烟酰胺增强非聚焦超声杀伤GLC-82肺腺癌细胞系

目的 研究烟酰胺对非聚焦超声杀伤培养的GLC-82肺腺癌细胞的增敏作用.方法 实验分A(空白对照)组,B(NA单独作用)组,C(NFU单独作用)组,D(NA增敏NFU作用)组;MTT法测细胞的存活率;增敏比(SER)参数分析增敏作用;荧光显微镜及扫描电镜观察细胞形态结构;流式细胞术测细胞周期和凋亡率.结果 NA对GLC-82细胞的抑制及NFU的增敏作用均呈剂量依赖性;经NA与NFU共同作用24 h后细胞凋亡小体形成,表面的微绒毛和丝状结构明显减少,其细胞的凋亡指数高于烟酰胺及非聚焦超声单独作用组,并使细胞阻滞于S和G2期.结论 一定浓度的NA对NFU杀伤悬液中培养的GLG-82肺腺癌细胞具有增敏作用,能够显著地提高NFU的杀伤效果.     

非聚焦超声对溶液中不同肺腺癌细胞株及永生化支气管上皮细胞系杀伤作用的实验研究

目的:探讨非聚焦超声(none focused ultrasound,NFU)对悬液中癌细胞的杀伤是否具有普遍性及是否存在差异,为设计NFU灭杀癌性胸腹水的治疗方案提供实验依据.方法:以肺腺癌细胞株(GLC-82、LLC)及永生化支气管上皮细胞系(HBE)为实验对象,将其分为GLC-82、LLC及HBE3个细胞组.采用的NFU剂量为30W/cm2×5 s.分别测试比较O℃及37℃条件下NFU作用后细胞的即刻及24 h存活率、24 h细胞的增殖率及凋亡率.台盼蓝拒染法测细胞存活率;MTT法检测增殖率;流式细胞仪检测凋亡率.结果:(1)3组细胞经NFU辐照后,即刻及实验24 h其存活率、增殖率及凋亡率在3组细胞间差异均无显著性.而实验24 h时细胞的周期变化在3组细胞之间差异有显著性,GLC-82、HBE2组的G1期细胞所占比例多于LLC组,而s期细胞所占比例少于LLC组;(2)Control、NFU 0℃和NFU 37℃3种不同处理方式的细胞其存活率、增殖率、凋亡率差异均有显著性,即NFU 0℃组和NFU 37℃组两组细胞存活率、增殖率明显低于Control组,且NFU 37℃组低于NFU 0℃组;NFU 0℃组和NFU 37℃组两组细胞凋亡率均高于Control组,且NFU 37℃组略高于NFU 0℃组;实验24 h时细胞的周期变化在3种不同处理方式间差异无显著性.结论:NFU对悬液中上述3种细胞均具杀伤作用,提示其对悬液中癌细胞的杀伤具有一定的普遍意义;其灭杀效果与温度环境有关,37℃时具有较好的灭杀效果;超声对悬液中肿瘤细胞的灭杀既有瞬时灭杀作用同时也具持续性灭杀效应.     

聚焦超声对卵巢癌细胞株COC1细胞凋亡和Bcl-2/bax基因表达的影响

目的:研究低频脉冲的聚焦超声对人卵巢癌细胞株COC1的抗肿瘤作用,并探讨其诱导细胞凋亡的分子机制.方法:以低频脉冲聚焦超声(超声频率0.8 MHz,声强83.6 W/cm2,脉冲持续时间50μs)辐照卵巢癌COC1细胞10秒,采用MTT法观察超声对COC1细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪(FCM)、TUNEL法、荧光染色和光、电镜检测细胞凋亡;应用FCM免疫荧光技术观察Bcl-2、bax基因蛋白表达的变化.结果:低频脉冲聚焦超声可明显抑制存活卵巢癌COC1细胞株的增殖,辐照后12 h、24 h、36 h和48 h,COC1细胞MTT光吸收值与对照组相比显著降低;FCM检测超声辐照后6 h的COC1细胞凋亡率达(23.57±4.62)%;Bcl-2蛋白的荧光指数(FI)降低,而bax蛋白FI升高.同时TUNEL法观察到棕褐色着染的凋亡细胞;荧光显微镜和电镜下观察到凋亡小体形成等典型的形态学改变.结论:低频脉冲聚焦超声辐照对人卵巢癌细胞株COC1具有细胞毒作用,其机制为诱导辐照后存活的人卵巢癌细胞株COC1凋亡,bcl-2和bax蛋白可能参与了COC1细胞凋亡过程.     

复频聚焦超声激活血卟啉杀伤离体肿瘤细胞的实验研究

在优选的超声辐照参数下 ,利用复频聚焦超声激活血卟啉 (Hp)杀伤肿瘤细胞K5 6 2 ,SW - 4 80并用MTT法检测分析了杀伤细胞的效率其初步结果为 :单频超声杀伤结果时低频优于高频 ;复频和单频比较 ,复频优于单频。而且杀伤效率不是单频的代数和 ,而是二者和的 2 - 3倍 ;由超声辐照后的孵育时间可以看出 :孵育 16h超声 Hp的杀伤效率高于 4h。     

人肺腺癌GLC-82细胞提取热休克蛋白70抗瘤效应的研究

为了寻找一种肺腺癌有效的治疗方法，我们探索肺癌GLC-82细胞产生的热休克蛋白70(HSP-70)的杀瘤作用。HSP-70的制备如下：常规培养的人肺腺癌GLC-82细胞经43℃30min处理后，置常规培养条件下培育12h，以EDTA．胰蛋白酶复合消化液分散细胞，调整细胞浓度为106／ml，加入10倍体积的细胞裂解液混匀，置4℃ 12～20h，细胞裂解成絮状．经透析浓缩后以低温高速离心，     

用基因芯片研究尼古丁对肺腺癌细胞凋亡基因表达的影响

目的：探讨尼古丁对人肺癌细胞生长的影响及其机制。方法：采用MTT法分析尼古丁处理人肺腺癌细胞SPC-A后生长变化；采用基因芯片技术检测尼古丁处理SPC-A-1细胞前后，细胞凋亡相关基因表达的变化。结果：尼古丁对SPC-A细胞的生长具有显著的促进作用，但随着尼古丁浓度的增大，促进作用也下降。100 μg/L尼古丁处理后，SPC-A-1细胞451个凋亡相关基因中有显著变化的基因有80个，其中，促进凋亡相关基因上调的有 29 个，下调的有13 个；抑制凋亡相关基因上调的有26个，下调的有12个。结论：尼古丁能促进人肺腺癌细胞生长，调节许多凋亡相关基因表达。     

人胚肺成纤维细胞与肺腺癌细胞共同培养时增殖率的变化

用一种新的细胞培养技术，选用人肺腺癌细胞及人胚肺成纤维细胞，将两者这一定顺序定位培养在同一容器内，用原位计数法分别测定两种细胞在１２，３６，６０，８４小时培养的细胞数法计算两种在不同时相的增殖率，观察人肺腺癌细胞和成纤维细胞的相互影响。     

超声弹性成像用于高强度聚焦超声损伤的检测

采用超声弹性成像的方法检测高强度聚焦超声在动物组织内产生的损伤.结果表明,聚焦超声的损伤在应变分布图(弹性图像)上表现为应变较小的区域,即损伤部位的弹性模量较周围组织的大,组织切片的损伤范围和大小也与应变分布图的结果一致.     

人非小细胞肺癌组织中自发性癌细胞凋亡的研究

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高强度聚焦超声治疗胰腺癌致超声通道损伤的机制研究

目的探讨高强度聚焦超声治疗胰腺癌的效果及导致超声通道损伤的机制。方法选择11例诊断明确并接受高强度聚焦超声治疗的晚期胰腺癌患者,行开放手术评价超声通道区组织、器官损伤情况,分析可能机制。结果 8例出现皮肤Ⅰ、Ⅱ度烧伤,超声通道区腹壁呈局限性浅、深筋膜纤维化样改变,肝脏呈充血样改变,胃、十二指肠、空肠、胆囊、胆总管均未发现肉眼可见的损伤。结论高强度聚焦超声治疗晚期胰腺癌有效,其损伤超声通道区组织、器官的可能机制为靶区与皮肤距离较近及消融时间相对较长。     

苏木素复染对免疫组化显色强度定量分析的影响

目的探讨苏木素复染是否影响免疫组化显色反应强度,为免疫组化定量分析的质量控制提供科学依据。方法用免疫组织化学方法检测GLC-82肺腺癌细胞株细胞蜡块中Ki67、Tiam1的表达,检测分为复染组和非复染组;在Nikon显微镜下通过Canon数码像机和Zoom Browser Ex采图软件随机截取样品显色反应细胞图像,用Imagepro Plus图像分析软件,分别测试苏木素复染与不复染时GLC-82细胞Tiam1、Ki67蛋白表达的阳性单位（PU值）,每组各测试100个细胞。结果苏木素复染后GLC-82细胞Tiam1的PU值为（36.76±5.12）,大于未复染Tiam1的PU值（26.64±5.09,t=9.906,P=0.000）,相对偏差为38%。苏木素复染后GLC-82细胞Ki67的PU值为（21.74±4.59）,大于未复染Ki67的PU值（14.37±4.65,t=7.985,P=0.000）,相对偏差为51%。结论经苏木素复染,Tiam1、Ki67的PU值均明显增大,且核表达抗原Ki67的相对偏差明显大于浆表达抗原Tiam1的相对偏差。因此,对免疫组化结果定量分析时,为保证测试结果的可靠性,不应进行苏木素复染。     

声衰减与非线性对双频聚焦声焦域的影响

目的：探讨声衰减与非线性对双频聚焦超声声焦域的影响。方法：利用瑞利积分的线性叠加算法数值模拟计算。并在辐照离体生物组织中进行实验验证。结果：随着声衰减系数的增大与非线性的增强．双频声焦域从“椭球形”变成“蝌蚪形”,并且焦域向着换能器方向移动,但声衰减的影响较非线性大。结论：声衰减与非线性对焦域影响较大,在实际应用中应予考虑。本文在利用瑞利积分的线性叠加算法,研究了媒介声衰减与高声强引起的非线性对差频相干模式下的双频聚焦声场焦域的影响。结果表明,随着声衰减系数的增大与非线性的增加。双频声焦域从“椭球形”变为“蝌蚪形”．并且焦域向着换能器方向移动．但声衰减的影响较非线性大。并在离体牛肝的损伤实验中得到初步验证。     

高强度聚焦超声治疗中空化效应的研究进展

高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)作为一种新技术已经成功的应用于临床治疗,其治疗机制一直是研究热点。本文就HIFU治疗中空化效应进行综述。     

高强度聚焦超声治疗剂量对组织温升影响的研究

测量了高强度聚焦超声(HIFU)定点辐照新鲜离体牛肝脏时，不同声强和辐照时间下的组织焦点温升。根据Pennes传热方程，从理论上分析了高强度聚焦超声定点辐照生物组织前后组织温度变化的规律，研究结果表明；一定的声强下，总有一个辐照闻值时间存在，当辐照时间超过辐照阐值时间后，温升缓慢，声强越大，辐照阐值时同出现得更早l组织焦点温升、相对累积热剂量随声强、辐照时间的增加而增大，当治疗剂量一定时，声强对组织焦点温升的影响大于辐照时间对组织焦点温升的影响。因此，HIFU最适治疗剂量应满足：适度的声强、辐照时间为该声强下的辐照阈值时间。     

双频共焦高强度超声增强仿组织体模毁损效果的初步研究

目的：比较双频共焦模式和单频模式高强度聚焦超声（HIFU）单次辐照毁损灶的大小。方法：分别采用相同声强度的双频共焦HIFU与传统单频HIFU对透明仿组织体模进行不同时间长度的辐照，直接在透明的仿组织体模上测量HIFU毁损灶的长度和直径。结果：双频和单频模式下，随辐照时间的延长毁损灶逐渐增大；相同声强相同辐照时间下，双频HIFU产生的毁损灶显著大于单频模式所致毁损灶。结论：双频共焦模式可以增大HIFU单次辐照毁损灶的体积．为HIFU治疗效率的提高提供了一种新技术。     

聚焦超声结合血卟啉对S180肿瘤细胞的杀伤作用

初步研究聚焦超声激活血卟啉对S180肿瘤细胞的杀伤作用,并探讨其作用的生物学机制。通过台盼蓝拒染法检测频率为2.2MHz的聚焦超声激活血卟啉作用于S180肿瘤细胞的存活率,筛选出最佳的超声处理参数,采用自由基清除剂检测超声激活血卟啉产生的起主要作用的活性氧成分,通过丙二醛含量测定法检测细胞内脂质过氧化含量变化。单纯血卟啉组表现出无明显的细胞毒作用;同等条件下,超声结合血卟啉组对细胞的损伤显著高于单纯超声组,且这种协同杀伤作用可以被组氨酸和甘露醇所抑制,而不被SOD抑制;同时,超声激活血卟啉后细胞内的脂质过氧化含量显著增加。超声结合血卟啉对S180肿瘤细胞有协同杀伤作用,可能由于声动力学处理过程中产生的活性氧自由基作用于细胞膜,增加膜脂质过氧化水平,最终导致细胞死亡。     

高强度聚焦超声在医学领域中应用的新进展

本文综述了国内外在高强度聚焦超声（high intensity focused ultrasound，HIFU）技术方面研究与应用的新进展。介绍了HIFU的治疗功能原理，特别给出了焦斑半径的具体计算公式和对相关组织的热效应、空化效应、机械效应，辐照效应等损伤机理，重点研究了热效应随声波频率及声强变化的规律。给出了HIFU的一般试验模型即分层组织模型以及HIFU应用与临床的情况。重点研究了HIFU源，主要讨论了换能器的聚焦方式（1）球面自聚焦换能器，（2）声透镜聚焦换能器，（3）大功率多元超声换能器，（4）电子扫描或相控阵列聚焦换能器，以及频率选择与目标深度和辐照强度的关系，并指出与其匹配的几类聚焦换能器的优缺点，列举了HIFU技术在泌尿科、肿瘤学、神经外科、眼科、妇科、止血以及其他医学领域中的最新应用。最后评价了目前HIFU在治疗方面的优势与某些不足以及可能改进的有效措施．展望了HIFU技术广阔的应用前景．     

新型相控聚焦超声声场测量实验研究

目的:相控聚焦超声是热物理治疗领域的研究热点之一,而对其声场的研究是其中最重要的技术环节.本文分析了新型相控聚焦超声声场仿真和实验测量的声场结果.方法:运用LabVIEW虚拟仪器平台开发了超声声场测量系统.该系统用水听器声场扫描法测量了单焦点模式下新型相控聚焦超声声场分布,并用MATLAB等工具包对单焦点模式下的声场分布进行仿真.结果:仿真数据和实验结果基本一致.结论:本文验证了理论模型的正确性及本系统测量相控型聚焦超声声场可行性和有效性.