PKC介导的自噬在肝纤维化中的作用

目的探讨在PKC信号通路介导的自噬在肝纤维化小鼠肝组织中的变化及意义。方法本研究将C57BL/6小鼠随机分为两组:模型组和假手术对照组,其中模型组采用胆管结扎方法诱导小鼠肝纤维化,手术4周后取材。HE染色、Masson染色显示小鼠肝组织纤维化程度;免疫组化检测肝组织内LC3蛋白的表达;Western Blot法检测肝组织中α-SMA、PKCα、p-PKCα和LC3蛋白的表达,最后将人正常肝细胞L02细胞转染PKCαsiRNA后检测LC3蛋白的表达变化并分析二者之间的关系。结果 HE和Masson染色结果显示胆管结扎诱导的肝纤维化模型组有明显的纤维增生。Western Blot结果显示模型组肝组织中α-SMA、PKCα和p-PKCα蛋白表达明显高于对照组(P0.01),而Western Blot和免疫组化结果均显示LC3蛋白的表达则明显降低(P0.05)。最后,L02细胞在转染PKCαsiRNA后显示LC3蛋白表达上调(P0.01)。结论 PKCα信号通路的激活可以抑制自噬的发生,二者的相互作用可能与肝纤维化的发生和发展密切相关。     

小鼠肝组织NTCP表达与肝纤维化程度相关性的研究

目的观察不同肝纤维化程度小鼠肝组织中Na~+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)表达水平的变化,探讨NTCP表达与肝纤维化严重程度的相关性。方法经口灌胃方法给予10%CCl4油剂建立小鼠肝纤维化模型;在CCl4给药不同时间点取肝组织进行Masson及天狼猩红染色,判断肝纤维化程度;实时荧光定量PCR方法检测不同程度肝纤维化小鼠肝组织中NTCP mRNA水平;Western blot方法检测不同程度肝纤维化小鼠肝组织中NTCP蛋白表达水平。结果与正常对照小鼠相比,肝纤维化程度评分为F1~F2的小鼠肝组织中NTCP mRNA及蛋白表达的水平均有显著增加;而与肝纤维化程度评分为F1~F2的小鼠相比,肝纤维化程度评分为F3~F4的小鼠肝组织中NTCP mRNA及蛋白的表达水平则显著下降。结论 NTCP的表达在肝纤维化发生早期升高,在肝纤维化晚期降低,其表达水平的动态变化有可能提示肝纤维化的发展进程。     

1,25-二羟维生素D3抑制慢性哮喘模型小鼠肺组织α-滑肌肌动蛋白的表达及气道重塑

目的:探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH) 2D3]对慢性哮喘模型小鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及气道重塑的影响.方法:卵白蛋白致敏激发建立慢性哮喘小鼠模型,将小鼠随机分为对照组、哮喘组及VD组.HE染色及天狼星红染色观察各组气道结构及上皮下纤维化,并用计算机图像分析系统评价各组气道重塑;Western blot法及实时荧光定量PCR法检测各组的α-SMA表达.结果:(1)哮喘组出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落、上皮下纤维化及平滑肌细胞层增厚等气道重塑的结构改变,而1,25-(OH)2D3的干预可有效减轻上述病理改变;(2)VD组肺组织α-SMA的mRNA及蛋白表达水平均显著低于哮喘组,但仍高于对照组(P＜0.05).结论:1,25-(OH) 2D3能降低哮喘小鼠肺组织α-SMA的表达并有效抑制哮喘气道重塑.     

miR-218-5p改善帕金森病小鼠多巴胺能神经元变性

目的：探索miR-218-5p对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的急性帕金森病（PD）模型小鼠黑质多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。方法：18只8周雄性C57小鼠随机分配至MPTP组和PBS组,分别腹腔注射20 mg/kg MPTP或等体积无菌PBS,每隔2 h注射一次,共4次。另将36只8周雄性C57小鼠随机平分为（NC agomir+PBS）组（NCPBS组）、（NC agomir+MPTP）组（NCMPTP组）、（miR-218-5p agomir+PBS）组（218PBS组）、（miR-218-5p agomir+MPTP）组（218MPTP组）,每组9只,分别进行双侧黑质立体定位注射miR-218-5p agomir/NC agomir,3 d后腹腔注射MPTP或PBS。免疫荧光染色和Western blot检测小鼠黑质多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶（TH）的表达;荧光定量PCR检测小鼠黑质miR-218-5p和Wnt7a、Ctnnb1、Lef1、Birc5 mRNA的表达。结果：与PBS组相比,MPTP组小鼠黑质miR-218-5p表达显著下降（...     

miR-27a靶向调节TLR4减轻糖尿病妊娠大鼠氧化应激和炎症损伤

目的 探讨MicroRNA-27a(miR-27a)在妊娠期糖尿病（GDM）大鼠胎盘组织中的表达及其对GDM大鼠氧化应激和炎症的影响，并分析潜在机制。方法 SD正常妊娠大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导建立GDM模型，造模成功后分为模型组（model组）、agomir-NC组、miR-27a agomir组、miR-27a agomir+脂多糖（LPS）组，每组12只；另取12只正常妊娠大鼠为对照组（control组）。检测大鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）水平，计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）；分析妊娠结局和胎盘质量；检测胎盘组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性以及丙二醛（MDA）含量；苏木精-伊红（HE）染色、TUNEL法检测胰腺和胎盘组织损伤及细胞凋亡情况；实时定量PCR(RT-qPCR)、Western blot检测胎盘组织miR-27a与Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB p65(NF-κB p65)的mRNA和蛋白水平。结果 miR...     

大鼠骨髓间质干细胞体内诱导肝星状细胞的凋亡

背景:骨髓间质干细胞治疗肝纤维化的疗效己得到很多实验的证实,但其机制仍不明确.目的:实验观察骨髓间质干细胞移植后肝星状细胞的凋亡情况,初步探讨骨髓间质干细胞治疗肝纤维化的机制.方法:连续8周皮下注射CCl_4诱导大鼠肝纤维化.造模成功后,20只大鼠随机分为实验组及对照组,每组10只.实验组经尾静脉注射骨髓间充质干细胞,对照组经尾静脉注射DMEM培养液.于移植前,移植后第3,7天分别处死大鼠,取其肝脏行羟脯氨酸的检测,苏木精-伊红染色及masson染色,免疫组织化学检测α-SMA及α-SMA+TUNEL双染反映肝星状细胞活化及其凋亡情况.结果与结论:造模8周后,大鼠肝脏羟脯氨酸含最明显升高,病理呈进展性肝纤维化表现.移植7 d后,实验组大鼠肝脏羟脯氨酸含量明显降低,肝纤维化有所缓解,而对照组的肝纤维化程度继续加重.免疫组织化学显示,CCl_4注射8周后,α-SMA阳性细胞大量增生,移植后第7天,实验组α-SMA阳件细胞明显少于对照组(P＜0.05).移植后第3天,实验组肝星状细胞凋亡明显较对照组增加(P＜0.05).结果提示,骨髓间质干细胞移植有治疗肝纤维化的作用.骨髓间质干细胞诱导肝星状细胞凋亡可能是其治疗肝纤维化的主要机制之一.     

β-arrestin1通过活化p38信号转导通路激活肝星状细胞促进肝纤维化

目的 探讨β-arrestin1(ARRB1)在肝纤维化中的作用，阐明ARRB1和p38信号转导通路诱导肝星状细胞活化从而促进肝纤维化的机制。方法 选取C57BJ/6L背景的雄性小鼠12只，随机分为对照组和模型组，每组6只小鼠，采用浓度为20%的四氯化碳诱导肝纤维化小鼠模型，并于临床收集肝硬化患者的肝组织及健康对照志愿者的肝组织样本。采用HE和天狼星红染色来评估肝纤维化情况。通过免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法及实时荧光定量PCR法检测ARRB1、p38、磷酸化p38(pp38)及纤维化相关指标α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白的表达水平。在人肝星状细胞LX2中使用转化生长因子-β(TGF-β)细胞因子诱导其活化，并分析ARRB1的表达水平；进而利用小干扰RNA和质粒沉默或者过表达ARRB1，同时配合p38特异性抑制剂（SB203580），揭示两者的调控关系。结果 在肝纤维化组织中ARRB1表达升高，p38信号活化增强（P均<0.05）。在肝星状细胞LX2中，TGF-β可以激活肝星状细胞并表达ARRB1和增强p38信号。ARRB1表达的升高或抑制可以相应地影响p38信号从...     

ACSL4抑制剂对草酸钙结石致小鼠肾损伤及间质纤维化的影响

目的 探讨ACSL4抑制剂调控铁死亡在草酸钙结石所致小鼠肾损伤及间质纤维化中的肾保护作用及可能机制。方法 15只雄性C57BL/6小鼠随机分为模型组、ACSL4抑制剂组、对照组各5只,其中模型组腹腔注射乙醛酸水溶液(100 mg/kg)构建草酸钙肾结石小鼠模型,ACSL4抑制剂组腹腔注射乙醛酸水溶液(100 mg/kg)并饮用含Abemaciclib(30 mg/kg)无菌水,对照组腹腔注射等量生理盐水,3组小鼠均连续处理12 d。12 d后检测3组小鼠血清肌酐、尿素水平。取3组小鼠左侧肾脏组织,行组织病理检查Von-Kossa染色、HE染色、Masson染色,观察肾脏晶体沉积、组织损伤及间质纤维化情况;行免疫组织化学检查,观察肾组织ACSL4、α-SMA表达情况;采用Western blot法检测肾组织ACSL4、collagenⅠ、vimentin、α-SMA、SLC7A11、GPX4蛋白相对表达量。结果 (1)模型组血清肌酐[(68.91±14.18)μmol/L]、尿素[(7.49±1.92)mmol/L]水平均高于对照组[(30.22±6.80)μmol/L、(3.76±0....     

川芎嗪诱导肺癌细胞凋亡及其机制研究

目的探究川芎嗪对肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养肺癌A549细胞,将细胞分为空白对照组(NC组)以及用不同浓度(200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml)的川芎嗪处理人肺癌A549细胞实验组,用吖啶橙/嗅化乙锭(AO/EB)双荧光染色观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测A549细胞凋亡相关蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western Blot检测Fox M1的表达水平。转染过表达Fox M1质粒,用800μg/ml川芎嗪干预,分别用AO/EB双荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果相对于NC组,AO/EB双荧光染色结果显示不同浓度的川芎嗪干预后,可见橘红色荧光的凋亡细胞,并且随着川芎嗪的浓度增加而增加,呈浓度依赖性。流式细胞仪检测结果显示川芎嗪干预的A549细胞凋亡数显著增加。WB结果显示不同浓度的川芎嗪干预后,Bcl-2蛋白的表达水平下调,Bax蛋白的表达水平上调,呈浓度依赖。qPCR结果显示Fox M1 mRNA显著下降,WB结果同样显示Fox M1蛋白表达水平降低,并随着川芎嗪的干预浓度增加而下降,具有浓度依赖性。过表达Fox M1蛋白后,相对于阴性对照组,AO/EB双荧光染色结果显示肺癌A549细胞橘红色荧光减少,流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率降低。结论川芎嗪能有效地诱导肺癌A549细胞凋亡,其作用机制可能与下调Fox M1蛋白表达有关。     

黄芪总皂苷调节Adora2b/IL-10信号通路抑制肝纤维化的实验研究

目的 探究黄芪总皂苷调节腺苷A2b受体/白介素-10 (Adora2b/IL-10)信号通路阻止肝纤维化进展的作用和机制。方法 通过CCl4低剂量反复染毒的方法制备肝纤维化小鼠模型,给予黄芪总皂苷干预,并设立索拉菲尼阳性对照组,检测血清肝功能,HE染色观察肝组织炎症情况,Masson染色观察肝纤维化进展情况,免疫组化观察Coll蛋白表达情况,Western blot检测Adora2b、IL-10蛋白表达情况。结果 模型组血清谷丙转氨酶(ALT)活性、总胆红素(TBiL)水平较正常组显著上升(P<0.01),黄芪总皂苷干预后能显著降低模型组ALT、TBiL水平(P<0.01)。HE染色和Masson染色显示,正常组小鼠肝组织无炎症和纤维化改变;模型组肝组织炎症细胞浸润明显,同时肝组织出现明显的纤维间隔;黄芪总皂苷干预后能显著改善组织炎症和肝纤维化进展。免疫组化结果显示,模型组小鼠肝组织的Coll蛋白表达较正常组显著增加(P<0.01),黄芪总皂苷干预后均能显著逆转这一变化。Wesemt Blot结果显示,模型组小鼠肝组织Adora2b、IL-10蛋白表达较正常组显著降低...     

GFAP启动子介导EGFP靶向肝星状细胞治疗肝纤维化的价值探索

目的探索体内特异性靶向肝星状细胞(HSC)治疗肝纤维化的技术方法。方法建立四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型,构建胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子调控增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体,采用尾静脉高压注射方法将EGFP表达裸质粒转染到纤维化小鼠的肝脏。荧光显微镜观察EGFP在肝脏的表达及免疫荧光共定位,观测EGFP与HSC标志蛋白(DESMIN)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的共定位。结果 EGFP与DESMIN和α-SMA共定位说明EGFP主要在HSC中表达,GFAP启动子能够调控外源基因在体内靶向HSC。结论 GFAP启动子介导体内靶向HSC,治疗肝纤维化策略具有临床应用的潜力。     

Lipidoid作为新型脂质载体对肝脏非实质细胞的靶向作用实验研究

目的探讨新型脂质载体Lipidoid对肝脏的细胞靶向效率,为抗肝纤维化治疗提供一定实验室依据。方法C57BL/6小鼠分别给予CCl_4灌胃建立肝纤维化模型,同时给予Lipidoid、Lipidoid/siRNA-TIMP-1尾静脉注射,通过Masson染色观察各组小鼠肝脏纤维化情况,并通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测Lipidoid/siRNA-TIMP-1对TIMP-1表达水平的影响;通过对小鼠尾静脉注射绿色荧光(GFP)标记的Lipidoid-GFP,取其肝组织进行冰冻切片分别进行Desmin及F4/80染色,评价Lipidoid-GFP对肝脏非实质细胞的靶向作用;通过对小鼠分离的原代肝星状细胞SW-HSC、小鼠巨噬细胞系(RAW264.7)转染Lipidoid-GFP,流式细胞仪分别检测上述两种细胞中GFP荧光强度。结果通过对肝组织进行Masson染色发现,在CCl_4诱导的肝纤维化小鼠模型中,给予Lipidoid/siRNA-TIMP-1治疗可显著降低胶原纤维的沉积;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果显示Lipidoid/siRNA-TIMP-1可以显著抑制TIMP-1基因的表达;肝组织冰冻切片Desmin及F4/80染色结果显示,Lipidoid-GFP主要被肝脏肝星状细胞和Kuffer所捕获,肝星状细胞、Kuffer细胞捕获Lipidoid-GFP的阳性率分别为13.4%、43.8%;原代肝星状细胞SW-HSC、小鼠巨噬细胞系(RAW264.7)转染Lipidoid-GFP后经流式细胞仪检测,结果显示转染Lipidoid-GFP的SW-HSC及RAW264.7GFP阳性率分别为66.9%、75.8%,均显著高于对照组。结论小鼠实验结果表明,Lipidoid/siRNA-TIMP-1可有效降低肝脏TIMP-1水平,发挥抗肝纤维化作用。Lipidoid作为一种新型脂质载体可有效感染肝脏非实质细胞(肝星状细胞和Kuffer细胞)。     

血吸虫病肝纤维化小鼠中肝星状细胞迁移功能改变的实验研究

目的探讨影响日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织中肝星状细胞(HSCs)迁移运动功能变化的相关因素。方法 SPF级6⁸周龄Balb/c小鼠16只,随机分为模型组(8只)和对照组(8只),以血吸虫尾蚴腹部贴附法建立感染模型,正常组予以生理盐水代替。于感染后8周末处理小鼠,取部分肝组织石蜡包埋,进行病理学评估,免疫荧光染色检测HSCs(α-SMA,红光)运动蛋白Fascin(绿光)的表达;另取部分肝组织,采用Real-time PCR方法检测迁移诱导因子转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)以及单核细胞趋化因子1(MCP-1)的表达以及HSCs运动蛋白α-SMA、Fascin的表达。结果 8周末时,模型组小鼠肝组织中已形成明显肝纤维化。模型组小鼠肝组织中TGF-β1、PDGF以及MCP-1的基因表达水平分别是对照组的30倍、14倍及14倍,差异具有统计学意义(P=0.033、P=0.039以及P=0.037);同时,模型组中HSCs运动相关蛋白α-SMA和Fascin的基因表达水平分别是对照组的9倍和5倍,差异具有统计学意义(P=0.004、P=0.018);荧光共聚焦结果提示,模型组小鼠肝组织中α-SMA(红色)和Fascin(绿色)表达部位一致,集中在虫卵周围肝纤维化区域,较对照组二者表达明显增加,且红绿光分布多重叠。结论诱导HSCs运动迁移的因子表达增加和HSCs自身的运动相关蛋白表达增加均有利于HSCs运动迁移能力增强。     

17-DMAG对人LX2肝星状细胞增殖及凋亡作用的研究

目的研究HSP90抑制剂17-DMAG在体外对人LX2肝星状细胞生长增殖及细胞凋亡的作用。方法 ?体外培养人LX2肝星状细胞,用细胞毒试验法(MTT)观察不同浓度和作用时间的17-DMAG对LX2细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测药物作用后LX2细胞凋亡的发生;Western blot检测α-SMA的表达,并与对照组进行对比。结果 17-DMAG能抑制人LX2肝星状细胞生长,且呈浓度和时间依赖性(P<0.01),随药物浓度加大和作用时间延长,存活细胞数量逐渐减少;流式细胞仪证实17-DMAG可诱导LX2细胞凋亡,与对照组比较,实验组细胞凋亡率明显增加(P<0.01);Western blot可以证实17-DMAG可使LX2细胞α-SMA表达减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 17-DMAG可呈浓度和时间依赖性的抑制人LX2肝星状细胞的生长,其机制为诱导细胞凋亡,并且通过这种机制来减少α-SMA的表达来抑制胶原的产生。     

红景天苷抑制大鼠肺纤维化机制研究

目的探讨红景天苷对大鼠肺纤维化的抑制作用机制。方法 SD大鼠18只,随机分为3组:对照组(6只),生理盐水组(A组,6只),红景天苷组(B组,6只)。大鼠气管内注射博来霉素制备肺纤维化模型后,A组每天腹腔注射生理盐水(5 mg/kg),B组每天腹腔注射红景天苷(5 mg/kg)。对照组气管和腹腔内注入等体积生理盐水。4周后处死动物,提取肺组织分别行Masson染色,免疫组化检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),PCR检测胶原I的mRNA表达。结果与对照组相比,A组Masson染色纤维化程度增强,α-SMA表达、胶原I mRNA表达明显升高(P0.05);同A组相比,B组Masson染色纤维化程度减弱,α-SMA表达、胶原I mRNA表达降低(P0.05)。结论红景天苷对肺纤维化有一定治疗作用,其机制可能与调控胶原相关蛋白有关。     

葛根素对STZ糖尿病模型大鼠视网膜VEGF的调节及对视网膜细胞凋亡的促进作用的研究

目的研究葛根素对链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)的调节及对视网膜细胞凋亡的促进作用。方法清洁级SD大鼠随机分为实验组及对照组各28只,实验组一次性腹腔注射1%STZ诱发糖尿病模型,对照组腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)。成模后给两组大鼠分别注射葛根素,4、8、16、24周后采用实时荧光定量(Real-time PCR)观察VEGF的表达水平,流式细胞技术检测细胞凋亡,WB检测凋亡相关蛋白磷酸化AKT(pAKT)及Caspase3、8、9表达量。结果与对照组相比,实验组大鼠注射葛根素4、8周后VEGF表达量,视网膜组织细胞凋亡,pAKT、Caspase8、Caspase9及Caspase3表达均改变不明显,差异无统计学意义(P0.05);但16、24周后VEGF表达量发生明显下降(P0.05),视网膜组织细胞凋亡发生明显升高(P0.05),pAKT表达下调,Caspase8、Caspase9及Caspase3表达均上调(P0.05)。结论较长时间注射葛根素能下调糖尿病大鼠视网膜VEGF的表达,从而下调pAKT表达,最终导致Caspase3、8、9的表达上调,诱导细胞发生凋亡。此研究结果为糖尿病性视网膜病变的治疗提供了实验依据。     

二维剪切波弹性成像技术评估高血压肾病小鼠肾纤维化的应用价值

目的 探究二维剪切波弹性成像技术(2D-SWE)评估高血压肾病小鼠肾纤维化的应用价值。方法 将C57小鼠随机分为正常对照组、模型组。正常对照组10只使用微渗泵灌注生理盐水,模型组使用用微渗透泵灌注血管紧张素Ⅱ,模型组根据建模时间长短,分为高血压肾病Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组,每组各5只。测量造模前后小鼠血压变化情况；通过2D-SWE技术测定不同造模阶段小鼠的肾皮质硬度；透射电镜观察肾小球毛细血管基底膜结构；酶联免疫法检测尿素氮(urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)和24 h尿蛋白定量(24 h urinary protein,24 h UP)；HE染色和Masson染色检测肾组织病理损伤；Western Blot检测肾组织内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(collagen-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen-Ⅲ)表达。结果 造模结束后小鼠血压明显上升；透射电镜观察到肾组织毛细血管内皮细胞损伤明显,基底膜节段性皱缩；其中高血压肾病Ⅲ组、Ⅳ组2D-SWE技术检测显示小鼠的肾皮质硬度测值显著升高；HE和Masson染色显示小鼠肾组织内肾小管损伤严重,甚至空泡变性,上皮细胞脱落,炎性细胞大量浸润,并伴随明显的纤维化；Western Blot结果显示 α-SMA、collagen-Ⅰ、collagen-Ⅲ的蛋白表达水平均升高。结论 2D-SWE技术检测的小鼠肾皮质硬度与小鼠肾纤维化程度呈正相关,2D-SWE技术对高血压肾病肾纤维化的评估具有重要的临床应用价值。     

MicroRNA-3963促进小鼠间充质干细胞成脂分化

目的:探讨MicroRNA-3963调控小鼠骨实质来源间充质干细胞(MSC)的成脂分化能力。方法:从C57BL/6小鼠骨片中分离培养MSC,将miR-3963mimic或inhibitor及其阴性对照分别转染MSC细胞,应用q-PCR检测转染后细胞中miR-3963的表达量及转染效率,并于转染后进行成脂诱导分化培养14 d后应用油红染色检测脂滴形成情况,应用q-PCR和Western blot方法从转录水平和蛋白水平检测成脂分化因子C/EBPα和PPARγ的表达。结果:q-PCR检测结果表明,转染miR-3963 mimic可显著上调miR-3963表达(P0.001),而转染miR-3963inhibitor可显著下调miR-3963表达(P0.001)。油红染色结果表明,过表达的或敲减miR-3963表达的M SC进行成脂诱导分化培养14 d后,转染miR-3963 mimic可明显促进MSC的脂滴形成。q-PCR和Western blot检测结果显示,转染miR-3963 mimic可显著促进成脂基因C/EBPα和PPARγ的表达;而转染miR-3963 inhibitor则其成脂分化能力较对照组显著降低。结论:miR-3963可调控小鼠骨实质来源的MSC的成脂分化能力,且可促进小鼠MSC的成脂分化。     

脓毒症患者血清IL-35与miR-21的表达及相互调控作用研究

目的检测脓毒症患者血清白细胞介素(IL)-35与微小RNA-21(简称miR-21)的表达水平及相关性,探讨其相互调控在脓毒症中的作用。方法收集脓毒症患者与健康对照者血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测血清IL-35与miR-21的表达,分析二者表达的相关性;小鼠腹腔注射脂多糖建立脓毒症模型,再分别腹腔注射anti-IL-35p35抗体、IgG、脓毒症miR-21模拟物(agomir-21)、脓毒症miR-21阴性对照(agomir-21NC)进行处理,real-time PCR检测各组小鼠血清miR-21表达水平,ELISA法检测各组小鼠血清IL-35、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6水平。结果脓毒症患者血清IL-35与miR-21的表达水平较健康对照组明显升高,差异有统计学意义(P0.05),且二者的表达呈正相关(P0.05);脓毒症小鼠拮抗IL-35后,血清miR-21表达明显升高,同时炎症因子TNF-α、IL-6的表达也明显升高,差异有统计学意义(P0.05);脓毒症小鼠经agomir-21处理后,血清IL-35的水平明显降低,而炎症因子TNF-α、IL-6的表达明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论血清IL-35与miR-21在脓毒症小鼠中通过相互调控作用共同参与脓毒症炎性反应。     

MicroRNA-15a抑制骨髓瘤细胞生长及其机制研究

目的:研究microRNA-15a(miR-15a)在多发性骨髓瘤(MM)细胞生长中的作用及可能机制。方法:慢病毒颗粒感染MM细胞株U266和RPMI8226,流式细胞术(FCM)分选获得稳定转染MM细胞株。CCK-8法检测miR-15a高表达前后MM细胞的增殖情况;AO/EB染色、Hoechst 33258荧光染色法及FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞凋亡的情况;FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞周期的情况;real-time PCR方法检测miR-15a高表达前后MM细胞miR-15a、BMI-1及BCL-2 mRNA的表达;Western blot方法检测miR-15a高表达前后MM细胞BMI-1蛋白表达。结果:获得高表达miR-15a的MM稳定转染细胞株。CCK-8结果显示miR-15a高表达可抑制M M细胞(U266和RPM I8226)的增殖;AO/EB、Hoechst 33258染色和FCM结果显示,miR-15a高表达可显著诱导MM细胞(U266和RPM I8226)的凋亡,U266和RPM I8226细胞高表达组与对照组细胞凋亡率分别为:90.52%vs37.08%,59.40%vs 44.17%;同时,miR-15a高表达可诱导MM细胞(U266和RPM I8226)G1期阻滞,G1期细胞分别为(41.50±0.64)%、(45.31±0.77)%。real-time PCR结果显示,在高表达miR-15a抑制骨髓瘤细胞生长的过程中BCL-2 mRNA表达显著降低,BMI-1 mRNA表达则没有改变,但是Western blot结果却显示BMI-1蛋白表达出现显著降低。结论:miR-15a高表达通过诱导骨髓瘤细胞周期阻滞和凋亡抑制骨髓瘤细胞生长,其机制涉及miR-15a在转录后水平对BMI-1、BCL-2基因的负调控。