胸腺肽注射液中细菌内毒素的定量检查

目的 定量测定胸腺肽注射液中的细菌内毒素含量。方法 用动态浊度法在供试品中定量添加标准内毒素,回收率在50％～200％。结果 胸腺肽注射液对鲎试剂反应无干扰。结论 用动态比浊法鲎试验可高效率地测定供试品中的细菌内毒素含量。     

基因重组鲎试剂检测促肝细胞生长素注射液中细菌内毒素含量适用性研究

目的 探讨基因重组鲎试剂用于测定促肝细胞生长素注射液中细菌内毒素含量的适用性。方法 分别使用基因重组鲎试剂和天然美洲鲎试剂建立细菌内毒素标准曲线，采用供试品干扰试验测定供试品溶液中外加内毒素的回收比，采用动态显色法测定供试品中细菌内毒素含量，并比较2种鲎试剂检测结果的差异。结果 2种鲎试剂细菌内毒素浓度在0.008～5 EU/mL范围内与反应时间线性关系较好（|r|≥0.998）。供试品在稀释2倍或20倍时对反应无干扰，细菌内毒素回收比均在50%～200%之间，26批供试品的细菌内毒素含量均小于限值（37.5 EU/mL）。2种鲎试剂细菌内毒素含量检测结果无显著差异（P> 0.05）。结论 该研究中建立了该制剂细胞内毒素的定量检测方法，准确性和灵敏度好，可用于该产品生产、流通环节细菌内毒素的质量控制。     

艾滋病DNA疫苗细菌内毒素检查法的方法建立

目的 建立艾滋病DNA疫苗细菌内毒素的检查法。方法 根据《中国药典》(2020年版)四部通则1143凝胶法进行细菌内毒素检查和方法学验证,验证该方法的灵敏度、干扰试验、中间精密度以及耐用性。结果 经过灵敏度复核,鲎试剂(0.5 EU·mL^-1)的λ_C在0.5λ～2.0λ,干扰试验显示供试品在最大稀释倍数下对结果无干扰,中间精密度符合要求,不同厂家、供试品阳性对照的配制方法结果显示该方法耐用性好。结论 建立的方法有较好的灵敏度、专属性、中间精密度和耐用性,可用于艾滋病DNA疫苗细菌内毒素的检测。     

动态浊度法定量检测磺达肝癸钠注射液细菌内毒素含量的研究

目的:建立动态浊度法定量检测磺达肝癸钠注射液中细菌内毒素的含量。方法:使用两个厂家的动态浊度法鲎试剂建立细菌内毒素标准曲线,对3批供试品进行干扰试验,分析不同稀释倍数下细菌内毒素的回收率并进行验证,完成供试品溶液中内毒素含量的定量检测。结果:两个厂家鲎试剂的标准曲线均符合标准要求,3批供试品在稀释10、100、800、1 600倍时细菌内毒素回收率均在50%~200%范围内,均无干扰,符合药典要求。结论:采用动态浊度法检测磺达肝癸钠注射液中细菌内毒素含量是可行的。     

动态浊度法定量检测毛冬青注射液中细菌内毒素

目的应用动态浊度法定量检测毛冬青注射液中的细菌内毒素。方法采用《中国药典》2005年版附录细菌内毒素定量检测法。结果将毛冬青注射液进行1：3200稀释,对3个供试品定量添加标准内毒素,其回收率分别为132%、137%、133%。回收率在50%～200%无干扰作用。结论应用动态浊度法可以测定供试品中的细菌内毒素。     

纳米胶束载体聚乙二醇单甲醚聚乳酸嵌段共聚物中细菌内毒素动态显色定量方法的建立

目的: 建立纳米胶束载体聚乙二醇单甲醚聚乳酸嵌段共聚物细菌内毒素动态显色定量方法。 方法: 首先建立动态显色法测定细菌内毒素的标准曲线,并验证标准曲线的可靠性,考察样品对细菌内毒素检查的干扰情况,确定样品的最大无干扰浓度,随后验证方法的精密性和准确性,并进行初步应用。 结果: 标准曲线可靠性验证中,相关系数r＞0.99,标准曲线可靠。供试品用水稀释并添加内毒素标准品至供试品终浓度0.625mg.ml^-1(稀释40倍)及内毒素终浓度为0.25 Eu.ml^-1时,测定其回收率接近100%,供试品在该浓度对内毒素实验的干扰作用较小。方法的精密度和准确度验证中,标准曲线各浓度点测量结果的变异系数均＜7%,加入各浓度的内毒素标准品的测定结果的变异系数均＜5%,回收率在94%-112%之间。另外,日常检测3批供试品的内毒素含量均小于限值,回收率在97%-105%之间。结论: 动态显色法可用于定量检测纳米胶束载体聚乙二醇单甲醚聚乳酸嵌段共聚物的细菌内毒素。     

动态浊度法定量检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中细菌内毒素含量方法的验证

目的   对定量检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中细菌内毒素含量的动态浊度法进行验证。方法   采用动态浊度法定量检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中细菌内毒素含量，并对分析方法的线性、专属性、准确度、重复性、中间精密度和耐用性进行验证。结果  动态浊度法的线性相关系数绝对值为0.996；最大有效稀释倍数下专属性回收率为68.81%~73.80%；准确度回收率为53.50%~77.77%；3名实验人员重复性相对标准偏差分别为2.0%、3.6%、2.0%；中间精密度相对标准偏差为7.6%；耐用性回收率为66.49%~108.34%。 结论   动态浊度法检测冻干甲型肝炎中的细菌内毒素含量的方法具有良好的专属性、准确度、线性、重复性、中间精密度和耐用性，符合定量检测和数据完整性的要求。     

动态浊度法定量检测醒脑静注射液中的细菌内毒素

目的：建立动态浊度法测定醒脑静注射液中细菌内毒素含量的方法。方法：依据《中国药典》2020年版四部通则（1143细菌内毒素检查法）中的动态浊度法及其指导原则,分别应用美洲鲎试剂和安度斯鲎试剂,在Pyros Kinetix? Flex（PKF）细菌内毒素定量检测系统上,对醒脑静注射液中的细菌内毒素进行方法开发。通过细菌内毒素标准曲线可靠性试验和干扰预实验确定有效稀释倍数,测定干扰试验的回收率,完成醒脑静注射液细菌内毒素的定量检测。结果：可靠性试验中,LAL标准曲线浓度线性范围为0.001～1.0 EU·mL－1（r=-0.987 7）,标准曲线的回归方程为：lgT=-0.312 3lgC+2.740。TAL标准曲线浓度线性范围为0.01～1.0 EU·mL－1（r=-0.999）,标准曲线的回归方程为：lgT=-0.270lgC+2.830。供试品在稀释比例1：20及以下浓度时对鲎试剂反应无干扰作用;3批供试品的内毒素定量检测结果均低于供试品规定限值。结论：应用Pyros Kinetix? Flex（PKF）细菌内毒素定量检测系统,动态浊度法可用于醒脑静注射液细菌内毒素含量的定量检测。     

混合时间对氧氟沙星注射液细菌内毒素含量回收率的影响

目的：建立氧氟沙星注射液细菌内毒素含量测定中获得理想回收率的方法。方法：选用不同混合时间的阳性对照品，比较其在氧氟沙星注射液细菌内毒素含量测定中回收率的变化。结果：内毒素与氧氟沙星的混合时间越长，氧氟沙星注射液细菌内毒素含量测定的回收率越低。结论：将样品阳性对照液制备好后，立即加入已有鲎试剂的反应试管中开始反应，即可避免影响所测供试品细菌内毒素含量的回收率。     

葛根素注射液细菌内毒素的测定

目的：研究葛根素注射液进行细菌内毒素检查的干扰情况，建立其细菌内毒素的定性和定量分析法。方法：采用2005年版中国药典凝胶法和动态浊度法检测供试品中的细菌内毒素。结果：供试品稀释50倍（凝胶法）和200倍（动态浊度法）后对细菌内毒素的检查无干扰作用。结论：用凝胶法和动态浊度法测定葛根素注射液中细菌内毒素的含量是可行的。     

动态浊度法定量检测地龙注射液中的细菌内毒素

目的应用动态浊度法定量检测地龙注射液中的细菌内毒素。方法采用《中国药典》2010年版附录细菌内毒素定量检测法。结果将地龙注射液进行1:100稀释,对3个供试品定量添加标准内毒素,其回收率分别为119%,110%,143%。回收率在50%～200%,无干扰作用。结论应用动态浊度法测定供试品中的细菌内毒素,具有快速、大范围定量的特性,同时还能节约成本,更适合于成本复杂且干扰大的中药注射剂的内毒素检测,同时在一定范围内的稀释倍数的供试品溶液对其无干扰作用。     

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞DNA残留定量PCR检测法的验证

目的  验证Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗中Vero细胞DNA残留定量PCR（quantitative PCR,qPCR）检测法。方法  用试剂盒提取Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗原液的DNA,采用qPCR法检测Vero细胞DNA,并验证方法的线性、专属性、准确性、精密度、耐用性及定量限;同时采用DNA探针杂交法检测样品。结果  qPCR检测Vero细胞DNA标准曲线在0.003 0~300.000 pg/μl之间线性良好;对Hep-2细胞、大肠埃希菌、酵母细胞DNA均无扩增反应;高、中、低浓度样品加标回收率在50%~150%,准确性良好;定量检出限为0.003 0 pg/μl;精密度良好（相对标准偏差＜15%）;反应体系配制好后置于2~8 ℃ 30 min后进行检测,相对标准偏差＜15%,耐用性良好。DNA探针杂交法与qPCR结果均小于0.1 pg/μl。 结论  qPCR检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗中Vero细胞DNA残留具有良好的线性、专属性、准确性、精密度和耐用性,可适用于该项检测。     

动态浊度法定量检测板蓝根注射液中的细菌内毒素

目的应用动态浊度法定量检测板蓝根注射液中的细菌内毒素。方法采用《中国药典》2010年版附录细菌内毒素定量检测法。结果将板蓝根注射液进行1∶100稀释,对3个供试品定量添加标准内毒素,其回收率分别为108%,132%,137%。回收率在50%~200%,无干扰作用。结论应用动态浊度法可以测定供试品中的细菌内毒素。     

动态浊度法检测注射用苯唑西林钠细菌内毒素的研究

目的：建立注射用苯唑西林钠细菌内毒素动态浊度法检测方法。方法：按照《中华人民共和国药典》2015年版四部,采用动态浊度法进行干扰试验,发现注射用苯唑西林钠对细菌内毒素检查有抑制作用,实验中用辅剂稀释剂Ⅰ稀释供试品以加入适量镁离子的方式消除注射用苯唑西林钠对细菌内毒素检查的抑制作用,定量测定样品中细菌内毒素含量。结果：补充适量的金属镁离子可以有效地消除注射用苯唑西林钠对细菌内毒素的抑制,降低样品的稀释倍数,细菌内毒素回收率在50%~200%之间。结论：可建立动态浊度法进行注射用苯唑西林钠细菌内毒素定量检测,样品中细菌内毒素含量均远低于《中华人民共和国药典》规定的0.10 EU·mg-1,建议提高现有标准。     

中药化学成分定量分析方法学验证中精密度和准确度的探讨

目的：研究精密度、准确度和范围的具体考察方法。方法：采用RP—HPLC法,以厚朴药材为例,对该药中厚朴酚、和厚朴酚含量进行测定,在方法学验证过程中,重复性和回收率试验分别设计不同范围和不同考察方法。结果：重复性试验结果表明厚朴酚、和厚朴酚含量的RSD分别为2．5％～5．8％,2．5％～5．7％;平均回收率厚朴酚为95．1％～97．7％（RSD：2．2％～4．3％）;和厚朴酚为94．8％～97．7％（RSD=2．0％～7．5％）。结论：重复性RSD值随考察范围增大而增大,且同一浓度6份供试品溶液的测定结果与低、中、高浓度9份供试品溶液的测定结果方差非齐性。回收率RSD值亦随考察范围增大而增大。当药材取样量不同,根据被测成分含量按1：1添加对照品时,误差影响相对较小。而确定相同取样量,通过改变对照品加入量考察回收率时,9份样品测定结果RSD明显增大。     

动态浊度法测定间苯三酚注射液中细菌内毒素含量

目的探讨间苯三酚注射液的细菌内毒素定量分析法。方法采用2005年版《中国药典（二部）》中的动态浊度法。结果供试品稀释50倍可以排除干扰，回收率在50％～200％范围内，试验结果与家兔升温法的一致。结论用动态文度法测定闯苯三酚注射液的细菌内毒素含量准确有效。     

凝胶法测定脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素

目的 探讨凝胶法测定人脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素的可行性。方法 收集人脐带间充质干细胞培养72 h的上清为供试品。参照《中国药典》2020年版第三部通则1143细菌内毒素检查法中凝胶法的具体要求和步骤对鲎试剂进行灵敏度复核,对供试品进行干扰初筛试验、干扰试验和供试品细菌内毒素的测定。结果 鲎试剂灵敏度测定值为0.125EU/mL,在0.5λ～2.0λ符合规定,可用于后续试验。供试品1、2、4倍稀释对鲎试剂均无干扰;干扰试验验证2倍稀释供试品对细菌内毒素凝胶法检测无干扰作用;采用凝胶法测定2倍稀释供试品的细菌内毒素含量均≤0.5 EU/mL,判定供试品中细菌内毒素含量合格。结论 凝胶法可用于人脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素的检测。     

用同体系模型动态比浊法定量测定血液透析浓缩液的细菌内毒素

目的授权应用已获专利的能有效消除供试品干扰的定量内毒素检查方法———同体系模型(专利号:03126794.7)动态比浊法定量检查血液透析酸性浓缩液(A液)中的细菌内毒素含量。方法对A液中定量添加标准内毒素进行干扰预试验,将A液稀释成30,40,50,60倍,定量添加标准内毒素,其回收率分别为76.12%,112.4%,173.6%,141.8%;从中筛选出最佳的稀释倍数为40倍,对3个批号(GH0504003,GH0504009,GH0504012)A液进行干扰试验,其回收率分别为116.7%,90.42%,113.8%。结果标准内毒素使用0.015 6,0.125,1.00 Eu/mL,将A液稀释成40倍,定量添加标准内毒素,回收率均在50%~200%之间,认为A液对动态比浊法无干扰作用,可用于A液供试品检查。结论应用同体系模型动态比浊法可以定量检测A液中的细菌内毒素。     

人促红素注射液生物学活性体外法的ELISA验证

本研究用双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验)检测人促红素注射液(Human erythropoietin injection, EPO)中EPO效价，并对其进行方法学验证。研究从准确度、重复性、中间精密度、线性、耐用性等各方面，对ELISA检测EPO建立的体外生物活性测试方法进行方法学验证。在准确度验证中，不同浓度供试品测定的回收率在87.20%～118.40%之间，同一浓度的6份样品的加标回收率为93.5%～107.2%之间；将5个不同浓度的供试品分别为2.5,5,20,50,100 mIU/mL进行3次重复性试验，结果RSD均<20%;在中间精密度验证过程中，在不同时间由不同人员各操作测定，检测结果的RSD=0.019%,<20%,人员和时间对结果均无统计学意义影响(P>0.05,F=0.043);线性验证实验结果表明，人促红素国家标准品和EPO成品重复3次的R²分别为0.987 2,0.996 8,0.989 3,0.997 8,0.998 8,0.985 6,均>0.98;在试验加入终止液后，不同长度时间间隔内的生物学活性测定结...     

络合滴定法测定复方乳酸依沙吖啶软膏中氧化锌的含量

目的：建立复方乳酸依沙吖啶软膏中氧化锌的含量测定方法。方法：采用络合滴定法对同一批次复方乳酸依沙吖啶软膏供试品进行氧化锌含量测定，对其专属性、线性范围、精密度、准确度实验结果进行数据分析，以判断方法的适用性。结果：本实验方法专属性良好，氧化锌在6.0~56.5 mg范围内线性关系良好，线性方程Y=0.245 196 X+0.050 564（R=0.999 4）；氧化锌检出限为0.13 mg，定量限为0.43 mg；精密度试验氧化锌重复性实验相对标准偏差（RSD）为1.5%（n=6)，氧化锌中间精密度RSD为1.3%（n=12）；所有加标水平氧化锌平均回收率为100.3%（RSD=2.7%）。结论：该方法简单、快速、测定结果均符合《中华人民共和国药典》2020年版四部通则9101要求，适用于复方乳酸依沙吖啶软膏中氧化锌的含量测定。