高表达乙型肝炎病毒转基因小鼠的制备

目的 制备高表达乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）转基因小鼠,为乙型肝炎研究提供较理想动物模型。方法 构建、筛选高表达ＨＢＶ质粒载体。用显微注射法导入昆明鼠受精卵雄性原核,用ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、放射免疫、免疫组织化学等方法分析ＨＢＶ基因在小鼠体内的整合、表达情况。结果 显微注射１４５６枚卵,产仔１１８只,整合阳性２５只,１１只血清ＨＢＶ ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ阳性,其中２只血清中ＨＢｓＡｇ含量高于１０００ｎｇ／ｍｌ,且子代鼠中达到９００ｎｇ／ｍｌ。肝组织免疫组化分析发现有ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ表达,未见明显病理学改变。结论 已初步获得高表达ＨＢＶ转基因小鼠。     

丙型肝炎病毒及乙型肝炎病毒联合基因免疫实验研究

为ＨＣＶ/ＨＢＶ重叠或混合感染的防治寻求新的高效联合基因免疫策略 ,分别将与ＨＣＶ核心区基因互补的ｃＤＮＡ和ＨＢＶ核心区基因克隆于具有两套独立表达单元的真核表达载体 ｐＲＳＣ的巨细胞病毒启动子和ＲＳＶ启动子下游 ,称为ｐＲＳＣ ＨＢＶ/ＨＣＶ ,转染ＳＰ2 / 0细胞 ,通过免疫荧光和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法观测蛋白的表达 ,免疫ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ;用酶联免疫法、ＭＴＴ法及荷瘤试验观察小鼠体液免疫应答及细胞免疫应答。结果表明 ,ｐＲＳＣ ＨＢＶ/ＨＣＶ转染ＳＰ2 / 0细胞可见ＨＢｃＡｇ及ＨＣＶ核蛋白染色阳性荧光细胞 ,相对分子质…     

415例HBV感染的不同血清学指标组合的HBVDNA的检测

了解ＨＢＶ感染的不同血清学指标组合的相应的ＨＢＶＤＮＡ阳性情况 ,以指导临床。对 4 15份不同肝病临床类型的血清同时行ＥＬＩＳＡ方法测定ＨＢＶ标志及普通ＰＣＲ法检测ＨＢＶＤＮＡ。结果表明 ,ＨＢｓＡｇ阳性组ＨＢＶＤＮＡ阳性率为 77.8% ( 2 70 /34 7) ,ＨＢｓＡｇ阴性组ＨＢＶＤＮＡ阳性率为 19.1% ( 13/68) ,两者差异显著 (Ｐ <0 .0 0 1)。其中 153例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗 ＨＢｃ阳性血清 ,ＨＢＶＤＮＡ全部阳性 ,阳性率为 10 0 %。ＨＢｓＡｇ阳性、抗 ＨＢｅ和抗 ＨＢｃ阳性组血清ＨＢＶＤＮＡ阳性率为 66.9% ( 79/118)…     

乙型肝炎病毒e抗原与免疫耐受

乙型肝炎病毒ｅ抗原 (ＨＢｅＡｇ)是一种非颗粒性分泌型蛋白 ,它在乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染中所起的作用尚不十分明确。研究发现 ,ＨＢｅＡｇ可能具有免疫调节功能 ,建立ＨＢｅＡｇ和ＨＢｃＡｇ特异性的Ｔ细胞耐受 ,并促进了病毒持续感染。本文就此方面的进展作一综述。1　转基因鼠模型建立与ＨＢｅＡｇ耐受通过ＨＢｅＡｇ表达的转基因鼠模型Ｂ10 .Ｓ -Ｔｇ3ｌｅ小鼠研究发现 ,ＨＢｅＡｇ/ＨＢｃＡｇ特异性耐受表现为以下几个方面〔1〕:( 1)ＨＢｅＡｇ血清浓度在 10ｎｇ/ｍｌ时可引发Ｔ细胞耐受 ;( 2 )ＨＢｅＡｇ诱导的Ｔ细胞耐受可扩大至…     

adr型乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠的制备

目的 制备用于人乙型肝炎研究的ＨＢＶ转基因小鼠模型。方法 将首层相连的ａｄｒ型ＨＢＶ全基因组克隆至ｐＢＲ３２２质料,经扩增纯化后,用显微注地射法导入Ｃ５７ＢＬ／６小鼠受精卵原核,让外源ＨＢＶ自然整合至小鼠受精卵基因组。用ＰＣＲ、ＤＮＡ测序、放免及免疫组化等方法分析ＨＢＶ在小鼠体内的整合、复制、表达情况。结果 显微注射１７１２枚卵,产仔１２８只,其中有１４只鼠尾ＨＢＶ ＰＣＲ检测阳性。１２只在血清中     

树鼩实验感染乙型肝炎病毒的再评价

目的评价乙肝病毒（ＨＢＶ）实验感染树的稳定性与实用性。方法用含ＨＢＶ的２．２．１５细胞或乙肝患者混合血清以不同剂量、经不同途径接种６０只健康树。观察其临床表现，检测血清ＡＬＴ、ＨＢｓＡｇ．ＨＢｅＡｇ及ＨＢＶ－ＤＮＡ。肝组织行ＨＥ及免疫组织化学染色，结果部分树出现一过性食欲不振、稀便；６０只树不同时相ＡＬＡ水平均在正常范围；８只树ＨＢＶ标志物一过性阳性；肝组织未见类似于人乙型肝炎的典型病理改变；免疫组织化学染色为阴性。结论树不能持续稳定感染ＨＢＶ     

HBV DNA及HBV抗原在血清HBV标志阴性肝炎肝组织中表达的研究

研究ＨＢＶＤＮＡ及ＨＢＶ抗原在血清ＨＢＶ标志阴性肝炎肝组织中的表达。对 4 5例ＨＢＶ血清标志阴性肝炎患者进行了肝组织ＨＢＶＤＮＡ的原位杂交及免疫组织化学研究。结果表明 ,原位杂交ＨＢＶＤＮＡ阳性 7例 ,阳性率为 15.56% ,阳性信号主要存在于肝细胞的胞核中 ,少数位于胞浆内 ;免疫组织化学ＨＢｓＡｇ及ＨＢｃＡｇ均为阴性。血清ＨＢＶ标志阴性肝炎肝组织中可检出ＨＢＶＤＮＡ。HBV DNA及HBV抗原在血清HBV标志阴性肝炎肝组织中表达的研究@周晓萍!730030$兰州解放军第一医院 @李爱月!730030$兰州解放军第一医院…     

感染乙型肝炎病毒MT2淋巴细胞表达Fas

目的：观测Ｔ淋巴细胞－ＭＴ２细胞对乙型肝炎病毒感染的敏感性，了解病毒感染对淋巴细胞表达Ｆａｓ的影响。方法：体外培养ＭＴ２细胞，用ＨＢＶ ＤＮＡ阳性血清直接感染，用酶联免疫和斑点杂交，ＰＣＲ法检测感染后的细胞病毒复制与表达状况，用酶联免疫法检测了Ｆａｓ抗原表达。结果：ＭＴ２细胞于阳性血清感染后第八天可测到ＨＢｅＡｇ，ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ同时出现Ｆａｓ表达信号，结论：ＭＴ２细胞对ＨＢＶ易感，ＨＢＶ     

高复制水平的YMDD变异株乙型肝炎一例

患者男 ,2 9岁。因乏力、食欲下降反复发作 2年 ,伴恶心、尿黄 2周于 2 0 0 1年 4月以“慢性乙型肝炎”第 2次入院。患者曾于 2 0 0 0年 8月以慢性乙型肝炎 (中度 )入院 ,当时查总胆红素 (ＴＢＩＬ)为 2 8.5 μｍｏｌ/Ｌ ,丙氨酸转氨酶(ＡＬＴ)为 10 0Ｕ/Ｌ ,天门冬氨酸转氨酶 (ＡＳＴ)为 80Ｕ/Ｌ ,ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗 ＨＢｃ阳性 ,ＨＢＶＤＮＡ 4 4 0 0ｍｅｑ/ｍｌ(ｂＤＮＡ法 ) ;肝活检病理报告 ,慢性乙型肝炎 (Ｇ2Ｓ3 ) ;免疫组化 :ＨＢｓＡｇ阳性和ＨＢｃＡｇ阳性 ;原位杂交 :ＨＢＶＤＮＡ阳性。经拉米夫定 10 0ｍｇ 1次 /ｄ、…     

HBV基因疫苗联合抗原蛋白免疫小鼠的研究

目的构建乙肝病毒（ＨＢＶ）基因疫苗,观察其与ＨＢＶ表面抗原蛋白（ＨＢｓＡｇ）联合免疫小鼠诱导的免疫应答．方法构建重组真核表达质粒ｐＣＲ３１Ｓ作为ＨＢＶ基因疫苗,联合应用纯ＨＢｓＡｇ蛋白免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,以单用基因疫苗ｐＣＲ３１Ｓ或纯蛋白ＨＢｓＡｇ免疫小鼠作为对照组．采用ＥＬＩＳＡ法检测免疫小鼠血清抗ＨＢｓ,另取免疫小鼠脾细胞,用３ＨＴｄＲ掺入法测定各组免疫小鼠的淋巴细胞增殖活性．结果２,４ｗｋ时联合免疫组抗ＨＢｓ效价低于纯蛋白免疫组,高于基因疫苗免疫组;６ｗｋ后基因疫苗免疫组抗ＨＢｓ效价升至最高,联合免疫组次之．３ＨＴｄＲ掺入法测定显示,各组免疫小鼠的淋巴细胞增殖反应差异不显著．结论乙肝病毒基因疫苗与表面抗原蛋白联合免疫无优势．     

树Qu实验感染乙型肝炎病毒的再评价

目的 评价乙肝病毒（ＨＢＶ）实验感染树Ｑｕ的稳定性与实用性。方法 用含ＨＢＶ的２．２．１５细胞或乙肝患者混合血清以不同剂量，经不同途径接种６０只健康树Ｑｕ，观察其临床表现，检测血清ＡＬＴ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及ＨＢＶ－ＤＮＡ，肝组织行ＨＥ及免疫组织化学染色。结果 部分树Ｑｕ出现一过性食欲不振、稀便；６０只树Ｑｕ不同时粗ＡＬＴ水平均在正常范围；８只树ＱｕＨＢＶ标志物一过性阳性；肝组织未见类似于人乙     

用套式聚合酶链反应检测乙型肝炎疫苗免疫后无抗体反应者血清HBVDNA

为了解乙型肝炎（乙肝）疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，作者用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了正常人群中乙肝疫苗免疫后１５例不产生抗－ＨＢｓ和２０例产生抗－ＨＢｓ者血清的ＨＢＶＤＮＡ，同时用Ａｂｂｏｔｔ试剂检测血清的ＨＢｅＡｇ。结果发现，不产生抗－ＨＢｓ的１５例中有６例（４０％）第２次ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ为阳性，其中３例（５０％）为ＨＢｅＡｇ阳性，产生抗－ＨＢｓ者的２０例其血清ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｅＡｇ均为阴性。提示：常规方法漏检的低水平ＨＢＶ感染可能是造成乙肝疫苗免疫后不产生抗－ＨＢｓ的原因之一。     

荧光定量PCR检测血清HBV DNA910例临床分析

探讨ＨＢＶ标志与ＨＢＶ复制及ＨＢＶＤＮＡ的关系。选择单一ＨＢＶ感染者 867例及ＨＢＶ标志阴性者 4 3例为研究对象 ,采用荧光定量ＰＣＲ法检测患者血清中ＨＢＶＤＮＡ ,并比较ＨＢＶ标志不同模式与ＨＢＶＤＮＡ定量值之间的关系。结果表明 ,ＨＢＶＤＮＡ定量阳性者只出现于以下 3种ＨＢＶ标志模式中 :ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及抗 ＨＢｃ阳性 ,ＨＢｓＡｇ、抗 ＨＢｅ阳性及抗 ＨＢｃ阳性和ＨＢｓＡｇ及抗 ＨＢｃ阳性 ,3种ＨＢＶ标志模式中ＨＢＶＤＮＡ阳性率分别是 98.8% ( 32 3/ 32 7) ,16.2 % ( 57/ 351)和 39% ( 4 1/10 5) ,且这 3种…     

单项抗-HBc阳性无症状HBV携带者的肝组织损伤研究

为了探讨单项抗 ＨＢｃ阳性无症状ＨＢＶ携带者的肝组织病理改变 ,对 4 6例单项抗 ＨＢｃ阳性、ＨＢＶＤＮＡ阳性和肝功能正常的患者做了肝组织学检查 ,并且用免疫组织化学方法检测了肝组织中的ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ。结果显示 ,肝组织正常者 8例 ( 17.4 % ) ,轻度慢性肝炎 35例 ( 76.1% ) ,中度慢性肝炎 3例 ( 6.5% ) ;肝组织中ＨＢｓＡｇ阳性 19例 ( 4 1.3% ) ,ＨＢｃＡｇ阳性 11例 ( 2 3.9% ) ,提示单项抗 ＨＢｃ阳性、ＨＢＶＤＮＡ阳性患者存在不同程度的肝组织学损伤 ,给予动态的医学观察是必要的。单项抗-HBc阳性无症状HBV携带…     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎致HBV变异并病情加重一例

患者男性 ,30岁 ,ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｃ阳性 4年。 1999年 10月因乏力、纳差、肝区不适住院。入院体检 :一般情况良好 ,肝脾不肿大 ,无肝掌、蜘蛛痣。除ＡＬＴ 10 3Ｕ/Ｌ外 ,ＴＢｉｌ、白/球蛋白比例、ＰＴ、ＨＡ、胆汁酸和ＬＮ均正常 ,肝组织活检显示为 :Ｇ1、Ｓ1。免疫荧光双标记法血液定量检测ＨＢＶＤＮＡ为3 .0 4× 10 -9ｇ/ｍｌ(阈值 <4× 10 -14 ｇ/ｍｌ)。服用拉米夫定10 0ｍｇ/ｄ ,2周后复查ＨＢＶＤＮＡ为 4× 10 -14 ｇ/ｍｌ ,4周后ＡＬＴ正常。用药 7个月时ＨＢＶＤＮＡ为 1.8× 10 -13ｇ/ｍｌ,肝功能正常。但用…     

聚合酶链反应评价原位杂交检测慢性HBV感染者肝内HBVDNA的结果

用地高辛素探针原位杂交检测慢性ＨＢＶ感染者肝内ＨＢＶＤＮＡ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清ＨＢＶＤＮＡ评价病毒复制状态。发现肝内ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，在１４例肝组织病变不活动的ＨＢｅＡｇ阳性慢性无症状ＨＢＶ携带者（ＡｓＣ）呈弥漫性分布；而在ＨＢｅＡｇ阳性或阴性活动性肝病病人均聚合分布于肝细胞坏死区。上述慢性感染者９８％血清ＨＢＶＤＮＡ阳性。说明ＨＢＶ复制与肝组织病变有关但非肝损伤直接原因。１６例ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ中，９例肝内仅见局灶性ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，其中４例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性，说明部分ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ也存在极低水平病毒复制。     

小儿乙型肝炎血清,病理及免疫病理分析

本文通过检测１５例小儿病毒性肝炎患者血清ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ标志及肝组织内ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ发现ＨＡＶ和ＨＣＶ标志全部阴性，ＨＢＶ标志全部阳性。１５例ＨＢＶ感染中，血清ＨＢＶＤＮＡ阳性１１例。其中ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）９例，ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｂ（＋）２例。综合血清其它的感染指标与肝脏病理及免疫病理的变化对１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病例作了重要分析。进一步证实ＨＢｅＡｇ为临     

拉米夫定治疗乙型病毒性肝炎期间出现性功能障碍二例

本文报道 2例拉米夫定抗乙型肝炎病毒治疗中出现性功能障碍的患者。病例 1　患者男性 ,3 5岁。反复乏力、纳差 4年 ,肝功能持续异常 ,ＡＬＴ波动在 70～ 15 0ＩＵ /Ｌ ,ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗 ＨＢｃ均阳性 ,ＨＢＶＤＮＡ定量大于 5 0 0 ｐｇ/ｍｌ。 2 0 0 1年 2月予拉米夫定抗病毒治疗 ,6个月后ＨＢＶＤＮＡ定量阴性 ,肝功能正常 ,ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗 ＨＢｃ仍均阳性。但患者诉阳痿、遗精、脾气暴躁 ,要求停用拉米夫定。否认治疗前性功能障碍。查体 :慢性肝病面容 ,皮肤巩膜无黄染 ,浅表淋巴结未触及肿大 ,颈胸部可见数粒蜘…     

干扰素治疗HBeAg阳性和抗-HBe阳性慢性乙型肝炎远期疗效

大剂量干扰素能有效治疗慢性乙型肝炎 ,ＨＢｅＡｇ阳性者可获 5 0 %左右完全应答 ,但抗 ＨＢｅ、ＨＢＶＤＮＡ阳性者对干扰素治疗的疗效 ,文献报道不一。我们对ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ阳性慢性乙型肝炎 6 7例和抗 ＨＢｅ、ＨＢＶＤＮＡ阳性慢性乙型肝炎 2 9例患者应用干扰素治疗进行了观察对比 ,并追踪随访 1～ 6年 ,现报告如下。资料与方法一、研究对象96例均为我院门诊或住院慢性乙型肝炎患者 ,所有患者均符合下列条件 :血清ＨＢｓＡｇ及ＨＢＶＤＮＡ阳性 ;ＨＢｅＡｇ阳性或抗 ＨＢｅ阳性 ;病程超过半年 ;血清ＡＬＴ≥ 12 0Ｕ/Ｌ ;半…     

用套式聚合酶链反应检测乙型肝炎疫苗免疫后无抗体反应者血清…

为了解乙型肝炎（乙肝）疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，作者用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了正常人君中乙肝疫苗免疫后１５例不产生抗－ＨＢｓ和２０例产生抗－ＨＢｓ者血清的ＨＢＶ ＤＮＡ，同时用Ａｂｂｏｔｔ试剂检测血清的ＨＢｅＡｇ。结果发现，不产生抗－ＨＢｓ者的１５例中有６例（４０％）第２次ＰＣＲ扩增ＨＢＶ ＤＮＡ为阳性，其中３例（５０％）为ＨＢｅＡｇ阳性，产生抗－ＨＢｓ者的２０例其血清ＨＢＶ