新生大鼠大脑皮层神经元原代培养方法

目的：介绍一种简单、生长良好的大脑皮层神经元的培养方法。方法：急性分离新生鼠大脑皮层制作单细胞悬液进行原代培养,观察培养神经元的生长形态,并用免疫荧光化学法对其进行鉴定。结果：培养的神经元细胞清晰,光晕明显,生长良好,免疫荧光鉴定结果表明该方法培养的细胞纯度较高,能够达到实验研究的要求。结论：该培养方法简单、可靠,是神经元培养的良好方法。     

神经生长因子对化学性缺氧神经细胞的保护作用

目的：研究NGF对化学性缺氧神经细胞的保护作用。方法：采用原代培养胚胎小鼠大脑皮层神经细胞KCN急性缺氧损伤模型，观察系列实验指标：利用MTT比色法观察NGF(100ng／ml)对缺氧神经细胞的作用；检测细胞外液LDH释放量以观察NGF对缺氧神经细胞膜稳定性的影响；光镜、透射电镜观察NGF对缺氧神经细胞形态的影响。结果：NGF能改善细胞形态，提高缺氧神经细胞的活力，降低LDH释放量。结论：NGF对化学性缺氧神经细胞有保护作用。     

胚胎大鼠背根神经节神经元的原代培养

目的 原代培养胚胎大鼠背根神经节神经元(DRGn),并观察其生长特性。方法 取E15 SD胎鼠的背根神经节,用胰蛋白酶消化法分离成单细胞,通过密度梯度离心法和差速贴壁法进行分离纯化,在无血清培养基中培养,用抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体鉴定神经元。结果 纯化培养神经元生长状态良好,纯度可达93%左右。结论 该方法具有较好的可操作性和可重复性,用于DRGn的相关实验研究。     

大鼠胚胎隔区神经元体外原代培养

目的：探讨大鼠胚胎隔区神经元培养方法。方法：建立稳定的大鼠胚胎隔区神经元体外培养模型，并观察神经元形态变化即生长过程。结果：神经元培养２小时，大部分细胞已贴壁；１２小时大部分细胞有突起伸出；２４小时部分细胞呈双极型；３天细胞开始聚集，突起互相连接成稀疏的网络；１周细胞簇明显，突起随时间延长而增长；２周细胞体积继续增大，突起连接成致密网络；３周细胞突起聚集明显，细胞数开始减少；４周细胞明显减少，仍见     

丁苯酞注射液对原代培养神经元类缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨丁苯酞注射液对原代培养神经元类缺血再灌注损伤的影响。方法:原代培养大鼠神经元建造实验模型,并随机分为对照组、缺血组(类缺血后再灌注)、实验组(类缺血再灌注后加丁苯酞),造模后鉴定培养细胞为神经元,分组后检测神经元细胞活性、神经元细胞凋亡率。结果:与对照组相比,缺血组的细胞存活率下降,细胞凋亡率增高。实验组细胞存活率高于缺血组,而细胞凋亡率低于缺血组。结论:丁苯酞注射液可显著增加类缺血再灌注神经元细胞再灌注后细胞的存活率,这种神经保护机制在一定程度上是通过其减少神经细胞凋亡而实现的。     

原代培养神经元细胞缺氧损伤后脑红蛋白表达研究

目的探讨皮层神经元细胞缺氧损伤后脑红蛋白的表达。方法构建C57BL／6胎鼠皮层神经元原代培养的细胞缺氧模型,联合MTT微量酶反应比色法、Real—TimePCR、免疫荧光染色及Western Blot等方法,观察缺氧后细胞形态学、细胞生存率、NgbmRNA及蛋白表达情况。结果原代培养皮层神经元缺氧4h后细胞生存率明显下降,NgbmRNA及蛋白表达升高,8h达高峰,此后逐渐稳步下降,至缺氧24h仍高于对照组。结论缺氧损伤可诱导原代培养皮层神经元NgbmRNA及蛋白的表达。     

SD大鼠海马神经元原代培养及形态学观察

目的：掌握SD大鼠海马神经元体外培养方法,观察神经元形态学特点,测定细胞生长曲线。方法：新生SD乳鼠,剥离海马,胰酶消化,接种,1 d换为Neurobasal培养基;小鼠抗大鼠微管相关蛋白-2、兔抗鼠神经元特异性烯醇化酶为一抗,免疫细胞化学法计数阳性细胞百分率并显微摄影;1%甲苯胺蓝、苏木精伊红染色。结果：原代培养神经元6~8 h内开始贴壁,培养5~7 d突起增粗增长,连接成网,以多极神经元为主,胞体呈三角形、梭形、椭圆形;MAP-2、NSE染色为棕褐色,经鉴定神经元纯度达90%左右;细胞经历生长潜伏期,对数生长期,平台期;细胞核大而圆,HE染色胞核深蓝色,胞浆红色,胞体中可见尼氏颗粒。结论：相差显微镜下神经元形态多样,MAP-2、NSE染色阳性细胞,HE染色细胞核呈深蓝色,胞浆为红色,尼氏体位于细胞质内,神经突起内少见。     

氯丙烯对原代培养的大鼠脊髓神经元的影响

目的：研究氯丙烯对脊髓神经元细胞形态的影响。方法：取新生4d Wistar大鼠的脊髓，原代培养12d后氯丙烯染毒，用相差显微镜观察脊髓神经细胞的形态变化。结果：随氯丙烯浓度的增加，脊髓神经细胞贴壁细胞数目减少，细胞突起变短、断裂成串珠状，最后破碎消失。结论：氯丙烯具有神经毒性，可引起脊髓神经细胞形态学改变和死亡。     

神经生长因子对机械性损伤大鼠脑皮质神经元的修复作用

目的 探讨神经生长因子(NGF)对机械性损伤大鼠脑皮质神经元的修复作用.方法 分离培养大鼠脑皮质神经元及其微管相关蛋白-2(MAP-2)免疫荧光鉴定;通过台盼蓝拒染色动态观察NGF对神经元的活性的影响;采用机械性离心损伤皮质神经元,观察损伤后神经元的形态改变,并测量损伤前后不同时间段损伤组与损伤加NGF组乳酸脱氢酶(LDH)含量.结果 培养4、5、6、8天NGF组与对照组进行比较,细胞存活率均有显著差异,P<0.05;损伤组与对照组LDH值比较差异有显著性(P<0.01);损伤组加NGF组与损伤组LDH值比较有显著差异(P<0.05,P<0.01).结论 NGF对皮质神经元有促生长作用;NGF对机械性大鼠脑皮质神经元的损伤具有修复作用.     

神经生长因子对大鼠小脑皮质神经细胞缺氧、缺糖损伤的保护作用

目的　探讨神经生长因子 (NGF)对小脑皮质神经细胞缺氧、缺糖损伤的影响。方法　采用含 0 5mmol·L-1连二亚硫酸钠 (Na2 S2 O4)的无糖Earle’s液复制小脑皮质神经细胞缺氧、缺糖损伤模型 ,通过形态学观察、MTT法和LDH活性的测定研究NGF对小脑皮质神经细胞的保护作用。结果　NGF (5 0 ,10 0 μg·L-1)组小脑皮质神经细胞形态损伤明显减轻 ,细胞存活率升高 ,培养液中LDH含量明显下降。结论　NGF对缺氧、缺糖引起的小脑皮质神经细胞损伤具有保护作用。     

高碘对原代培养的大鼠皮层神经元细胞凋亡影响的实验研究

目的研究高碘对原代培养的大鼠皮层神经元细胞凋亡的影响,并对其机制作初步探讨。方法采用体外新生大鼠皮层神经细胞培养法观察不同浓度的碘化钾对神经细胞凋亡及其一氧化氮（NO）含量及一氧化氮合酶（NOS）活性的影响。结果高碘可以诱发原代培养的大鼠皮层神经元细胞发生凋亡,细胞凋亡率随碘化物浓度的升高而升高,实验组细胞的NO含量及NOS活性较正常对照组增高。结论高碘可以诱导原代培养的大鼠皮层神经元细胞发生凋亡,并呈剂量依赖关系,其机制可能与NOS活性及NO含量增高有关。     

阿魏酸对NMDA诱导的体外培养神经细胞损伤的保护作用

目的应用培养的胎鼠皮层神经细胞观察阿魏酸对N-甲基-D-天门冬氨酸(30μmol／L)诱导的皮层神经元损伤的保护作用；方法取17-18d胎龄大鼠皮层神经元进行分离培养。通过光镜观察细胞形态变化并测定乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量来观察阿魏酸的保护作用；结果阿魏酸可以使细胞损伤减轻，使LDH在培养液中漏出量显著降低，并呈剂量依赖性；结论阿魏酸对NMDA损伤的神经元有保护作用。     

小檗碱对体外培养大鼠大脑皮层神经元损伤的保护作用

体外培养大鼠胎鼠大脑皮层神经细胞,观察小檗碱（ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ,Ｂｅｒ）对Ｎ－甲基－Ｄ－门冬氨酸（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｄ－ａｓｐａｒ－ｔａｔｅ,ＮＭＤＡ）、过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）及撤血清培养引起的细胞损伤的保护作用。结果表明,培养的大鼠胚胎大脑皮层神经细胞在ＮＭＤＡ５００μｍｏｌ／Ｌ作用１０ｍｉｎ、或Ｈ２Ｏ２１００μｍｏｌ／Ｌ２４ｈ、或无血清培养４８ｈ后,细胞的死亡率及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）漏出率明显增加,抗氧化酶ＳＯＤ、谷胱甘肽过氧化酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性显著降低,而脂质过氧化物丙二醛（ＭＤＡ）生成增多。Ｂｅｒ１０、３０μｍｏｌ／Ｌ能显著降低细胞死亡率、ＬＤＨ漏出率及ＭＤＡ的生成,且能明显提高抗氧化酶活性。提示：Ｂｅｒ可拮抗ＮＭＤＡ、Ｈ２Ｏ２及撤血清培养引起的神经细胞损伤,其机理可能与其减少膜脂质过氧化物生成,提高抗氧化酶活性有关     

氯化钴预处理对缺氧预适应小鼠缺氧耐受的影响

目的观察氯化钴对缺氧预适应小鼠缺氧耐受的影响。方法用氯化钴(CoCl2)处理小鼠,观察小鼠在重复缺氧中缺氧耐受时间的变化及其离体海马脑片缺氧时群峰电位(PS)消失时间的变化。结果CoCl2预处理小鼠的缺氧耐受时间不随缺氧次数的增加而增加,缺氧耐受性显著增高,CoCl2预处理小鼠离体海马脑片缺氧时群峰电位消失的时间比对照组明显延长,但明显低于预适应组。结论小鼠CoCl2预处理激活缺氧诱导因子-1(HIF-1),可对脑产生保护作用,但其机制可能不同于由急性重复缺氧获得的缺氧耐受机制。     

参麦注射液对培养鼠大脑皮层神经细胞缺氧损伤的保护作用

目的探讨参麦注射液对培养鼠大脑皮层神经细胞缺氧损伤的保护作用。方法将培养8d后生长良好的神经细胞随机分为正常组、模型组、参麦组和尼莫地平组;每组设3个培养瓶,正常组不作任何处理,其余3组均分别在缺氧后30min、1h、3h、6h和12h5个时间点造成神经细胞缺氧损伤模型。参麦注射液(1∶50)和尼莫地平(20μg/mL),分别在缺氧前24h及缺氧后加入,相差显微镜下观察神经细胞形态学的变化,测定DNA裂解率。结果参麦组和尼莫地平组的神经细胞在缺氧损伤后的形态学改变明显比模型组轻,DNA裂解率与模型组相比亦有显著性差异(P<0.05)。结论参麦注射液可能通过抑制细胞凋亡而对缺氧损伤的鼠大脑皮层神经细胞具有保护作用。     

神经生长因子NGF对原代培养的海马神经元缺氧反应的影响

目的 :观察不同浓度NGF对大鼠海马神经元缺氧的保护作用。方法 :采用MTT比色法测定NGF对缺氧神经细胞活性的影响 ,测定LDH漏出率 ,分光光度法检测MDA ,同时进行形态学观察。结果 :各浓度NGF均对大鼠海马神经元缺氧损伤具有保护作用 ,NGF明显减少缺氧所增加的LDH漏出率和MDA含量 ,且能减轻细胞的形态学损伤。结论 :NGF可以通过减少LDH漏出率和MDA含量 ,对大鼠海马神经元缺氧损伤具有明显的保护作用     

知母皂苷B对体外培养的大鼠皮层神经元树突发育的影响

目的探讨知母皂苷B（Saponins from Anemarrhena asphodeloides Bge,SAaB）对体外培养大鼠乳鼠大脑皮层神经元树突发育的促进作用。方法选用出生0～24h的Sprague—Dawley（SD）大鼠乳鼠,取皮层神经元进行体外细胞培养,培养4d的神经元用于实验。应用倒置相差显微镜测量培养神经元树突分支总长度（TDBL）、一级树突数目（PDN）、最大分支级数（MBO）和神经元胞体面积。Western印迹法观察神经元突触素蛋白表达的改变。结果形态学观察结果显示SAaB（10、30、100μmol／L）可明显促进树突发育,表现为树突分支总长度增加、一级树突数目增多、最大分支级数增大及胞体面积增大。并呈明显浓度依赖。Western印迹结果显示SAaB（10、30、100μmol／L）也可明显增加突触素蛋白表达水平,并呈明显浓度依赖。结论SAaB对体外培养皮层神经元树突的发育有促进作用。     

吡那地尔对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞缺氧缺糖损伤的保护作用

目的 :探讨ATP敏感性K+ 通道 (KATP)开放剂吡那地尔 (pinacidil,Pin)对缺氧缺糖再复氧损伤大鼠大脑皮层神经细胞的保护作用。方法 :体外培养大鼠大脑皮层神经细胞 ,细胞培养至 10d ,建立神经细胞缺氧缺糖损伤模型 ,观察Pin及KATP阻断剂格列苯脲对缺氧缺糖不同时间 ,再复氧 2 4h后细胞死亡率、丙二醛 (MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)活力的影响。结果 :缺氧缺糖、再复氧后大鼠的神经细胞死亡率均显著升高、MDA生成增多、SOD的活力下降 ,Pin干预后 ,细胞死亡率下降、MDA生成减少、SOD的活力升高 ;格列苯脲能拮抗Pin这种保护作用。结论 :Pin对缺氧缺糖损伤神经细胞具有保护作用 ,并与拮抗氧自由基有关