW264.7,照射6、12、24、48 h后,实时荧光定量聚合酶链反应法(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测MMP-9 mRNA表达,选择MMP-9 mRNA表达最强的照射剂量;在照射细胞6、12、24、48 h后采用免疫印迹法(Westernblotting)检测MMP-9蛋白表达,并于照射前1 h加入地塞米松1μmol,检测MMP-9蛋白表达。结果60Coγ-射线(5、10、20 Gy)照射RAW264.7细胞系6、12、24、48 h后MMP-9 mRNA表达均明显增强(P<0.05),24 h达高峰,10 Gy增强最明显。与对照组相比,10 Gy照射细胞6、24、48 h后MMP-9蛋白表达明显增强(P<0.05),以24 h最明显(P<0.01);照射前1 h加入1μmol的地塞米松,10 Gy照射24 h后检测MMP-9蛋白表达,与未加地塞米松组相比,MMP-9蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论γ-射线照射巨噬细胞系RAW264.7,可显著增强MMP-9 mRNA及其蛋白表达;地塞米松可有效抑制电离辐射诱导的MMP-9蛋白表达,MMP-9可能参与了放射性肺损伤的发展。     

放射治疗对直肠癌组织中肿瘤转移抑制基因Kiss-1表达的影响

目的:探讨放射治疗对直肠癌组织中Kiss-1基因表达的影响及意义。方法:应用免疫组化SP法检测29例放射治疗前、后直肠癌组织中Kiss-1基因的表达,通过图像分析系统(Image-Pro Plus 6.0)进行定量分析。结果:放射治疗前直肠癌组织中Kiss-1基因表达水平的图像分析灰度值为160.81±2.78,放疗后为158.04±3.24,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:放射治疗对直肠癌中肿瘤转移抑制基因Kiss-1的表达无明显影响,推测放射治疗不会增加直肠癌转移的风险。     

阻断CLC-3 氯通道对结直肠癌细胞株生存率和侵袭转移能力的影响及其分子机制*

目的:通过研究CLC-3 在结直肠组织中的表达,探讨CLC-3 对结直肠癌细胞株SW480、SW620 的细胞生存率、侵袭转移能力的影响及其潜在的机制。方法:采用RT-PCR 方法测定不同分期结直肠癌组织和正常结直肠组织中CLC-3 的mRNA 表达水平。运用CLC-3 阻断剂DIDS、NPPB阻断SW480、SW620 细胞的CLC-3 表达后,采用CCK-8 法实验检测细胞生存率,细胞侵袭实验检测细胞侵袭转移情况;并采用免疫印迹法测定阻断CLC-3 表达后SW480、SW620 细胞Wnt/ β -catenin 信号通路相关蛋白表达。结果:结直肠癌组织中CLC-3 mRNA 表达水平高于结直肠炎黏膜组织和正常结直肠组织（P < 0.05）,且CLC-3 mRNA 表达和结直肠分期相关。抑制CLC-3 表达后,SW480、SW620 细胞的生存率和侵袭转移能力降低（P < 0.05）,且β -catenin、C-myc 、cyclinD 1、Ki-67、survivin表达降低（P < 0.05）。 结论:CLC-3 高表达与结直肠的发生发展有潜在联系,其机制可能与Wnt/ β -catenin 有关,为CLC-3 作为治疗结直肠癌的潜在新靶点提供实验基础。      

60Co-γ照射对肺癌A549细胞VEGF表达的影响

目的:探讨60Co -γ射线照射肺癌A549细胞后血管内皮生长因子(vascula endothelial growth factor ,VEGF)表达变化.方法:2 Gy剂量60 Co-γ射线照射肺癌A549细胞,以荧光定量PCR法检测照射后4、12、24、48、72 h VEGF mRNA表达改变, 以ELISA法检测各组培养液上清中VEGF蛋白表达量变化.结果:以对照组(未照射组)VEGF mRNA表达量为1,照射后4 h VEGF mRNA表达开始升高,12、24小时达到高峰(8.83±3.01,P＜0.05 ;14.67±7.18,P＜0.01),48-72 h随后降至接近对照组水平.ELISA检测培养液上清中VEGF蛋白表达量,在照射后4 h 降低,随后开始升高,24、48 h达到高峰(600.86±20.87,P＜0.05;594.75± 2.52,P＜0.05),72 h降至对照组水平.结论:2 Gy剂量60Co-γ射线照射肺癌A549细胞后早期VEGF表达升高,我们推测此时可能是联合抗VEGF药物抑制肺癌转移的最佳时机.     

X线照射后肺癌细胞肿瘤坏死因子mRNA的表达

目的探讨X线诱导和调节肺癌细胞株NCI-H596和A549肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的表达作用及其临床意义。方法应用实时荧光定量RT-PCR技术,定量检测NCI-H596和A549细胞株照射前和接受不同剂量(2,5,10,20,30和40Gy)的X线照射后,以及受照30Gy后不同时间TNF-αmRNA的表达。同时进行集落形成试验,检测NCI-H596和A549细胞株的放射敏感性。结果集落形成试验结果显示,未照射的NCI-H596细胞株集落形成率为0.12～0.24;A549细胞株集落形成率为0.37～0.45。照射后,A549细胞的存活分数(SF)在2Gy时为47.3%±9.0%,4Gy时为18.0%±3.0%,6Gy时为6.0%±2.0%,8Gy时为1.4%±0.3%;NCI-H596细胞的SF在2Gy时为55.2%±51.0%,4Gy时为15.9%±9.2%,6Gy时为3.5%±1.7%;8Gy时为0.9%±0.6%;二者SF差异无统计学意义,二者的D0值和Dq值差异亦无统计学意义(P>0.05)。实时荧光定量RT-PCR检测显示,NCI2H596细胞受照后TNF-αmRNA表达逐渐升高,照射剂量达40Gy时,TNF-αmRNA表达水平达高峰,为对照组的83倍;受照后,1hTNF-αmRNA表达逐渐升高,6h达高峰,为对照组的568倍。A549细胞受照后,1hTNF-αmRNA表达即达高峰,为对照组的136倍。结论X线可诱导肺癌细胞株A549和NCI2H596产生TNF-α,且呈剂量、时间依赖性,可提高肺癌放射治疗的疗效,也可对正常组织和     

结直肠癌组织中T-框蛋白5表达与临床病理特征及预后的关系

目的 探讨结直肠癌组织中T-框蛋白5表达与临床病理特征及预后的关系。方法 选取2020年2月至2021年2月间锦州市中心医院收治的180例结直肠癌患者,分析结直肠癌组织中TBX5表达与临床病理特征的关系,统计分析人结肠癌细胞株中、各组HT29细胞中TBX5 mRNA和蛋白表达水平。结果 180例患者中,TBX5表达阳性44例,阳性率为24.4%,其中浸润深度T1、T2、T3、T4患者的TBX5表达阳性率逐渐降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。有淋巴结转移、神经侵犯患者的TBX5表达阳性率分别低于无淋巴结转移、无神经侵犯患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。SW620细胞、LOVO细胞、HCT116细胞、SW480细胞、HT29细胞中TBX5 mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。TBX5转染组HT29细胞中TBX5 mRNA和蛋白表达水平均高于阴性对照组、空白对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 结直肠癌组织中T-框蛋白5表达与浸润深度、淋巴结转移、神经侵犯及预后的关系密切。     

基因沉默HIF-1α在结直肠癌SW480细胞的缺氧与上皮-间质转化中的作用

目的通过基因沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),研究其对结直肠癌SW480细胞的生长增殖、侵袭迁移能力,及对锌指转录因子(Snail)与上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响和作用。方法利用氯化钴(CoCl2)化学诱导建立结直肠癌SW480细胞的缺氧模型,设计合成HIF-1α的小干扰RNA(HIF-1α-siRNA)并将其转染入细胞内。通过四甲基偶氮唑兰(MTT)法检测细胞的体外生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell法)检测细胞的体外侵袭迁移力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫蛋白印迹(Western blot)检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherinmRNA与蛋白的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,缺氧条件下,基因干扰组的OD值及细胞存活率均降低(P<0.05);体外侵袭实验结果显示,基因干扰组侵袭迁移率降低(P<0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示,基因干扰组中HIF-1α和Snail mRNA和蛋白的表达明显降低,E-cadherin mRNA和蛋白的表达明显增强(P<0.05),对3种因子进行相关性分析,结果显示HIF-1α和Snail的表达呈正相关,HIF-1α和Snail均与E-cadherin的表达呈负相关(P<0.05)。结论 RNA干扰沉默HIF-1α基因可抑制结直肠癌SW480细胞的体外生长增殖和体外侵袭迁移能力,其机制可能是由于基因沉默HIF-1α导致细胞中Snail低表达,E-cadherin高表达,抑制了EMT发生、发展所致。     

DNA-PK／AKT／GSK3β通路与结肠癌细胞的放射抗拒性

目的探索结肠癌细胞株SW480在长期分割放疗下获得放射抗拒性的可能机制。方法经不同剂量0Gy、2Gy、5Gy、10Gy单次x射线照射后,以RT．PCR法检测结肠癌亲本细胞SW480和放射抗拒性细胞SW480-R中CCNDlmRNA的表达;Westernblot法检测DNA．PK／AKT／GSK3[3通路中两种细胞株cyclinD1、CDK4、Rb、P—Rb．Ser795、AKT、p-AKT-ser473、GSK313、p-GSK3β-Ser9、DNA．PKcs、P—DNA．PKcs蛋白的表达。结果经单次x射线照射0Gy、2Gy、5Gy、10Gv后,RT—PCR法检测显示SW480．R细胞中CCNDlmRNA的表达明显低于SW480的表达（P〈0．05）,其相对表达水平分别为0．31±0．02、0．32±0．03、0．34＋0．05、0．44±0．04;Westernblot法检测显示SW480和SW480．R中的cyclinDI、CDK4、Rb、P—Rb．Ser795、AKT、P—AKT．Ser473、p-GSK3β-Ser9、DNA—PKcs及p-DNA-PKcs蛋白的表达含量在两种细胞中显著不同,SW480．R的蛋白表达明显高于SW480（P〈0．05）,而GSK313蛋白的表达含量SW480．R却低于SW480（P〈0．05）。结论经过长期分割放疗的结肠癌细胞获得的放射抗拒性可能与激活DNA—PK／AKT／GSK313通路中cyclinD1蛋白过表达介导的DNA损伤反应（DDR）的改变有关。     

PYK-2在PGE_2诱导大肠癌细胞侵袭转移中的作用

目的 研究富含脯氨酸的酪氨酸激酶 2(proline rich tyrosine kinase 2,PYK 2)在前列腺素E2(PGE2)诱导大肠癌SW480细胞侵袭转移中的作用。方法 实验分为A、B、C、D四组,分别为未处理组,PGE2组,PGE2+SC19220(EP1抑制剂)组,PGE2+BAPTA AM(胞内Ca2+螯合剂)组。通过 RT PCR检测SW480中PGE2四种EP(EP1,EP2,EP3,EP4)受体的表达,应用Western blotting检测SW480细胞中PYK 2蛋白的表达,应用Transwell实验观察各组SW480细胞侵袭转移能力的改变。结果SW480表达PGE2的三种EP受体,EP1,EP2和EP4,PGE2可促进EP1的表达;经PGE2作用后,10分钟内PYK 2磷酸化水平逐渐增加,0分钟、5分钟、10分钟检测结果相比差异均有统计学意义(P<0.05),30分钟与0分钟检测结果相比差异无统计学意义(P>0.05);C组、D组与B组相比PYK 2磷酸化水平明显下降(P<0.05),大肠癌细胞侵袭转移能力显著降低(P<0.05)。结论 PGE2可能通过Ca2+,EP1促进PYK 2的磷酸化,从而进一步诱导大肠癌细胞的侵袭转移过程。     

哇巴因抑制结直肠癌多药耐药细胞增殖及侵袭力的研究

  目的  探讨结直肠癌耐药细胞增殖及侵袭力与Na+, K+-ATP酶活性及其β1亚单位和P糖蛋白(P-gp)表达的关系, 及哇巴因增加化疗敏感性的可能机制。  方法  以人结直肠癌亲本细胞(SW480)和耐奥沙利铂细胞(SW480/OxR)为研究对象, 采用MTS法、Transwell小室、生化酶学、实时定量PCR(Real time quantitative, RT-PCR)及流式细胞技术等方法比较SW480细胞与SW480/OxR细胞的增殖及侵袭力、Na+, K+-ATP酶活性及其β₁亚单位和P-gp表达的差异, 观察哇巴因对SW480/OxR细胞上述指标的影响。  结果  与SW480细胞比较, SW480/OxR细胞增殖活力无明显变化(P > 0.05), 而细胞侵袭力却显著增加, Na+, K+-ATP酶活性下降, β₁亚单位表达下调, P-gp表达上调(P均 < 0.01);哇巴因能显著抑制SW480/OxR细胞增殖活力, 减弱其侵袭力, 下调SW480/OxR细胞P-gp蛋白表达, 上调SW480/OxR细胞β₁亚单位蛋白表达, 增加SW480/OxR细胞Na+, K+-ATP酶活性(P均 < 0.01)。  结论  Na+, K+-ATP酶活性下降可能源于β₁亚单位表达下调, 并参与结直肠癌的耐药; 哇巴因能部分逆转结直肠癌耐药细胞MDR, 可能与增加Na+, K+-ATP酶活性及下调P-gp表达有关。      

DCLK1 对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响及机制

目的:探讨双肾上腺皮质激素样激酶1（DCLK1）对结直肠癌耐药细胞化疗敏感性的影响及机制。方法:采用实时定量PCR和Western blot方法检测人结直肠癌细胞系HT29、SW480及其奥沙利铂（OXA）耐药株HT29/OXA和SW480/OXA中DCLK1的表达。采用siRNA干扰HT29/OXA和SW480/OXA细胞中DCLK1的表达,并用不同浓度OXA干预细胞,CCK-8法检测细胞增殖及其对OXA的敏感性,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞的Caspase-3活性,Western blot检测细胞中DCLK1、Bax、Bcl-2、多药耐药蛋白1（MDR1）、P-糖蛋白（P-gp）等蛋白的表达。结果:与亲本细胞系比较,DCLK1在HT29/OXA和SW480/OXA细胞中的mRNA和蛋白表达水平均显著上调（P<0.05）。转染DCLK1 siRNA（si-DCLK1）后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞的增殖活性均显著降低（P<0.05）,且它们对OXA的敏感性显著增加（P<0.05）;转染si-DCLK1后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞的凋亡显著增加（P<0.05）,伴随Caspase-3活性上调（P<0.05）,Bax蛋白表达上调（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达下调（P<0.05）;转染si-DCLK1后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞中MDR1和P-gp的蛋白表达均显著下调（P<0.05）。结论:DCLK1可能通过调控Bax/Bcl-2以及MDR1和P-gp的表达影响结直肠癌细胞的化疗敏感性。     

APRIL在大肠癌组织中的表达及化疗药物对大肠癌SW480细胞APRIL表达的影响

背景与目的:增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)是最近发现的肿瘤坏死因子家族新成员,有促进肿瘤生成和增殖的能力。本实验通过研究APRIL在大肠癌组织中的表达,并对比氟尿嘧啶和顺铂对大肠癌细胞株SW480表达APRIL水平的影响,探讨抗癌药对APRIL在大肠癌组织中表达的影响。方法:采用免疫组化法和荧光定量PCR检测56例大肠癌患者癌组织和配对癌旁相对正常组织及大肠癌细胞株SW480上APRIL的表达。将不同终浓度的氟尿嘧啶和顺铂加入培养中的SW480细胞,用荧光定量PCR检测加入药物后24h、48h和72hSW480细胞表达APRIL mRNA的水平。结果:大肠癌组织表达APRIL的阳性率为76.8%,mRNA水平为0.71±0.08,高于癌旁相对正常组织的16.1%和0.16±0.05(P<0.001)。SW480细胞上有明显的APRIL表达,加入不同浓度的氟尿嘧啶后,SW480细胞APRIL的mRNA水平逐渐升高,至72h表达最高,25、50、100、200μg/mL4个药物浓度作用72h后细胞APRIL mRNA水平分别为0.85±0.10、0.81±0.09、0.83±0.11和0.90±0.12,与空白对照(0.57±0.06)相比差异有统计学意义(P<0.001);而加入不同浓度的顺铂后,细胞APRILmRNA水平与空白对照相比差异无统计学意义(P>0.05),仅在10、20μg/mL浓度作用72h后细胞的APRIL mRNA水平(分别为0.44±0.05,0.40±0.07)低于空白对照(P<0.05)。结论:APRIL在大肠癌的进展过程中可能起到一定程度的促进作用;氟尿嘧啶可能具有对抗APRIL功能的潜在作用。     

靶向SMC1A基因慢病毒介导的RNA干扰对奥沙利铂治疗敏感性的影响

目的 探讨沉默结直肠癌细胞株染色体结构维持-1A（SMC1A）基因对奥沙利铂（L-OHP）敏感性的影响。方法 构建SMC1A基因的小分子RNA干扰表达质粒。与慢病毒包装质粒一起转染239T细胞制备pGCSIL-GFP／SMC1A-siRNA慢病毒载体,并将重组质粒转染结直肠癌SW480、HT-29细胞株。RT-PCR、Western blotting法检测SMC1A mRNA和蛋白的表达情况。CCK-8法检测不同浓度L-OHP对细胞的抑制作用。 结果 pGCSIL-GFP／SMC1A-siRNA慢病毒载体构建成功,RT-PCR产物为343bp。RT-PCR显示重组质粒转染的SW480、HT-29细胞SMC1A mRNA表达量明显低于其对应的未转染细胞（0.13±0.02 vs. 1.02±0.06,0.182±0.019 vs. 1.114±0.032;P＜0.05）;Western blotting 显示干扰后的细胞SMC1A蛋白表达受到明显抑制;不同浓度的L-OHP处理细胞48h后,CCK-8显示转染SMC1A-siRNA细胞生长抑制率较未转染细胞高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 沉默结直肠癌细胞株SMC1A基因对奥沙利铂的敏感性显著增加,为临床进一步提高结直肠癌的疗效提供了研究基础。     

Na+-K+-ATP酶表达对结直肠癌细胞增殖及侵袭力的影响

  目的  探讨Na+-K+-ATP酶α亚单位表达对人结直肠癌细胞增殖及侵袭力的影响,及哇巴因治疗结直肠癌的可能机制。  方法  以SW480和SW620细胞为研究对象,予生理浓度的哇巴因（1 nM）干预,应用MTT法、Transwell侵袭小室、生化酶学、实时定量PCR及蛋白免疫印迹等方法检测细胞的增殖及侵袭力,Na+-K+-ATP酶活性及其亚单位（α₁、α₂及α₃）表达水平。  结果  与SW480细胞比较,SW620细胞增殖及侵袭力明显增加（P均 < 0.05）,Na+-K+-ATP酶活性下降,Na+-K+-ATP酶α₁亚单位mRNA表达上调（P均 < 0.001）;而SW480细胞Na+-K+-ATP酶α₃亚单位mRNA表达上调（P < 0.001）;且均与蛋白表达水平一致;哇巴因在24、48及72 h均能显著抑制两种细胞的增殖活力,以48 h效应最强,减弱其侵袭力,并下调两种细胞Na+-K+-ATP酶α₁亚单位蛋白表达,增加SW620细胞Na+-K+-ATP酶活性,而对两种细胞Na+-K+-ATP酶α₂和α₃亚单位蛋白表达及SW480细胞Na+-K+-ATP酶活性无影响。  结论  Na+-K+-ATP酶活性下降部分源于α₃亚单位表达下调及α₁亚单位表达上调,可能共同参与结直肠癌的转移;哇巴因抑制结直肠癌细胞的增殖及侵袭力的机制,可能部分与下调Na+-K+-ATP酶α₁亚单位蛋白表达有关。      

The mechanisms of 5-FU-PLA-O-CMC-NPS-mediated inhibition of the proliferation of colorectal cancer cell line SW480

We aimed to investigate how 5-FU-PLA-O-CMC-NP (5-FPOCN) inhibits the proliferation of the SW480 colon cancer cell line. Following the treatment of cell line SW480 with 0.1, 1, 10 or 100 μg/ml 5-FPOCN or 5-fluorouracil (fluorouracil, 5-Fu) for 0, 24, 48, or 72, the rate of cell was tested by the tetrazolium assay (MTT). After the SW480 cells were treated with 5-FPOCN or 5-FU for 72 h, the growth rate and apoptosis were detected. After the SW480 cells were treated with 5-FPOCN or 5-FU for 24, 48, 72, or 120, flow cytometry (FCM) was used to determine the cell cycle distribution. The changes in the expression of P21, CyclinD1 and Rb were detected by Western blotting and real-time PCR. We found that different doses of 5-FPOCN can significantly inhibit the growth rate of SW480 cells, and this effect is dose and time dependent. However, there is no significant difference from 72 to 120 h (P?>?0.05). After 5-FPOCN treatment for 72 h, there is a negative correlation between the concentration of 5-FPOCN and the activity of SW480 cells and a positive correlation between the concentration of 5-FPOCN and SW480 cell apoptosis. G1 phase was significantly increased, and S phase was significantly decreased in 5-FPOCN-treated SW480 cells at 72 h compared to the control group (P?<?0.05); there was a positive correlation between the concentration of 5-FPOCN and the above changes. It was suggested that 5-FPOCN can delay G1/S phase and that this is a dose-dependent effect. The expression of P21 protein and messenger RNA (mRNA) and Rb protein and mRNA was significantly increased in 5-FPOCN-treated SW480 cells at 72 h compared to the control group, and this was a dose- and time-dependent effect. CyclinD1 protein and mRNA expression was reduced as the dose increased, and its expression was negatively associated with the increased expression of P21. We concluded that 5-FPOCN can significantly inhibit the growth of colon cancer SW480 cells. 5-FPOCN increased P21 expression and decreased cyclin family and pRb expression to promote cell cycle delay and apoptosis.