基质金属蛋白酶-2与子宫内膜异位症及相关研究

由于子宫内膜异位症(endomemiosis,EMs)具有侵袭性强、广泛种植、易复发等特点,近年来已成为妇科多发病和常见病,现代医学对本病的发病机制迄今尚未完全明了,诊断和治疗仍带有探索性质.基质金属蛋白酶-2(ma-trix metalloproteinases-2,MMP-2)与EMs发病机制密切相关,是目前研究EMs的热点.本文就目前MMP-2、EMs及其关系的研究做一综述.     

基质金属蛋白酶-2,-9及金属蛋白酶组织抑制物-1基因在病变肝脏的表达

目的 了解不同肝病时肝内基质金属蛋白酶的变化及其与肝脏纤维化的关系.方法 应用聚合酶链反应方法,对不同肝病时肝内基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9和金属蛋白酶组织抑制物-1的基因表达进行研究.结果 在正常肝脏,基质金属蛋白酶-2和金属蛋白酶组织抑制物-1的表达很弱,而基质金属蛋白酶-9的表达较强,提示基质金属蛋白酶-9可能是正常肝脏Ⅳ型胶原代谢的主要降解酶.急性肝损伤时,基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9和金属蛋白酶组织抑制物-1的表达均较强,这可能与正常肝脏内基底膜样结构的降解及损伤后的修复有关.在慢性肝炎和肝硬变的肝组织内,基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达较弱,而金属蛋白酶组织抑制物-1的表达较强,进一步抑制了基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的活性,使肝内的Ⅳ型胶原的降解减少,促进了肝纤维化的形成和发展.在肝转移癌的癌旁组织内,基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达较强,可能促进转移灶周围组织基底膜的破坏,与转移灶进一步扩散有关;而金属蛋白酶组织抑制物-1表达增加,可减少基底膜的破坏,可能对转移灶扩散有一定抑制作用.结论 急性肝损伤肝内胶原代谢活跃,慢性肝损伤胶原降解活性减低,在癌旁肝组织内胶原降解增加.     

胃癌组织中膜型1-基质金属蛋白酶的表达

目的 探讨膜型1－金属蛋白酶在胃癌组织的表达以及与胃癌侵袭和转移的关系。方法 采用免疫组织化学SP方法检测了47例胃癌组织MT1－MMP的表达，采用秩和T检测进行临床病理资料分析。结果 MT1－MMP在正常胃组织中几乎不表达（1／15），而在胃癌组织中高表达（42／47）。进展期胃癌表达（41／42）明显高于早期胃癌（1／5）（P＜0．01），肠型胃癌（24／28）和弥漫型胃癌（12／12）均高表达MT1－MMP，但弥漫型胃部的表达更显著（P＜0．01），浆膜侵袭组表达（32／33）与非浆膜侵袭组（10／14）的差别有非常显著的意义（P＜0．01），淋巴结转移组（31／32）与非淋巴结转移组（11／15）的差别有非常显著的意义（P＜0．01）。MT1－MMP表达定位在胃癌侵袭生长的边缘区，其中以瘤细胞为主，部分基质细胞也表达。分布形式主要有两种。带状分布主要见于肠型胃癌的粘膜，粘膜下层以及肠型胃癌和弥漫型胃癌的肌层侵袭。弥漫性分布多见于弥漫型胃癌的全层侵袭。结论 MT1－MMP表达促进胃癌的的胃壁侵袭和淋巴结转移，可作为判断胃癌恶性表型有有用指标。     

基质金属蛋白酶组织抑制剂-2、基质金属蛋白酶-13及c-fos蛋白表达与合并髂静脉狭窄下肢静脉曲张患者病情严重程度相关性分析

目的 探讨基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及c-fos蛋白表达与合并髂静脉狭窄下肢静脉曲张(VVLE)患者病情严重程度的相关性.方法 选取自2017年12月至2018年12月承德医学院附属医院收治的200例合并髂静脉狭窄的VVLE患者为研究对象.根据髂总静脉狭窄程度将患...     

基质金属蛋白酶-1在创伤性骨关节炎软骨及滑膜中的表达

目的　观察基质金属蛋白酶 - 1(MMP - 1)在兔前交叉韧带切断 (ACLT)创伤性骨关节炎 (OA)软骨及滑膜中的表达和分布 ,探讨MMP - 1表达与创伤性软骨退变之间的关系。　方法大耳白兔 2 0只行单侧ACLT术 ,术后 4周及 8周各处死 10只 ,另选 10只行单侧膝关节切开术作为假手术对照 ,于术后 8周处死。于解剖显微镜下行股骨关节面软骨退变大体评分 ,用免疫组化的方法检测MMP - 1在软骨及滑膜中的表达及分布。　结果　大体评分显示ACLT组软骨退变明显重于对照组 (P <0 .0 1) ,其中 8周组软骨退变程度又明显高于 4周组 (P <0 .0 5 )。MMP - 1主要在软骨表层及中上层、滑膜衬里层表达 ,其表达量随OA进展逐渐增高 (P <0 .0 5 )。OA早期 ,MMP - 1在滑膜中的增长滞后于它在软骨中的增长。　结论　MMP - 1与创伤性OA软骨退变关系密切 ,早期软骨退变主要源于软骨自身代谢改变 ,其后滑膜亦参与软骨退变。     

急性冠脉综合征患者血清基质金属蛋白酶-2检测的临床意义

目的研究急性冠脉综合征(ACS)患者血清中的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的水平变化,探讨其在ACS诊断和预测中的临床价值。方法选取临床确诊为ACS的患者68例,其中急性心肌梗死(AMI)组35例,不稳定型心绞痛(UA)组33例,以同期、同年龄健康者30例作为对照。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测MMP-2的浓度。结果 AMI组和UA组患者血清MMP-2浓度明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且AMI与UA组间比较也有统计学意义(P<0.05),AMI组患者在治疗前后血清中MMP-2水平也存在统计学差异(P<0.05)。结论 ACS患者血清MMP-2水平是有价值的冠脉损伤指标,可作为ACS的重要预测和预后判断指标。     

基质金属蛋白酶-9在腰椎间盘髓核组织中的表达

目的 检测腰椎间盘髓核组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达，进一步阐明椎间盘退变的机制。方法 利用RT-PCR和Western-Blot技术，对20例正常腰椎间盘髓核、45例退变腰椎间盘髓核的MMP-9进行了检测。结果 正常腰椎间盘组髓核内有一定量的MMP-9表达，退变腰椎间盘组髓核MMP-9mRNA、蛋白质表达水平升高，分别是正常组的1．86和1．65倍，存在差异（P〈0．05）。结论 MMP-9与腰椎间盘髓核退变关系密切。     

基质金属蛋白酶及其抑制物与骨性关节炎

骨性关节炎（osteoarthritis,OA）是一种常见的关节退行性疾病,表现为关节软骨破坏,关节表面形成骨赘,滑膜细胞增生,滑膜炎和关节间隙变窄.病理过程以关节软骨基质的降解破坏为特征,其发病原因至今尚不清楚.近年研究表明,OA关节软骨中的基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）合成增加,基质金属蛋白酶特异性抑制物（Tissue Inhibitor of Metalloproteinases,TIMPs）合成减少,造成软骨细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的合成与降解失衡是导致软骨退变的重要原因[1].本文就MMPs及TIMPs与OA相关性研究作一概述.     

模拟高原缺氧对慢性牙周炎大鼠牙龈组织中基质金属蛋白酶-2活性的影响

目的 观察常氧与缺氧条件下慢性牙周炎大鼠牙龈组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的活性变化,探讨MMP-2在高原牙周病发生发展中的作用.方法 健康成年SD大鼠32只,随机分为正常对照组(N组)、常氧牙周炎组(P1组)、缺氧对照组(H组)、缺氧牙周炎组(P2组),每组8只.P1、P2组分别在常氧与模拟海拔5000m缺氧条件下建立常氧与缺氧牙周炎模型,N、H组作为对照.采用明胶酶活性分析方法检测各组大鼠牙龈组织中活化形式MMP-2的表达水平.结果 N、P1、H、P2组牙龈组织中活化形式MMP-2灰度值分别为13.72±6.22,37.23±4.40、14.45±6.51、45.44±4.79,其中N组与N组(P<0.05)、P2组与P1组(P<0.05)、P1组与N组(P<0.01)、P2组与H组(P<0.01)比较差异均有统计学意义,以P2组牙龈组织中活化形式MMP-2灰度值最高.结论 模拟高原缺氧环境可提高慢性牙周炎大鼠牙龈组织中活化形式IMMP-2含量,进而促进牙周病的发生、发展.     

基质金属蛋白酶-9基因多态性与2型糖尿病大血管并发症的相关性研究

目的探讨基质金属蛋白酶－9（MMP－9）基因启动子区C－1562－T基因多态性与2型糖尿病大血管并发症的相关性。方法利用PCR—RFIP方法对288例2型糖尿病患者及120名健康对照者MMP－9基因启动子区C－1562－T位点等位基因和基因型进行测定。结果实验组和正常对照组间C、T两种等位基因和CC、CT、TT三种基因型分布无差异;实验组中,2型糖尿病无大血管病变组与合并大血管病变组比较CC基因型与C等位基因显著增加。结论2型糖尿病患者与正常人群中MMP－9基因启动子区C－1562－T基因位点CT和TT基因型与C、T等位基因频率分布相同;在2型糖尿病人群中,CC基因型与C等位基因在糖尿病无大血管病变者中显著升高,提示其可能是糖尿病大血管病变的保护型基因。     

基质金属蛋白酶-2,9及其抑制因子在增生性瘢痕中的表达特征及意义

 目的 探讨3种不同的基质金属蛋白酶-2, 9(MMP-2, 9)及其抑制因子(TIMP-2)在不同形成时期的增生性瘢痕中的基因表达和蛋白含量的变化.方法 用病理学技术检测增生性瘢痕和正常皮肤的结构特征后,分别用RT-PCR和Western blot方法检测这3种基因在16例不同发生时期的增生性瘢痕和8例正常皮肤组织中的基因表达和蛋白含量的变化规律.结果 在正常皮肤组织内,MMP-2, 9和TIMP-2的基因表达较弱,蛋白含量较低;而在增殖期的增生性瘢痕中这2种MMPs和TIMP2基因表达水平和蛋白含量都显著升高(P＜0.05),在成熟期的瘢痕中,MMP-2, 9基因表达量降低至正常皮肤水平,但蛋白含量仍保持较高水平,明显高于正常皮肤(P＜0.05),TIMP-2的mRNA水平和蛋白含量则降低至正常皮肤相近的水平.结论 MMP-2, 9和TIMP-2表达增强可能是增生性瘢痕形成的机制之一,而MMP-2, 9蛋白含量的增多,TIMP-2蛋白含量减少可能与增生性瘢痕达到相对稳定的成熟期有关.     

MMP-2-PEX原核表达纯化及其对黑色素瘤细胞与内皮细胞黏附的影响

目的探讨原核表达的人源基质金属蛋白酶2的C端结构域（MMP-2-PEX）对黑色素瘤细胞A375与内皮细胞黏附的影响。方法利用RT-PCR方法从人成纤维肉瘤细胞HT1080中克隆MMP-2 C端结构域,构建原核表达载体pET-His-PEX;转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达;盐酸胍裂解包涵体,经镍琼脂糖凝胶柱纯化,透析复性后获得MMP-2-PEX蛋白,随后对其进行Western印迹和质谱鉴定。采用明胶酶谱法检测MMP-2-PEX的活性;采用平行板流动小室系统检测在流动状态下MMP-2-PEX对A375细胞与脐静脉内皮细胞HUVEC黏附的影响,通过小鼠实验性肺转移模型检测MMP-2-PEX对A375细胞在小鼠肺内癌栓形成的影响。结果 Western印迹和质谱鉴定原核表达的MMP-2-PEX蛋白正确,明胶酶谱检测MMP-2-PEX能够明显抑制MMP-2的活性。表达的MMP-2-PEX蛋白能够在流动状态下抑制A375细胞与HUVEC细胞的黏附,其黏附抑制率与MMP-2-PEX蛋白浓度增加成正相关,MMP-2-PEX浓度为12.5,25和50μg/ml时抑制率分别为32.5%,41.4%和53.9%。用MMP-2-PEX处理后,A375细胞在小鼠肺内癌栓的形成与对照组相比降低了26.4%。结论原核表达的人MMP-2-PEX在体外流动状态下可抑制A375细胞与内皮细胞的黏附,并抑制A375细胞在小鼠肺内癌栓的形成。     

抗人TNF-α单链抗体rScFvH22原核表达及纯化

目的：应用PET32-c原核表达载体快速、高效地表达及纯化单链抗体。方法：将单链抗体H22基因克隆到PET32-c原核表达载体中，通过酶切及测序鉴定正确后，进行原核诱导表达和纯化。并检测纯化后单链抗体的功能。结果：DNA琼脂糖凝胶电泳表明，单链抗体基因克隆成功；SDS-PAGE结果表明，单链抗体得到成功表达和纯化；ELISA和Western印迹结果表明，单链抗体H22能够特异性结合人TNF-α。结论：成功地表达及纯化抗人TNF-α单链抗体rSeFvH22。     

基质金属蛋白酶-2、9在肺癌组织中的表达及与胸部CT部分征象的关系

目的 :通过基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )和 9(MMP 9)在肺癌组织不同病理分型及不同肺部CT征象中的表达情况的比较 ,探讨其与肺癌浸润转移的关系。方法 :采用免疫组化S P法检测 4 5例肺癌组织中金属蛋白酶的表达 ,所有病例均行胸部CT。结果 :MMP 2、9在小细胞肺癌及非小细胞肺癌中均有表达 ,低度分化、瘤体直径 >3cm、具有分叶征及有纵隔淋巴结转移者同高分化、瘤体直径≤ 3cm、无分叶征、无纵隔淋巴结转移者相比 ,MMP 2、MMP 9表达有显著性差异。结论 :MMP 2及MMP 9的测定 ,联合肺部CT检查 ,可以对肺癌浸润转移情况进行评价 ,预测预后。     

单核细胞趋化蛋白-1诱导人主动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶-9及相关通路研究

目的 观察单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响及其相关机制.方法 将HASMCs细胞分为两部分,一部分分别加入0(对照组)、10、50、100ng/ml MCP-1干预48h,采用Western blotting法测定HASMCs细胞MMP-9、NF-kB p65的蛋白表达;另一部分先加入100ng/mlMCP-1,再分别加入0(对照组)、10、50、100μ mol/L的NF-kB特异性抑制剂吡咯醛二硫氨基甲酸(PDTC),培养48h,采用Western blotting法检测HASMCs细胞MMP-9蛋白的表达情况.结果 MCP-1以剂量依赖方式刺激HASMCs细胞内MMP-9蛋白和NF-kB p65蛋白的表达,与对照组比较,加入10、50、100ng/ml MCP-1可使MMP-9蛋白的表达分别增加70.0％、118.3％和125.0％,使NF-kB p65蛋白的表达分别增加32.0％、52.0％和89.0％(P＜0.01).加入PDTC后,与对照组比较,10、50、100μmol/L的PDTC分别使MMP-9蛋白的表达降低了22.1％、28.9％和36.7％,均有显著性差异(P＜0.01).结论 MCP-1可诱导HASMCs表达MMP-9.NF-kB通路是MCP-1刺激MMP-9表达的调控通路之一.     

鼠盘状结构域受体真核表达载体的构建与表达

目的 分别构建DDR2的野生型(FLDDR2)、嵌和体(FcDDR2)和截短体(ttDDR2)的真核表达载体,并在哺乳动物细胞表达,为进一步研究DDR2与类风湿性关节炎发病机制的关系奠定基础。方法 FLDDR2和ttDDR2通过RT-PCR的方法获得,测序正确后亚克隆入pCDNA3．1( )。FcDDR2是利用人IgG1的Fc段替代部分胞浆区,测序正确后亚克隆入pMKIT-Neo。重组产物经脂质体2000介导瞬时转入COS-7细胞,48h后收取蛋白,分别利用蛋白印迹法和免疫沉淀法检测重组产物的表达。转入重组质粒的细胞经胶原刺激3h后收取蛋白,利用免疫印迹和免疫沉淀法检测磷酸化水平的变化。结果 所构建的三种真核表达载体均可在COS-7细胞中正确表达。将ttDDR2和FLDDR2共转染COS-7细胞并给予胶原刺激后FLDDR2的磷酸化水平有所下降,而FcDDR2在无胶原刺激时也可自身活化,其程度与FLDDR2经胶原刺激后的活化程度相仿。结论 成功构建了FLDDR2、ttDDR2和FcDDR2三种真核表达载体,其中FcDDR2可以作为一种激活剂,而ttDDR2在一定程度上具有负性竞争的作用。     

重组白介素2在十二烷基硫酸钠溶液中的复性

采用在十二烷基硫酸钠（ＳＤ）溶液中加入铜离子的方法，观察了反应温度、ＣｕＣｌ２及ＳＤＳ浓度等因素对重组白介素２（ｒＩＬ－２）复性的影响。确定了能够明显减少二聚体形成的复性条件，可使ｒＩＬ－２反应浓度提高到１ｍｇ／ｍｌ。结果表明，复性后形成的二聚体低于１％（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），ｒＩＬ－２的比活性可达到１０＾７Ｕ／ｍｇ。     

胸腺瘤MSCT征象与PCNA及MMP-2表达的相关性

目的:探讨胸腺瘤MSCT征象与增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)在胸腺瘤组织中表达的相关性。方法:对46例胸腺瘤患者行MSCT平扫,其中21例行增强扫描,所有胸腺瘤标本行免疫组化SP法染色,分析MSCT征象与PCNA、MMP-2表达水平的相关性。结果:胸腺瘤CT征象中的病灶直径大于10cm,分叶征,病灶边缘不光滑,纵膈脂肪线消失,胸膜、心包及大血管侵犯,纵隔淋巴结、远处转移及病灶高强化程度与胸腺瘤组织PCNA及MMP-2的高表达具有显著相关性(P<0.05)。结论:MSCT征象能在一定程度上反映胸腺瘤的病理学特点,有利于术前无创地评估肿瘤生物学行为。     

基质金属蛋白酶基因1、2、3和9多态性与冠状动脉粥样斑块进展关系的研究

目的 评价基质金属蛋白酶(mmp)基因(1、2,3、9)多态性对冠状动脉粥样斑块进展的影响.方法2005年1月至2008年12月80例在我院行2次冠状动脉造影的冠心病患者,根据冠脉粥样斑块有无进展(第2次冠脉造影任何节段冠脉病变的最小管腔直径较第一次冠脉造影减少0.4 mm者为冠脉粥样斑块有进展),将患者分为斑块进展组(n=31)和非斑块进展组(n=49).详细记录每例患者临床特征,包括冠心病易患因素等,以及检测每例患者的血脂、血糖、超敏C反应蛋白(hsCRP)等.应用PCR直接测序技术测定两组患者MMP-1、MMP-2、MMP-3和MMP-9基因启动子部位的序列,分析两组多态频率.结果 斑块进展组中,女性和急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者上述基因的多态比率明显高于非斑块进展组(分别为41.9%比18.4%,P<0.05和77.4%比46.3%,P<0.01);斑块进展组hs-CRP的浓度也明显高于非斑块进展组[(0.26±0.44)mg/L比(0.02±0.14)mg/L,P<0.01).多因素Logistic逐步回归分析显示:高浓度hs-CRP和ACS是冠状动脉粥样斑块进展的独立危险因素(OR为12.63,95%CI为1.45～110.29,P<0.05和OR为2.99,95%CI为1.04～8.63,P<0.05).斑块进展组中MMP-3(-1612 6A/6A)基因型和MMP3(-1612 6A)等位基因频率均显著高于非斑块进展组(87.1%比53.1%.P<0.01和93.5%比75.5%,P<0.01).MMP-1(-1607 GC)、MMP-2(-955A/C)和MMP-9(-1562C/T)的基因型和等位基因频率在斑块进展组与非斑块进展组中均无显著差异.结论 女性、高浓度hs-CRP和ACS与冠状动脉粥样斑块进展明显相关,高浓度hs-CRP和ACS足冠状动脉粥样斑块进展的独立危险因素.MMP-3启动子区域5A/6A基因多态性与冠状动脉粥样硬化斑块的进展显著相关,可能是冠状动脉粥样硬化斑块的进展标志.