鼻咽癌EB病毒Rta/IgG抗体检测的诊断价值

目的 通过检测血清中的EB病毒Rta/IgG抗体,评价其在鼻咽癌诊断上的价值.方法 收集211例未经治疗的鼻咽癌患者,413例对照组(包括203例相似症状的非鼻咽癌病例和210例健康体检者)的血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Rta/IgG抗体.应用受试者工作特征(ROC)曲线对结果进行分析评价.结果 鼻咽癌组的Rta/IgG抗体rA值中位数明显高于对照组(P<0.001).Rta/IgG抗体检测诊断鼻咽癌的ROC曲线下面积为0.933,最佳截断点时敏感度为90.5%,特异度为90.1%.结论 采用ELISA方法检测血清中Rta/IgG抗体可以作为检测EB病毒的一个新指标,并可作为鼻咽癌诊断的重要标志物之一.     

联合检测血清唾液酸和EBVCA-IgA对鼻咽癌诊断及疗效监测的意义

目的 探讨联合检测血清唾液酸（SA）和EB病毒壳抗原IgA抗体（EBVCA-IgA）在鼻咽癌（NPC）患者诊断及疗效监测中的意义.方法 对65例NPC患者治疗前、治疗结束后1个月、和21例治疗后1年出现局部复发或远处转移者,50例头颈部良性病变患者及50例正常人血清SA与EBVCA-IgA进行联合检测.结果 NPC患者治疗前血清SA和EBVCA-IgA阳性率均明显高于正常人和头颈部良性病变患者,差异有统计学意义（均P＜0.01）;联合检测敏感性达到96.9%,明显高于SA、EBVCA-IgA的单项检测（P＜0.05）,同时特异性仍有91.0%.与NPC治疗前组比较,NPC治疗后组和未复发组的血清SA水平明显下降（P＜0.01）,NPC治疗后复发组较未复发组患者的血清SA水平明显上升（P＜0.01）,而EBVCA-IgA的阳性率的变化却不明显.结论 血清SA水平可作为判断NPC疗效及监测病情的一种有效手段,联合检测血清SA水平和EBVCA-IgA阳性率,可明显提高NPC患者的阳性检出率.     

EB病毒胸腺嘧啶激酶抗体在鼻咽癌血清学诊断中的作用

目的 建立EB病毒感染和鼻咽癌血清学检测的敏感,特异和有效的方法.方法 以EB病毒早期蛋白胸腺嘧啶激酶为检测抗原,建立ELISA和免疫纤维膜条方法,检测血清中的特异性的IgG抗体.结果 用ELISA和诊断条同时检测了401份血清,其中鼻咽癌患者血清127份.两种方法检测鼻咽癌患者血清抗体均阳性,274份门诊患者血清中,55份ELISA和诊断条检测抗体均阳性,3份诊断条方法检测阳性的血清,ELISA检测A值接近临界值.对胸腺嘧啶激酶的抗体阳性率明显地高于早期蛋白P54.结论 以胸腺嘧啶激酶为检测抗原,为鼻咽癌血清学诊断和高危人群的筛查提供更有效的手段.     

三株人鼻咽癌Scid小鼠移植瘤的建立及特性研究

目的 建立鼻咽癌鼠移植瘤,为鼻咽癌的特异性免疫治疗研究提供实验模型。方法 从26例未治的鼻咽癌病人鼻咽部铰取肿瘤组织,分别皮下接种BALB／c裸小鼠（14只）和Scid小鼠（12只）;成功建立移植瘤株后观察其生长特性、形态、染色体和LMP的表达情况。结果 成功建立鼻咽癌Scid小鼠移植瘤株CSNET－1、CSNET－2和CSNET－3,已分别传至第11代（23个月）、第14代（17个月）和第9代（16个),其光镜和电镜下形态符合低分化磷癌的特征,电镜下在CSNET－1中可观察到Epstein-Barr病毒样颗粒,CSNET－1的染色体全部为人体细胞来源的染色体,免疫组化检测结果,3个瘤株均可见EB病毒晚期膜蛋白LMP－1和LMP－2阳性细胞。结论 CSNET－1、CSNET－2和CSNET－3是人类来源的鼠移植瘤株,是鼻咽癌免疫治疗研究的理想动物模型。     

鼻咽癌中EB病毒LMP1基因的序列变异

目的 检测广州地区鼻咽癌中EB病毒LMP1基因N-和C-末端区序列变异的热点,并探讨其产生的机制。方法 收集中山大学肿瘤医院未经治疗的鼻咽癌患者鼻咽新鲜活检标本63例。采用巢式聚合酶链反应（PCR）扩增EB病毒LMP1基因N-和C-末端区,用XhoⅠ对N-末端区扩增产物进行酶切分析,并检测C-末端区扩增产物30bp缺失的情况。采用四色荧光末端终止法对4例患者N-和C-末端区的8份扩增产物进行序列分析。结果 63例鼻咽癌组织EB病毒LMP1基因N-和C-末端区有4种序列变异类型：wt-XhoⅠ／wt-LMP1（4例,6．3％）、wt-XhoⅠ＆XhoⅠ-loss／del-LMP1（4例,6．3％）、wt-XhoⅠ／del-LMP1（5例,7．9％）和XhoⅠ-loss／del-LMP1（50例,79．5％）。序列分析显示：与B95-8细胞相比较,所有检测的鼻咽癌组织中EB病毒LMP1基因均发生了错义点突变和无义点突变。错义点突变数与无义点突变数之间的比值为2．25（9／4）。结论 广州地区鼻咽癌中EB病毒LMP1基因的序列变异类型以XhoⅠ-loss／del-LMP1占主导。LMP1基因N-末端区XhoⅠ酶切位点的丢失很可能是在C-末端区30bp缺失的基础上发生的。LMP1基因的4种序列变异类型可能代表了鼻咽癌变过程中EB病毒在宿主内演变的4个时相。     

应用基于Logistic回归的ROC曲线评价鼻咽癌EB病毒抗体联合检测

目的 以基于Logistic回归的受试者工作特征(ROC)曲线分析方法,评价VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG和EBNA1/IgA等EB病毒抗体不同组合在鼻咽癌诊断中的价值.方法 收集211例初治鼻咽癌和203例相似症状的非鼻咽癌病例的血清,采用免疫酶法检测VCA/IgA及EA/IgA,酶联免疫吸附法检测Rta/lgG和EBNA1/IgA.对各种的抗体组合建立Logistic回归模型,以预测概率为分析指标,应用ROC曲线分析,评价不同组合对鼻咽癌的诊断价值.结果 单一指标评价,VCA/IgA敏感度最高(98.1%),EA/IgA特异度最高(98.5%).以基于Logistic同归的ROC曲线分析各项组合,敏感度和特异度均有所提高.双指标组合中,VCA/IgA+Rta/lgG组合的ROC曲线下面积(AUC)为0.991,诊断效能最高,敏感度、特异度及约登指数分别为94.8%、98.0%及0.928.VCA/IgA+Rta/IgG+EBNA1/IgA组合和4项指标组合的敏感度、特异度及约登指数分别为94.8%、98.5%、0.933和96.7%、97.0%、0.937;这两种多指标组合的AUC与VCA/IgA+Rta/IgG组合比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 基于Logistic回归的ROC曲线分析方法可以为多指标联合诊断试验提供更客观的综合分析,VCA/IgA和Rta/IgG联合检测具有互补作用,是鼻咽癌血清学诊断的合适组合.     

鼻咽癌淋巴结转移组织中EB病毒BamH Ⅰ"f"变异分析

目的 探讨高发区原发鼻咽癌及相应的淋巴结转移癌组织中EB病毒BamH Ⅰ"f"变异情况.方法 原位杂交法检测了21对鼻咽原发癌及其相应的淋巴结转移癌组织、22例未伴淋巴结转移的鼻咽癌组织中EB病毒EBER的表达,进而采用PCR和限制性酶切分析技术检测了所有鼻咽癌病例及相应的淋巴结转移癌组织和50例鼻咽黏膜慢性炎组织中EB病毒BamH Ⅰ"f"变异情况.结果 所有鼻咽癌和相应的淋巴结转移癌组织均呈EBER阳性表达.21对鼻咽原发癌及其相应的淋巴结转移癌组织、22例未伴淋巴结转移的鼻咽癌组织和50例鼻咽黏膜慢性炎组织中EB病毒BamH Ⅰ"f"基因变异率分别为52.4%(11/21)、57.1%(12/21)、81.8%(18/22)和2.1%(1/47).统计学分析显示,鼻咽癌组织"f"变异率明显高于鼻咽黏膜慢性炎组织的变异率;伴淋巴结转移的鼻咽癌组织中"f"变异率并不比未伴淋巴结转移的鼻咽癌组织的变异率高.另外,表现为"f"变异的1例鼻咽黏膜慢性炎呈"F/f"型,且其组织学可见部分鼻咽上皮出现轻度的不典型增生.结论 高发区鼻咽癌组织中EB病毒BamH Ⅰ "f"变异率远高于同一地区鼻咽黏膜慢性炎组织中的变异率;鼻咽癌淋巴结转移组织中也有较高的BamH Ⅰ"f"变异率,且与其原发癌组织基本一致.     

鼻咽癌患者树突状细胞对EBV特异性细胞毒T细胞的免疫反应

目的：用负载EB病毒抗原LMP-2表位肽段的鼻咽癌患者树突状细胞（DC）诱导自身CD8^＋T细胞，观察其细胞毒性T细胞的免疫应答能力。方法：在体外分离并诱导成熟HLA—A2基因型鼻咽癌患者自身的DC，分别负载EB病毒抗原LMP-2的HIA—A2限制型两个表位肽段CLGGLLTMV（CLG）和LTAGFIFL（LTA）后，诱导自身CD8^＋T细胞，培养2周后，运用酶联免疫斑点法（Elispot）和HLA-肽四聚体法（Tetramer）检测诱导后T细胞的免疫应答情况。结果：经DC抗原呈递后分泌IFN-γ的CLG和LTA特异性CD8^＋T细胞数，分别为（42．67±33．79）个／孔和（25．67±18．25）个／孔，而呈递前分别为（2．67±1．97）个／孔和（5．33±1．86）个／孔。两者IFN-γ^＋CD8^＋T细胞数均有明显增加（P〈0．05）。CLG和LTA肽段特异性细胞毒性T细胞（CTL）的中位数在呈递前分别为0．135％和1．14％；呈递后则为1．045％和1．945％。两者较呈递前均明显增加（P〈0．05）。结论：负载EB病毒抗原LMP-2表位肽段的DC诱导鼻咽癌患者自身CD8^＋T细胞，可产生特异性CTL，对鼻咽癌患者的免疫治疗具有潜在的应用价值。     

血清EB病毒抗体水平与鼻咽癌患者预后的关系

目的 探讨血清EB病毒VCA/IgA、EA/IgA、NA1/IgA及Rta/IgG抗体水平与鼻咽癌患者预后的关系.方法 140例初治无远处转移的鼻咽癌患者分别在治疗前和治疗结束后采用免疫酶法检测血清VCA/IgA和EA/IgA,ELISA法检测NA1/IgA和Rta/IgG.随访进行远期疗效和生存的评价.结果 治疗后患者血清VCA/IgA、EA/IgA、NA1/IgA及Rta/IgG抗体水平较治疗前有明显下降,但仍显著高于正常对照组(P＜0.05).治疗后持续缓解的鼻咽癌患者其治疗前VCA/IgA、EA/IgA抗体水平显著低于疾病进展患者(P＜0.05).血清VCA/IgA、EA/IgA、NA1/IgA及Rta/IgG抗体水平与患者的3年总生存率无关(P＞0.05).治疗前VCA/IgA抗体高水平组(≥1∶320)及EA/IgA抗体高水平组(≥1∶80)患者的无进展生存期(61.8％,61.3％)低于抗体低水平组患者(86.5％,86.5％;P＜0.001).Cox回归分析显示治疗前VCA/IgA抗体水平是影响无进展生存的独立危险因素(HR=3.80,P=0.001).结论 VCA/IgA、EA/IgA可为鼻咽癌患者预后判断提供帮助.     

不同来源潜伏膜蛋白1基因转染对鼻咽癌CNE1细胞生长的影响

目的:探讨不同来源的EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)基因转染对人高分化鼻咽癌(NPC)细胞系CNE1生长的影响。方法:采用脂质体介导法分别将含有来源于B95-8淋巴细胞标准株的LMP1基因(B95-8-LMP1)和来源于NPC组织的LMP1基因(CAO-LMP1)的质粒转染CNE1;RT-PCR和蛋白印迹法分别鉴定LMP1mRNA和蛋白表达;结晶紫法、流式细胞术和平板克隆形成法测定不同来源的LMP1对CNE1生长特性的影响。结果:成功建立稳定表达不同来源LMP1的CNE1细胞系。两种不同来源的LMP1均可促进CNE1细胞的生长(P<0.01);CAO-LMP1比B95-8-LMP1具有更强促进CNE1生长的作用(P<0.01)。结论:不同来源LMP1对CNE1的体外生长均有促进作用,CAO-LMP1比B95-8-LMP1具有更强的促增殖能力。     

EB病毒潜伏膜蛋白对人鼻咽癌细胞系CNE1生长分化的影响

目的 研究ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＥＢＶ－ＬＭＰ）对人高分化鼻咽癌细胞生长分化的影响。方法 以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象,采用电穿孔基因转染技术,将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒转染ＣＮＥ１细胞。以载体质粒转染及ＣＮＥ１细胞为对照,用细胞体外增殖实验、流式细胞信（ＦＣＭ）和裸鼠体内丰瘤实验等,观察细胞生长分化的变化。结果 ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞地增殖,实验组平均吸光度（Ａ）     

EBV4型IgA/VCA IgA/EA IgG/EA IgG/ZEBRA抗体在鼻咽癌普查和早期诊断中的应用

目的摸索以疱疹病毒4型（EBV）IgG／ZEBRA为捕捉抗原的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）条件,为大量人群普查奠定基础。方法将纯化的ZEBRA抗原用于对鼻咽癌（NPC）患者血清及健康人血清IgG／ZEBRA抗体的ELISA检测。结果检测NPC患者血清288份,其中ELISA实验显示阳性262份,敏感度91％,检测正常人血清96份,其中阳性5份,特异度94．8％。其结果显示NPC组的阳性率与健康对照组的数据之间差异有统计学意义（P〈0．001）。本研究在此基础上对广东惠州5463份和广西桂平2017份血清进行检测,检出早期鼻咽癌患者5例。并将结果与免疫酶法检测IgA／VCA、IgA/EA、IgG／EA比较。结论以EBV早期抗原ZEBRA为捕捉抗原的间接ELISA方法具有较高的特异性和敏感性,可以用于大量人群的NPC早期筛查和早期诊断。     

鼻咽癌中EB病毒编码的潜伏膜蛋白1对β-catenin转录活性及表达的影响

目的 观察鼻咽癌细胞潜伏膜蛋白1(LMP1)表达对β-catenin的转录活性及蛋白表达的影响,探讨LMP1与Wnt/β-catenin信号通路在鼻咽癌发生发展中的作用.方法应用免疫组织化学EnVision法检测75例鼻咽癌组织中LMP1和β-catenin的表达.构建pHA2-LMP1重组质粒,应用细胞免疫荧光、双荧光素酶报告分析、Western blot方法研究LMP1在鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中对β-catenin转录活性及表达的影响.结果 (1)鼻咽癌组织中β-catenin的异常表达率为50.7%(38/75),LMP1的阳性表达率为50.7%(38/75).鼻咽癌组织中β-catenin异常表达与LMP1表达存在正相关(相关系数为x2=7.048,P=0.008).(2)LMP1表达明显提高鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中β-catenin的核表达,且β-catenin的核表达在低分化鼻咽癌细胞株CNE2明显高于高分化鼻咽癌细胞株CNE1.(3)LMP1可明显上调CNE1和CNE2中β-catenin的转录活性,且呈时间依赖性.另外,β-catenin的转录活性在低分化鼻咽癌细胞株CNE2高于高分化鼻咽癌细胞株CNE1.(4)LMP1对鼻咽癌细胞株β3-catenin的总蛋白表达水平无明显影响.结论 EB病毒编码的LMP1可能通过β-catenin信号通路参与鼻咽癌的发生发展.