SARA低表达对Activin A/Smads环路活性的影响

目的探讨下调Smad锚捉蛋白(SARA)表达对Activin A/Smads环路活性的影响。方法利用RNA干扰技术,设计靶向大鼠SARA基因的短发卡RNA(shRNA),瞬时转染激活素A(ActA)高表达的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞。转染48h后倒置荧光显微镜观察转染效率,实时定量PCR、Western blot检测SARA基因的表达情况。对阳性转染组及阴性转染组细胞换液3h后,Western blot检测Smad3总蛋白及磷酸化蛋白的表达。结果靶向SARA基因的SARA-shRNA及对照NC-shRNA质粒的转染效率均超过70%。转染48h后,SARA基因转录及蛋白水平的表达显著降低。细胞换液3h后,与NC-shRNA组比较SARA-shRNA组Smad3总蛋白及磷酸化蛋白下调44%和57%。结论 SARA基因低表达下调ActA/Smads环路活性。     

高血糖状态对大鼠骨骼肌和心肌C-Jun氨基末端激酶和p38信号转导系统的影响

目的：探讨高血糖状态对大鼠骨骼肌和心肌C-Jun氨苯末端激酶(C-JunN-terminalkinase，JNK)和p38激酶活性的作用，进一步了解糖尿病的发病机制，为糖尿病的临床康复治疗提供一些理论依据。方法：12周龄、体质量200～230g的SD大鼠12只，根据是否注射链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)随机分为高血糖组(n=6)和正常血糖组(n=6)。高血糖组大鼠腹腔内注射STZ(65mg／kg)建立持续高血糖模型(血糖&;gt;16mmol／L)。正常血糖组大鼠不注射STZ，维持正常血糖。运用化学发光法测定骨骼肌和心肌JNK和p38活性。结果：骨骼肌和心肌JNK活性在高血糖组明显增高。分别高于正常血糖组1．8倍和1．4倍。骨骼肌和心肌p38活性在高血糖组分别高于正常血糖组的2．O倍和1．6倍。结论：高血糖状态可以激活骨骼肌和心肌JNK和p38信号转导通道。提示细胞信号转导系统参与了糖尿病的发病机制。     

c-Jun氨基末端激酶通路在内毒素休克大鼠生物喋呤诱生中的信号机制

目的 观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路抑制剂——curcumin对内毒素休克大鼠生物喋呤(BH4)及一氧化氮(NO)表达的影响，并探讨JNK途径在生物喋呤诱生中的信号转导机制。方法建立内毒素休克模型，60只大鼠随机分为正常对照组(n=8)、内毒素休克组(n=32)和curcumin拮抗组(n=20)。采用逆转录多聚酶链式反应测定肝、肺、肾组织三磷酸鸟苷环水解酶Ⅰ(GTP-CHI)与诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平，分别采用反相高效液相色谱法和Griess比色法测定血浆与组织中BH4、NO水平的变化。结果与正常对照组相比，内毒素使动物肝、肺、肾组织GTP-CHI基因表达和BH4水平明显升高，至伤后24h仍持续于较高水平；与之相应，组织iNOS基因表达和NO水平亦明显升高。curcumin处理可明显下调肝、肺、肾组织GTP-CHI mRNA表达水平，并且肝组织6～24h时、肺组织12h时BH4水平显著降低；各组织iNOS mRNA表达及NO水平亦显著降低。结论抑制JNK信号通路能明显抑制内毒素休克鼠多器官生物喋呤／NO系统的表达，JNK途径参与了生物喋呤诱生的信号转导过程。     

高血糖状态对大鼠骨骼肌和心肌C-Jun氨基末端激酶和p38信号转导系统的影响

目的:探讨高血糖状态对大鼠骨骼肌和心肌C-Jun氨苯末端激酶(C-JunN-terminalkinase,JNK)和p38激酶活性的作用,进一步了解糖尿病的发病机制,为糖尿病的临床康复治疗提供一些理论依据。方法:12周龄、体质量200～230g的SD大鼠12只,根据是否注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)随机分为高血糖组(n=6)和正常血糖组(n=6)。高血糖组大鼠腹腔内注射STZ(65mg/kg)建立持续高血糖模型(血糖>16mmol/L)。正常血糖组大鼠不注射STZ,维持正常血糖。运用化学发光法测定骨骼肌和心肌JNK和p38活性。结果:骨骼肌和心肌JNK活性在高血糖组明显增高,分别高于正常血糖组1.8倍和1.4倍。骨骼肌和心肌p38活性在高血糖组分别高于正常血糖组的2.0倍和1.6倍。结论:高血糖状态可以激活骨骼肌和心肌JNK和p38信号转导通道。提示细胞信号转导系统参与了糖尿病的发病机制。     

TGF-β/Smads信号通路在白血病中的作用

造血细胞增值与凋亡的动态平衡受到正、负两类调控因子的精确调控.其中,TGF-β是调节造血系统增殖和分化的关键因子,Smad蛋白的功能是将TGF-β与细胞膜上受体结合后产生的信号从胞浆传导到胞核内.TGF-β/Smads信号传导通路中任何一个环节的变化,都会导致信号转到通路的异常,使细胞生长分化失控,与白血病的发病密切相关.本文主要就TGF-β/Smads通路在白血病发生中的作用作一综述.     

TGF-β/Smads信号通路在子宫内膜癌中的研究进展

子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)是女性最常见的来源于子宫内膜上皮的恶性肿瘤,近年发病呈上升趋势且发病年龄年轻化,主要的治疗方式仍然是手术和放化疗,但晚期EC治疗效果不理想。传统的分类方法在诊疗中存在严重不足,不能为患者的精准治疗提供足够的依据。近年来,随着分子生物医学研究的不断深入,越来越多的研究发现EC的发病和信号通路关联,TGF-β/Smad s信号通路与EC的相关性更为明显,临床上迫切需要将其纳入患者的常规诊疗中。TGF-β/Smads信号通路主要通过促进上皮-间充质转化、刺激血管生成、诱导免疫抑制以及与肿瘤微环境相互作用等推动肿瘤的进展。     

c-Jun氨基末端激酶在单增李斯特菌感染形成炎症复合体中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在单增李斯特菌(LM)感染小鼠腹腔巨噬细胞过程中,对于炎症复合体活化与装配的作用,及其与毒力因子李斯特菌溶血素(LLO)的关系。方法将小鼠腹腔巨噬细胞随机分为SP处理组、未处理组及阴性对照组(NI),每组3个复孔。SP处理组用JNK抑制剂SP600125预处理小鼠腹腔巨噬细胞1h,除NI外,其余各组巨噬细胞感染野生型LM(WT-LM)24h,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测上清液中白细胞介素(IL)-18的表达;免疫荧光观察细胞内炎症复合体的关键蛋白组分ASC斑点(ASC-speck)的形成情况;Western blot检测WT-LM感染小鼠腹腔巨噬细胞不同时相点JNK的磷酸化水平。同时使用LM的△hly和△hly::hly突变株感染小鼠腹腔巨噬细胞,观察胞内ASC-speck的形成情况及不同时相点JNK蛋白的磷酸化水平。结果 SP处理组IL-18的表达水平与未处理组相比明显降低,差异有统计学意义(P0.05),免疫荧光法发现SP处理组ASC-speck阳性的细胞百分比明显低于未处理组,差异有统计学意义(P0.01)。Western blot结果显示p-JNK在WT-LM感染10min时即明显升高,40min时达到峰值,持续至少120min。LM的突变株感染实验中,免疫荧光结果显示△hly感染组ASC-speck阳性细胞的百分比较WT-LM感染组明显降低,差异有统计学意义(P0.01),而LLO重新表达的△hly::hly感染组,ASCspeck阳性细胞数得到明显恢复,与野生型LM组相比差异无统计学意义(P0.05)。Western blot结果看到p-JNK在△hly突变株感染后40min有显著表达,而在80min和120min后出现骤然减弱甚至消失。结论JNK信号通路参与调控LM感染过程中炎症复合体的活化,并且在JNK参与活化过程中,与LLO密切相关。     

丹参酮Ⅱ A对肥厚心肌细胞内C-jun氨基末端激酶活性的影响

目的:在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的肥大心肌细胞C-jun氨基末端激酶(C-junN-terminalkinases,JNKs)表达的影响。方法:采用相差显微镜测量心肌细胞直径大小,3H-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率作为心肌细胞肥大的指标,用细胞免疫荧光标记和蛋白质印迹法(westernblot)检测心肌细胞核内磷酸化JNKs(JNK-P)的表达代表JNKs活性。结果:AngⅡ诱导心肌细胞肥大,其导致的心肌细胞直径、蛋白合成速率、细胞内JNK-P蛋白含量均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),丹参酮ⅡA对此有一定的抑制作用(P<0.05),其效果与AngⅡ受体阻滞剂氯沙坦相似。结论:丹参酮ⅡA对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大有一定的抑制作用。其作用机制可能与丹参酮能抑制AngⅡ1型受体激活,阻止Ca2 内流,阻断丝裂原活化的蛋白激酶通路,抑制JNKs的磷酸化和向核内移位有关。     

Notch信号通路在脑缺血损伤中的作用机制研究进展

1917 年,Morgan 及其同事在果蝇体内发现了一种基因, 因其功能部分缺失可导致果蝇翅缘出现缺口, 故命名该基因为Notch.随后的研究发现,Notch 在胚胎发育、T 细胞发育、维持造血干细胞自我更新以及神经干细胞的发生及分化过程中起重要作用.近年来,有研究发现Notch 信号通路在脑缺血损伤中同样发挥着重要的作用.本文就Notch 信号通路在脑缺血损伤中的作用机制进展进行综述.     

TGF-β/Smads信号通路与胰腺纤维化

胰腺星状细胞（PSC）是胰腺纤维化发生发展的关键细胞,转化生长因子β（TGF-β）是促进PSC活化以及细胞外基质合成的主要因子。TGF-β/Smads信号转导通路在PSC活化、进而在胰腺纤维化形成中具有重要的作用,本文着重就TGF-β/Smads信号转导通路在胰腺纤维化中的分子机制做一综述。     

RhoA/Rho激酶信号通路在慢性疼痛中的作用

正RhoA是一种小分子G蛋白,RhoA的主要效应底物Rho激酶(Rho-associated coiled-coil-forming kinases,ROCK)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,主要在细胞迁移、分化和生存等方面起重要作用[1]。RhoA/ROCK的异常激活可在很多疾病中被观察到,如中枢神经系统疾病、心血管疾病、肿瘤等。目前大量研究表明,RhoA/ROCK通过其介导的细胞信号传导系统在慢性疼痛中也发挥着重要作用。本文通过阐述RhoA/ROCK信号通路在慢性疼痛中的作用机制,为临床治疗疼痛提供新的思路和策略。     

丹参酮ⅡA对星巴謦心肌细胞内C-jun氨基末端激酶活性的影响

目的：在原代培养的新生大鼠心肌细胞上，观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的肥大心肌细胞C-jun氨基末端激酶（C-jun N-terminal kinases，JNKs）表达的影响。方法：采用相差显微镜测量心肌细胞直径大小，^3H-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率作为心肌细胞肥大的指标，用细胞免疫荧光标记和蛋白质印迹法（western blot）检测心肌细胞核内磷酸化JNKs（JNK-P）的表达代表JNKs活性。结果：AngⅡ诱导心肌细胞肥大，其导致的心肌细胞直径、蛋白合成速率、细胞内JNK-P蛋白含量均明显高于对照组（P〈0.05或P〈0．01），丹参酮ⅡA对此有一定的抑制作用（P〈0．05），其效果与AngⅡ受体阻滞剂氯沙坦相似。结论：丹参酮ⅡA对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大有一定的抑制作用。其作用机制可能与丹参酮能抑制AngⅡ1型受体激活．阻止Ca^2＋内流。阻断丝裂原活化的蛋白激酶通路。抑制JNKs的磷酸化和向核内移位有关。     

脑缺血预适应大鼠脑内c-Jun氨基末端激酶磷酸化水平和蛋白表达量的改变

目的初步探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）在大鼠脑缺血预适应中（IPC）的作用。方法将大鼠随机分为正常对照（control）、假手术（SI）、缺血预适应或缺血耐受（IT）、单纯蜜蜂毒（BV）、外周伤害耐受（PNT）5组。应用SDS-PAGE、Western blot等实验方法,借助GelDoc和Versa Doc凝胶成像系统,半定量检测大脑躯体感觉皮层、海马组织内JNK的磷酸化水平和蛋白表达量的变化。结果IPC大鼠大脑躯体感觉皮层内JNK46KD的磷酸化水平（激活程度）增高（P〈0.05）,JNK54KD及海马组织内JNK46KD和JNK54KD的磷酸化水平无明显变化。IPC大鼠躯体感觉皮层JNK46KD蛋白表达量回落（P〈0.05）,JNK54KD及海马组织内JNK46KD和JNK54KD的蛋白表达量均无明显变化。结论大鼠躯体感觉皮层内JNK46kDa磷酸化水平的增高及其蛋白表达量的回落可能参与了脑缺血预适应的形成。     

补阳还五汤对大鼠脑缺血后蛋白激酶B1和c-Jun氨基末端激酶1/2表达的影响

目的探讨补阳还五汤对脑缺血后大鼠蛋白激酶B1（AKT1）和c-Jun氨基末端激酶1/2（JNK1/2）的影响。方法将48只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组、补阳还五汤组,每组12只。采用大脑中动脉闭塞法（MCAO）建立右侧局灶性脑缺血大鼠模型。补阳还五汤组大鼠于术后2h起灌服补阳还五汤（主要由生黄芪120g、当归6g、赤芍4.5g、川芎3g、西红花3g、桃仁3g、广地龙3g组成）14.2 g/kg,每日1次,连续7 d。其他各组动物均给予等体积生理盐水。于第7日处死大鼠,取脑组织,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定AKT1 mRNA表达,采用免疫组化法检测JNK1/2蛋白表达。结果与正常对照组和假手术组比较,模型组AKT1 mRNA表达量〔吸光度（A）值〕明显降低（0.48±0.08比0.63±0.11、0.61±0.09,均P＜0.05）,JNK1/2阳性细胞数（个/mm2）明显增多（34.13±4.57比16.15±1.09、16.23±2.05,均P＜0.05）;与模型组比较,补阳还五汤组脑组织中AKT1 mRNA表达（0.93±0.11）和JNK1/2阳性细胞数（45.04±5.68）明显增加,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。结论补阳还五汤可上调缺血脑组织AKT1 mRNA和JNK1/2阳性细胞数表达,是其脑保护作用机制之一。     

抑制c-Jun蛋白氨基末端激酶信号通路对内毒素血症大鼠肠屏障功能的保护作用

目的 探讨阻断细胞质内应激信号通路c-Jun蛋白氨基末端激酶(JNK)对内毒素血症大鼠肠屏障损伤的保护作用.方法 24只雄性SD大鼠,按随机数字表法分为对照组、内毒素血症模型组、JNK抑制剂组3组,每组8只.对照组仅给予生理盐水2 ml/kg+JNK抑制剂SP600125的溶剂PPCES液2.5 ml/kg;内毒素血症模型组静脉注射脂多糖( LPS) 10 mg/kg+PPCES液2.5 ml/kg;JNK抑制剂组静脉注射LPS 10 mg/kg+JNK抑制剂SP600125 10 mg/kg.记录各组大鼠活动和生存情况;并于12h后取大鼠同肠,光镜下观察肠道黏膜病理改变;同时取血,采用酶联免疫吸附试验( ELISA)测定血浆D-乳酸含量.结果 对照组大鼠活动正常,无死亡;模型组大鼠精神萎靡、活动减少,12h内死亡1只;JNK抑制剂组大鼠活动较模型组活跃,无死亡.回肠黏膜病理检查显示:与对照组相比,模型组大鼠回肠组织黏膜水肿,绒毛缩短,炎性细胞浸润;INK抑制剂组回肠组织病变较模型组减轻.模型组大鼠血浆D-乳酸含量(μg/L)较对照组显著升高(943.8±439.6比227.9±130.0,P＜0.05);JNK抑制剂能显著降低内毒素血症大鼠血浆D-乳酸含量(637.4±114.4比943.8±439.6,P＜0.05).结论 抑制细胞质内应激信号通路JNK能减轻内毒素血症大鼠肠屏障损伤.     

c-Jun 氨基末端激酶在D-半乳糖胺/脂多糖诱导急性肝衰竭小鼠肝组织中的表达及意义

目的 研究c-Jun 氨基末端激酶(JNK)在D-半乳糖胺/脂多糖(D-GalN/LPS)引起的小鼠急性肝衰竭模型肝组织中的表达及其意义.方法 32 只C57BL/6 小鼠随机分成实验组与对照组,利用D-GalN/LPS 构建急性肝衰竭模型,于给药后0 h、2 h、4 h、6 h 取材,应用蛋白免疫印迹、免疫组织化学的方法 对磷酸化的JNK(p-JNK) 进行检测并作半定量分析,观察其在模型中的变化情况.结果 实验组肝组织损害、肝细胞坏死逐渐加重,6 h 最重;p-JNK 在给药后的实验组小鼠肝组织中持续高表达,高峰出现在给药后2 h.结论 给小鼠注射D-GalN/LPS 后可以增加JNK 的磷酸化水平,JNK 信号通路可能在D-GalN/LPS 引起的急性肝衰竭损伤中起至关重要的作用.     

一氧化氮通过环磷酸鸟苷激活细胞外信号调节激酶/P90RSK 信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的:观察大鼠脑缺血再灌注损伤时诱导型一氧化氮合酶源性一氧化氮、细胞外信号调节激酶激酶/细胞外信号调节激酶的信号转导通路,分析神经细胞损伤之间的联系。方法:实验于2005-03/2006-03在中国医科大学第一临床学院麻醉实验室完成。32只Wistar大鼠随机摸球法分为4组,即对照组、模型组、诱导型一氧化氮合酶抑制剂组、细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组,每组各8只。采用4血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型,对照组行假手术。诱导型一氧化氮合酶抑制剂组、细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组夹闭两侧颈总动脉前30min分别腹腔注射N-3-苯甲基-乙脒(诱导型一氧化氮合酶特异性抑制剂)45μmol/kg或SL327(细胞外信号调节激酶激酶特异性抑制剂)100mg/kg,对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水。缺血20min再灌注24h后处死大鼠取海马,检测大鼠海马组织中一氧化氮、环磷酸鸟苷量的变化及诱导型一氧化氮合酶mRNA和细胞外信号调节激酶1/2、P90RSK蛋白表达水平;电镜观察海马线粒体的变化。结果:Wistar大鼠32只全部纳入结果分析。①模型组大鼠海马中一氧化氮、环磷酸鸟苷的量、诱导型一氧化氮合酶mRNA水平比对照组增高[(0.42±0.03),(0.21±0.02)μmol/g;(44.7±4.1),(19.6±1.8)nmol/L;1.07±0.04,0.25±0.02;P<0.01];诱导型一氧化氮合酶抑制剂组、细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组大鼠海马中一氧化氮、环磷酸鸟苷、诱导型一氧化氮合酶mRNA水平比模型组降低[(0.31±0.02),(0.44±0.03)μmol/g;(29.5±2.4),(46.3±4.2)nmol/L;0.70±0.03,1.10±0.04;P<0.01]。②模型组大鼠海马中细胞外信号调节激酶1/2,P90RSK蛋白表达水平较对照组升高;诱导型一氧化氮合酶抑制剂组、细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组较模型组降低(P<0.01)。③电镜观察模型组大鼠海马线粒体变性率比对照组升高(P<0.01),诱导型一氧化氮合酶抑制剂组和细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组大鼠海马线粒体变性率比模型组低(P<0.01)。结论:脑缺血再灌注损伤时,诱导型一氧化氮合酶源性的一氧化氮可能通过环磷酸鸟苷激活了细胞外信号调节激酶激酶/细胞外信号调节激酶/P90RSK信号转导通路诱导了神经细胞的损伤。     

人参皂苷Rg3通过活性氧/c-Jun氨基末端激酶对骨肉瘤细胞凋亡与自噬影响

目的探讨人参皂苷Rg3(G-Rg3)通过活性氧(ROS)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)对骨肉瘤细胞凋亡和自噬的影响及可能机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞(MG63),用不同剂量G-Rg3(0、40、80、160μmol/L)进行干预。为分析G-Rg3的作用机制,将细胞分为对照(Con)组、G-Rg3组(160μmol/L G-Rg3干预)、G-Rg3+N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(160μmol/L G-Rg3和ROS清除剂NAC进行干预)、G-Rg3+SP600125组(160μmol/L G-Rg3和JNK特异性抑制剂SP600125进行干预)。采用流式细胞术检测细胞凋亡和ROS水平;激光共聚焦显微镜观察细胞自噬;蛋白免疫印迹法检测凋亡蛋白(BAX、Bcl-2)、自噬蛋白(Beclin1和P62)和磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平。结果不同浓度G-Rg3均可诱导MG63细胞发生凋亡,使BAX蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降,且存在剂量依赖性(P<0.05)。激光共聚焦显微镜观察到不同浓度G-Rg3均可诱导MG63细胞发生自噬,LC3 puncta数目形成增...