胰岛素启动子在肝干细胞分化研究中的应用

目的：利用报告基因监测肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。方法：通过PCR从大鼠鼠尾基因组中克隆胰岛素启动子片段,构建大鼠胰岛素Ⅰ启动子调控的红色荧光蛋白报告载体（pRIP Ds Red）,并利用报告载体标记的肝原始细胞系（liver epithelialprogenitor cells,LEPCs）及经逆转录病毒感染后表达MafA的肝原始细胞系（LEPCs-MafA）,观察肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。结果：获得胰岛素启动子调控的报告载体、报告载体标记的LEPCs及LEPCs-MafA。结论：pRIP DsRed报告载体的成功构建为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化提供了简捷的分子工具。     

同源盒基因MEOX1在肿瘤中的研究进展

作为一种同源盒转录因子,MEOX1可通过与基因组特异DNA基序相结合调控目的基因的表达.MEOX1在细胞增殖、迁移和分化中起关键作用,并参与胚胎发育中骨骼、肌肉、血管的形成.近年来研究发现,MEOX1在乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌等多种肿瘤组织中高表达,并与肿瘤患者的淋巴结转移和不良预后密切相关.同时MEOX1还可调控肿瘤细胞的增殖和迁移,提示其在肿瘤的发生发展中起重要作用.     

同源盒基因MSX2在子宫内膜癌中的表达和功能研究

目的;通过检测 ⅡI类肌节同源盒基因2（muscle segment homeobox 2,MSX2）在子宫内膜癌中的表达情况.分析其表达与临床病理参数的关系,并初步探索 MSX2 基因在子宫内膜癌细胞中的生物学功能。方法∶通过生物信息学、Real-Time PCR 及免疫组化方法分析 MSX2 基因在正常子宫内膜及子宫内膜癌中的表达及与临床病理,预后的关系。使用 CCK8 实验、细胞划痕实验 、Transwell 实验验证 MSX2 基因的表达调控子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭与转移。结果;MSX2 基因在子宫内膜癌组织中旱现高表达,肿瘤分级越低,FIGO 分期越早,MSX2 表达越高.高表达 MSX2 的患者预后更好。MSX2 基因的高表达能够抑制子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和转移能力。结论∶MSX2 基因可能在子宫内膜癌中发挥了抑制肿瘤进展的功能。     

同源异型盒基因BP1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的BP1(beta-protein1)基因是新近发现的转录因子,定位于染色体17q21-22,属同源异型盒基因DLX家族,在急性髓系白血病和急性T淋巴细胞白血病中均呈过度表达。本研究通过观察BP1mRNA在乳腺癌中的表达情况,分析并探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法以β-actin基因作为参照,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测82例乳腺肿瘤组织、12例近端肿瘤旁组织和10例远端癌旁组织中BP1mRNA的表达。结果82例肿瘤组织中有53例BP1阳性(64.63%),而在近端癌旁组和远端癌旁组中则表达很弱(16.67%)或不表达(0%),差异具有统计学意义(P<0.05)。BP1基因的过表达与组织学分级有关(P<0.05),而与肿瘤大小、有无淋巴结转移、病理类型、肿瘤家族史、初潮年龄、初产年龄、怀孕次数、绝经状况、雌激素受体及孕酮受体状态无关。结论BP1基因在部分乳腺癌中上调,其表达与肿瘤组织学分级有关。     

同源异型盒基因HOXD10在乳腺癌组织中的表达及其临床病理意义

背景与目的：乳腺癌是威胁女性健康最常见的恶性肿瘤之一,从分子水平深入研究其癌变机制,对寻找新的标志基因具有重要意义.本研究探讨同源异型盒基因HOXD10基因在乳腺癌发生、发展进程中的可能作用.方法：以18s rRNA基因作为参照,采用荧光实时定量RT-PCR技术,以相对定量方法检测44例乳腺癌组织及16例乳腺良性病变组织中HOXD10 mRNA表达情况.结果：HOXD10在乳腺癌中的表达显著低于乳腺良性病变组织.组织学分级为Ⅲ级的乳腺癌标本中H0XD10 mRNA的表达显著低于组织学Ⅰ、Ⅱ级标本.H0XD10 mRNA的表达与淋巴结转移、肿瘤大小、TNM分期之间相关性不显著.结论：HOXD10基因在乳腺癌中呈低表达甚至表达缺失,由于这种基因可能为乳腺癌发生发展的抑制因素,因此对其我们应给予更多关注.     

同源异型盒A5、高迁移率族蛋白1在卵巢癌中表达及临床意义

目的 探讨同源异型盒A5(HOXA5)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)在卵巢癌中的表达及临床意义.方法 分别取38例上皮性卵巢癌患者、22例良性上皮性卵巢肿瘤患者、20例无卵巢病变患者的卵巢癌组织、良性病变组织、正常组织,免疫组化法检测不同组织中HOXA5、HMGB1蛋白的表达情况,及其与患者临床特征的关系;采用逆转录...     

基于数据挖掘分析同源盒基因C9在胃癌中的表达及意义

目的 通过数据挖掘分析同源盒基因C9(HOXC9)在人胃癌中的表达及其意义.方法 利用TIM-ER、Fire Browse数据库分析HOXC9基因在不同肿瘤类型的表达情况;利用Oncomine、基因表达谱数据动态分析(GEPIA)、肿瘤基因组图谱(TCGA)、基因表达汇编(GEO)等数据库分析HOXC9基因在胃癌中的表...     

微小RNA-433-3p靶向同源异形盒基因A1抑制胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的研究

目的 探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)靶向同源异形盒基因A1 (HOXA1)对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的影响。方法 体外培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组（正常培养,不进行任何处理）、si-NC组（转染miR-433-3p siRNA阴性对照）、si-miR-433-3p组（转染miR-433-3p siRNA）、mimic-NC组（转染miR-433-3p mimic阴性对照）和miR-433-3p mimic组（转染miR-433-3p mimic）。荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测MGC-803细胞中miR-433-3p及HOXA1 mRNA表达;细胞计数法、Transwell法分别检测MGC-803细胞增殖、侵袭;双荧光素酶报告基因试验检测miR-433-3p与HOXA1的靶向关系。结果 与对照组和si-NC组相比,si-miR-433-3p组MGC-803细胞中miR-433-3p表达降低（P<0.05）,HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数升高（P<0.05）。与对照组和mimic-NC组相比,miR-433-3...     

Prospero相关同源异形盒蛋白1在非小细胞肺癌中的表达及意义

背景与目的：Prospero相关同源异形盒蛋白1（prospero-related homeobox 1,PROX1）是一种高度保守的转录调节因子,参与多种肿瘤的发生、发展。探讨PROX1在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表达及意义。方法：免疫组织化学法检测2011年1月—2013年6月在淄博市第一医院手术切除的86例NSCLC癌组织及其配对的癌旁组织中PROX1的表达;蛋白质印迹法（Western blot）检测人NSCLC细胞系A549、H460、H1229、H358和人支气管上皮细胞Beas-2b中PROX1的表达。采用克隆形成实验、细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）实验、transwell侵袭和迁移实验检测敲降PROX1对A549细胞生物学功能的影响。生存分析用Kaplan-Meier法,NSCLC患者生存预后的影响因素用COX比例风险回归模型。结果：癌组织中PROX1阴性、弱阳性、中等阳性、强阳性分别6例、25例、20例、35例;癌旁组织中分别48例、27例、8例、3例,癌组织中PROX1阳性表达率明显高于癌旁组织（P＜0.05）。与Beas-2b相比,A549、H460、H1229和H358细胞系中PROX1蛋白水平明显较高（P均＜0.05）。PROX1高表达组淋巴结转移率和TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期的占比明显高于低表达组（P＜0.05）。TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移和PROX1高表达是NSCLC患者不良生存预后的独立影响因素（P＜0.05）。PROX1高表达组生存时间明显短于低表达组（P＜0.05）。敲降PROX1后A549细胞PROX1蛋白表达水平、克隆数目、培养第72和96 h时细胞增殖的吸光度（D）值、侵袭和迁移细胞数量明显降低（P＜0.05）。结论：PROX1在NSCLC发生、发展中可能起到重要作用,敲降PROX1基因可以抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,PROX1高表达可能预示患者不良生存预后。     

肝圆镰状韧带一体化包裹加强技术在胰十二指肠切除术中的应用价值分析

目的 探讨胰十二指肠切除术(PD)中应用肝圆镰状韧带一体化包裹加强技术的临床应用价值。方法 回顾性分析哈尔滨医科大学附属肿瘤医院肝胆胰外科2016年1月—2021年12月759例实施开腹PD或保留幽门的胰十二指肠切除术(PPPD)患者的临床资料。根据是否应用肝圆镰状韧带一体化包裹加强技术将患者分为包裹加强组(372例)和无包裹加强组(387例),比较两组患者基本特征、术中资料、术后资料、晚期胰腺术后出血(PPH)资料。结果 与无包裹加强组相比,包裹加强组临床相关性胰瘘(CR-POPF)、C级胰瘘、B/C级及C级PPH、晚期PPH、腔外PPH、腹腔感染发生率及腹腔穿刺置管引流率、90天再手术率、PPH相关90天再手术率明显降低(P＜0.05),术后住院时间明显缩短(P＜0.05)。与无包裹加强组相比,包裹加强组晚期腔外PPH、B/C级及C级晚期腔外PPH发生率、侵入性治疗及再手术率明显降低(P＜0.05)。结论 肝圆镰状韧带一体化包裹加强技术能够降低PD后CR-POPF、晚期PPH发生率,尤其能够降低C级胰瘘、B/C级及C级晚期腔外PPH发生率,并同时降低腹腔感染、腹腔穿刺置管引流及再手术率,缩短术后住院时间。     

pdx-1基因克隆及其在人肝癌细胞系SMMC-7721中的表达

背景与目的克隆小鼠胰十二指肠同源框-12(PEGFP-C1pdx-1)基因,并构建pdx-1的表达载体。材料与方法通过RT-PCR方法从小鼠胰腺总RNA中克隆pdx-1基因,并将该基因构建到pEGFP-C1和pcDNA3.0中获得pdx-1的表达载体。通过观察荧光和RT-PCR方法检测表达载体转染SMMC-7721后pdx-1基因在细胞中的表达。结果克隆了883bp的pdx-1全长cDNA,成功构建了pEGFP-C1pdx-1和pcDNA3pdx-1两种表达载体。pEGFP-C1pdx-1转染SMMC-7721后,可观察到绿色荧光仅局限于细胞核中;通过RT-PCR方法在转染后的细胞中都检测到了pdx-1基因的转录。结论pdx-1表达载体的构建为进一步研究pdx-1基因在胰腺发育和肝干细胞增殖与分化方面的作用奠定了基础。     

Hes1基因诱导小鼠肝原始细胞分化为胆管上皮细胞

背景与目的： 采用体外获得性表达外源发状分裂相关增强子-1(hairy and enhancer of split 1,Hes1)基因的方法,探讨Hes1在肝干细胞分化以及胆管上皮细胞发育中的作用。 材料与方法： 通过PCR方法从小鼠基因组中克隆Hes1基因片段,构建表达载体pEGFP-C1-Hes1和pcDNA3.1- Hes1,将2种表达载体分别转染肝原始细胞系(LEPCs) ,应用RT-PCR和Real-time PCR技术检测胆管细胞分子标志物CK19、GGT,胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β,肝细胞分子标志物GS、BGP和肝卵圆细胞的分子标志物Thy-1的表达,并在荧光显微镜下观察EGFP标记的LEPCs细胞系荧光强度的变化。结果：成功构建表达载体pEGFP-C1- Hes1和pcDNA3.1-Hes1。RT-PCR和Real-time PCR检测均表明胆管细胞分子标志CK19、GGT表达量上调;胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β表达上调;肝细胞分子标志GS、BGP表达量下调;卵圆细胞的分子标志Thy-1表达量下调;LEPCs细胞系绿色荧光增强。 结论： 初步证明小鼠肝原始细胞经Hes1的表达诱导后可向胆管上皮细胞方向分化,推测Hes1为胆管上皮细胞分化的转录调控因子。     

肺上皮干/祖细胞种类和研究方法进展

分离和鉴定肺上皮干/祖细胞,深入了解他们在肺脏生理病理条件下的具体作用机理,对于防治包括肺癌在内的肺脏疾病有重要意义.本综述介绍了已鉴定的肺上皮干/祖细胞种类和肺上皮干/祖细胞研究方法的最新进展,前者具有区域特异性,主要包括位近端气道的基底细胞和导管细胞,位细支气管的Clara细胞、变异Clara细胞、细支气管肺泡干细胞和诱导出的krt5+细胞及位肺泡的Ⅱ型肺泡上皮细胞和Ⅱ型肺泡上皮祖细胞;后者主要包括肺损伤模型、谱系示踪技术、三维培养技术、移植、慢性标记细胞法及单细胞转录组学分析等.最后简述了肺上皮干/祖细胞与肺癌的关系以及肺癌干细胞靶向药物治疗进展.     

Effects of Garlic Oil on Pancreatic Cancer Cells

Background: To investigate the preventive and therapeutic potential of garlic oil on human pancreaticcarcinoma cells. Methods: The 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay wasperformed to study the effects of garlic oil on three human pancreatic cancer cell lines, AsPC-1, Mia PaCa-2and PANC-1. Cell cycle progression and apoptosis were detected by flow cytometry (FCM), staining with PIand annexin V-fluorescein isothiocyanate (FITC)/propidium iodide (PI), respectively. Morphologic changesof pancreatic cancer cells were observed under transmission electron microscopy (TEM) after treatment withgarlic oil at low inhibitory concentrations (2.5 μM and 10 μM) for 24 hours. Results: Proliferation of the AsPC-1,PANC-1, and Mia PaCa-2 cells was obviously inhibited in the first 24 hours with the MTT assay. The inhibitioneffect was more significant after 48 hours. When cells were exposed to garlic oil at higher concentrations, anearly change of the apoptotic tendency was detected by FCM and TEM. Conclusion: Garlic oil could inhibitthe proliferation of AsPC-1, PANC-1, and Mia PaCa-2 cells in this study. Moreover, due to programmed celldeath, cell cycle arrest, or both, pro-apoptosis effects on AsPC-1 cells were induced by garlic oil in a dose andtime dependent manner in vitro.     

Induction of Apoptosis in Human Pancreatic Carcinoma Cells by a Synthetic Bleomycin-like Ligand

Histidine-pyridine-histidine-3 (HPH-3) is an oxygen-activating ligand based on the structure of bleomycin. HPH-3 induced the death of human pancreatic adenocarcinoma AsPC-1 cells in 24 h, causing apoptotic morphology and internucleosomal degradation of DNA. HPH-3-induced cell death was not inhibited by antioxidants such as reduced glutathione and N -acetylcysteine, whereas hydrogen peroxide-induced cell death was inhibited by them, indicating that hydrogen peroxide is not involved in the induction of apoptosis by HPH-3. Induction of apoptosis by HPH-3 was inhibited by zinc and copper ions, indicating that chelation with ferrous ion is responsible for induction of apoptosis, as is the case in chelation by bleomycin to cleave DNA. Bleomycin A₂ and its fragment having no DNA-binding region, glycopeptide-3, did not induce apoptosis in AsPC-1 cells. Bleomycin A₂ induced G2/M block in flow-cytometric analysis, but HPH-3 did not and instead induced an apoptotic pre-G1 peak. Thus, HPH-3 induced apoptosis in human pancreatic carcinoma cells, which is a unique characteristic among bleomycin-related compounds.     

人体胰腺癌细胞株PANC-1中四环素可诱导的周期素D1表达抑制系统的建立

[目的]在人体胰腺癌细胞株PANC-1中建立一个四环素可调控周期素D1表达系统。研究抑制周期素D1对胰腺癌细胞的影响。[方法]反义周期素D1质粒通过两次稳定转染进入胰腺癌细胞株PANC-1细胞中，其表达调控系统采用Tet-Off系统（四环素调控系统）。通过抑制周期素D1表达对PANC-1细胞生长、集落形成能力以及周期素蛋白表达的影响，评价此系统的可调控性和有效性。[结果]通过第一次转染pTet—Off质粒，选择两个最佳表达克隆行第二次转染DTRE-反义周期素D1质粒，并通过免疫印记测定挑选出能在Tet—Off系统中最有效地表达反义周期素D1的克隆。通过Tet—Off系统对反义周期素D1的调控．发现周期素D1的表达抑制可明显地抑制胰腺癌细胞生长和集落能力，并可导致胰腺癌细胞形态学改变。其抑制作用与四环素调控浓度和时间有关。[结论]此研究在PANC-1胰腺癌细胞株中建立了一个高效、可诱导的反义周期素D1的表达系统。通过这个系统的建立，可进一步在体内和体外研究周期素D1的抑制对胰腺癌细胞的影响．并可结合其它治疗手段如化疗来探讨联合治疗在临床的潜在应用价值。     

黄曲霉毒素G1长期灌胃对NIH小鼠肺泡上皮细胞SP-C和PCNA表达的影响

目的探讨黄曲霉毒素G1长期灌胃对NIH小鼠肺泡上皮细胞SP-C和PCNA蛋白表达的影响。方法将60只NIH小鼠随机分为3组：AFG，小剂量组（3μg／kg组）、AFG1大剂量组30μg／kg组和对照组。实验组经口灌胃NIH小鼠AFG1，对照组灌胃同等容量生理盐水，3次／周，连续灌胃24周。实验第58周处死实验动物，光镜下观察肺组织病理学改变，采用免疫组化染色方法检测Ⅱ型肺泡上皮细胞特异分化标志物SP-C蛋白和细胞增殖活性相关抗原PCNA的表达情况。结果小剂量AFG1组和大剂量AFG，组肺泡上皮细胞SPC标记指数分别为（31．63±5．51）％和（33．58±4．84）％明显高于对照组（19．72±1．92）％，P〈0．01。小剂量AFG1组和大剂量AFG1组肺组织PCNA标记指数分别为（27．64±9．22）％和（30．08±9．35）％也明显高于对照组（7．91±1，89）％，P〈0．01。结论黄曲霉毒素G1长期灌胃NIH小鼠可以促进肺泡上皮细胞中Ⅱ型肺泡上皮细胞特异分化标志物SP-C和细胞增殖活性相关抗原PCNA的表达。     

黄曲霉毒素G1长期灌胃对NIH 小鼠肺泡上皮细胞SP-C 和PCNA 表达的影响

 目的 探讨黄曲霉毒素G1长期灌胃对NIH小鼠肺泡上皮细胞SP-C和PCNA蛋白表达的影响。方法 将60只NIH小鼠随机分为3组：AFG，小剂量组（3μg／kg组）、AFG1大剂量组30μg／kg组和对照组。实验组经口灌胃NIH小鼠AFG1，对照组灌胃同等容量生理盐水，3次／周，连续灌胃24周。实验第58周处死实验动物，光镜下观察肺组织病理学改变，采用免疫组化染色方法检测Ⅱ型肺泡上皮细胞特异分化标志物SP-C蛋白和细胞增殖活性相关抗原PCNA的表达情况。结果 小剂量AFG1组和大剂量AFG，组肺泡上皮细胞SPC标记指数分别为（31．63±5．51）％和（33．58±4．84）％明显高于对照组（19．72±1．92）％，P〈0．01。小剂量AFG1组和大剂量AFG1组肺组织PCNA标记指数分别为（27．64±9．22）％和（30．08±9．35）％也明显高于对照组（7．91±1，89）％，P〈0．01。结论 黄曲霉毒素G1长期灌胃NIH小鼠可以促进肺泡上皮细胞中Ⅱ型肺泡上皮细胞特异分化标志物SP-C和细胞增殖活性相关抗原PCNA的表达。     

Prognostic Significance of Annexin A1 Expression in Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Annexin A1 is a 37-kDa calcium- and phospholipid-binding protein of the annexin superfamily considered toplay an important role in tumorigenesis. However, associations with clinicopathological features in pancreaticductal adenocarcinoma (PDAC) cases have yet to be fully defined. We therefore investigated the prognosticvalue of annexin A1 protein as a PDAC biomarker in 83 tumor and matched non-cancerous tissues or normalpancreas tissues. Expression was analyzed using real-time RT-PCR, Western blotting and immunohistochemistry.In non-tumor tissue, myoepithelial cells showed no or weak expression of annexin A1 while expression was strongand sometimes even located in the nuclei of endothelial cells in tumor tissue. High expression was significantlyassociated with advanced stage (P <0.05) and a worse overall survival (P <0.05). These results provide newinsights to better understand the role of annexin A1 in PDAC survival, and might be relevant to prediction ofprognosis and development of more effective therapeutic strategies aimed at improving survival.