HBV转基因小鼠免疫耐受状态的研究

目的研究HBV转基因小鼠免疫耐受状态机制。方法以正常ICR小鼠为对照,检测转基因小鼠脾树突状细胞(DC)表面la(MHC-Ⅱ)和CD_(80)(B7)表达水平及其免疫功能;脾及外周血T淋巴细胞表面CD_8和CD_(28)及肝细胞膜上MHC-I和腹腔巨噬细胞MHC-Ⅱ抗原表达情况。结果发现HBV转基因小鼠DC表面MHC-Ⅱ及CD_(80)表达水平(13.34±1.11及12.24±1.31)明显低于对照组(20.47±1.78及15.83±1.52,P<0.05);其DC体外诱发T淋巴细胞增殖能力(6409.67±445.71cpm)明显低于对照组(13870.67±1706.9cpm,P<0.01);而脾及外周血T淋巴细胞CD_8及CD_(28)表达水平与对照组差异不明显;肝组织冰冻切片免疫组化测定其MHC-Ⅰ抗原表达量低于正常对照组;腹腔巨噬细胞表面 MHC-Ⅱ抗原表达水平明显低于正常对照组。结论本研究表明 HBVH基因小鼠免疫耐受状态并非免疫系统单一环节障碍,在抗原提呈细胞、靶细胞抗原标志,特异性细胞免疫应答等方面均存在免疫功能低下及调节、识别障碍,其中DC功能低下,在免疫耐受状态中有重要作用。     

乙型肝炎病毒转基因小鼠免疫耐受状态及血液生物化学指标的研究

目的 了解HBV转基因鼠HBV基因的复制表达和免疫耐受状态,为探讨乙型肝炎发病机制和抗HBV新药评价提供可靠的参考依据.方法 选取遗传背景相同的SPE级HBsAg阴性非转基因鼠和转基因鼠.化学发光法检测HBsAg、HBeAg、HBV DNA,ELISA检测前S1、HBcAg,肝组织行病理学检查,免疫组织化学染色检测不同时期转基因鼠肝HBsAg表达,流式细胞仪检测小鼠淋巴细胞增殖情况,酶联免疫斑点检测(ELISPOT)分泌IFNγ的T淋巴细胞斑点数,双色免疫荧光法检测脾细胞悬液和脾树突状细胞(DC)中Toll样受体(TLR)2和TLR9的表达.数据行t检验和F检验.结果 HBV转基因鼠可复制表达HBsAg、前S1、HBeAg、HBcAg和HBVDNA,而抗-HBs、抗-HBc、抗-HBe均阴性;肝组织无明显病理改变,肝细胞中HBsAg在胞质表达,HBcAg在胞核表达.HBsAg刺激后,HBV转基因鼠T淋巴细胞增殖能力为(697.6±67.3)cpm,显著低于非转基因鼠的(1315.5±191.6)cpm.经HBsAg刺激后,HBV转基因鼠脾细胞分泌IFNγ的T淋巴细胞斑点数为8.25±1.10,低于非转基因鼠的28.50±4.21(F=155.967,P=0.000).HBV转基因DC表达CD11c+、TLR2和TLR9与非转基因鼠比较,差异无统计学意义(均P＞0.05).在18日龄胎鼠和1日龄仔鼠肝组织观察到HBsAg表达.结论 HBV转基因鼠有HBV相关抗原表达,并对HBV相关抗原存在免疫耐受,其先天和获得性免疫功能均正常,类似于人类慢性HBV无症状携带者.HBV转基因鼠是比较理想的动物模型.     

HBV感染研究的转基因小鼠模型

文章综述了各种用于ＨＢＶ所致的慢性肝病研究用转基因小鼠的制备与应用。 ( 1)以ＨＢＶ基因组作为转基因的系列转基因小鼠模型 ,如ＨＢＶ全基因转基因小鼠 ,包括普通ＨＢＶ转基因小鼠如Ｃ57ＢＬ、ＩＣＲ等 ,为免疫耐受型 ,能模拟人类无症状携带者。重症复合型免疫缺陷 (ＳＣＩＤ)转基因小鼠 ,由于淋巴细胞分化成熟受阻 ,因而体液免疫与细胞免疫均缺陷 ,免疫系统重建后 ,能引发类似人类的慢性乙型肝炎 ,为该病的发病机制的研究提供了较好的模型 ;以ＨＢＶ基因组部分基因制备的转基因小鼠 ,如ＨＢＶ Ｓ基因 ,ＨＢＶ Ｃ基因和ＨＢＶ Ｘ基因等…     

加味四逆散抑制HBV转基因小鼠HBV实验研究

目的:通过对HBV转基因小鼠(TGM)的实验观察,探讨加味四逆散抗HBV作用.方法:选用G3代HBVTGM22只,非HBVTGM10只,分为3组:正常对照、转基因对照和转基因治疗组,治疗组按50g/kg·d-1灌加味四逆散(约含生药4g/ml),两对照组灌等体积的生理盐水,共30天,采用HBV DNA PCR定量法检测治疗前后HBVTGM血清中HBV DNA含量,斑点杂交法检测TGM肝组织HBV DNA的含量.结果:治疗组小鼠血清中HBVDNA定量比治疗前有显著下降(7.662±0.78比5.22±3.14,P＜0.05),而HBV TGM对照组灌生理盐水前后HBVDNA定量差异不显著(7.125±4.26比8.932±5.12,P＞0.05);治疗组肝细胞中的HBV DNA比对照组斑点的OD值有明显的减少(0.274±0.096比0.432±0.119,P＜0.01).结论:加味四逆散具有一定的抑制HBVTGM血清中与肝组织中HBV DNA的作用.     

高表达HBV转基因小鼠建成

HBV转基因小鼠的问世,为活体研究乙型肝炎及相关疾病,特别是药物及疫苗的筛选和验证,找到了理想的工具。本单位为全军肝病中心和全军转基因动物重点实验室,近年一直从事HBV转基因小鼠的建立和应用工作。已成功制备出有高水平抗原表达的HBV转基因小鼠模型,经多家科研单位多     

HBV转基因小鼠的病理学及免疫学研究进展

转基因动物技术在免疫学研究中的应用日益广泛,其在研究免疫耐受发生机制、诱导和打破免疫耐受的方法中发挥了重要作用。HBV（乙型肝炎病毒）转基因小鼠已成为用于研究打破免疫耐受及乙型肝炎治疗的模型。     

HBV转基因小鼠的建立和应用初探

ＨＢＶ转基因小鼠的问世 ,为乙型肝炎发病机制及其防治深入研究开辟了一条新的途径 ,特别是为在活体进行抗ＨＢＶ药物疗效验证、评价、比较和筛选提供了较理想的动物模型。但如何建成稳定高表达的ＨＢＶ转基因小鼠 ,怎样将其用于研究乙型肝炎及抗ＨＢＶ药物筛选等 ,仍属待探讨的领域。现通过构建、筛选出高表达的ＨＢＶ质粒 ,并通过原核显微注射等方法建成了较为理想的稳定、高表达ＨＢＶ转基因小鼠模型 ,解决了长期困扰乙型肝炎研究中缺乏理想动物模型的难题。为了证明这些模型的应用价值 ,用此新的活体模型探索了乙型肝炎发病机理 ,并验证…     

HBV转基因小鼠的舌色改变及血流变化

目的:研究HBV转基因小鼠的舌色表现和微血管血流变化.方法:10只C57BL/6J-HBV转基因小鼠和10只正常小鼠(C57BL/6J非转基因小鼠),均雌雄各半,采用小鼠舌象观察装置对小鼠舌色进行观察;使用激光多普勒血流仪进行舌和肝脏微血管血流检测;断头采血,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;HE染色观察肝和舌组织病理变化.结果:HBV转基因小鼠中,6只小鼠舌色呈紫色,4只舌色呈暗红色,而正常小鼠的舌色均为淡红色.HBV转基因小鼠舌色色调(H值)变深,有显著性差异(P<0.01);舌色亮度(V值)变弱,有极显著性差异(P<0.001).和正常鼠相比,紫舌HBV转基因小鼠微血管血流灌注量和血流速度显著降低(0.206±0.13vs0.794±0.13;0.479±0.07vs0.331±0.04,P<0.01,P<0.001),该模型肝脏微血管血流灌注量和血流速度显著降低,HBV转基因小鼠肝脏和舌存在明显的炎性改变.结论:HBV转基因小鼠舌色以紫色多见,其形成机制与微循环障碍有关.该模型存在肝脏和舌的炎症病理,提示炎性微环境是形成其肝脏和舌微循环障碍的重要原因.     

慢性HBV感染免疫耐受研究进展

免疫耐受是T及B淋巴细胞对抗原的特异不应答或负应答表现。按形成时期的不同,免疫耐受可分为中枢耐受和外周耐受。HBV感染后机体对HBV免疫耐受是慢性HBV感染的主要原因。简要介绍了HBe Ag、树突状细胞的功能缺陷、细胞毒性T淋巴细胞低应答、辅助性T淋巴细胞及细胞因子、HBV基因型及基因组的变异、宿主基因多态性在慢性HBV感染免疫耐受形成中的作用及相关研究进展。     

慢性HBV感染免疫耐受的研究进展

正慢性HBV感染呈世界性流行,世界上许多国家儿童出生时或早期就开始接种乙肝疫苗[1]。虽然这个策略在过去的几十年中已经有效降低了大部分流行地区的乙型肝炎发病率和流行率[2],但在普及婴儿免疫后的20~40年内,它不会对终末期肝病或肝癌的发病率产生很大的影响。因此,HBV感染危害人类健康仍是全世界关注的焦点。HBV并不直接引起肝细胞病变,机体不同的免疫状态导致HBV感染后出现不同的结     

胸腺肽对HBV转基因小鼠表达HBV DNA的影响(摘要)

应用杨州大学农学院提供的HBV转基因小鼠30只,均分三组。胸腺肽治疗组每日给实验鼠腹腔内注射3mg/只,pHGF(护肝对照组)也每日腹腔内注射3mg/只,另以等量生理盐水注射作为一般对照组,三组均连续注射3个月,在用药前和用药后15、30、45、60、75、90和117天分别从小鼠眼眶取血,20℃保存统一检测HBV DNA(PCR法)。结果如表。     

刺参糖胺聚糖对HBV转基因小鼠肝组织HBV相关抗原表达的影响

目的:研究刺参糖胺聚糖在动物活体内的抗HBV作用.方法:开放性动物实验.HBV转基因小鼠30只,按性别随机分为生理盐水对照组(每天给予等容积的生理盐水)、刺参糖胺聚糖低(30mg/kg)、中(40 mg/kg)、高(50 mg/kg)三个剂量组及干扰素(45 U/kg)对照组,每组雌雄各半,分笼饲养.给药方式为腹腔注射,每日1次,连续用药30 d.给药结束后处死小鼠,剥离其肝脏组织.免疫组织化学染色法及综合评分法观察并半定量分析小鼠肝脏组织HBsAg,HBcAg的表达.结果:与生理盐水对照组比较,刺参糖胺聚糖低、中、高剂量对小鼠肝脏HBsAg,HBcAg的表达均有抑制作用(4.93±1.43,3.57±1.02,3.27±0.64 VS 6.97±0.75;5.73±1.62,4.27±1.03,4.27±1.03 VS 7.23±0.53,P<0.01或0.05),但其抑制作用低于干扰素对照组(P<0.01或0.05),并呈现一定的量效反应关系.结论:刺参糖胺聚糖具有一定的体内抗HBV作用.     

HBV感染慢性化的免疫耐受机制

HBV感染机体后,机体抗病毒免疫强度的高低,能否及时、有效、彻底清除病毒可能成为决定急性自限性感染或慢性感染的标志。HBV作为抗原,欲长期持续存在于宿主体内,必须逃避宿主免疫系统的监视与攻击,即造成免疫耐受环境,免疫耐受是HBV感染慢性化最主要的机制。免疫耐受与机体免疫系统发育成熟程度有关。成人、儿童、幼儿感染HBV后分别有5％、30％、95％的患者成为慢性HBV感染者。表明免疫成熟程度是决定HBV持续感染的重要因素。     

大剂量HBsAg疫苗对HBV转基因小鼠细胞免疫调节的实验研究

目的 研究大剂量HBsAg疫苗对HBV转基因小鼠(Tg鼠)细胞免疫应答影响。方法 用大剂量HBsAg疫苗免疫Tg鼠后，用流式细胞术、氚-胸腺嘧啶核苷(^3H-TdR)掺入法和ELISA，分别检测其树突状细胞(DC)、T淋巴细胞增殖及其诱生细胞因子IL-2、IFNγ的水平。结果 大剂量HBsAg疫苗组DC表面共刺激分子和I-E^k表达，特异T淋巴细胞增殖能力及其诱生细胞因子IL-2、IFNγ的水平显著高于对照组。结论 大剂量HBsAg疫苗增强Tg鼠细胞免疫应答，恢复对乙型肝炎表面抗原的应答。