银杏叶提取物对慢性阻塞性肺疾病大鼠T细胞亚群的影响

目的探讨银杏叶提取物(Ginkgo biloba Extract,GBE)对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠血清、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中T淋巴细胞亚群的影响。方法将90只雄性Wistar大鼠按照随机数字表法分为正常对照组(A组)、COPD对照组(B组)、GBE早期干预组(C组)、GBE后期干预组(D组)、红霉素早期干预组(E组)及红霉素后期干预组(F组),每组15只。对B、C、D、E和F组采用烟雾吸入、冷空气刺激等复合因素对大鼠进行28 d COPD造模,C和D组分别在1~14 d和29~42 d用GBE干预,E和F组分别在1~14 d和29~42 d用红霉素干预,检测各组血清、BALF前后CD4~+、CD8~+含量,并计算CD4~+/CD8~+比值。结果 B组血清与BALF中CD4~+、CD4~+/CD8~+比值明显低于A组(P0.05),CD8~+的含量明显高于A组(P0.05)。C、D两组血清与BALF中CD4~+、CD4~+/CD8~+比值明显高于B组(P0.05),CD8~+含量明显低于B组(P0.05);C、D、E和F组之间CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+比值进行两两比较,差异无统计学意义(P0.05),C组BALF中CD4~+的含量明显高于E、F组(P0.05)。结论 GBE可通过增加COPD大鼠血清及BALF中CD4~+含量,提高CD4~+/CD8~+比值,降低CD8~+含量,实现对免疫功能的调节,从而增强机体免疫力。     

银杏叶提取物对慢性阻塞性肺疾病大鼠血清及肺组织中CRP、IL-1及IL-8的影响

目的:探讨银杏叶提取物(GBE)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血清及肺组织中C反应蛋白(CRP)、白介素-1(IL-1)、白介素-8(IL-8)的影响。方法:将60只大鼠随机分为4组,每组15只,分别记为A组(正常对照组)、B组(COPD对照组)、C组(GBE干预组)和D组(红霉素干预组)。除A组外其他组大鼠通过香烟熏吸联合气道内注入脂多糖的方法造模。造模完成后每组随机取2只大鼠处死并取组织切片进行病理检查。A组和B组在造模成功后2周内给予生理盐水0. 4 m L/(kg·d),C组给予GBE 0. 4 m L/(kg·d),D组根据体表面积换算方法给予红霉素100 mg/kg2。实验结束后检测各组大鼠血清及肺组织中CRP、IL-1、IL-8水平。结果:B、C、D组血清和肺组织CRP水平均明显高于A组(P 0. 05),C、D组血清和肺组织CRP水平相较B组有明显降低(P 0. 05),其中C、D组两组相较差异无统计学意义(P 0. 05); B、C、D组血清和肺组织IL-1水平均明显高于A组(P 0. 05),C、D组血清和肺组织IL-1水平相较B组有明显降低(P 0. 05),其中C、D组两组相较差异无统计学意义(P 0. 05); B、C、D组血清和肺组织IL-8水平均明显高于A组(P 0. 05),C、D组血清和肺组织IL-8水平相较B组有明显降低(P 0. 05),其中C、D组两组相较差异无统计学意义(P 0. 05)。结论:GBE能够有效降低COPD大鼠血清及肺组织中CRP、IL-1、IL-8水平,抑制气道和全身炎症反应。     

血清SAA、FKN水平与COPD患者病情程度的相关性

目的:研究血清淀粉样蛋白A(SAA)、不规则趋化因子(FKN)水平变化与慢性阻塞性肺疾病(COPD患者病情程度的相关性。方法:选取郑州大学附属洛阳中心医院2017年9月至2019年1月收治的COPD患者120例作为观察组,其中根据病情程度分为COPD稳定期患者56例,慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者64例,另选取同期健康体检者115例作为对照组。检测两组的血清SAA、FKN水平,分析两者与COPD患者病情程度相关性。结果:观察组血清SAA、FKN水平高于对照组,差异具有统计学意义(P 0.05);AECOPD患者血清SAA、FKN水平高于COPD稳定期患者,差异具有统计学意义(P 0.05);患者病情程度与血清SAA水平呈正相关(r=0.622,P 0.05)、与FKN水平呈正相关(r=0.541,P 0.05)。结论:血清SAA、FKN水平在COPD患者中呈现异常升高趋势,且与病情程度具有正相关关系,可为临床准确判断病情程度、制定治疗方案提供可靠信息。     

银杏叶提取物干预肺纤维化模型大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的变化

目的:观察AT-Ⅱ细胞在博莱霉素致大鼠肺纤维化过程中的动态变化及银杏叶提取物对肺纤维化模型大鼠AT-Ⅱ细胞凋亡的影响。方法:96只W istar大鼠,随机分成正常组(A组)、模型组(B组)、强的松干预组(C组)、银杏叶提取物干预组(D组)。每组各24只,除A组外,其余各组采用博莱霉素复制大鼠肺纤维化模型,造模第2天起,D组用银杏叶提取物灌胃,C组用强的松混悬液灌胃,A、B组用生理盐水灌胃。每组分别于造模后第7、14、28天随机取8只大鼠,参照文献提取AT-Ⅱ细胞,用流式细胞仪检测AT-Ⅱ细胞凋亡率。结果:博莱霉素可使AT-Ⅱ细胞的凋亡率明显增加;D组与B组相比,凋亡率有显著下降(P<0.05)。结论:银杏叶提取物对AT-Ⅱ细胞可能有直接抗凋亡作用,可能通过抑制AT-Ⅱ细胞的过度凋亡而起到保护和修复肺泡结构及功能的作用。     

复方钩藤降压片对自发性高血压大鼠P13K/Akt信号通路及其下游细胞炎性因子的影响

目的研究复方钩藤降压片对P13K/Akt信号通路调节作用以及CRP、IL-6、IL-8、TNF-ɑ相关炎症因子表达的影响,探讨复方钩藤降压片对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensire rats, SHR)的可能降压机制。方法将40只8周龄雄性SPF级SHR随机分为:模型组(A组)、复方钩藤组(B组)、西药组(C组)、阻断剂组(D组)、阻断剂+复方钩藤组(E组),另取8只雄性Wistar(WKY)大鼠为空白对照组(F组)。所有大鼠给予相应干预,6周后采用ELISA方法检测血清中CRP、IL-6、IL-8、TNF-ɑ的含量;采用Western blot和RT-PCR方法检测胸主动脉组织PI3K、Akt、p-Akt的蛋白和基因水平。结果各组实验大鼠血清CRP、IL-6、IL-8、TNF-ɑ表达明显升高,均明显高于F组(P0.05),且各组间差异明显。其中,A、D组表达最高,与其他组别相比差异有统计学意义(P0.05);B、C组较A、D组表达为低,差异有统计学意义(P0.05)。A、B、C、D、E组实验大鼠胸主动脉组织PI3K、p-Akt蛋白表达明显下调,与F组相比差异具有统计学意义(P0.05),其中A、D、E组表达最低,与其他各组相比差异有统计学意义(P0.05)。B、C组下调程度稍缓,其中B组下调程度C组更为缓慢,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。各组实验大鼠胸主动脉组织PI3K基因表达明显下调,与F组相比差异具有统计学意义(P0.05),其中A、D、E组表达最低,与其他各组相比差异有统计学意义(P0.05)。各组胸主动脉组织Akt基因的表达比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论复方钩藤降压片能有效降低SHR的血压,降低心率,且可通过上调PI3K蛋白和基因的表达,调控Akt及下游CRP、TNF-ɑ、IL-6等炎症因子的表达,抑制炎症反应,从而改善高血压病炎症状态。     

芪麝颈康丸对颈椎间盘细胞凋亡的影响

目的探讨芪麝颈康丸抑制颈椎间盘退变的细胞分子机制.方法将48只大鼠分成四组,切除其中36只(A、B、C三组)颈后部浅、中层肌,造成颈椎间盘退变模型,D组为正常假手术组.分别给予芪麝颈康丸(A)、颈复康(B)等药物治疗,C、D组不给药.4月后将动物处死,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法观察大鼠颈椎间盘退变模型椎间盘组织中细胞凋亡的情况及芪麝颈康丸等对细胞凋亡的影响.同时观察各组椎间盘退变程度的变化.结果模型空白组(C)椎间盘退变明显,与A、D组比较,差异有显著意义(P＜0.05,P＜0.01).正常组D组椎间盘细胞凋亡指数低于其余各组,分别与A、B、C组比较差异有显著意义(P＜0.05);空白对照组C组细胞凋亡指数偏高,A组、B组细胞凋亡指数低于C组,但差异没有显著意义(P＜0.05).结论动物颈椎间盘退变与椎间盘细胞凋亡有关.A组细胞凋亡指数明显低于C组,差异虽无显著意义,却预示芪麝颈康丸有抑制椎间盘细胞凋亡的可能性.     

蜥蜴胃康方及其拆方含药SD大鼠血清对人胃癌细胞BCG-823的影响研究

目的研究蜥蜴胃康方及其拆方含药SD大鼠血清对人胃癌细胞BCG-823增殖凋亡,以及细胞E-钙黏素(Ecad)、整合素(Integrin)、基质金属蛋白酶(MMP-9)蛋白表达水平的影响,阐明蜥蜴胃康方干预胃癌细胞的作用及其机制。方法 70只SPF级雄性SD大鼠,随机分为7组:生理盐水对照组(A),蜥蜴胃康方组(B)、拆方补气组(C)、养阴组(D)、解毒通络组(E)、华蟾素片对照组(F)、5-FU对照组(G),每组10只。各组分别用相应浓度药物灌胃1周后处死,于腹主动脉处取血、离心,制备含药血清,加于人胃癌细胞BCG-823培养48h,MTT法检测含药血清对胃癌细胞增殖凋亡的影响;Western-Blot检测胃癌细胞Integrin、E-cad、MMP-9蛋白表达的变化。结果各含药大鼠血清干预组OD均值小于生理盐水对照组;蜥蜴胃康方组(B)及其拆方C、E组与对照组F、G比较,P0.05;蜥蜴胃康方组B与拆方组C、D、E比较,P0.05;拆方组C、D、E组之间比较,P0.05,以补气组C作用较佳,其次为解毒通络组;Integrin、E-cad蛋白表达与生理盐水组比较,呈显著升高趋势;MMP-9蛋白表达与生理盐水组比较则显著降低,均以蜥蜴胃康方组为著。结论蜥蜴胃康方可通过影响Integrin、E-cad及MMP-9蛋白表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,具有较好的抗癌作用。     

青娥方调节MMP2/EGFR通路影响成骨细胞凋亡的实验研究

目的:探讨中药青娥方调节MMP2/EGFR通路影响成骨细胞凋亡的作用机制。方法:成骨细胞分为6组,A组只加入培养液。除A组外,均加入30ng/mL的TNF-α培养液,C组再加入MMP2重组蛋白,D组再加入5%含药血清,E组再加入10%含药血清,F组再加入MMP2重组蛋白干预后5%含药血清。最后测定各组凋亡率和信号蛋白表达水平。结果:B组比A组细胞凋亡数目增加显著,F组凋亡细胞比例最小(仅为22.97%),而D组中处于G0-G1期的细胞最少,S期的细胞最多。C组中ERK2和Bad表达显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。D和E两组比较,EGFR含量轻微下降,ERK2含量稍有增加,而Bad含量无变化,差异均无统计学意义(P>0.05)。F组中EGFR表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);ERK2和Bad明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:只有中药青娥丸和基质金属蛋白酶同时应用可降低EGFR-ERK2-Bad通路蛋白表达,成骨细胞失凋亡,促进成骨。     

血清SAA、hs–CRP和PCT联合检测在新生儿感染诊断中的应用

目的:探讨新生儿感染诊断中血清淀粉样蛋白A(SAA)、超敏C反应蛋白(hs–CRP)和降钙素原(PCT)联合检测的应用价值。方法:选取2018年10月至2019年10月河源市妇幼保健院收治的细菌感染新生儿、病毒感染新生儿各70例,分别用免疫比浊法测定SAA、hs–CRP,用荧光免疫层析法测定PCT水平,并进行比较。结果:细菌感染组血清PCT、SAA、hs–CRP水平与病毒感染组相比,均显著偏高,差异具有统计学意义(P 0.05)。细菌感染组PCT、hs–CRP阳性率高于病毒感染组,差异具有统计学意义(P 0.05),而SAA阳性率与病毒感染组比较,差异无统计学意义(P 0.05)。结论:在新生儿感染诊断中应用血清PCT、SAA、hs–CRP联合检测,价值突出,可将其当作病情诊断与判断的基础指标,其对病毒感染、细菌感染的鉴别与诊断有利。     

安胃汤含药血清调节Fas/FasL信号通路促进MC细胞凋亡的影响

目的探讨安胃汤含药血清对MC细胞[MNNG诱导人胃黏膜上皮细胞系(GES-1)恶性转化]Fas/FasL信号通路相关因子及细胞凋亡影响。方法根据中药复方血清药理学实验方法,以MC细胞为研究对象,设立空白组(A组)、安胃汤组(B组)、安胃汤+阻断剂组(C组)、阻断剂组(D组)。含药血清处理12 h、24 h、48 h后的各组细胞采用流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测细胞培养液上清FasL的含量;Western blot和Real-time PCR检测Fas、Bcl-2、Bax蛋白及mRNA的表达。结果 A组细胞凋亡率比较低,B、C、D组细胞凋亡率有所增加;24h和48h时,与A组比较,B、C、D三组细胞培养液上清中FasL的含量均有所增加(P0.01);与A组相比,B、C、D三组细胞内Fas、Bax基因及蛋白表达有所升高(P0.01或P0.05),Bcl-2基因及蛋白表达有所降低(P0.01或P0.05)。结论安胃汤能促进MC细胞细胞凋亡,可能与其通过调控Fas/FasL通路,调控Bcl-2、Bax mRNA及蛋白有关。     

蜥蜴胃康方及其拆方含药SD大鼠血清对人胃癌细胞BCG-823影响的研究

目的:研究蜥蜴胃康方及其拆方含药SD大鼠血清对人胃癌细胞BCG-823增殖凋亡,以及细胞E-钙黏素(E-cad)、整合素(Integrin)、基质金属蛋白酶(MMP9)蛋白表达水平的影响,阐明蜥蜴胃康方干预胃癌细胞的作用及其机制。方法:70只SPF级雄性SD大鼠,随机分为7组:生理盐水对照组A,蜥蜴胃康方组B、拆方补气组C、养阴组D、解毒通络组E、华蟾素片对照组F、5-FU对照组G,每组10只。各组分别用相应浓度药物灌胃1周后处死,于腹主动脉处取血、离心,制备含药血清,加于人胃癌细胞BCG-823培养48h,MTT法检测含药血清对胃癌细胞增殖凋亡的影响;WesternBlot检测胃癌细胞Integrin、E-cad、MMP-9蛋白表达的变化。结果:各含药大鼠血清干预组OD均值小于生理盐水对照组;蜥蜴胃康方组B及其拆方C、E组与对照组F、G比较,P﹤0.05;蜥蜴胃康方组B与拆方组C、D、E比较,P﹤0.05;拆方组C、D、E组之间比较,P0.05,以补气组C作用较佳,其次为解毒通络组;Integrin、E-cad蛋白表达与生理盐水组比较,呈显著升高趋势;MMP-9蛋白表达与生理盐水组比较则显著降低,均以蜥蜴胃康方组为著。结论:蜥蜴胃康方可通过影响Integrin、E-cad及MMP-9蛋白表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,具有较好的抗癌作用。     

安胃汤含药血清通过调节PI3K/Akt信号通路促进MC细胞凋亡的研究

目的:探讨安胃汤含药血清对MC细胞(MNNG诱导人胃黏膜上皮细胞系(GES-1)恶性转化)PI3K/Akt信号通路相关因子及细胞凋亡影响。方法:根据中药复方血清药理学实验方法,以MC细胞为研究对象,设立空白组(A组)、安胃汤组(B组)、安胃汤+阻断剂组(C组)、阻断剂组(D组)。含药血清处理12、24、48 h后的各组细胞采用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot和Real-time PCR检测PI3Kα、AKT、XIAP蛋白及mRNA的表达。结果:A组细胞凋亡率比较低,B、C、D组细胞凋亡率有所增加,C组细胞凋亡率增加最为明显;与A组相比,B、C、D 3组细胞内PI3Kα、AKT、XIAP基因及蛋白表达有所降低(P0.01或P0.05)。结论:安胃汤能促进MC细胞细胞凋亡,可能与其通过调控PI3K/Akt通路,下调XIAP基因及蛋白有关。     

复方蜥蜴散含药大鼠血清对人胃癌细胞MGC-803增殖、凋亡及周期的影响

目的研究复方蜥蜴散含药大鼠血清对人胃癌细胞MGC-803增殖、凋亡及周期的影响,探讨其对胃癌的干预作用。方法 160只SPF级SD雄性大鼠随机分成8组:生理盐水组(A组)、5-FU组(B组),华蟾素组(C组)、复方蜥蜴散80目组(D组)、复方蜥蜴散100目组(E组),80与100目混合低剂量组(F组)、中剂量组(G组)和高剂量组(H组),每组共20只。各组给予相应干预,1次/d,持续1周。末次给药后1 h,腹腔麻醉,无菌条件下腹主动脉取血、离心,制备各组含药血清,分别干预人胃癌MGC-803细胞24 h,采用MTT法检测细胞的增殖变化; TUNEL检测细胞凋亡情况;流式细胞法检测细胞的周期变化。结果 (1)与A组相比,各处理组含药大鼠血清均能抑制人胃癌细胞MGC-803的增殖、诱导其凋亡,并且将细胞阻滞于G1期,P <0. 05。(2)复方蜥蜴散各组OD均值小于B、C组,P <0. 05;复方蜥蜴散各组细胞总凋亡率大于B、C组,P <0. 05;复方蜥蜴散各组G1期细胞比例大于B、C组,P <0. 05。(3)F、G、H各组OD均值小于D、E组,P <0. 05; F、G、H各组细胞总凋亡率大于D、E组,P <0. 05; F、G、H各组G1期细胞比例大于D、E组,P <0. 05。(4)F、G、H组比较,以H组对人胃癌细胞MGC-803的影响最为明显P <0. 05;其中F、G、H组呈浓度-效应依赖性。结论复方蜥蜴散含药大鼠血清对体外培养MGC-803细胞有抑制增殖、诱导凋亡、使其发生周期阻滞的作用,表现出对胃癌较好的干预作用。     

天麻钩藤饮加风药治疗高血压(肝阳上亢证)大鼠风药增效性研究

目的:探讨天麻钩藤饮加风药(羌活、川芎)治疗高血压(肝阳上亢证)的增效作用及其作用机理。方法:取SD雄性大鼠130只,分为F组(假手术)、G组(正常)和造模组。造模组采用肾性高血压(RHR)大鼠模型,加灌附子汤及激惹方法,制备高血压肝阳上亢证模型,取造模成功的大鼠随机分为A组(天麻钩藤饮+风药(羌活、川芎)组)、B组(天麻钩藤饮组)、C组(卡托普利组)、D组(羌活、川芎)、E组(模型组)五组,灌胃给药4周后,检测大鼠收缩压(SBP)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、C反应蛋白(CRP)等指标,评价其对RHR(肝阳上亢证)大鼠高血压的改善作用。结果:给药后,SBP:A组、B组、C组均较E组血压下降明显(P0.05),A组比B、C组血压下降明显(P0.05);ALD:A、B、C、D组均比E组数值低(P0.05),A组比B、C、D组数值低(P0.05);AngⅡ:A、B、C、D组水平较E组低,差异有统计学意义(P0.05),D组与A组、G组差异无统计学意义(P0.05);CRP:各组均相近,差异无统计学意义(P0.05)。结论:天麻钩藤饮+风药(羌活、川芎)有显著的降压作用,其作用优于单用天麻钩藤饮、卡托普利,后两者降压作用相当。其降压作用可能与降低ALD、AngⅡ有关。     

不同剂量红霉素在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化中的疗效观察

目的:观察不同剂量红霉素在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化中的疗效。方法:选取55只体质量18~22 g的雄性C57/BL6小鼠,周龄6~8周,随机分为A、B、C、D、E组,A、B每组20只,C、D、E组每组5只。A组为0.9%氯化钠溶液对照组,B组为肺纤维化模型组,C组为地塞米松干预组,D、E组分别采取不同剂量红霉素治疗,D组为50 mg·kg~(-1),E组为100 mg·kg~(-1),比较各组小鼠肺系数、肺组织肺泡炎及肺纤维化程度、羟脯氨酸(HYP)含量,观察肺组织IL-17A蛋白在各组中不同时间点的表达水平。结果:(1)D、E组较B组肺系数明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);(2)D、E组较B组肺泡炎及肺纤维化程度评分明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);(3)D、E组较B组HYP含量明显降低,差异具有统计学意义(P0.05),且E组降低更显著;(4)D、E组较B组IL-17A蛋白浓度明显降低,差异具有统计学意义(P0.05),且E组降低更显著。结论:不同剂量的红霉素均有助于减轻博来霉素诱导的小鼠肺泡炎及肺纤维化程度,降低肺系数及HYP含量,减少IL-17的表达,且以100 mg·kg~(-1)浓度为佳。     

温阳补肾药对抗骨髓间充质干细胞凋亡的实验研究

目的:探讨温阳补肾药对骨髓间充质干细胞凋亡的影响及作用机制。方法:建立白细胞介素1β诱导体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞凋亡体系,分别向其中加入巴戟天含药血清(A组)、鹿角胶含药血清(B组)、淫羊藿含药血清(C组)、骨碎补含药血清(D组)和空白血清(F组),E组不加入血清。各组细胞培养48 h后,采用RT-PCR法检测bcl-2和Bax的mRNA表达量,采用电泳法检测骨髓间充质干细胞凋亡体系的建立,采用Western Blot法检测bcl-2和Bax的蛋白表达量。结果:①骨髓间充质干细胞表面标记结果。流式细胞仪检测结果显示CD34、CD45表达阴性,CD90表达阳性。②bcl-2和Bax的mRNA表达量。各组bcl-2mRNA表达量比较,差异有统计学意义(22.25±1.15,15.18±1.51,15.36±0.72,16.12±0.95,16.79±1.39,16.02±1.14;F=182.000,P=0.000)。A组bcl-2mRNA表达量高于B组、C组、D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);E组高于B组(P=0.030)。各组BaxmRNA表达量比较,差异有统计学意义(19.17±0.67,15.37±1.02,18.18±0.23,17.37±0.72,28.36±0.93,23.52±1.26;F=28.422,P=0.000)。A组BaxmRNA表达量高于B组和D组(P=0.001,P=0.018),低于E组(P=0.001);B组低于C组、E组和F组(P=0.013,P=0.000,P=0.000),B组与D组比较,差异无统计学意义(P=0.052);D组低于F组(P=0.000);E组高于C组和F组(P=0.000,P=0.000)。③bcl-2DNA和BaxDNA电泳结果。电泳图谱显示,E组条带与A组、B组、C组、D组有明显差异。④bcl-2和Bax的蛋白表达量。各组bcl-2蛋白表达量比较,差异有统计学意义(11 526.18±697.38,20 096.88±953.73,16 784.88±504.36,14 856.65±546.90,8 549.29±313.63,9 004.79±399.12;F=341.740,P=0.000)。A组bcl-2蛋白表达量低于B组、C组和D组(P=0.000,P=0.000,P=0.000),高于E组和F组(P=0.000,P=0.000);B组高于C组、D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);C组高于D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);D组高于E组和F组(P=0.000,P=0.000)。各组Bax蛋白表达量比较,差异有统计学意义(12 435.09±1002.35,4 590.96±71.45,11 721.90±855.08,10 393.54±662.79,13 874.83±541.16,12 774.15±674.40;F=136.305,P=0.000)。A组Bax蛋白表达量高于B组和D组(P=0.000,P=0.039);B组低于C组、D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);C组低于E组(P=0.010);D组低于E组和F组(P=0.000,P=0.002)。结论:温阳补肾药含药血清有对抗白细胞介素1β诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的作用,其机制主要是上调抑制凋亡基因Bcl-2的表达,下调促进凋亡基因Bax的表达,抑制其蛋白酶活性从而降低细胞凋亡率。     

真武汤抗大鼠心肌细胞凋亡机制的体外实验研究

目的:通过真武汤抗大鼠心肌细胞凋亡机制的体外实验研究,阐述真武汤抗心肌细胞凋亡的具体机制。方法:(1)采用MTT法分别观察于3 h、6 h、12 h三个时间点异丙肾上腺素对心肌细胞活性的影响,测定细胞存活率,选择建立体外心肌细胞损伤模型所需异丙肾上腺素的最佳时间及剂量;(2)筛选真武汤含药血清的最佳浓度;(3)实验分为模型对照组[异丙肾上腺素(10~6 mol/L)]、空白对照组、真武汤组(异丙肾上腺素+10%含药血清)、卡托普利组[异丙肾上腺素+卡托普利(10-6mol/L)];(4)AO/EB双重荧光染色和流式细胞仪检测心肌细胞凋亡;(5)Western blotting方法测定培养心肌细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果:(1)异丙肾上腺素对心肌细胞的生长有抑制作用;异丙肾上腺素10μmol/L作用6h后,细胞存活率降低明显。(2)真武汤含药血清浓度的选择:各组心肌细胞与相应干预措施作用48h后,各干预组细胞活性均低于空白组,差异有统计学意义(P0.05);卡托普利组及不同浓度含药血清组细胞活性均高于异丙肾上腺素组(P0.05);20%含药血清组、10%含药血清组与卡托普利组相比细胞存活率相似,差异无统计学意义,但考虑到中药的细胞毒作用及成本,选择10%含药血清组进行后续实验。(3)AO/EB双重荧光染色检测细胞凋亡:与空白组比较,真武汤组及西药组可见明显抑制心肌细胞凋亡。(4)流式细胞仪检测心肌细胞凋亡:模型对照组细胞凋亡率明显升高,与空白对照组比较有显著差异(P0.01);卡托普利组及真武汤组与模型对照组相比细胞凋亡明显降低,有统计学差异(P0.05)。(5)Western Blotting检测结果:真武汤组和卡托普利组与模型对照组相比较,Caspase-3蛋白表达降低(P0.05)。结论:真武汤能降低心肌细胞损伤,抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与调节Caspase-3蛋白表达有关。     

温和灸对动脉粥样硬化兔血清淀粉样蛋白、白介素-6、肿瘤坏死因子-α及白介素-10水平的影响

目的:观察温和灸对动脉粥样硬化(AS)兔血清淀粉样蛋白(SAA)、白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-10含量及肝组织淀粉样蛋白表达的影响,探讨温和灸治疗AS的抗炎机制。方法:将40只日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、温和灸组及药物组,以高脂饲养及免疫损伤法制备AS模型。温和灸组艾灸"神阙"及"后三里",每日1次,连续14周;药物组以洛伐他丁每日10mg/kg灌胃。采用ELISA法检测血清SAA、IL-6、TNF-α、IL-10水平,观察颈总动脉组织形态学变化,Western blot法检测各组肝淀粉样蛋白表达。结果:模型组兔血清SAA、IL-6、IL-10、TNF-α明显高于正常组(P0.01,P0.05);温和灸组及药物组血清SAA、IL-6、TNF-α较模型组降低(P0.05,P0.01),IL-10较模型组升高(P0.05,P0.01)。模型组动脉内膜下有大量含脂质泡沫细胞增生;温和灸组及药物组泡沫细胞增生减少。模型组兔肝组织淀粉样蛋白表达明显高于正常组(P0.05);温和灸组和药物组与模型组比较,肝组织淀粉样蛋白表达明显降低(P0.01)。温和灸组与药物组比较,各指标的差异均无统计学意义(P0.05)。结论:温和灸组及药物组均能通过调节相关抗炎因子和促炎因子,达到治疗AS的作用,温和灸组与药物组疗效相当。     

肾衰Ⅱ号方对5/6肾切除大鼠残余肾组织凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察肾衰Ⅱ号方对5/6(ablation/infarction,A/I)肾切除慢性肾衰竭(CRF)大鼠残余肾组织凋亡相关蛋白表达的影响。方法 SD雄性大鼠采用5/6(A/I)肾切除术制备CRF大鼠模型,随机分为模型组、肾衰Ⅱ号方组、西药组,每组15只,另取15只大鼠作为假手术组。各组给予相应干预,60 d后Western blot检测凋亡相关蛋白p53、Bax、Cleaved-parp的表达,免疫组化检测p53、Bax蛋白的表达,透射电镜观察肾组织超微结构。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾皮质和肾髓质p53、Bax、Cleaved-parp蛋白表达明显升高(P0.05);与模型组比较,各给药组大鼠肾皮质和肾髓质p53、Bax、Cleaved-parp蛋白表达明显降低(P0.05)。免疫组化结果显示,p53、Bax蛋白表达主要位于肾小管,模型组大鼠炎性细胞浸润明显,蛋白表达较假手术组明显升高,各给药组较模型组炎性细胞浸润减轻,p53和Bax蛋白表达降低。透射电镜结果显示,假手术组大鼠肾皮质和肾髓质未见细胞凋亡,超微结构正常,模型组大鼠核固缩,细胞凋亡出现,超微结构紊乱,各给药组较模型组超微结构改善,少见细胞凋亡发生。结论肾衰Ⅱ号方可抑制5/6(A/I)肾切除CRF大鼠细胞凋亡,其作用机制可能与下调p53、Bax、Cleaved-parp蛋白表达相关。     

加味参附汤对肾阳虚肺纤维化大鼠凋亡相关因子caspase-3和Bcl-2表达的影响

目的:观察加味参附汤对肾阳虚肺纤维化大鼠模型的病变程度及caspase-3和Bcl-2在模型大鼠肺内表达的影响。方法:大鼠60只随机分为正常组、模型组和干预组。模型组和干预组制作肾阳虚肺纤维化大鼠模型,造模成功后干预组给予加味参附汤治疗,常规石蜡切片,HE染色,观察肺泡炎及肺纤维化程度,免疫组织化学技术检测caspase-3和Bcl-2蛋白在各组大鼠肺组织中的表达。结果:caspase-3和Bcl-2主要在肺泡上皮细胞、肺泡巨噬细胞及浸润的炎症细胞中表达,第28天,模型组、干预组caspase-3和Bcl-2蛋白表达增强,均高于正常组(P0.05)。第42天,干预组大鼠细胞caspase-3表达较模型组降低(P0.05),而Bcl-2表达在干预组中增强,高于模型组(P0.05)。结论:在大鼠肾阳虚肺纤维化的发展过程中,肺组织细胞凋亡起重要作用,加味参附汤可用通过调控caspase-3和Bcl-2蛋白的表达而减少细胞凋亡,从而减缓肾阳虚肺纤维化的进展。