慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中HCV RNA和NS5抗原的检测

目的 研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染外周血个核细胞（ＰＢＭＣ）的情况及其意义。方法 运用非核素原位杂交法（ＮＩＳＨ）和抗生蛋白链菌素－生物素法（ＳＡＢＣ）分别检测２０例慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ ＲＮＡ和ＮＳ５抗原。结果 ２０例患者中有８例（４０％）,ＰＢＭＣ中ＨＣＶ ＲＮＡ呈阳性,其中６例（３０％）ＰＢＭＣ中ＮＳ５抗原同时呈阳性。ＨＣＶＲＮＡ主要分布于胞浆中,而ＮＳ５抗原还可以出现在胞膜     

不同临床型HCV感染的基因分型与血清学分型研究

采用酶免疫（ＥＩＡ）和反转录聚合酶链反应９ＲＴ－ＰＣＲ）技术对不同临床型ＨＣＶ感染的血清标本进行ＨＣＶ分型，结果显示，各临床型ＨＣＶ感染的的型别构成无明显差异。主要为基因Ⅱ型（９３．７％）、少量基因Ⅲ型（２．７％）和Ⅱ＋Ⅲ混合型（３．６％）未见基因Ⅰ、Ⅳ、菲分型一血清学分型总符合率为９７．９６％，血清学分型率与ＨＣＶ抗－ＣＳ／Ｃ 正相关；ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性者９３．７５％可基因分型，但仅有５２．０８     

慢性丙型肝炎患者HCV基因型分析

目的研究慢性丙型肝炎患者HCV基因型概况。方法采用基因芯片法检测HCV基因分型;采用PCR法测定HCV RNA定量。结果在570例患者中,HCV RNA阳性552例（95%）,其中1b型400例（72.4%）,2a型63例（11.4%）,3a型20例（3.6%）,3b型20例（3.6%）,1b＋2a型12例（2.1%）,1a型2例（0.4%）,6型7例（1.26%）,1b＋3a型1例（0.18%）,2a＋1b型3例（0.5%）,未定型24例（4.3%）;不同HCV基因型感染者血清HCVRNA水平无统计学差异（P〉0.05）。结论本组患者HCV基因型以1b型为主,2a型次之,多种混合型的出现提示HCV基因型呈现多样化趋势。     

HCV蛋白NS5A对PI3K/Akt通路的分子调节作用

目的研究丙肝病毒（HCV）蛋白NS5A对PI3K/Akt信号的调节机制及其意义。方法 HepG2细胞分别转染NS5A质粒和对照载体。提取总蛋白,用Western blotting法分析PI3K信号Akt磷酸化水平,并用免疫沉淀法检测p85酪氨酸磷酸化水平及p85与p110蛋白间的相互作用。结果 NS5A转染细胞p-Akt蛋白水平上调,同时p85酪氨酸磷酸化水平显著提高,但催化亚基p110与调节亚基p85的结合作用没有明显变化。结论丙肝病毒（HCV）蛋白NS5A可以和PI3Kp85亚基结合而调节PI3K/Akt信号通路,但其机制可能有p85/p110以外的机制。这可能为临床丙肝IFN敏感性的诊断与治疗提供依据。     

丙型肝炎病毒NS5A蛋白功能的研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）可引起肝炎、肝硬化和肝癌等一系列肝脏疾病,且慢性化几率较高。目前全世界HCV感染人数仍呈增加趋势,因此科学家对HCV的研究高度重视。HCV有一个大的开放阅读框编码约三千多个氨基酸的多聚蛋白,经蛋白酶裂解为十个多肽片段;氨基末端为结构蛋白包括有核心蛋白、包膜蛋白E1和E2、P7蛋白;羧基末端为非结构蛋白包括有NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B蛋白。     

HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的临床研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus.HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NSSB RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NSSBRNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研究最为活跃的方向,本文综述了他们在临床试验中的最新研究进展.     

10例慢性丙型肝炎病人血清HCV RNA检测及基因分型

应用Ａｍｐｌｉｃｏｒ ＰＣＲ试剂盒检测１０例慢性丙型肝炎和３例慢性乙型肝炎病人血清ＨＣＶ ＲＮＡ,并对其中３例ＨＣＶ ＲＮＡ阳性者ＩＮＮＯ－ＬｉｐＡ基因分型试剂盒进行分型。结果３例慢性丙型肝炎为ＨＣＶ ＲＮＡ阳性,基因型均为１ｂ型。     

丙型肝炎病毒5''-非编码区与NS 5b区酶切分型对比研究

探讨北京与河南地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布情况以及HCV5’—NCR和HCV NS5b两区域分型结果之间的差异。对56例慢性丙型肝炎和80例有偿供血员的HCV RNA阳性血清，同时进行HCV5’—NCR和HCV NS5b酶切分型研究。HCV5’—NCR和HCV NS5b两区域的Ⅱ／1b型感染率北京地区分别占85．7％和87．5％，河南地区分别占68．8％和70．0％。HCV Ⅱ／1b型为北京和河南地区HCV感染的优势株，同时HCV5’—NCR和HCV NS5b区酶切分型结果问具有良好的相互对应关系。     

昆明地区丙型肝炎患者基因分型及其临床意义

近年研究显示,在我国不同地区HCV基因型存在差异。HCV基因型与肝病严重程度、干扰素应答等关系密切[1],因此越来越多地受到人们的重视。本研究对我院2008年7月至2009年3月收治的176例慢性丙型肝炎患者的血清进行基因分型,探讨昆明地区HCV基因型与HCVRNA含量,基因型与ALT、AST的关系。     

HCV NS5A结合蛋白顺乌头酸酶1的验证研究

目的筛选人肝脏cDNA文库中与HCV NS5A的结合蛋白基因,验证其中顺乌头酸酶1与HCV NS5A的相互作用。方法应用酵母双杂交系统3筛选人肝脏cDNA文库中的HCV NS5A结合蛋白基因,应用哺乳动物双杂交及免疫共沉淀技术验证其中顺乌头酸酶1蛋白与HCV NS5A之间的相互作用。结果成功筛选出人肝脏cD-NA文库中与HCV NS5A存在相互作用的蛋白基因,哺乳动物双杂交及免疫共沉淀实验结果证实HCV NS5A与顺乌头酸酶1蛋白在HepG2细胞内存在相互作用。结论本实验成功筛选人肝脏cDNA文库中的HCV NS5A结合蛋白基因,并且在体外水平即细胞内证实HCV NS5A与其中的顺乌头酸酶1蛋白之间的相互作用,为进一步细胞内及体内的糖、脂类代谢等功能研究奠定基础。     

丙型肝炎病毒NS5b区与5'-非编码区不同基因区RNA检测结果的比较

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５ｂ区与５’－非编码区（５’－ＮＣＲ）不同基因区ＲＮＡ检测结果的区别及临床应用价值。利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测１４８例肝炎患者血清ＨＣＶ ＮＳ ５ｂ基因的ｃＤＮＡ,并与５’－ＮＣＲ基因区ｃＤＮＡ检测技术进行了比较。结果 ＨＣＶ ＮＳ ５ｂ基因区ＲＮＡ检出率为２４．３％（３４／１４８）,５’－ＮＣＲ基因区ＲＮＡ检出率为３１．１％（４７／１４８）。Ｈ     

有偿供血员,丙型肝炎及肝癌患者HCV基因分型

为了解本地区ＨＣＶ基因亚型的分布情况，作者对采自６６例有偿供血员、８７例输血后丙型肝炎、１５例散发性丙型肝炎和９例原发性肝癌患者的共１７７份ＨＣＶＲＮＡ阳性的血清标本，进行了ＨＣＶ基因亚型分析。结果发现除２例输血后丙肝患者系ＨＣＶ－Ⅲ感染外，其余被检者均为ＨＣＶ－Ⅱ感染。此结果表明ＨＣＶ－Ⅱ是本地区的ＨＣＶ伏势株     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP9的克隆化研究

目的 筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)反式激活新型靶基因，研究HCV NS5A反式激活作用的分子生物学机制。方法 应用抑制性消减杂交技术(SSH)及生物信息学技术，以HCV NS5A表达质粒pcDNA3．1(-)-NS5A转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照，提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。对于所获基因片段序列分析表明，其中之一为新型基因片段，与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性，利用表达序列标签(EST)序列数据库的搜索和比对，进行电子拼接，根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列，确定新型基因序列。从HepG2细胞提取总RNA，以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列，并测序证实，命名为NS5ATP9，在GenBank中注册，注册号为AF529370。结果 Ns5ATP9基因的编码序列全长为336个核苷酸(nt)，编码产物由111个氨基酸残基(aa)组成，并成功的克隆化。结论 HCVNS5A反式激活新型靶基因NS5ATP9的筛选与克隆，为进一步研究HcvNs5A反式激活作用的分子生物学机制开辟了新的研究方向。     

HCV NS3蛋白酶及抑制剂的研究进展

丙型肝炎呈全球性流行,感染HCV后常呈慢性化,且易使病情进一步发展为肝硬化、肝功能衰竭或肝细胞癌,至今仍缺少理想的治疗药物和方案.HCV NS3蛋白酶在病毒体的成熟和复制中起着重要的作用,是近年来抗丙型肝炎药物研究的重要靶点.本文从NS3蛋白酶结构、功能及与NS4A的相互作用和抑制剂等几方面,介绍NS3蛋白酶及抑制剂的研究进展.     

丙型肝炎病毒NS5A对p53活性调控机制研究

目的 研究HCV NS5A对抑癌蛋白p53活性的抑制作用及其作用机制。 方法 采用荧光素酶报告基因系统观察pwwp-luc,pwwp-mut-luc,pc53-NS3及pCNS5A分别转染或共同转染HepG2、Huh7细胞的荧光素酶活性。应用凝胶滞留试验观察HCV NS5A是否影响p53与其特异DNA序列的结合。 结果 内源性p53能激活p21启动子转录功能,使荧光素酶活性明显增加(3.49×10~5与0.60×10~5,t=5.92,P<0.01)。外源性p53也能激活p21启动子转录功能,荧光素酶活性为5.63×10~5,与对照组(0.47×10~5)比较差异具有显著性(t=10.12,P<0.01)。HCV NS5A能抑制内源性和外源性p53对p21启动子的激活作用,并呈剂量依赖性(F≥20.71,P<0.01)。凝胶滞留试验显示HCV NS5A能阻碍p53与其特异DNA序列的结合。 结论 HCV NS5A能抑制p53的反式激活功能使其目的基因p21启动子的转录功能下降,其机制是HCV NS5A能阻碍p53与其特异DNA序列的结合。     

上海等地区慢性丙型肝炎患者中HCV基因型的分布

目的：探讨上海等地区丙型肝为患者ＨＣＶ基因型的分布，方法：以一种新的ＨＤＶ基因分型方法－线探针试验（ＩＮＮＯ－ＬｉＰＡ）对来源于上海等地区９６例慢性丙型肝炎患者进行ＨＣＶ基因分型，结果：显示９６例患者中以１ｂ型为主（占７７．６％）其次为２ａ／２ｃ（占８．６２％）并发现１ａ４ａ和４ｅ基因亚型，８２例感染单一型（１ｂ）基他１４例为混合感染，有一例慢性丙型肝炎患者感染５个亚型，对其中３９例病人应用干扰素     

慢性丙型肝炎患者肝组织中病毒和Fas抗原表达及其与干扰素？…

目的 探讨丙型肝炎患者肝组织中ＨＣＶ ＮＳ５的Ｆａｓ抗原表达及其与肝组织损伤和干扰素治疗反应的关系。方法 应用α干扰素对一组慢性丙型肝炎患者进行２４周治疗，停药后随访６个月，以血清丙氨酸转氨酸（ＡＬＴ）恢复正常及血清ＨＣＶ ＲＮＡ持续阴转为完全应答标准，采用免疫组化方法检测组织中病毒和Ｆａｓ抗原呈阳性者均为１９例（６５．５％），两者在肝组织中的表达显著相关；单因素相关分析时，两者均与组织病变程度有     

国人SCN5A基因新的同义突变位点

目的:研究中国人心原性猝死相关基因SCN5A突变位点.方法:采用聚合酶链反应和DNA测序对1例RQT间期综合征(LQTs)和2例特发性J波患者SCN5A基因进行突变检测.结果:①3例患者在国内、外已知的SCN5A突变位点上,均未发现有突变.②发现1个新的同义突变(T990C),位于钠通道α-亚基的DⅠ区段S5～S6胞外环上.结论:这个新的同义突变可能通过影响门控性钠通道的跨膜电流而与恶性心律失常的发生相关.     

HIV/HCV混合感染者与HCV感染者感染HCV基因型分析*

目的 使用二代测序技术检测广州地区人类免疫缺陷病毒（HIV）/丙型肝炎病毒（HCV）混合感染者和HCV感染者HCV基因型,了解本地区HCV基因型的流行特点。方法 在233例HCV感染者中,包括95例HIV/HCV混合感染者和138例HCV感染者,使用Illumina Miseq平台PE300模式对HCV Core和NS5B片段进行测序,采用生物信息学分析确定HCV基因型,对测序结果提示混合基因型感染的样本,使用NS5A基因型特异引物进行验证。结果 HIV/HCV混合感染者静脉吸毒感染构成比显著高于HCV感染者（77.7%对19.6% P<0.001）,HCV感染者输血感染的构成比显著高于HIV/HCV混合感染者（48.6%对3.2% P<0.001）;HIV/HCV混合感染者HCV Core基因片段平均数据量为（15456±6689） reads,HCV感染者为（14323±5321） reads,两组无显著差异（P>0.05）;HIV/HCV混合感染者HCV NS5B基因片段平均数据量为（16432±3467） reads,HCV感染者为（17611±5632） reads,也无显著差异（P>0.05）;本组228例（97.9%）HCV感染者为单一HCV基因型感染,HIV/HCV混合感染者HCV 6a型和3b型感染率显著高于HCV感染者（分别为47.4%对26.8%,P=0.001和13.7%对3.6%,P=0.005）,HCV 1b型感染率显著低于HCV感染者（20.0%对59.4%,P<0.001）;在233例入组的HCV感染者中,发现5例（2.1%）为混合基因型感染,其中4例为HIV/HCV混合感染者,1例为HCV感染者。结论 广州地区HIV/HCV混合感染者与HCV感染者感染HCV基因型构成比存在差异,其临床意义还需要探讨。