分级定量PCR检测血清HBV DNA

目的利用竞争ＰＣＲ法建立分级测定ＨＢＶＤＮＡ含量的定量方法．方法设立３个标准竞争模板（１０２ｃｏｐ,１０４ｃｏｐ,１０６ｃｏｐ）,分别和恒量的待测模板混合,分别进行４０,３０,２０次循环的ＰＣＲ扩增,最后凝胶电泳分离待测模板和竞争模板的ＰＣＲ产物,测定两者的荧光强度的比值,计算待测模板的初始量．结果对乙型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ定量表明,１２份ＨＢｅＡｇ阳性血清,ＨＢＶＤＮＡ的血清浓度在６×１０７～１×１０１１ｃｏｐ／Ｌ,而１２份ＨＢｅＡｂ阳性血清只有７份可检出ＨＢＶＤＮＡ,它们的血清浓度均在３×１０８ｃｏｐ／Ｌ以下,其余５份用该ＰＣＲ方法,检测不到．结论该方法可用于ＨＢＶＤＮＡ以及其他病原体ＤＮＡ的定量     

HBV DNA荧光定量PCR检测的临床意义

乙型肝炎病（ＨＢＶ）毒核酸定量测定方法经过近几年的长足发展,迄今已有数种检测设备和商业化试剂盒面市,其中Ｒｏｃｈｅ公司新开发的Ｌｉｇｈｔｃｙｃｌｅｒ荧光定量ＰＣＲ仪和深圳匹基公司推出的ＨＢＶ荧光定量ＰＣＲ（ＦＱ－ＰＣＲ）检测法的临床应用鲜见报道。我们采用上述设备和试剂定量测定ＨＢＶ ＤＮＡ并探讨其临床意义。 一、资料和方法 １．研究对象：我所２００１年１月至６月收治的门诊和住院患者共１５３例。 ２血清标志物检测：由本所临床检验室测定。ＨＢＶ标志检测采用军事医学科学院四环公司研制的试剂盒,ＨＢＶＤＮＡ…     

荧光定量PCR法检测HBV感染者精液HBV DNA及其临床意义

乙型肝炎病毒 (HBV )感染的病原诊断及抗病毒疗效判断主要依赖于血清特异性抗原抗体和HBVDNA的检测 ,HBVDNA是复制活动最直接和可靠的指标 ,而血清检查结果常不能反映其精液的感染状况。为了解乙型肝炎患者精液感染情况及传染性 ,采用荧光定量PCR(FQ PCR)技术对 5 7例乙型肝炎患者精液HBVDNA作定量检测 ,现将结果报告如下。材料与方法一、标本来源及处理2 0 0 1年 6月～ 10月我院感染科门诊男性HBV感染者5 7例 ,年龄 2 0～ 4 0岁 ,平均 2 9.3岁。血清HBsAg均阳性。将精液置 37℃温箱内温化 30min。行精液常规分析 ,标本置 - 2…     

PCR荧光定量检测血清结核杆菌DNA在临床的应用

结核病的诊断主要靠临床及X线影像资料,通过痰涂片诊断阳性率低,结核菌培养虽能诊断结核,但培养时间长,不能满足临床需要。PCR技术操作简单,出结果时间短,但目前主要应用在乙肝病毒和性病检测上。作者通过检测结核患者血清中的TB-DNA,或许能为结核病的早期诊断提供帮助。     

定量PCR检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及其临床意义

目的:了解不同临床类型乙型肝炎患者HBV DNA含量并探讨其临床意义。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测163例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,应用ELISA法检测上述患者HBV感染血清免疫学标志物(HBV-M),并对两者进行比较。结果:血清HBV DNA水平在不同乙型肝炎临床类型中无显著性差异(P>0.05);与HBV-M对比,HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性病人的检出率为87.76％,HBsAg、抗-HBe、抗HBc病人的检出率为45.71％,HBsAg、抗-HBc病人的检出率为42.86％,抗-HBc单项阳性病人的检出率亦达40.00％;血清HBVDNA含量与黄疸的程度及转氨酶水平的高低未见相关。结论:提示HBV DNA的复制状态与不同乙型肝炎临床类型无明显相关关系;HBV DNA含量高低与肝功能受损程度亦无相关关系。     

荧光定量PCR检测血清和外周血单核细胞中HBV DNA含量及其意义

通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测慢性乙型肝炎及肝癌患者血清和外周血单核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量,分析两者的相关性,阐述:HBV感染PBMC在乙型肝炎慢性化和向肝癌恶性转化中的作用。     

有限稀释定量PCR检测血清HBV DNA的临床应用及意义

本文应用有限稀释PCR技术,以已知浓度的DNA为参比标准,定量检测慢性乙型肝炎(CFIB)患者血清中HBV DNA的浓度,观察其对α-干扰素(IFN)抗病毒治疗效果及预后的意义.现将结果报告如下.     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及临床价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应法定量检测乙型肝炎病毒(HBV)核酸的临床应用价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应定量检测1962例乙型肝炎患者血清HBV DNA水平并与血清HBV标志物进行比较,并对35例乙型肝炎患者在拉米夫定治疗前后血清HBV DNA含量及相关指标作动态观察。结果乙型肝炎患者HBVDNA定量范围在6.79×102～1.95×109拷贝/毫升之间,在HBeAg阳性患者,其检出率和定量拷贝数较高。拉米夫定治疗后患者外周血HBV DNA载量下降明显。结论荧光定量PCR法是一种相对准确、灵敏度高、特异性强的定量检测HBV DNA的技术,对乙型肝炎诊断、指导、临床用药和疗效监测方面具有实用价值。     

应用荧光定量PCR技术检测HBV DNA低拷贝样品及临床意义分析

目的：观察荧光定量PCR技术对HBVDNA低拷贝样品检测的情况并探讨其临床意义。方法：采用荧光定量PCR和改良PCR法对一系列不同拷贝数的临床标本平行进行检测。结果：在电泳分析时PCR产物的亮度与样品的拷贝数呈正相关，〉10^3copies／ml的样品能经PCR扩增得到明亮的特异产物条带，10^3copies／ml的样品也可得到特异的弱条带，但10^2copies／ml的样品无法检测到特异产物，并有明亮的引物聚合体产生。结论：荧光定量PCR技术的检测准确下限为10^4copies／ml，10^3copies／ml的样品检测时存在很大的随机性，这种条件下的样品并不能用荧光定量PCR的方法进行准确检测，应该采用其他更灵敏的方法。     

2种PCR试剂盒定量检测血清HBV DNA含量的比较

目的探讨AMPLIPREP-COBAS TAQMAN法(罗氏COBAS法)和北京鑫诺美迪PCR-荧光探针"一管法"检测血清HBV DNA含量的性能差异。方法采用2种方法同步检测175例乙型肝炎患者血清样本,并将黄疸、溶血和脂血标本作为干扰样本,分析2种方法的相关性、一致性和抗干扰性。取一已知定量为2.24×109IU/ml的标本,用阴性血清做1+9(即1∶10)的稀释,并依次稀释至2.24×10 IU/ml,比较2种方法的线性范围和灵敏性的差异。结果 175份均有数值的标本中,2种试剂检测结果比较差异无统计学意义。2种试剂对黄疸、溶血和脂血标本的定量值影响不大。对于HBV DNA1.70×108IU/ml的样本,罗氏COBAS法结果只显示1.70×108IU/ml,而"一管法"无须稀释仍能准确定量;对于HBV DNA1.00×102IU/ml的样本,"一管法"仅能检测到病毒,而罗氏COBAS法的稳定性和线性更好。结论 PCR-荧光探针"一管法"与进口罗氏COBAS法具有良好的一致性,且省时、省力,价格低廉,适合在我国推广应用。     

PCR检测HBV感染患者血清HBV DNA的临床意义

目的探讨急、慢性乙型肝炎及与ＨＢＶ感染相关的肝硬变和肝癌患者血清ＨＢＶＤＮＡ的临床意义．方法应用ＰＣＲ技术检测不同ＨＢＶ感染２０５例，患者血清ＨＢＶＤＮＡ，并与正常人２０例作比较．结果ＨＢＶ感染患者２０５例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性率为６９３％，慢性乙肝、乙肝后肝硬变和肝癌患者的阳性率分别为７６４％，７１９％和７００％，显著高于急性乙肝患者２１７％的阳性率（Ｐ＜００１）；ＨＢｅＡｇ（＋）患者血清ＨＢＶＤＮＡ阳性率为９３６％，显著高于ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）／（－）和ＨＢｓＡｇ（－）患者的阳性率（４５６％，２５０％和１２５％，Ｐ＜００１）；血清ＨＢＶＤＮＡ阳性和阴性两组患者的血清ＡＬＴ水平无明显差异（Ｐ＞００５）．结论血清中ＨＢＶＤＮＡ持续存在可能与乙型肝炎的慢性化有关，而与ＨＢＶ感染患者的肝损伤无明显关系     

孕妇血清HBV DNA定量检测的临床意义

目的:探讨HBV DNA定量检测在乙型肝炎病毒宫内感染监测中的临床意义。方法:将134例HBsAg(+)孕妇及其所生婴儿作为研究对象,按孕妇HBsAg定性结果分为阳性组和阴性组。孕妇产时取血;新生儿出生2小时内取血,并注射高效价乙肝免疫球蛋白(HBIG)及乙肝疫苗,于7、12月龄时再分别取血留检。采用英国罗氏公司生产的Light Cycler Quantification直接进行ABV DNA定量测定,同时与HBsAg和HBV DNA定性检测结果比较。结果:HBsAg阴性组中依然有17.0％的病例HBV DNA定性阳性,且HBV DNA定量均值与阳性组比较无统计学差异(P>0.05);新生儿血清HBV DNA阳性病例的母亲血清HBV DNA定量均值明显高于阴性病例(P<0.01);HBVDNA阳性的新生儿母婴阻断成功率明显降低(P<0.01)。结论:用分子生物学技术证明孕期HBV DNA定量检测是监测HBV宫内感染程度的可靠方法。     

PCR技术检测血清中HBV－DNA与乙肝标记33例临床分析

ＰＣＲ技术检测血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ与乙肝标记３３例临床分析李澍虹，段芳龄，陶笃学（河南医科大学第二附属医院内科郑州４５０００３）ＰＣＲ技术是聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）的简称，它是新近建立的一种分子生物学技术，是模拟...     

定量聚合酶链反应检测血清中HBV DNA及其临床应用

为探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因含量与干扰素治疗效果的关系，采用信号引物能量转移定量ＰＣＲ方法，检测了２５例慢性乙型肝炎（慢乙肝）患者干扰素治疗前后的血清ＨＢＶＤＮＡ含量。结量显示，慢乙肝血清ＨＢＶ基因含量范围在１０４至１０１１拷贝／毫升之间；干扰素完全反应组治疗前血清ＨＢＶＤＮＡ含量（１０６．１３±２．４）显著低于（Ｐ＜０．０１）部分反应（１０７．８４±３．３）和无反应组（１０６．６８±４．８），表明血清ＨＢＶＤＮＡ含量与干扰素治疗效果有关，而与ＡＬＴ水平关系不明８显。研究结果提示定量检测ＨＢＶＤＮＡ是预测和评价干扰素治疗效果的重要指标之一。     

PCR检测血清中HBV—DNA及其临床意义

应用聚合酶链反应(PCR)结合Southern blot核酸杂交和DNA直接杂交技术,检测50例乙型肝炎病毒(HBV)感染后不同血清学标志的血清标本及5例无任何HBV血清学标志的血清标本中的HBV DNA,并与血清学检查结果比较。结果发现PCR结合Southern blot核酸杂交的灵敏度明显高于DNA直接杂交技术,而且还能直接反映患者血液是否有感染性。此外,前者还能直接反映病毒在体内的复制情况,澄清模棱两可的血清学结果。     

慢性活动性肝炎血清HBV DNA的PCR检测

应用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction PCR)对抗—HBs、抗—HBc 单项和联合阳性及乙肝五项标志物全阴性共49例慢性活动性肝炎患者,进行 HBV DNA 检测。结果总阳性率59.1％(29/49)。其中单项抗—HBs 阳性17例中检出5例(29.6％);抗—HBc 15例中检出14例(93.0％);两项均阳性11例中检出9例(88.8％);乙肝标志物全阴6例中检出1例。提示慢性活动型肝炎病例,即使抗—HBs 阳性、乙肝标志物全阴性仍可能潜在地存在低水平的 HBV 复制,只能用 PCR 法测出其阳性。这可能是其它的检测法认为慢性活动型肝炎病情不稳定的原因。     

建立PCR—ELISA定量检测HBV DNA的技术

目的 建立一种敏感特异和精确的乙型肝炎病毒基因ＰＣＲ及其产物酶联杂交定量分析技术。方法 制备了一种与野生扩增片段等长的ＰＣＲ内参照;设计了一对ＨＢＶ基因组Ｓ区基因扩增引物,上游引物的５′－端用生物素修饰,可同时扩增长为３１９ｂｐ的野生和内参照片段。两套捕获探针可分别与竞争ＰＣＲ产物中的野生片段和突变片段杂交,在同一反应管内,加入已知量内参照及待测ＨＢＶ ＤＮＡ标本。进行ＰＣＲ扩增,然后用酶联杂交法进行产物分析。根据Ｃｌｅｍｅｎｔｉ等介绍的公式计算待测标本中的ＨＢＶＤＮＡ标本。进行ＰＣＲ扩增,然后用酶联杂交法进行产物分析。根据Ｃｌｅｍｅｎｔｉ等介绍的公式计算待测标本中的ＨＢＶＤＮＡ含量。结果 灵敏度达到１０＾－３ｆｍｏｌ／Ｌ。在该法中,由于有ＰＣＲ过程中的特异引物及酶联杂交过程的特异探针两个环节的限制,因此具有很