细胞外基质对造血干祖细胞增殖、分化的影响

细胞外基质是造血微环境的重要组成部分，它在造血干祖细胞增殖、分化过程中担负着重要角色，可以由多个途径影响造血干祖细胞的增殖、分化。     

用WEHI_3－条件培养液代替肺－条件培养液培养CFU－GM

用ＷＥＨＩ＿３－条件培养液（ＷＥＨＩ＿３－ＣＭ）代替个条件培养液（Ｌ－ＣＭ）对小鼠粒单系集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）生长的影响进行研究。结果表明，ＷＥＨＩ＿３－ＣＭ对体外小鼠ＣＦＵ－ＧＭ的形成具有明显的刺激作用；ＷＥＨＩ＿３－ＣＭ与Ｌ－ＣＭ均主要刺激混合型集落生长。提示ＷＥＨＩ＿３－ＣＭ内可能含粒单集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）活性。     

去甲肾上腺素和酚妥拉明对肝星状细胞增殖和细胞外基质的影响

目的探讨肾上腺素激动剂（NA）和拮抗剂（PTL）对细胞因子刺激大鼠肝星状细胞（HSC-T6）的影响。方法HSC-T6的复苏和传代;MTT法检测HSC-T6的增殖;放射免疫法（RIA）检测HSC-T6分泌透明质酸（HA）和前胶原的水平（PC）;糖原染色（PAS）用来检测HSC-T6内糖原水平。结果在体外实验中,NA（10^-5、10^-7、10^-9mol／L）能促进PDGF-BB诱导的HSC-T6的增殖、TGF-诱导的HA及PCIII的分泌并且能增强细胞内糖原的表达;PTL（10^-5、10^-7、10^-9mol／L）能抑制PDGF-BB诱导的HSC—T6的增殖、TGF-诱导的HA及PCIII的分泌并且能减弱细胞内糖原的表达。结论NA能促进HSC—T6增殖及基质的分泌,PTL则抑制HSC-T6的增殖及基质的分泌。     

巴戟天对骨髓基质细胞向成骨细胞分化影响的实验研究

为探讨巴戟天对骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响,采用含药血清的方法体外培养骨髓基质细胞,分A组(巴戟天水提物组)、B组(巴戟天醇提物组)、C组(对照组)、D组(经典成骨诱导组)、E组(巴戟天水提物+经典成骨诱导组)、F组(巴戟天醇提物+经典成骨诱导组),观察各组碱性磷酸酶染色、茜素红染色、碱性磷酸酶比活性及骨钙素含量,结果显示碱性磷酸酶染色和茜素红染色反应强弱的顺序为F组＞E组＞D组＞B组＞A组,C组为阴性;碱性磷酸酶比活性和骨钙素(BGP)含量测定结果为:A、B、D、E、F组在同一时间点均高于C组(P<0.05),E组、F组在同一时间点均高于D组(P<0.05).说明巴戟天水提物及醇提物均能促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化,且巴戟天醇提物的作用强于水提物.     

一贯煎对DMN肝纤维化大鼠肝卵圆细胞增殖分化的影响

[目的]探讨一贯煎有效逆转大鼠肝硬化的作用途径,促进中医药在组织结构重构研究中的发展.[方法]二甲基亚硝胺(DMN)制备大鼠肝硬化模型,于肝硬化造模成型后,给予一贯煎治疗,以Thyl.1为肝脏卵圆细胞(HOC)标记物,通过免疫组织化学、蛋白定量检测以及激光共聚焦检测技术,观察一贯煎对肝脏干细胞增殖及分化及相关因子的影响...     

人胎肝干细胞的体外诱导分化

目的 :体外分离和诱导分化人胎肝干细胞。方法 :原代分离培养人胎肝干细胞集落 ,免疫细胞化学鉴定细胞集落分子标志物的表达 ;在体外因子作用下诱导干细胞定向分化为成熟肝脏细胞 ,对其生物学特性进行初步鉴定。结果 :从人胎肝组织中成功分离表达AFP、Albumin、Cytokeratin等标志物的胎肝干细胞集落 ;在体外因子作用下肝干细胞定向分化为成熟肝脏细胞。结论 :人胎肝中同样存在具有干细胞特性的原始细胞 ,体外可定向分化为成熟肝细胞。人肝干细胞的分离培养对于肝脏发育及其病理学的深入研究奠定了良好的基础。     

低能量激光照射对人脂肪基质细胞增殖分化的影响

目的： 研究低能量激光照射（low level laser irradiation,LLLI）的照射剂量对人脂肪基质细胞（human adipose-derived stromal cells,hASCs）增殖与分化作用的影响,为LLLI进一步在骨组织工程中的应用奠定基础。方法： 将P4代hASCs接种于孔板中,24 h后利用半导体激光器（980 nm,100 mW~12 W）连续照射4 d。以增殖培养基为空白对照组(PM组),实验组接受2、4、6、8 J/cm2的激光照射,连续7 d进行细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）增殖检测。当细胞达到70%的融合后将一半细胞更换为成骨培养基（osteogenic medium,OM）,根据培养基及累计接受的激光总能量密度分为6组：PM、OM、PM+LLLI2 J/cm2、OM+LLLI2 J/cm2、PM+LLLI4 J/cm2、OM+LLLI4 J/cm2。于第7天进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色及定量检测,于第14、21天进行矿化沉积检测,于第7、14天进行实时定量PCR检测成骨相关基因的表达,探究低能量激光对hASCs成骨分化的影响,结果采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果： PM+LLLI4 J/cm2组细胞增殖速率最快,OM各组的ALP染色均呈阳性表达,且染色深度随激光能量密度的增高而加重。第14天时,OM各组随激光照射能量升高,矿化结节体积明显增大、数目增多;第21天时,OM组间茜素红染色结果无明显差异。ALP及茜素红定量结果均与相应染色结果趋势一致。hASCs实时定量PCR结果提示,LLLI可促进ALP和Runx2的表达,且促进作用与照射剂量呈正相关。结论： LLLI具有促进hASCs增殖分化的作用,且在一定剂量范围内,这种促进作用会随照射剂量的增大而加强,当达到峰值后随照射剂量的增大而减弱。     

人胎肝造血生长因子对造血祖细胞的刺激增殖作用

将胎肝提取液经超滤后取中分子蛋白(MMWP)和低分子蛋白(LMWP),用祖细胞培养方法检测其造血生长因子活性。结果显示MMWP具有刺激多向祖细胞(CFU-Mix)、粒单祖细胞(CFU-GM)和红系祖细胞(CFU-E)增殖的白介素-3(IL-3)、粒单集落刺激因子(GM-CSF)和红细胞生成素(Epo)活性。以重组的IL-3、GM-CSF和Epo作标准对照,初步测定每毫升MMWP约含12.5μgIL-3、10~5UGM-CSF和500UEpo。而LMWP在祖细胞培养中仅有少数集落生长,但无抑制现象出现。     

苦杏仁甙对小鼠肝、肾细胞增生的影响

本文以苦杏仁甙4mg/20g 体重及7mg/20g 体重经皮下给予小鼠,给药6次后参入(~3H)胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR),经放射自显影计数肝细胞、枯否细胞、肾小管上皮细胞之标记细胞以及分裂期细胞,算出标记指数(LI)及分裂指数(MI))与对照组比较,肝细胞、枯否细胞之两个用药组与对照组间差异均为非常显著(P<0.01)本实验显示苦杏仁甙对小鼠肝细胞及枯否细胞增生有明显促进作用。     

白细胞介素-3对小鼠淋巴瘤细胞生长的影响

用小鼠IL-3分泌细胞株WEHI-3和IL-3依赖细胞株32-D,获取了IL-3并对其活性进行了鉴定。在此基础上,选用国内实验性T-S-Z白血病系统中的一株小鼠淋巴瘤细胞克隆SAC-ⅡB_2,观察了IL-3对其增殖和分化的影响。结果表明,IL-3对SAC-ⅡB_2细胞有一短暂的刺激增殖作用;IL-3作用的SAC-ⅡB_2细胞未见成熟形态迹象出现,未见成熟T或B细胞表面标志Thy-1、Smlg的表达,也未显示成熟T、B细胞的功能。     

体外造血微环境对L_(801)白血病细胞增殖和分化的影响

本文观察到同系正常小鼠骨髓基质细胞层对L_(801)白血病细胞有明显抑制增殖和促进分化的作用,而基质细胞条件培养液只能抑制L_(801)细胞增殖,不能诱导其分化。提示基质层能产生抑白血病细胞增殖的抑制因子,基质细胞的直接接触或短距离因子的作用与L_(801)的细胞分化有关。这种抑制增殖和促进分化的作用可能不通过GM-CSF。     

大鼠胎肝细胞移植对肝硬化肝部分切除的影响

本实验观察了胎肝细胞腹腔移植对肝硬化大鼠肝部分切除术后的肝再生及代谢变化的影响,发现肝硬化大鼠较正常鼠肝部分切除术后肝衰死亡率增加,肝再生及血浆白蛋白的恢复延迟。胎肝细胞腹腔移植可加快其恢复过程,对减少肝切后的肝衰死亡具有一定的作用。移植的肝细胞同时可引起机体的排斥反应,短期内即破坏消失。     

WEHI－3细胞的自我刺激作用

采用体外液体培养和琼脂半固体培养方法，观察ＷＥＨＬ－３细胞的生长特点。结果表明，种入的细胞浓度越高，细胞增殖越快；ＷＥＨＩ－３细胞条件培养液对ＷＥＨＩ－３细胞的生长、集落形成及小鼠粒－单系造血祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）产率均有明显的刺激作用（Ｐ＜０．０１）。提示ＷＥＨＩ－３条件培养液具有ＧＭ－ＣＳＦ活性。     

体外冲击波对肝和胆囊上皮细胞超微结构的影响

研究体外冲击波冲击对新西兰兔肝胆组织细胞超微结构的影响。冲击波冲击时间为０、１５、３０和４５ ｍｉｎ，冲击波能量储存读数分别为０、７．８、１５．６和２３．５。作用后立即处死动物，在透射电镜下观察。结果：胆囊上皮细胞不同程度变性，表现为内质网、线粒体肿胀及基质变淡；细胞侧面的连接结构消失，间隙增宽；有的细胞分离、脱落。肝细胞能观察到肿胀、核固缩和质膜破裂等改变．能量越强，改变越严重。冲击波作用后２、４、６和１４个月，上述改变和损伤大部分可逆变，在电镜下观察到损伤修复恢复正常的过渡细胞，在１４个月时，所有细胞恢复正常。结论：实验支持体外冲击波碎石术在临床应用，但应尽量避免对肝胆组织的过度冲击，以免产生严重的细胞损伤。     

亚硒酸钠对U—937细胞增殖,分化及双链RNA含量的影响

采用流式细胞仪检测等方法,初步研究亚硒酸钠对U-937细胞的抑制增殖作用和诱导分化作用及其对U-937细胞双链RNA的影响,结果提示:亚硒酸钠可抑制U-937细胞增殖,其作用随剂量增加和时间延长而增强。可使细胞用期发生改变,表现为G_0/G_1期细胞比例增加,S期细胞减少,G_2/M期细胞减少。可增强细胞非特异性酯酶和酸性磷酸酶活性,同时伴有单核细胞样形态变化,提示亚硒酸钠可能有诱导U-937细胞分化的作用。亚硒酸钠尚可明显降低U-937细胞双链RNA过量百分率。     

铁蛋白对卵巢癌细胞生长和细胞周期动力学的影响

检测Ｈ铁蛋白及Ｌ铁蛋白对人上皮性卵巢癌细胞株ＡＯ及３ＡＯ的生长情况及细胞周期分布的影响。采用３Ｈ标记胸腺嘧啶校苷摄入细胞ＤＮＡ的放射测定法及流式细胞仪进行测定。结果：Ｈ及Ｌ铁蛋白均能抑制 ＡＯ及 ３ＡＯ细胞的生长，此作用在加入铁蛋白后的 ７２ ｈ较 ３６ ｈ显著，且随铁蛋白浓度的增加而增强０．０１＜Ｐ＜０．０５）。在７２时Ｈ铁蛋白的抑制作用较强，有显著差异（Ｐ＜０．０１）。同时发现，加入铁蛋白可使Ｇ１期细胞百分比增加，而Ｓ期细胞明显减少，也有显著差异（Ｐ＜０．０５）。结论：初步认为铁蛋白，特别是Ｈ铁蛋白可抑制卵巢癌细胞生长，并阻止其从 Ｇ０／ Ｇ１；期进入 Ｓ期。     

当归补血汤对内皮细胞和骨髓造血细胞的增殖和分化作用

目的：探讨当归补血汤对内皮细胞及骨髓造血细胞的刺激增殖和诱导分化作用。方法：在培养的内皮细胞及骨髓造血细胞半固体和液体培养体系中加入不同浓度的当归补血汤，采用流式细胞术、双抗夹心法检测其对内皮细胞及骨髓造血细胞增殖的影响。结果：当归补血汤能够促进内皮细胞由G1期进入S期及细胞因子的分泌，但对BFU—E，CFU—E，CFU—GM和CFU—MK集落产率的提高及细胞表面表达CD13和CD71的细胞数量没有统计学上的意义。结论：在体外，当归补血汤能够促进内皮细胞的增殖及细胞因子的分泌，但未发现促进骨髓造血干细胞增殖与分化的作用。     

肝细胞生长因子和表皮生长因子对体外肝细胞生长的影响

取成年小鼠肝细胞在RPMI1640培养液中加热60℃胎肝提取液(FE_(60)HSS),加热80℃胎肝提取液(FE_(80)HSS)及加热60℃成年雄性小鼠颌下腺提取液(M_(60)EGF),用I~(125)UdR掺入法测定其肝细胞DNA合成,结果显示FE_(60)HSS为8575±17cpm,FE_(80)HSS为4788±990cpm,M_(60)EGF为4592±1120cpm,和对照组1902±657cpm比较差异有非常显著意义(P值均<0.01)。FE_(60)HSS组对细胞DNA合成较FE_(80)HSS明显,说明HSS对加热80℃不很稳定。