两种HCV RNA荧光定量试剂盒检测丙型肝炎病毒的比较分析

目的 比较分析两种丙型肝炎病毒（HCV）核酸定量检测试剂盒的临床性能.方法 随机抽取63例临床血清样本进行平行检测,分别采用HCV磁珠法试剂和对照试剂检测血清中RNA水平.结果 对照试剂检测63例临床样本中有22例阳性,41例阴性;磁珠法试剂检测63例样本中有27例阳性,36例阴性,两种试剂的阳性样本具较好的一致性（P=0.000）,磁珠法试剂与对照试剂的定量检测结果具有线性相关性（r=0.935,P＜0.05）.结论 两种试剂都可以应用于HCV临床检测,磁珠法试剂具有更高的灵敏度,是一种比较理想的HCV RNA定量检测试剂.     

聚合酶链反应检测血清及肝脏中丙型肝炎病毒核糖核酸的研究

本文报道了简便快速检测血清及肝脏中丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的聚合酶链反应(PCR)方法。检测单浆献血员61例,其中抗-HCV阳性30例,检出血清HCV RNA阳性者17例;抗-HCV阴性31例,检出血清HCV RNA阳性者9例。检测6例血清HCV RNA阴性、抗-HCV阳性丙型肝炎患者的肝穿标本,发现4例HCV RNA阳性。说明本文所建立的PCR方法是诊断HCV感染的特异性强、敏感度高的一种新方法。检测肝组织内的HCV RNA可提高HCV RNA的检出率。本文还对标本的处理及如何避免假阳性等问题进行了讨论。     

PCR-BHEL技术的建立及对血清中丙肝病毒的检测

目的:探讨聚合酶链反应偶联印迹杂交和酶联放大技术(PCR-BHEL)在检测血液传染性病毒中的优越性。方法:采用PCR-BHEL检测129例抗-HCV阳性和45例抗-HCV阴性的血清标本,并将该项技术与逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的检测结果进行比较。结果:PCR-BHEL检测129例抗-HCV阳性标本的HCV RNA检出率为78.29%,45例阴性标本的HCV RNA检出率为6.67%;采用RT-PCR检测的HCV RNA检出率分别为62.02%和2.22%。PCR-BHEL技术对HCVRNA的检出率高于RT-PCR,差别有统计学意义(P<0.001)。结论:PCR-BHEL较RT-PCR技术的灵敏度高,能够有效地提高HCV RNA的检出率,可推广应用于其他传染性病毒的检测。     

丙型肝炎患者外周血单个核细胞内HCV RNA的定量测定

目的：明确丙型肝炎患者外周血单个核细胞内是否可检测到HCV RNA,以及外周血清与PBMCs中HCV RNA载量的相关性。方法：通过SYBR Green Realtime PCR对丙型肝炎患者外周血单个核细胞内及血清中HCV RNA进行定量检测。结果：40例抗HCV阳性的患者中35例血清HCVRNA阳性,5例血清HCVRNA阴性,35例血清HCVRNA阳性的患者中30例PBMCs中可测定到HCVRNA,而5例血清HCVRNA阴性的患者中2例PBMCs中检测到HCVRNA。统计分析示患者外周血清与PBMCs中HCVRNA载量无相关性（P〉0.05）。结论：HCV患者PBMCs中可测定到HCV RNA,外周血清与PB-MCs中HCV RNA载量无相关性。     

HCV核心抗原检测技术的临床应用

目的:探讨丙型肝炎病毒核心抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法的临床应用价值。方法:采用丙型肝炎病毒核心抗原ELISA试剂盒对临床丙肝感染者血清进行检测,同时用HCV抗体ELISA检测试剂盒和HCV RNA基因扩增试验作为对照进行比较。结果:以HCV RNA PCR检测为对照,HCV抗原检测试剂盒的灵敏度为95.65%,特异性为100%,23例HCV RNA PCR检测阳性血清,用HCV抗体检测法进行检测,其中有3例阴性,将这3例阴性标本用HCV核心抗原检测法进行检测,其中2例为阳性。结论:丙型肝炎核心抗原ELISA检测方法能缩短窗口期,敏感性高,特异性好,费用低廉,在临床上具有很好的推广前景。     

病毒性肝炎基因诊断芯片测定HBV DNA、HCV RNA的价值

目的：研究病毒性肝炎基因芯片的制备,评价该基因芯片对乙型和丙型肝炎的诊断价值。方法：收集乙型肝炎40例,丙型肝炎20例,40例健康人,乙型肝炎确诊用美国雅培设备试剂,荧光微离子法;丙型肝炎检测抗HCV及PCR法检测HCV RNA。确诊后同健康人血清一起进行双盲混合编组,用肝炎基因诊断芯片检测。结果：40例乙型肝炎病毒标志阳性血清,基因诊断芯片检测阳性30例,阴性10例;12例HCV RNA阳性血清,基因诊断芯片检测阳性8例;抗HCV阳性、HCV RNA阴性血清8例,基因诊断芯片检测阳性2例,阴性6例。40例健康人血清,乙型和丙型肝炎基因诊断芯片检测均为阴性。结论：肝炎基因诊断芯片可以同时检测乙型和丙型肝炎,诊断乙型肝炎的准确率可达80％,假阳性率低;诊断丙型肝炎的阳性率低,技术有待完善。     

两种HCVRNA载量检测试剂相关性分析

目的：分析进口与国产试剂在HCV RNA定量检测中的相关性,评价国产HCV RNA荧光定量PCR试剂在不同病毒载量时的检测能力。方法：以美国Roche公司COBAS Amplipreo/cobas TaqMan HCV test试剂（Roche试剂）对标本的HCV RNA定量为标准,评价某国产HCV荧光定量PCR试剂（DA试剂）对不同病毒滴度标本的检测性能。分析两种试剂检测HCV RNA结果的相关性,对DA试剂在不同病毒载量时的检测能力进行评价。结果：两种试剂检测结果存在线性相关（R2=0.916,P〈0.01）,Roche试剂检测结果[（5.68±1.22）IU/ml,lg]高于DA试剂检测结果[（4.16±1.24）IU/ml,lg],差别有统计学意义（P〈0.01）;对检测HCV高病毒载量[（≥5~〈7）IU/ml,lg和≥7IU/ml,lg]组,两种试剂相关性较高（R2分别为0.781、0.729,P〈0.01）对低HCV病毒载量（≥3~〈5）IU/ml,lg组,两种试剂相关性较低（R2=0.483,P〈0.01）;病毒载量在（≥3~〈4）IU/ml,lg组,DA试剂假阴性为45.4%（5/11）;病毒载量（≥1.18~〈3）IU/ml,lg组及〈1.18 IU/ml,lg组,DA试剂均未检出。结论：与Roche试剂相比,DA试剂在高病毒载量标本的相关性较好,低病毒载量标本的相关性低于高病毒载量标本。DA试剂检测HCV RNA的线性范围较窄,与Roche试剂相比存在一定差距。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床应用探讨

[目的]探讨HCV核心抗原在HCV感染诊断和治疗中的作用。[方法]对173例HCV感染患者血清和82例健康对照者血清,使用ELISA法分别检测抗-HCV、总的HCV核心抗原,使用荧光定量RT-PCR检测HCV RNA。[结果]173例HCV感染者抗-HCV均为阳性。HCV RNA阳性率为49.7%(86/173);HCV核心抗原阳性率为36.4%(63/173)。二者差异有统计学意义(P<0.05)。86例HCV RNA阳性标本中,HCV核心抗原阳性60例(69.8%);HCV核心抗原阴性26例(30.2%)。82例健康对照者抗-HCV、HCV核心抗原、HCV RNA均为阴性。[结论]在没有HCV RNA检测资格的实验室,HCV核心抗原检测可作为病毒存在和复制的一个指标,作为抗-HCV检测的补充试验。     

HCV RNA含量与肝脏组织病理学损伤之间的关系

目的:探讨丙型肝炎病毒感染者血清HCV RNA含量和ALT浓度与肝脏组织病理学损伤之间的关系.方法:应用TaqMan实时荧光定量PCR技术检测681例HCV感染患者血清HCV RNA,电化学发光分析技术检测HBsAg,ELISA检测抗HAV IgM、抗HCV IgG和抗HEV IgM,Bayer全自动生化分析仪检测ALT浓度.H-E染色,光学显微镜观察组织病理损伤程度.结果:681例血清标本中,HCV RNA和抗HCV抗体均阳性和均阴性者分别是150例和420例,HCV抗体阴性而HCV RNA阳性40例,HCV RNA阴性而HCV抗体阳性71例.在排除了甲型、乙型和戊型肝炎病毒感染后,190例HCVRNA阳性患者中,36例患者在HCV RNA检测前后7 d内,曾进行过肝脏组织病理学检测,轻度、中度和重度肝脏病理学损伤患者血清中,HCV RNA浓度及ALT浓度相差均不显著.结论:血清学标志物和病毒核酸都是监测HCV感染的重要指标.HCV RNA浓度、血清ALT浓度与肝脏病理损伤相关性不显著,HCV RNA水平不能反映肝脏病理损伤程度.     

全血中直接抽提RNA方法的探讨

目的:对全血中直接抽提RNA的方法及标本的保存方式进行探讨。方法:采集人体外周血标本15例,分成三份,分别作为新鲜血组、-80℃冻存血组和-20℃冻存血组标本,用TRIReagent和TRIReagent BD两种不同的试剂提取RNA,以RT PCR方法扩增βActin基因,经1.5%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,紫外透射仪下观察分析。结果:经TRIReagent BD抽提的15例新鲜血标本,均出现了303bp的目标带。而经TRIReagent抽提的新鲜血标本,只有11例出现了目标带,4例未见目标条带;新鲜血标本、-80℃冻存血标本和-20℃简易冻存血中抽提RNA,均出现了目标带。结论:全血中直接提取RNA的抽提液以TRI Reagent BD为宜;-20℃简易冻存的外周血标本中提取的RNA,可用于RT PCR实验。     

TRIzol法与磁珠法用于丙型肝炎病毒RNA定量检测的比较

目的 比较TRIzol法与磁珠法对丙型肝炎病毒(HCV) RNA定量检测结果的影响.方法 收集117例丙型肝炎病毒感染阳性患者的血清及其基因分型信息.分别采用TRIzol法与磁珠法提取患者血清样本的HCVRNA,qPCR检测提取HCV RNA的病毒载量,分析两种提取方法所得HCV RNA检测结果的差异.结果 qPCR结果显示TRIzol法和磁珠法具有良好的线性相关性:y=0.978x+0.063(R2 =0.973).Bland-Altman统计分析显示TRIzol法提取的HCV RNA病毒载量对数值的平均值略低于磁珠法,但差异无统计学意义(P＞0.05).基因型分析结果显示1a、1b、2a、3a和6a基因型中两种提取方法差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 TRIzol法提取HCV RNA的定量检测结果和磁珠法相当,且成本低廉,可在国内广泛用于试剂盒的开发和HCV RNA临床检测.     

肝细胞癌和癌旁肝组织中HCVRNA正,负链的检测

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了４２例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者肝癌及癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的正，负链，结果显示，肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正，负链的检出率分别为５４．８％和３５．７％，ＨＣＶＲＮＡ的正链和负链在肝癌和癌旁肝组织中，同时阳性的患者分别占４５．２％和３１．０％，血清ＨＣＶＲＮＡ和抗ＨＣＶ阴性埂肝组织中ＨＣＶＲＮＡ的检出率仍有５１．３％，肝组织ＨＣＶＲＮＡ与乙型肝炎     

Detection of plus and minus strands of HCV RNA in cancerous and non－cancerous liver tissues of patients with hepatocellular c

ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐｌｕｓａｎｄｍｉｎｕｓｓｔｒａｎｄｓｏｆＨＣＶＲＮＡｉｎｃａｎｃｅｒｏｕｓａｎｄｎｏｎ－ｃａｎｃｅｒｏｕｓｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａＣｕｉＸｉａｏｈｏｎｇ...     

PCR检测丙型肝炎病毒感染各高危人群

用ＰＣＲ方法克隆了中国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者的５’端非编码区（５’－ｎｏｎｃｏｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎ，５’－ＮＣＲ）序列，并根据此序列合成引物检测我国ＨＣＶ各高危感染人群的病毒复制情况，结果显示ＨＣＶＲＮＡ在慢性丙型肝炎患者的血清标中的阳性率为８１．８％（９／１１），在ＨＣＶ抗体阳性的血液透析患者血清标本中的阳性率为６３．６％（７／１１），在ＨＣＶ抗体阳性的献血员血清标中的阳性率为２０％（４／     

套式PCR法检测慢性丙肝患者PBMC及血清中HCV-RNA的意义

目的 探讨慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）内HCV－RNA与血清中HCV－RNA的相互关系及其在慢性丙肝发病机制中的作用。方法 用套式PCR（RT－nested-PCR)对124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者的PBMC及血清中HCV－RNA进行检测。结果 124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者中,PBMC及血清中HCV－RNA阳性率分别为53．23％（66／124）和64．52％（80／124）,经χ^2检验,两者差异无显著性（P＞0．05）。各慢肝组PBMC与血清HCV－RNA阳性率相比,差异均无显著性（P＞0．05）。结论 HCV可隐匿于患者PBMC中;PBMC中HCV－RNA与血清中HCV－RNA似有一致性倾向。PBMC中HCV－RNA检测不仅是对常规血清检测的重要补充,而且是HCV肝外感染的直接证据,是导致丙型病毒性肝炎患者易于慢性化的重要原因之一。     

检测HCA-RNA的RT-PCR技术改进与应用

以台湾株丙型肝炎病毒的非结构区基因序列(HCV-T_3)设计内外五条呈巢式排列的引物,结合AGPC核酸一步抽提法,寡聚核苷酸探针5′末端标记法和Southern电泳转移杂交法,建立简捷特异检测HCV-RNA的逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)技术。应用这一技术对121例非甲非乙型肝炎患者和45例抗HCV阳性的慢性乙型肝炎患者进行了血浆HCV-RNA检测,结果阳性率分别为66.1％(80/121)和66.7％(30/45)。本文对这一技术的方法学、HCV-RNA与抗HCV的关系、血液暴露史对HCV感染的意义以及HBV与HCV的重叠感染进行了讨论。     

慢性乙型肝炎患者的HCV重叠感染

研究45例慢性乙型肝炎患者的HCV重叠感染。病例均为后发抗HCV阳性的慢性HBsAg携带者,无先抗HCV阳性而后HBsAg阳性的个案,这可能反映HBV和HCV两种病毒感染的先后次序、不同传播方式及HBV对HCV易感性的增进作用。用RT-PCR检出30/45例血浆HCV RNA阳性,不仅确证HCV重叠感染诊断,还证实HCV复制及传染性。23/30例HCVRNA阳性者有输血史,提示输血是其获得HCV重叠感染的主要途迳。用PCR检出25/45例血清HBV DNA阳性,其中抗HBe阳性者的HBV DNA检出率为42.9％(12/18),明显低于(P<0.001)我们前文报道,提示重叠HCV感染对HBV复制有抑制作用。此外有9例抗HBe阳性者,其HBV DNA阴性但HCV RNA阳性,反映HCV可能已取代HBV成为致肝损害的主要病因。