双抗体夹心ELISA法检测HIV-1 p24抗原的初步建立

目的 建立敏感、特异的艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1) p24抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,为试剂盒的研制奠定基础.方法 用纯化的基因工程p24表达抗原免疫小鼠及兔子,获得单克隆抗体(单抗)及多克隆抗体(多抗),用单抗包被酶标板,辣根过氧化物酶标记多抗,初步建立HIV-1 p24抗原的ELISA检测方法.进一步与美国杜邦公司的HIV-1 p24抗原检测试剂同时检测88份HIV感染者血清和50份健康献血员血清中的p24抗原,确定其特异性;采用倍比稀释法的p24抗原标准品,测定试剂的灵敏度.结果 两种方法检测88份HIV感染者血清和50份献血员血清中的p24抗原.结果 均为阴性(符合率为100%);自建ELISA法检测HIV-1 p24抗原的灵敏度为100pg/ml.结论 初步建立了检测HIV-1 p24抗原的ELISA法,与国外同类试剂比较,本法的特异性和灵敏度均接近国外同类试剂,有较好的特异性和灵敏度,为进一步研制HIV-1 p24抗原ELISA检测试剂盒打下了基础.     

双抗体夹心ELISA法检测肺炎支原体抗原方法的研究

肺炎支原体 (ＭｙｃｏｐｌａｓｍａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＭｐ)由Ｃｈａｎｏｃｋ等 (196 2年 )首先从人类原发性非典型肺炎 (Ｐｒｉｍａｒｙａｔｙｐｉｃａｌｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ,ＰＡＰ)患者痰液中分离培养出的支原体〔1〕。目前国内、外主要依靠培养基培养分离Ｍｐ ,以确诊Ｍ     

检测犬弓形虫感染双抗体夹心ELISA方法的建立

目的用42#抗弓形虫SAG3单抗为捕获抗体、29#抗弓形虫SAG3单抗作为检测抗体建立检测犬弓形虫感染的双抗体夹心ELISA方法。方法利用HRP标记检测29#抗弓形虫SAG3单抗;采用棋盘滴定法确定捕获抗体42#抗弓形虫SAG3单抗的包被浓度和弓形虫阳性血清稀释度;对封闭剂、检测抗体的工作浓度等条件进行优化,并进行敏感性、特异性、重复性以及稳定性测定。用所建立的双抗体夹心ELISA方法对76份犬待检血清进行检测,计算阳性率。结果最佳优化条件为捕获抗体包被浓度为1∶800稀释(0.34μg/孔),弓形虫阳性血清稀释度为1∶12,封闭剂为10%FBS溶液,最佳封闭时间为2h,参考阳性血清最佳作用时间为2h,检测抗体稀释度1∶3 000,TMB底物最佳显色时间为10min。优化的ELISA敏感性为1∶48;与犬心丝虫阳性血清、犬等孢球虫阳性血清、犬蛔虫阳性血清及犬巴贝斯虫阳性血清之间均无交叉反应;批内、批间重复性试验的CV均15%;保存于4℃中的包被板稳定性90d。用该方法检测76份犬血清中的弓形虫抗原,阳性率为5.26%。结论建立的双抗体夹心ELISA方法特异、敏感,重复性好,可用于犬弓形虫感染的早期检测。     

AIDS的HIV-1和HIV-2抗体的快速检测方法

美国的OrasureTechnology(口腔稳健技术公司 )于 2 0 0 4年 3月 2 4日收到美国 (食品与药品管理局 ,FDA)对它的O raquick快速检测HIV 1和HIV 2抗体方法的批准。此试验方法既可以用指尖血 ,又可以用静脉血同时检测上述两种抗体。这种单一的快速检验HIV 1和HIV 2两种毒株的方法可以为广泛的检查、治疗与预防HIV/AIDS所用。在一次新闻发布会上 ,口腔稳健技术公司的总裁和执行长官MikeGausling说 :“在美国出现HIV 2较大流行的城市地区 ,和当要求检测HIV 2作为正常检查项目的一部分的国家 ,这种方法就具有特别重要的意义”。AIDS…     

建立双抗原夹心酶免疫试验对人畜布鲁氏菌抗体检测的研究

目的为人畜布鲁氏菌病(布病)的血清学诊断、监测及流行病学调查提供特异、敏感、快速的试验方法。方法在制备高滴度的布鲁氏菌(布氏菌)抗原及其抗原辣根过氧化物酶结合物基础上。建立了检测人畜布氏菌抗体的双抗原夹心酶免疫试验(DAgS-EIA),包括常规双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)、双抗原夹心酶免疫斑点试验(DAgS-DIEA)以及快速双抗原夹心ELISA(快速DAgS-ELISA),并对影响本试验的主要因素因素进行了试验。结果制备了高滴度的布氏菌抗原及其抗原酶结合物和冻干制品。并在此基础上,建立了常规DAgS-ELISA及DAgS-DIEA以及快速DAgS-ELISA检测人畜布氏菌抗体方法。经对115份布病患者血清检测结果,阳性率以DAgS-ELISA为最高(61.7%),其余依次为RBPT(58.1%)I、-ELISA(55.6%)、DAgS-DIEA(53.7%)、及SAT(44.2%)且用DAgS-EIA检测布氏菌感染羊、牛、猪及实验动物家兔、豚鼠和小鼠均为强阳性反应,而对正常人、羊、牛、猪及实验动物血清均为阴性反应。结论双抗原夹心酶免疫试验检测人畜血清布氏菌抗体,不仅特异、敏感、快速、简便而且仅需制备单一的布氏菌抗原酶结合物就可对人及各类动物血清布氏菌抗体进行检测。     

戊型肝炎病毒抗体双抗原夹心法ELISA的建立与初步应用

目的　建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法　将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血清建立双抗原夹心ELISA ;用 4 0 0份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况 ;用 3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂 ;用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛、绵羊、山羊、猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果　建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法 ,对 4 0 0份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好 ,并且有更高的s/co比值 ;与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早 ,尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂 ;在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体 ,其中猪抗体的阳性率最高 ,表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论　利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA ,并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。     

HIV-1/2抗体自我检测的应用现状

艾滋病病毒(HIV)自我检测(简称自检)是现有HIV检测服务的补充途径。目前,全球共有4种快速检测试剂被批准用于HIV自检,16个国家有相关的政策支持HIV自检或者(和)销售HIV快速检测试剂用于HIV自检。HIV自检的开展可能受HIV自检试剂的准确性、检测前后的咨询、自检费用等因素的影响。为了解HIV自检的准确性、可行性、接受性等,从国内外开展情况、方法学评价、社会学评价对HIV自检进行综述。     

单克隆抗体双抗体夹心ELISA检测日本血吸虫病人循环抗原

本文用抗日本血吸虫肠相关抗原的单克隆抗体Ｓｊ１１６和Ｓｊ１０ｃ作双夹心ＥＬＩＳＡ检测粪检阳性的血吸虫病人血清中的循环抗原，阳性率达９３．４％。正常人假阳性率为６．７％。与肺吸虫、华支睾吸虫、旋毛虫及囊虫病的交叉反应分另伪３．２％、０、１３．３％和１３．３％。     

单克隆抗体双抗体夹心ELISA检测日本血吸虫病人循环抗原

本文用抗日本血吸虫肠相关抗原的单克隆抗体Ｓｊ１１６和Ｓｊ１０ｃ作双夹心ＥＬＩＳＡ检测粪检阳性的血吸虫病人血清中的循环抗原，阳性率达９３．４％。正常人假阳性率为６．７％。与肺吸虫、华支睾吸虫、旋毛虫及囊虫病的交叉反应分别为３．２％、０、１３．３％和１３．３％。     

牛呼吸道合胞体病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的建立牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法。方法以重组纯化的BRSV-G蛋白免疫家兔和小鼠,制备抗G蛋白的多克隆抗体(PcAb)和单克隆抗体(MAb),方阵滴定法优化DAS-ELISA方法抗体工作浓度及反应条件,并对其敏感性、特异性、符合率进行验证。结果获得5株稳定分泌抗G蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分泌抗体亚类均为IgG1型κ链,Western blot、IFA试验表明PcAb和MAb均与G蛋白和BRSV发生特异性反应,MAb作为捕获抗体的最佳包被浓度为2.5μg/mL,PcAb作为检测抗体最佳工作浓度为5μg/mL,判定临界值为0.22,最低检测限为1.43μg/mL,批内和批间重复性试验变异系数均小于10%,与常引起牛呼吸道疾病的几种病原均无交叉反应,与RT-PCR的敏感性、特异性、符合率分别为92.0%、100%、95.6%。结论建立的检测BRSV的DAS-ELISA方法可用于临床样品的大规模检测,为BRSV疫情的监测和快速诊断奠定了基础。     

ELISA双抗原夹心法检测内脏利什曼病抗体的研究

目的观察rK39抗原酶联免疫吸附试验双抗原夹心法(ELISA夹心法)检测内脏利什曼病抗体用于内脏利什曼病诊断与宿主动物感染调查的可行性。方法采用ELISA夹心法与rK39免疫层析试条法(ICT)同步检测内脏利什曼病抗体。结果 5种家畜血清229份,7种鼠类标本238份,ELISA夹心法和rK39 ICT法抗体检测均阴性;接种利什曼原虫灰仓鼠、草原兔尾鼠标本33份,13份阳性,阳性率39.4%;塔里木兔标本119份,阳性7份,阳性率5.9%;非疫区儿童血清29份,全部阴性;疫区无内脏利什曼病症状人血清250份,4份两种方法均阳性,阳性率均为1.6%;住院内脏利什曼病病人血清67份,两种方法的阳性率分别为68.7%和67.2%。共检测人和其他动物标本965份,两种方法的阳性符合率98.6%,阴性符合率99.9%。ICT相同显色等级的阳性标本,ELISA跨10个滴度。结论 ELISA夹心法可检测多种动物内脏利什曼病抗体,抗体滴度具有定量意义。该方法适用于内脏利什曼病诊断、疗效观察和流行病学调查。     

ELISA双抗原夹心法检测鼠疫FI抗体的效果评价

目的比较ELISA双抗原夹心法与IHA法检测人血清中鼠疫FI抗体的最低检出限,符合率以及检测ELISA的特异性,以确定ELISA检测技术能否在鼠疫监测、诊断和流行病学调查中得到应用。方法分别用ELISA双抗原夹心法和IHA（间接血凝法）检测血清298份和鼠疫阳性诊断血清1份。结果ELISA双抗原夹心法检出4份阳性血清,IHA也检出4份阳性血清,2种方法阳性检出率无差别,符合率为75％,最低检出限均为1：160。结论ELISA特异性强,阳性检出率与IHA相当,结果容易判定,可以在鼠疫病例诊断及鼠疫监测中作为常规方法推广使用。     

ELISA双McAb夹心法检测鼠疫F1抗原

对应于同一F1抗原分子且不相互阻断的2株F1 McAb,分别制备酶标抗体并包被反应板,用于ELISA双McAb夹心法检测鼠疫F1抗原。以PcAb-RIHA和四步检查为对照,检测不含F1抗原的细菌8株,非鼠疫疫区8种动物的新鲜和腐败标本723份,检测结果全部阴性,和四步检查结果相同,PcAb-RIHA出现非特异反应45份。检测鼠疫强毒菌18株和感染鼠疫标本27份,GMT比PcAb-RIHA高2~4和2~3。本法特异性、敏感性、试剂稳定性均高于PcAb-RIHA。应用于鼠疫疫源地调查、疫情监测、人间疫情判定、细菌学研究效果良好。     

应用混合单抗双抗体夹心-ELISA法检测肺吸虫循环抗原

用混合单克隆抗体双抗体夹心-ELISA法检测19例痰检虫卵阳性肺吸虫病人,血清中循环抗原全部(100％)皆呈阳性反应。59例根据临床和实验室证据(三项以上免疫学试验呈阳性反应)确诊者,56例(94.9％)显示阳性。在治疗后6个月-3年患者的15例中,14例(93.3％)转为阴性,另一例仍呈阳性反应,因系采用硫双二氯酚治疗未完成疗程者。89名正常人和109例其它7种寄生虫病人,全部皆为阴性,本试验未出现任何假阳性和交叉反应。     

一种唾液快速检测HIV-1/2型抗体试剂的现场评价

目的对一种唾液快速检测艾滋病病毒Ⅰ/Ⅱ型(HIV-1/2)抗体试剂进行现场评价,考核其现场使用的敏感性和特异性,以及与血液HIV-1/2抗体检测试剂的一致性。方法采集247例已知HIV感染者、1 090例正常献血人员、60例患有其它疾病的患者(包括孕妇、肿瘤患者、一般疾病患者),以及109例HCV感染者和119例未知HIV感染状况的吸毒人员的唾液标本,现场使用Vanguard OMTTM唾液HIV-1/2抗体快速检测试剂盒(CalypteBiomedical生产)进行检测,同时平行采集上述人群的血液标本,使用Vironostika HIV Uni-FormⅡplus O(BioMerieux生产)进行对比测试。结果247例已知HIV感染者中,247例唾液标本HIV-1/2型抗体检测均为阳性。1 259例血液酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HIV抗体阴性人群中,1 257例唾液检测为阴性,2例为阳性。119例吸毒人员中,28例血液标本HIV阳性中,唾液标本检出27例。91例HIV阴性中检出阴性90例。该唾液HIV抗体快速检测试剂,敏感性为99.64%,特异性为99.78%。与ELISA检测的一致性为99.75%。结论唾液HIV-1/2型抗体检测试剂与现行的血液ELISA检测结果相近。唾液标本的采集方便而且危险性小,推荐在采血较困难的人群、基层医疗机构、VCT门诊等,可考虑使用唾液HIV-1/2型抗体快速检测试剂进行HIV抗体初筛检测。     

区分HIV-1p24抗原和HIV抗体检测方法的临床应用

目的了解艾滋病病毒(HIV)-1p24抗原和抗体联合检测在临床应用的价值。方法总结从2012-2016年HIV-1p24抗原和抗体联合检测并且能区分是抗原还是抗体阳性的临床结果,并和不能区分抗原抗体的四代酶联试剂结果比较,对其中HIV-1p24抗原阳性的样本进行CD4+T淋巴细胞及HIV核糖核酸(RNA)的检测。结果 2012-2016年共检测HIV-1p24抗原和抗体联合检测样本10 476例,其中HIV抗体阳性777例,HIV-1p24抗原阳性36例,其中抗原抗体同时阳性8例,单独HIV-1p24抗原阳性28例。结论 HIV-1p24抗原和抗体联合检测敏感性高、特异性强,尤其是能将抗原和抗体阳性区分开来,大大缩短了窗口期,提高了HIV急性期感染的检出率。     

双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的建立双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原(Cag)。方法采用两株抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,应用双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫CAg,并摸索该法的最佳实验条件。对感染大鼠、小鼠、疑似和确诊广州管圆线虫病病例血清进行检测,评价方法的敏感性;对日本血吸虫、肺吸虫、旋毛虫、囊虫病人血清进行交叉反应试验,评价方法的特异性。结果10μg/ml单抗包被,酶标记单抗1∶1 600稀释为最佳工作浓度。利用该法检测不同血清广州管圆线虫循环抗原的敏感性为84.2%~87.2%,特异性为100%。结论建立的双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原具有敏感性高、特异性强和经济、简便易行等优点。     

结核分枝杆菌MPT64双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

目的 建立结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白MPT64的双抗体夹心ELISA检测方法并评价初步应用效果。方法 采用间接ELISA和ELISA叠加试验在各株抗MPT64 mAb中筛选出亲和力较高的识别不同抗原表位的配对抗体;Protein A亲和层析纯化配对的2株mAb腹水,其中1株mAb偶联生物素(Biotin)作为检测抗体,另1株作为捕获抗体,棋盘滴定法优化捕获抗体和检测抗体的工作浓度,建立双抗体夹心ELISA方法;以常规条件作为初始反应条件,依次优化包被、封闭、抗原、抗体以及底物反应环节的条件;以MPT64抗原检测评估建立的ELISA方法的检测限、线性范围、精确性、准确性和特异性;采用该方法检测Mtb H37Ra不同阶段培养上清中MPT64含量,初步评价应用效果。结果 ELISA法成功筛选出配对抗体H2F4和A5B2 mAb;液相色谱法从腹水中纯化获得的mAb滴度分别为1∶102 400、1∶51 200。以生物素偶联的A5B2 mAb作为检测抗体,以H2F4 mAb为捕获抗体,建立并优化MPT64双抗体夹心ELISA方法,确定的试...     

应用混合单抗双抗体夹心——ELISA法检测肺吸虫循环抗原

用混合单克隆抗体双抗体夹心—ELISA法检测了19例痰检虫卵阳性的肺吸虫病人血清中循环抗原,全部(100％)皆呈阳性反应。59例根据临床和实验室证据(三项以上免疫学试验呈阳性反应)确诊者,56例(94.9％)显示阳性。15例治疗后6个月—3年患者14例