卡维地洛、比索洛尔、哌唑嗪对SHR心肌成纤维细胞增殖作用的对比研究

目的观察卡维地洛(carvedilol)、比索洛尔(bisoprolol)、哌唑嗪(prazosin)对培养的SHR和Wistar大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响.方法采用胰酶消化法培养CFs,用 3H-TdR法、MTT比色法分别观察carvedilol、bisolol、prazosin干预下CFs的增殖情况.结果 SHR、Wistar大鼠CFs 3H-TdR掺入及OD值随carvedilol浓度的增加而减低,呈剂量和时间依赖性.10-5 mol /L carvedilol分别干预SHR和Wistar大鼠CFs 72 h其 3H-TdR掺入分别减低52.1%和47.5%,OD值分别减低41.5% 和 35.3%, bisolol(10-8 mol/L～10-5mol/L )和prazosin(10-8 mol/L～10-5 mol/L)则无此作用.结论 Carvedilol抑制心肌成纤维细胞增殖,并呈浓度及时间依赖性,高血压时,CFs对Carvedilol更为敏感.而Bisoprolol和Prazosin则对CFs细胞增殖无影响.     

卡维地洛对高血压大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的抑制作用

目的 :探讨卡维地洛、比索洛尔、哌唑嗪对培养的 SHR和 Wistar大鼠心脏成纤维细胞 （ CFs）胶原合成的影响。方法 :采用胰酶消化法培养 CFs,用3 H-脯氨酸掺入法分别观察卡维地洛、比索洛尔、哌唑嗪干预下两组大鼠 CFs胶原合成的情况。结果 :1各种浓度的卡维地洛 （ 0 .0 1～ 10μmol/ L ）可以浓度依赖的方式抑制 CFs 3 H-脯氨酸掺入量 ,与 Wistar大鼠组相比 ,SHR组 CFs受抑制的效应更强。2同等浓度比索洛尔对两组大鼠 CFs3 H-脯氨酸掺入量表现出轻度抑制。 3同等浓度哌唑嗪对两组大鼠 CFs3 H-脯氨酸掺入量均无明显影响。结论 :卡维地洛呈浓度依赖性抑制 CFs合成胶原 ,其作用机制部分与阻滞β1 受体有关。     

辛伐他汀对自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的探讨辛伐他汀(simvastatin)对培养的自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats,SHR)和正常血压Wistar大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和胶原合成的影响.方法采用胰酶消化法培养CFs,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖,流式细胞分析仪(FCM)技术检测细胞周期,ELISA法检测Ⅰ型胶原合成.结果(1)10-9mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和10-5mol/L辛伐他汀作用后MTT比色法OD值SHR组分别为0.38±0.01、0.34±0.01、0.26±0.01和0.24±0.01,与对照组(0.41±0.01)比较差异非常显著(P＜0.05);Wistar大鼠组分别为0.35±0.01、0.31±0.01、0.26±0.01和0.23±0.01,与对照组(0.37±0.01)相比差异非常显著(P均＜0.05).(2)10-6mol/L辛伐他汀作用48h,SHR和Wistar大鼠CFs的G0G1期细胞百分率均较对照组显著提高(P均＜0.01),S期细胞百分率、G2/M期细胞百分率和增殖指数(proliferation index,PI)则较对照组显著降低(P均＜0.01).(3)随着辛伐他汀浓度的增高,CFs的Ⅰ型胶原分泌呈明显的递减趋势.10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和10-5mol/L辛伐他汀作用后Ⅰ型胶原,SHR分别为O.80±0.01、0.74±0.01、0.68±0.01、0.68±0.01和0.62±0.02,均显著低于对照组0.97±0.02(P均＜0.01);Wistar大鼠分别为0.73±0.01、0.65±0.01、0.60±0.02和0.56±0.02,与对照组(0.81±0.01)相比差异非常显著(P均＜0.01).SHR组与Wistar大鼠相比较,CFs受抑制的效应更强.结论辛伐他汀呈浓度依赖性抑制SHR的CFs增殖和胶原合成,这对逆转高血压心室重塑有一定的价值.     

盐酸吡格列酮对SHR心脏成纤维细胞增殖的影响及其与一氧化氮的关系

目的研究胰岛素增敏剂盐酸吡格列酮(PIO)对培养的自发性高血压大鼠(SHR)和试验大鼠(Wistar)心脏成纤维细胞(CFs)增殖的影响及其与一氧化氮(NO)的关系.方法采用胶原酶消化法培养SHR和Wistar的CFs,四氮唑蓝比色法(MTT)测定CFs的增殖状况,硝酸还原酶法测定CFs培养上清NO浓度.结果 (1)1×10-7、1×10-6、5×10 -6、1×10 -5 mol/L的PIO作用24 h,SHR和Wistar的吸收值(A490值)分别为SHR 0.19±0.01、0.18±0.01、0.16±0.01、0.16±0.02;Wistar 0.21±0.01、0.19±0.01、0.18±0.01、0.17±0.01,与各自对照组(SHR 0.22±0.01,Wistar 0.21±0.02)相比,差异非常显著(P<0.01).(2)5×10 -6 mol/L的PIO作用12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h后,SHR的A490值与同一时间点相比,差异非常显著(P<0.001);Wistar的A490值与同一时间点的对照组相比,差异非常显著(P<0.001).(3)5×10 -6 mol/L的PIO干预48小时后,SHR和Wistar的CFs培养上清NO浓度分别为111.2±12.4 μmol/L、221.7±35.3 μmol/L,与各自对照组(76.8±2.4 μmol/L、112.1±8.9 μmol/L)相比,差异非常显著(P<0.001).结论 PIO能够抑制SHR的CFs增殖,其效应可能是通过上调NO的表达来实现的.     

阿伐他汀对自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的探讨阿伐他汀(atorvastatin)对培养的自发性高血压大鼠 (spontaneous hypertensive rats,SHR)和正常血压Wistar大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts , CFs)增殖和胶原合成的影响.方法采用胰酶消化法培养CFs,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖,流式细胞分析仪(FCM)技术检测细胞周期,ELISA法检测Ⅰ型胶原合成.结果 (1)10-7 mol/L、10-6 mol/L、10-5 mol/L 和10-4 mol/L阿伐他汀作用后MTT比色法A比值SHR组分别为0.30±0.01、0.26±0.01、0.24±0.01 和0.22±0.01,与对照组(0.33±0.01)比较差异非常显著(P均<0.01);Wistar大鼠组分别为0.28±0.01、0.26±0.01、0.23±0.01 和 0.21±0.01,与对照组 (0.30±0.01)相比差异非常显著(P均<0.01).(2) 10-6 mol/L 阿伐他汀作用48 h,SHR和Wistar大鼠CFs的G0/G1期细胞百分率均较对照组显著增高(P均<0.01),S期细胞百分率、G2/M期细胞百分率和增殖指数(proliferation index, PI)则较对照组显著降低(P均<0.01).(3)随着阿伐他汀浓度的增高,CFs的Ⅰ型胶原分泌呈明显的递减趋势.10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L 和10-4 mol/L阿伐他汀作用后Ⅰ型胶原,SHR分别为0.71±0.01、0.70±0.01、0.63±0.01 和0.58±0.02,均显著低于对照组0.88±0.02(P均<0.01);Wistar大鼠分别为0.53±0.01、0.51±0.01、0.47±0.02 和0.40±0.02,与对照组 (0.68±0.01) 相比差异非常显著(P均<0.01).SHR组与Wistar大鼠组相比较,CFs受抑制的效应更强.结论阿伐他汀呈浓度依赖性抑制SHR的CFs增殖和胶原合成,高血压时CFs对阿伐他汀更为敏感,这对逆转高血压心室重塑有一定的价值.     

雌三醇对MG-63细胞增殖和分化的影响

目的 研究雌三醇（Estri01）对成骨肉瘤样细胞株MG-63的作用，并与雌二醇（17-β—estradiol）对MC-63细胞的作用进行比较，从而探讨雌三醇防治骨质疏松的作用机制。方法 用雌三醇或雌二醇处理成骨样细胞株MC-63，^3H掺入法（3H—TdR）测定细胞的增殖，通过测定细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性的变化和细胞分泌的骨钙素（osteocalcin）水平的变化来分析细胞功能。结果 以浓度为0mol／L的雌三醇为对照，10^-10、10、10^～8、10^-7、10^-6mol／L雌三醇分别增加MG-63细胞增殖达0．00％、18．10％、31．62％、23．81％、14．86％；以浓度为0mol／L的雌二醇为对照，10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-8mol／L雌二醇分别增加MG-63细胞增殖达16．95％、30．86％、62．48％、28．19％、24．76％。雌二醇促进MC-63细胞增殖的作用比雌三醇的作用强。不同浓度（10^-10～10^-6mol／L）的雌三醇或雌二醇对MG-63细胞内ALP活性及骨钙素分泌量均无显著影响。Western杂交法检测到雌激素受体α和β在MG-63细胞中均有表达，雌激素受体的拮抗剂ICI 182780可以消除雌二醇和雌三醇对MG-63细胞增殖的促进作用。结论雌三醇可以促进MG-63细胞的增殖，但对分化无影响；雌三醇对MG-63细胞增殖的促进作用由雌激素受体介导。     

盐酸吡格列酮对SHR心脏成纤维细胞增殖的影响及其与一氧化氮的关系

目的　研究胰岛素增敏剂盐酸吡格列酮 (PIO)对培养的自发性高血压大鼠 (SHR)和试验大鼠 (Wistar)心脏成纤维细胞 (CFs)增殖的影响及其与一氧化氮 (NO)的关系。方法　采用胶原酶消化法培养SHR和Wistar的CFs ,四氮唑蓝比色法 (MTT)测定CFs的增殖状况 ,硝酸还原酶法测定CFs培养上清NO浓度。结果　 (1) 1× 10 - 7、1× 10 - 6 、5× 10 - 6 、1× 10 - 5 mol/L的PIO作用 2 4h ,SHR和Wistar的吸收值 (A4 90 值 )分别为SHR 0 .19± 0 .0 1、0 .18± 0 .0 1、0 .16± 0 .0 1、0 .16± 0 .0 2 ;Wistar 0 .2 1± 0 .0 1、0 .19± 0 .0 1、0 .18± 0 .0 1、0 .17± 0 .0 1,与各自对照组 (SHR 0 .2 2± 0 .0 1,Wistar 0 .2 1± 0 .0 2 )相比 ,差异非常显著 (P <0 .0 1)。 (2 ) 5× 10 - 6 mol/L的PIO作用 12h、2 4h、3 6h、48h、60h、72h后 ,SHR的A490 值与同一时间点相比 ,差异非常显著 (P <0 .0 0 1) ;Wistar的A4 90 值与同一时间点的对照组相比 ,差异非常显著 (P <0 .0 0 1)。 (3 ) 5×10 - 6 mol/L的PIO干预 48小时后 ,SHR和Wistar的CFs培养上清NO浓度分别为 111.2± 12 .4μmol/L、2 2 1.7± 3 5.3μmol/L ,与各自对照组 (76.8± 2 .4μmol/L、112 .1± 8.9μmol/L)相比 ,差异非常显著 (P <0 .0 0 1)。 结论     

丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大、凋亡的影响

目的 研究丹参酮Ⅱ A(1、SN)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大、凋亡的影响。方法 培养乳鼠心肌细胞分别暴露于AngⅡ(10^-6mol／L)、TSN(10^-6mol／L、AngⅡ(10^-6mol／L) TSN(10^-5mol／L)36h，检测心肌细胞的凋亡率、心肌细胞直径和^3H亮氨酸掺入率。结果 TSN可抑制AngⅡ所诱导的心肌细胞的凋亡率、心肌细胞直径和^3H亮氨酸掺入率的显著增高。结论 TSN可抑制AngⅡ所诱导的心肌细胞的凋亡和肥大。     

C 型钠尿肽对大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：观察C型钠尿肽（CNP）对大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖及胶原合成的影响,探讨其抑制心肌细胞外基质（ECM）重构的作用机制。方法原代培养新生大鼠CFs,应用MTS法分析细胞增殖,以Western blot法检测CFs中Ⅰ型、Ⅲ型胶原的蛋白表达。结果10^-9mol/L、10^-8mol/L、10^-7mol/LCNP能显著抑制CFs的增殖（P＜0．05）,同时抑制CFs中Ⅰ型胶原（P＜0．05）、Ⅲ型胶原（P＜0．05）的蛋白表达,并具有浓度依赖性。结论CNP能有效抑制CFs的增殖及胶原合成,这可能是其抑制心肌ECM重构的重要机制。     

血管紧张素Ⅱ刺激肝星状细胞核酸、蛋白质及胶原合成

目的 研究不同浓度血管紧张素Ⅱ（AngⅡ)对大鼠肝星状细胞（HSC）增殖和胶原合成的影响。方法 采用酶法分离大鼠肝星状细胞（HSC），应用^3H-TdR（胸腺嘧啶核苷）、^3H-Leu(亮氨酸）、^3H-Pro（脯氨酸）掺入检测10^-9-10^-5mol/L不同浓度AngⅡ对HSC的DNA、蛋白质及脯氨酸合成的影响。结果 10^-9-10^-6mol/L AngⅡ能促进HSC对^3H-TdR的掺入率（P＜0．05），但只有10^-6mol/L和10^-7mol/L浓度的AngⅡ才能显著增加HSC对^3H-Leu的掺入率（P＜0．01）；而10^-9-10^-6mol/L AngⅡ均能促进HSC对^3H-Pro的掺入率（P＜0．05），且呈剂量依赖关系。结论 适当浓度的AngⅡ能促进HSC增殖和胶原合成。     

甲状旁腺素1-34对新生Wistar大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的观察人甲状旁腺素1-34(hPTH)对原代培养新生Wistar大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响,通过细胞内钙离子([Ca~(2 )]i)的变化,探讨诱导CFs增殖的发生机制。方法培养新生Wistar大鼠心肌成纤维细胞,根据加入不同浓度的hPTH(10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)mol/L)分组、同时设维拉帕米(L型钙通道拈抗剂)组。四氮唑盐比色法(MTT)、~3H-TdR掺入法检测细胞增殖；激光共聚焦显微镜(LSCM)测定细胞内[Ca~(2 )]i。结果①CFs增殖活性组间比较,差异有统计学意义(F=9．20,P＜0．01)。随着hPTH的增加,CFs增殖活性呈明显递增性升高,10~(-10)、10~(-9)、10~(-8) mol/L组CFs增殖活性分别为(0．408±0．016)、(0．518±0．019)、(0．778±0．034),与对照组(0．365±0．013)比较,差异有统计学意义(P＜0．01)。②~3H-TdR的掺入量组间比较差异有统计学意义(F=8．82,P＜0．01)；~3H-TdR的掺入量也随着hPTH的升高而呈递增趋势,10~(-10)、10~(-9)、10~(-8) mol/L组分别为(36．79±2．03)、(39．13±1．98)、(45．51±2．64)Bq,与对照组(24．08±1．23)Bq比较,差异有统计学意义(P＜0．01)；维拉帕米组~3H-TdR掺入量(41．68±2．72) Bq,明显低于10~(-8) mol/L组(P＜0．01)。③CFs内[Ca~(2 )]j组间比较,差异有统计学意义(F=9．16,P＜0．01)；10~(-10)、10~(-9)、10~(-8) mol/L组CFs内[Ca~(2 )]i(38．28±4．40、63．78±5．15、78．39±6．87)也明显高于对照组(36．18±3．57)；维拉帕米组CFs内[Ca~(2 )]i为(52．14±4．69),明显低于单独应用hPTH 10~(-8) mol/L组。结论PTH能刺激CFs增殖,增殖活性与PTH浓度有关,L型钙通道开放引起的细胞外钙内流增加为其重要的机制之一。     

血管外膜源一氧化氮对内皮素—1诱导的血管平滑肌增殖的影响

目的 观察血管外膜生成的一氧化氮（NO）对内皮素－1（ET－1）诱导的血管平滑肌（VSM）增殖的影响，以探讨血管外膜源NO对血管结构重塑调节的意义。方法 取大鼠胸主动脉，去除内皮，分以下几组进行组织孵育10h：（1）完整外膜血管组；（2）单纯中膜组；（3）中膜与剥离的外膜共育组；（4）中膜与服L－N－硝基精氨酸（L-NNA)预处理的外膜共育组。每例胸主动脉剪为二段，分两个亚组：ET（10^-7mol/L)组和对照组。^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR)掺入法检测各组VSM的细胞增殖。另取大鼠腹主动脉外膜，用10^-8和10^-7mol/L ET-1刺激4h。Griess法测血管外膜生成的亚硝酸（NO2-)含量，^3H-L－精氨酸（^3H-L-Arg)标记的同位素法测定外膜一氧化氮合酶（NOS）活性。结果 （1）各ET亚组^3H-TdR掺入比相应对照组分别增加48．8％－71．9％。（2）在10^-7mol/L ET-1刺激下，完整外膜组及中膜＋外膜组的^3H-TdR掺入分别比单纯中膜组低21．3％和24．5％。中膜＋L－NNA预处理的外膜组^3H-TdR掺入分别比中膜＋外膜组及完整外膜组高30．8％和25．4％，而与单纯中膜组差异无显著性。（3）与对照组相比，10^-8和10^-7mol/L 的ET－1使外膜NOS活性分别增加124％和177％；使外膜生成的NO2－含量分别增加88％和225％。结论 实验结果表明：血管外膜生成的NO可抑制ET－1刺激的VSM的增殖，其抑制作用为ET－1激活的血管外膜NOS／NO途径所分导。提示血管外膜源NO可能参与心血管疾病过程中血管重塑的调节。     

抑制血管紧张素Ⅱ1型受体对自发性高血压大鼠阻力血管节律性振荡舒缩的作用

目的观察抑制血管紧张素Ⅱ1型受体对自发性高血压大鼠（SHR）阻力血管节律性振荡舒缩的作用。方法采用小血管张力测量仪测定SHR对照组、替米沙坦[5mg／（kg&#183;d）]组和咪哒普利[3mg／（kg&#183;d）]组离体肠系膜上动脉Ⅱ级分支血管环对不同浓度乙酰胆碱、硝酸甘油的反应性及对血管紧张素Ⅱ、去甲肾上腺素诱导的节律性振荡舒缩反应。结果1）第16周时，替米沙坦组和咪哒普利组鼠尾动脉收缩压明显低于对照组（P〈0．01）。2）与对照组相比，替米沙坦和咪哒普利能显著增强SHR肠系膜动脉血管环对乙酰胆碱（10^-6～10^-4mol／L）的舒张反应（P〈0．01）；替米沙坦，而不是咪哒普利，增强血管环对硝酸甘油（10^-5mol／L）的反应性（P〈0．05）。3）替米沙坦，而不是咪哒普利，显著降低血管环对血管紧张素Ⅱ（10^-6mol／L）和去甲肾上腺素（10^-5mol／L）诱导的节律性振荡舒缩反应（P〈0．01）。结论替米沙坦和咪哒普利能显著降低SHR收缩压；替米沙坦可增强SHR肠系膜动脉内皮依赖和非内皮依赖的血管舒张功能，并显著降低SHR肠系膜动脉节律性振荡舒缩反应；咪哒普利虽能改善SHR肠系膜动脉内皮依赖性舒张功能，而对SHR肠系膜动脉节律性振荡舒缩反应无作用。     

丝裂原活化蛋白激酶在醛固酮诱导心室成纤维细胞增殖中的作用

目的:探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖的信号转导机制.方法:用胰酶消化法分离、培养新生大鼠CFs,采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法、western-blotting技术从DNA合成、蛋白表达等方面观察MAPK活化与醛固酮促CFs增殖的关系.结果:①醛固酮剂量依赖性促CFs DNA合成,10-5mol/L PD98059 [(782±152)个·min-1] 可逆转 10-7mol/L醛固酮 [(1879±169)个·min-1]的作用;②10-7mol/L醛固酮对活化MAPK蛋白表达有显著增强作用,在4 h达峰作用(8.11±0.46),10-7mol/L 醛固酮的作用(8.11±0.46)被10-5mol/L PD98059 (1.21±0.10, P<0.01)阻断.结论:醛固酮能激活CFs的MAPK,MAPK表达及活化参与醛固酮诱导的CFs增殖.     

氟对鼠成骨细胞BMP表达的影响及锌的拮抗作用

目的：研究氟对大鼠成骨细胞中骨形态发生蛋白(BMP-2)表达的影响以及锌制剂能否拮抗氟化物的作用。方法：体外培养SD乳鼠成骨细胞，给予不同剂量氟或／和锌制剂，测定细胞增殖及AKP活性，通过免疫组化方法对各组成骨细胞表达BMP-2进行定量分析。结果：10^-4mol/L ZnSO4及10^-5mol/L NaF能促进细胞增殖，增强AKP活性；10^-3mol／L NaF则抑制细胞增殖及AKP活性；高氟(10^-3mol／L)可促进BMP-2表达，但10^-4mol／L ZnSO4加入高氟组后未发现有抑制BMP-2表达的作用。结论:高氟可促进成骨细胞BMP-2表达，锌制剂能拮抗高氟的毒性作用，但对BMP-2的表达无拮抗作用。     

V1受体拮抗剂对精氨酸升压素诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响

目的探讨V1受体拮抗剂[d(CH2)5-Tyr2(Me)]AVP对精氨酸升压素(AVP)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响. 方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley (SD)大鼠心脏成纤维细胞(CFs),以3H-TdR掺入法测定CFs的DNA合成功能,MTT比色法测定CFs数目,并应用流式细胞仪进行CFs细胞周期分析. 结果①CFs的3H-TdR掺入率随着AVP干预浓度的增加而增高,其中10-7mol/L AVP和10-6mol/L AVP组每5000个细胞的3H-TdR掺入率分别为(243±61)cpm和(328±68)cpm,均明显高于对照组3H-TdR掺入率(117±32)cpm(P<0.01);②MTT比色法吸光度(A490 nm)值随AVP浓度的增加而增高,其中10-7mol/L AVP、10-6mol/L AVP组的A490 nm值分别为0.24±0.01和0.29±0.02,均较对照组A490 nm值(0.16±0.01)显著增高(P<0.01);③10-7mol/L AVP组CFs细胞周期S期百分率显著高于对照组(30.20±0.88)% vs (26.86±1.06)%( P<0.01);④10-7mol/L AVP+10-7 mol/L [d(CH2)5-Tyr2(Me)]AVP组的每5000个细胞的3H-TdR掺入率、MTT比色法A490 nm值和S期百分率分别为(143±40)cpm、0.17±0.01和(25.02±0.51)%,均显著低于10-7mol/L AVP组(分别P<0.05,P<0.01,P<0.01). 结论 AVP可诱导CFs的DNA合成功能增强和细胞数目增加,其作用可被V1受体拮抗剂[d(CH2)5-Tyr2(Me)] AVP所阻断,表明V1受体可能介导了AVP促CFs增殖效应.     

小窝蛋白-1反义寡核苷酸在AVP诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖erk1/2信号转导中的作用及辛伐他汀的干预效应

目的 研究小窝蛋白-1反义寡核苷酸(cav1-AS ODN)在血管加压素(AVP)诱导的成年大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖erk1/2信号转导中的作用及辛伐他汀(Sim)对cav1表达的干预效应.方法 采用脂质体导入法将cav1-AS ODN导入离体培养的成年大鼠CFs,用3H-TdR掺入法定量观察CFs增殖,蛋白免疫印迹法分析cav1-AS ODN对AVP诱导大鼠CFs增殖后磷酸化erk1/2 (p-erk1/2)、p21和细胞周期蛋白A(cyclin A)表达变化及Sim对cav1表达的影响.结果 cav1-AS ODN与10-7 mol/L的AVP共同干预组,大鼠CFs内3H-TdR掺入率和p-erk1/2蛋白表达量分别相当于空白对照组的(212±6)% 和(7.9 ± 0.3)%,10-7mol/L的AVP单独干预组的3H-TdR掺入率和p-erk1/2表达量分别相当于空白对照组的(172±4)%和(5.7±0.2)%,两组比较差异非常显著(P<0.01).cav1-AS ODN单独干预或与10-7mol/L的AVP共同干预大鼠CFs 24 h后,两组CFs内p21表达丰度均较空白对照组下降,cyclin A表达丰度升高.β-环糊精、黄体酮或Sim可减少CFs胞膜上cav1蛋白表达.用10、15或20 μg/ml胆固醇分别与10-7 mol/L Sim共同干预CFs 24 h后,CFs胞膜上cav1蛋白表达量分别相当于对照组的(86±3)%、(91±4)%和(94±5)%,与10-7mol/L Sim单独作用CFs组(66±4)%比较,均有显著的统计学差异(P<0.05,P<0.01).结论 cav1-AS ODN可增强AVP促CFs增殖的作用,Sim降胆固醇作用影响CFs胞膜上cav1蛋白表达,从而影响CFs增殖.     

缓激肽在血管紧张素(1～7)抑制心脏成纤维细胞增殖中的作用

目的探讨缓激肽(BK)在血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心脏成纤维细胞(CFs)增殖中的作用及其可能机制.方法将差速贴壁法培养的新生大鼠CFs,随机分为5组对照组、AngⅡ组、Ang(1～7)组、AngⅡ+Ang(1～7)组和AngⅡ+Ang(1～7)+HOE-140组.以3H胸腺嘧啶掺入反映细胞增殖情况,通过硝酸还原酶法测定NO含量,放射免疫分析法测定cGMP含量.结果(1)与对照组比,AngⅡ10-7mol/L孵育细胞36 h后可明显诱导CFs3H胸腺嘧啶掺入增加,[100%vs 51.8%±1.8%,P＜0.01].(2)Ang(1～7)呈浓度依赖性的抑制AngⅡ诱导的CFs3H胸腺嘧啶掺入增加,其Ang(1～7)10-6mol/L可使3H胸腺嘧啶掺入下降至57.9%±2.1%(P＜0.01).(3)与对照组比,AngⅡ组的NO和cGMP含量显著降低(P＜0.01),而Ang(1～7)10-5mol/L可显著增加NO和cGMP的含量,与AngⅡ组比,分别上升至177.2%±6.9%、242.3%±19.1%(P＜0.01).(4)缓激肽β2受体阻断剂HOE-140 10-8mol/L明显减弱了Ang(1～7)抑制CFs增殖和促进CFs释放NO与cGMP的作用,AngⅡ+Ang(1～7)组与AngⅡ+Ang(1～7)+HOE-140组比,57.9%±2.1%、177.2%±6.9%、242.3%±19.1%分别转变为88.9%±4.2%、125.7%±8.2%、162.2%±14.7%(P＜0.01).结论Ang(1～7)可能通过与BK相互作用促进NO和cGMP的产生,从而抑制AngⅡ诱导的CFs的增殖.     

金雀异黄酮对成骨细胞增殖的影响及其可能的分子生物学机制

目的观察金雀异黄酮（GS）对绝经期骨质疏松患者骨膜成骨细胞增殖的影响及其分子生物学机制。方法用噻唑蓝比色法和流式细胞术分别检测GS对成骨细胞增殖活力和细胞周期分布的影响；Western—blot技术分析GS对细胞周期蛋白D和E表达的影响。结果GS可显著提高成骨细胞增殖活力，与溶剂对照组比较，10^-8mol／L、10^-7mol／L和10^-6mol／L GS时，细胞增殖率分别为137％、155％和161％；提高S期和M／G2期细胞分布比例，并伴有G0／G1期细胞比例降低；它莫西芬可抑制10^-7mol／L和10^-6mol／L GS促成骨细胞增殖效应。Western—blot的检测结果显示，10^-8mol／L和10^-7mol／L GS对成骨细胞处理24h，提高细胞周期蛋白D和E蛋白质的表达（P〈0．05）。结论由于雌激素受体拮抗剂它莫西芬可抑制GS对成骨细胞的促增殖作用，表明金雀异黄酮可通过激活雌激素受体途径，表现出雌激素效应，并促进骨组织代谢中的骨形成作用。     

维甲酸抑制甲状腺鳞癌细胞株生长增殖作用机制的探讨

目的观察9-顺维甲酸（9-cis-RA）对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖及维甲酸受体B（RARβ）和p21表达的影响，进而探讨维甲酸的抗癌作用机制。方法将甲状腺鳞癌细胞株SW579分为对照组和实验组。实验组加入不同浓度的9-cis-RA，使其终浓度分别为1×10^-7mol／L、5×10^-7mol／L、1×10^-6mol／L、5×10^-6mol／L、1×10^-5mol／L，各组细胞均在培养24h后加药，继续培养48h。在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化；采用MTT比色法测定细胞增殖活性；流式细胞仪检测细胞周期；用RT-PCR方法检测SW579细胞RARβ及p21mRNA的表达。结果低浓度9-cis-RA组（1×10^-7mol／L、5×10^-7mol／L、1×10^-6mol／L）肿瘤细胞有向良性细胞形态转化的趋势；高浓度组（5×10^-6mol／L、1×10^-5mol／L）细胞生长密度较对照组明显降低，与低浓度组相比，向成熟分化的趋势不明显。MTT结果显示，实验组细胞均出现显著的生长抑制作用，且呈剂量依赖性。流式细胞仪分析，实验组随着9-cis-RA的升高，S期细胞在细胞周期中所占比例逐渐减少，G1期细胞则明显增加（P〈0．01），细胞滞留在G1期。RT-PCR检测结果表明，经不同浓度维甲酸处理的各组细胞RARβ和p21mRNA表达水平均显著上调。结论9-顺维甲酸在一定浓度范围内对甲状腺鳞癌细胞株SW579有剂量依赖性的增殖抑制作用，其机制可能与提高SW579细胞RARβ基因的表达，进而再上调p21的表达有关。