软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠TIMP-1、TIMP-2基因调节及蛋白表达的影响

探索肝纤维化发生的分子机理 ,尤其是ＴＩＭＰ 1、ＴＩＭＰ 2的作用。采用免疫组织化学和原位杂交的方法分别测定组肝纤维化大鼠不同治疗前后ＴＩＭＰ 1、ＴＩＭＰ 2的基因调节和蛋白表达。结果显示 ,ＣＣＬ4 模型组ＴＩＭＰ 1、ＴＩＭＰ 2ｍＲＮＡ及蛋白水平明显高于治疗组。正常组大鼠肝组织无 1例阳性。ＴＩＭＰ 1、ＴＩＭＰ 2与肝纤维化形成密切相关 ,软肝缩脾丸对ＴＩＭＰ 1、ＴＩＭＰ 2的基因和蛋白表达有一定的抑制作用。软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠TIMP-1、TIMP-2基因调节及蛋白表达的影响@申德林!450042$郑州解放军第一五三中心…     

硫代反义寡核苷酸对实验性肝纤维化大鼠TIMP-1基因及蛋白表达的抑制作用

观察硫代反义寡核苷酸 (ａｓＯＮ)对实验性免疫性肝纤维化大鼠肝组织中的ＴＩＭＰ 1基因和蛋白表达的抑制作用。根据ＴＩＭＰ 1二级结构基因组的调控序列、结构蛋白和编码区序列等分析 ,设计 4组不同的ａｓＯＮ。利用尾静脉注射将其导入肝纤维化大鼠模型体内 ,通过ＲＴ ＰＣＲ、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的免疫组织化学、原位杂交法、胶原纤维特殊染色及电镜等观察ａｓＯＮ对大鼠肝纤维化的影响。结果表明 ,针对ＴＩＭＰ 1设计的ａｓＯＮ经硫代修饰后在活体内能确切表达并能在ｍＲＮＡ水平上封闭实验性肝纤维大鼠肝组织中ＴＩＭＰ 1的基因和蛋白表…     

实验性肝纤维化时MMP—1,TIMP—1的表达与Ⅰ,Ⅲ型胶原含量？…

为了观察实验性肝纤维化时ＭＭＰ－１、ＴＩＭＰ－１的表达与Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化之间的关系，本文制备了免疫性大鼠肝纤维化模型，运用定量ＲＴ－ＰＣＲ检测肝脏内ＭＭＰ－１、ＴＩＭＰ－１的表达，通过免疫组化检测肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。运用相关理论作统计学分析。结果发现在肝纤维化发生时，Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量的变化有显著相关性；ＭＭＰ－１的表达在肝纤维化组与正常对照组之间未见显著差异，与Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量     

毒素型及免疫型大鼠纤维化肝组织中金属蛋白酶组织抑制因子定位及表达差异

目的 探讨人血自蛋白免疫诱导型及四氯化碳(CCl4)毒素诱导型所致大鼠肝纤维化模型肝组织中金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)定位及表达状态的差异。方法 分别以20％人血白蛋白进行免疫攻击和CCl4毒素攻击大鼠,造模结束后对大鼠肝组织进行H-E、V-G染色及电镜观察;同时研究TIMP-1、TIMF-2蛋白及mRNA定位及表达状态。结果 造馍结束后,免疫诱导型模型肝组织病理改变具有进行性加重趋势,TIMP-1、TIMP-2 mRNA及蛋白表达强度高、持续时间长：而毒素诱导型模型具有TIMP-1、TIMP-2mRNA及蛋白表达强度弱、肝纤维化持续时间短等特点。免疫诱导实验组肝脏中TIMP-1、TIMF-2相关抗原表达在肌成纤维细胞、成纤维细胞,以汇管区及纤维间隔中最明显,阳性信号位于细胞胞质中,未见细胞核表达。原位杂交检测结果亦相似。结论 毒素诱导型肝纤维化模型自然吸收较快,不利于抗肝纤维化药物疗效的观察;免疫诱导型肝纤维化模型自然吸收时间较慢,且在造模结束后1～3个月有逐渐加重趋势,有利于抗肝纤维化药物疗效观察及肝纤维化机制研究。     

反义金属蛋白酶组织抑制因子—1表达质粒对实验性大鼠肝纤维 …

观察反义金属蛋白酶组织抑制因子－１（ＴＩＭＰ－１）表达质粒对实验性大鼠肝纤维化的影响。方法运用逆转录巢式和重组ＤＮＡ技术,构建大鼠反义ＴＩＭＰ－１真核细胞表达质粒,经脂质体包埋后,利用腹腔注射将其导入免疫性大鼠肝纤维化模型体内;通过ＲＴ－ＰＣＲ,Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化及Ｍａｓｓｏｎ胶原染色观察反义ＴＩＭＰ－１表达质粒对大鼠肝纤维化的影响。结果反义原的免疫组化以及     

基质金属蛋白酶组织抑制因子mRNA及蛋白在肝硬化组织中的定位研究

基质金属蛋白酶组织抑制因子 (ＴＩＭＰｓ)具有调节金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)活性的作用。为了探明ＴＩＭＰ 1和ＴＩＭＰ 2蛋白及ｍＲＮＡ在肝硬化组织中的表达情况及分布状态 ,从免疫病理学及分子病理学角度研究ＴＩＭＰ 1和ＴＩＭＰ 2在肝硬化发病机制中所起的作用。以抗ＴＩＭＰ 1和ＴＩＭＰ 2单克隆抗体和ＴＩＭＰ 1和ＴＩＭＰ 2ｃＤＮＡ探针为试剂 ,采用免疫组织化学法和原位杂交技术检测肝硬化组织中ＴＩＭＰ 1和ＴＩＭＰ 2蛋白及ｍＲＮＡ。结果表明 ,4 0例肝硬化患者肝组织中ＴＩＭＰ 1和ＴＩＭＰ 2蛋白以及ｍＲＮＡ表达的阳性率为 10 0…     

扶正化瘀方对DMN诱导肝纤维化大鼠肝脏MMP-2活性的影响

探讨扶正化瘀方对二甲基亚硝胺 (ＤＭＮ)诱发的肝纤维化大鼠肝脏Ⅳ型胶原含量、Ⅳ型胶原酶 (ＭＭＰ 2 )活性及基质金属蛋白酶抑制物 2 (ＴＩＭＰ 2 )含量表达的影响。采用ＤＭＮ诱导的大鼠肝纤维化模型 ,设正常组、模型组和扶正化瘀方治疗组 ,分别用生化方法测定其肝组织Ｈｙｐ含量、血清ＡＬＴ活性和Ａｌｂ含量 ;Ｅｎｖｉｓｉｏｎ两步法 (免疫组化 )测定肝组织Ⅳ型胶原含量和ＴＩＭＰ 2含量 ;酶图法测定肝组织ＭＭＰ 2活性。结果表明 :①扶正化瘀方能显著降低模型大鼠肝组织Ｈｙｐ及血清ＡＬＴ ,显著升高血清Ａｌｂ ;②扶正化瘀方能够明显降低ＤＭＮ诱发的肝纤维化鼠肝脏的Ⅳ型胶原和ＴＩＭＰ 2 ,显著升高其ＭＭＰ 2活性。扶正化瘀方能够明显改善ＤＭＮ诱发的肝纤维化鼠的病理改变和生化指标 ;能够明显升高ＤＭＮ诱发的肝纤维化大鼠肝脏ＭＭＰ 2活性 ,并显著降低其ＴＩＭＰ 2的表达 ,促进过多的Ⅳ型胶原的分解 ,加速肝窦毛细血管化的恢复。扶正化瘀方对DMN诱导肝纤维化大鼠肝脏MMP-2活性的影响@徐光福!200032$上海中医药大学肝病研究所 @陆雄!200032$上海中医药大学肝病研究所 @刘成海!20003...     

基质金属蛋白酶—1,反义金属蛋白酶组织抑制因子—1表达质粒？…

目的 观察基质金属蛋白酶－１（ＭＭＰ－１）,反义金属蛋白酶组织抑制因子－１（ＴＩＭＰ－１）表达质粒对大鼠肝纤维经的影响。方法 运用重组ＤＮＡ技术,构建大鼠ＭＭＰ－１,反义ＴＩＭＰ－１,真核细胞表达质粒,经脂质包埋后,利用腹腔注射将其导入免疫性大鼠纤维化模型体内,观察其对大鼠肝纤维化的影响。结果 ＭＭＰ－１,反义ＴＩＭＰ－１表达质粒均可促进肝脏中Ⅰ,Ⅲ型胶原的降解（Ｐ〈０．０５－Ｐ〈０．０１）,且作     

基质金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化

基质金属蛋白酶是肝内细胞外基质降解酶的重要酶类肝内ＭＭＰ家族包括ＭＭＰ－１，ＭＭＰ－２，ＭＭＰ－３及其抑制因子ＴＩＭＰ－１，ＴＩＭＰ－２，ＴＩＭＰ－３，ＭＭＰ主要由肝脏间质细胞合成和分泌，ＴＩＭＰ可由肝实质及间质细胞合成和分履，肝纤维化早期时，肝组织间质胶原酶活性较高。纤维化晚期活性下降，而肝纤维化时肝组织中ＴＩＭＰ－１表达增强，慢性肝炎患者血清ＴＩＭＰ－１水平显著增高，并与肝纤维程度呈显著相关。     

秋水仙碱对肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶—1及其抑制因 …

目的 观察秋水仙碱对纤维化肝脏基质金属蛋白酶－１（ＭＭＰ－１）、基质金属蛋白酶组织抑制因子－１（ＴＩＭＰ－１）表达的影响。从胶原降解的角度探讨秋水仙碱对肝纤维化有无逆转作用及可能存在的机制。方法 制备免疫性大鼠肝纤维化模型,并给予秋水仙碱治疗;通过ＲＴ－ＰＣＲ检测ＭＭＰ－１、ＴＰＭＰ－１的表达,并作Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化以及Ｍａｓｓｏｎ胶原染色。结果 发现秋水仙碱对肝纤维化大鼠ＭＭＰ－１的表达无明     

姜黄素对肝纤维化大鼠瘦素及瘦素受体表达的影响

目的：探讨姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝脏组织中瘦素（leptin）以及瘦素受体（leptin receptor）表达的影响。方法：将22只雄性SD大鼠随机分为3组：正常对照组、模型组、姜黄素治疗组。采用四氯化碳（CCl4）皮下注射制作大鼠肝纤维化模型。制备肝组织切片，行常规HE染色、Masson染色，观察各组大鼠肝脏病理学变化，采用肝纤维化病理分期进行病理学疗效评估；应用免疫组织化学法检测肝组织中瘦素以及瘦素受体的表达。结果：姜黄素对肝纤维化大鼠的肝脏病理分期具有明显的改善作用。并且免疫组织化学检测显示姜黄素能显著减少瘦素与瘦素受体的阳性表达。结论：姜黄素能明显改善实验性大鼠肝纤维化，同时下调肝纤维化大鼠肝脏中瘦素以及瘦素受体的水平，这可能是姜黄素抗肝纤维化作用的机制之一。     

实验性肝纤维化基质金属蛋白酶抑制剂-1的动态变化

我们用大鼠实验性肝纤维化模型,动态地检测肝纤维化过程中ＴＩＭＰ－１的表达量,以探讨ＴＩＭＰ－ｌ与肝纤维化的关系。 一、材料与方法 １．肝纤维化模型的建立： ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠３６只,体重 １８０—２１０ ｇ,由中国医科大学实验动物部提供。随机分组,对照组１５只,模型组２１只。模型组给４０％四氯化碳花生油混合液,以 １．２ ｍｌ／ｋｇ皮下多点注射,每周２次,分别于４、８、１２周末处死大鼠,模型组７只,对照组５只。麻醉后剖腹取肝,相应固定、保存备检。 ２．主要试剂及方法：（１）试剂：ＴＩＭＰ－１抗体为Ｓａ…     

免疫性肝纤维化中肝组织基质金属蛋白酶-1及其抑制因子-1的表达

正常肝脏细胞外基质的合成和溶解维持着动态平衡 ,基质金属蛋白酶 1(ＭＭＰ 1)及金属蛋白酶抑制因子 1(ＴＩＭＰ 1)起着重要的调节作用 ,当二者比例失调时 ,Ⅰ、Ⅲ型胶原降解减少而沉积[1,2 ] ,形成肝纤维化。我们应用ＥＬＩＳＡ方法在大鼠免疫性肝纤维化形成的不同时期同步测定ＭＭＰ 1、ＴＩＭＰ 1的蛋白表达 ,旨在进一步了解二者的动态变化及其作用。一、材料和方法1.主要试剂 :2 0 %人白蛋白 (ＨＳＡ ,ＡｒｍｏｕｒＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉ ｃａｌＣｏｍｐａｎｙ ,ＵＳＡ) ;ＭＭＰ 1及ＴＩＭＰ 1测定 (ＥＬＩＳＡ)试剂盒 (ＴＰＩＩｎＣ…     

IL-10对实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2影响的研究

目的研究IL-10对实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的影响.方法建立大鼠肝纤维化模型并行IL-10干预实验,从正常大鼠(N组)和CCl4诱导肝纤维化大鼠(C组)及IL-10干预肝纤维化大鼠(E组)中取肝脏组织,采用S-P免疫组织化学方法检测分析不同组大鼠肝脏组织中MMP-2的表达状况.结果N组MMP-2阳性染色偶见于窦内皮细胞及肝细胞的胞浆;C组MMP-2阳性染色多见于汇管区新生的胆管细胞及纤维隔内条索状的成纤维细胞,26例标本中阳性13例,强阳性8例.第5周开始MMP-2有阳性表达,第9周阳性表达明显增强;E组MMP-2阳性染色明显减少,多见于汇管区的新生胆管细胞,27例标本中阳性10例,强阳性1例.Redit分析表明3组间MMP-2阳性表达有显著性差异(P＜0.01).结论MMP-2随着大鼠肝纤维化进展阳性表达升高,IL-10对CCl4诱导的大鼠肝纤维化具有保护作用,可明显抑制纤维化的生成和沉积.     

反转录-聚合酶链反应法研究肝星状细胞与细胞间粘附分子-1表达的关系

目的研究肝星状细胞（ＨＳＣ）与细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ１）表达的关系。方法用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流,Ｎｙｃｏｄｅｎｚ密度梯度离心分别分离正常大鼠及四氯化碳实验性大鼠肝纤维化模型中的ＨＳＣ,并进行体外培养,应用免疫组织化学方法和反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术分别观察不同培养时期的ＨＳＣ、正常及造模肝组织中ＨＳＣ的ＩＣＡＭ１的表达。结果正常大鼠新分离的ＨＳＣ中,ＩＣＡＭ１不表达;原代培养第１０天及传代培养第７天的ＨＳＣ表达ＩＣＡＭ１,且随着培养时间的延长ＩＣＡＭ１表达量逐渐增加。四氯化碳实验性大鼠肝纤维化模型中,新分离的ＨＳＣ中即可见ＩＣＡＭ１表达。结论体内动物实验和体外细胞培养表明,ＩＣＡＭ１表达可能与ＨＳＣ活化、肝脏炎性损伤及肝纤维化的发生有关。     

Wnt4／Frizzled2在肝纤维化组织中的表达及其意义

目的观察Wnt4／Frizzled2在肝纤维化模型肝组织中的表达水平变化，探讨wnt信号通路在肝纤维化发生中的作用。方法建立四氯化碳诱导大鼠实验性肝纤维化模型，采用免疫组织化学及免疫印迹技术观察Wnt4／Frizzled2在肝组织中的表达水平变化。结果模型组Ⅰ型胶原表达明显增强，包绕并形成假小叶；免疫组织化学和免疫印迹技术检测发现，肝纤维化模型肝组织Wnt4／Frizzled2的表达水平较正常对照组显著升高。结论非经典Wnt信号通路可能参与实验性肝纤维化的发生。     

RT-PCR法研究肝星状细胞ICAM-1的表达

目的：研究肝星状细胞(HSC)与细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的关系。方法：用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流，Nycodenz密度梯度离心分别分离正常大鼠及CCl4实验性大鼠肝纤维化模型中的HSC，并进行体外培养，应用免疫组织化学方法和RT-PCR技术分别观察不同培养时期的HSC、正常及造模肝组织中HSC的ICAM-1的表达。结果：正常大鼠新分离的HSC中，ICAM-1不表达；原代培养第7天及传代培养的HSC表达ICAM-1，且随着培养时间的延长ICAM-1表达量逐渐增加。CCl4实验性大鼠肝纤维化模型中，新分离的HSC中即可见ICAM-1表达。结论：体内动物实验和体外细胞培养表明，ICAM-1表达可能与HSC活化、肝脏炎性损伤及肝纤维化的发生有关。     

实验性肝纤维化大鼠细胞因子及超微结构的变化和意义

目的:研究四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子β1(TGFβ1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达及定位,血清IL-6、IL-10和IL-18的变化,以及肝组织超微结构的改变.方法:将28只大鼠随机分为正常对照组与模型组,模型组大鼠予以40?l4皮下注射8周后处死.免疫组化技术检测TGFβ1和CTGF在肝脏的表达及细胞内的定位;ELISA检测血清IL-6、IL-10和IL-18;电镜检测肝组织超微变化.结果:与正常组大鼠比较,模型组大鼠肝内TGFβ1和CTGF表达增加,免疫阳性反应信号的主要位于纤维间隔中的细胞浆;模型组大鼠血清IL-6和IL-18升高,而IL-10较正常组降低(P＜0.05 or P＜0.01);超微结构符合肝纤维化改变.结论:TGFβ1、CTGF、IL-6、IL-10和IL-18与肝纤维化的形成发展有关,可作为抗肝纤维化的新途径.     

虫草多糖脂质体对肝纤维化大鼠转化生长因子β-基因表达的影响

目的：探讨冬虫夏草多糖脂质体(CPL)对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子(TGF)β-的影响。方法：动物分为3组,肝纤维化模型组、CPL治疗组和正常对照组,采用Northern杂交技术检测各组大鼠肝组织TGF-β基因的表达。结果：CPL治疗组大鼠肝脏中TGF-βmRNA表达量明显下降,与模型组大鼠比较差异有显著性(P&;lt;0.01)。结论：CPL可明显下调实验性肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1mRNA的表达。     

软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ，Ⅲ型胶原基因调节及蛋白表达的影响

目的：阐明软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠肝脏胶原基因调节及蛋白表达的影响,探索;肝纤维化发生的分子生物学机理,方法：采用免疫组化和原位杂交技术分别测定各组肝纤维大鼠治疗前后肝脏I,III型胶原的基因调节和蛋白表达,结果CCl4模型组大鼠肝脏,I,III型胶原mRNA及蛋白水平明显高于治疗组,正常组大鼠肝组织无1例阳性,结论：软肝缩脾丸治疗可显著降低肝纤维化大鼠肝脏I,III型胶原基因和蛋白表达,从而发挥其抗肝纤维化作用。