深低温处理同种异体肌腱移植组织形态学变化实验研究

目的探讨经深低温冷冻处理(-80℃)、未经处理同种异体肌腱和自体肌腱移植后组织形态学的变化。方法采用兔跟腱缺损修复模型,分为深低温冷冻同种异体肌腱移植组(深低温异体组)、未经处理同种异体肌腱移植组(未处理异体组)和自体肌腱移植组(自体组)。在移植后3周对肌腱进行组织形态学观察。结果光镜、电镜下未处理异体组肌腱腱束变性、坏死,而深低温异体组与自体组则无明显差别。结论深低温冷冻同种异体肌腱移植在形态学方面的表现与自体肌腱移植结果基本相同。     

兔同种异体肌腱移植的电镜观察

目的:观察分析同种异体肌腱(经深低温和普通低温处理)、自体肌腱、未经处理的同种异体肌腱移植后电镜下的微观变化特点,为同种异体肌腱移植提供理论依据。方法:新鲜自体肌腱和未经处理的同种异体肌腱切下后立即移植于相应受体,同种异体肌腱分别经普通低温(-26℃)、深低温冷冻(-80℃)处理10d后移植于相应受体,移植后3周,取移植腱段,透射电镜下观察。结果:深低温处理组:腱细胞增生活跃,数量多,细胞器发达,新生的细胶原原纤维较多,与自体肌腱移植组镜下观察结果比较接近;普通低温处理组:腱细胞数量少,细胞器功能不发达,仍能见到少量的新生的细胶原原纤维;未经处理的同种异体肌腱组:偶见腱细胞,未见到新生的细胶原原纤维,粗胶原原纤维排列紊乱、疏松。结论:经深低温冷冻处理的同种异体肌腱移植后与自体肌腱移植后的电镜观察结果接近,提示免疫排斥反应轻;普通低温处理的同种异体肌腱移植后电镜观察结果优于未经处理的同种异体肌腱移植,但又差于深低温冷冻处理的同种异体肌腱移植,提示仍存在明显的免疫排斥反应。     

关节镜下自体与同种异体骨-髌腱-骨重建膝前交叉韧带的临床探讨

目的探讨关节镜下自体与同种异体骨-髌腱-骨（B-PT—B）移植重建膝前交叉韧带（ACL）的临床疗效。方法对术前MRI检查有前交叉韧带断裂且术中关节镜检证实为前交叉韧带断裂者25例,按病人要求,分别选择采用关节镜下自体（自体组）和同种异体（同种异体组）骨-髌腱-骨移植重建膝前交叉韧带进行治疗,观察并记录两组治疗前后的症状、体征变化及术后Lysholm膝关节功能评分。术后随访6～24个月,平均16．7个月。结果两组术后均未发生严重的并发症,关节失稳明显改善,客观指标正常。手术时间自体组为（80±10）min,同种异体组为（60±10）min。术后发热时间自体组为（2±1）d,同种异体组为（3±1）d。膝关节功能按Lysholm评分标准,自体组为（86．7±4．3）min,同种异体组为（85．8±4．4）min。按Lukiano评分标准,自体组优良率为92．5％,同种异体组为90．09％。两组病例膝关节活动范围均正常。结论采用关节镜下自体B—PT-B移植手术时间较同种异体B—PT-B移植时间长,而术后吸收热时间较短（P〈0．01）,但白体与异体B—PT—B移植住院时间、Lysholm评分和重建ACL临床疗效差异均无统计学意义（P〉0．05）。同种异体移植重建无明显排斥反应,避免了自体B-PT—B重建时的自体组织损伤。同种异体B—PT—B是ACL重建的良好选择之一。     

自体髌腱前交叉韧带重建术供区不适的防治

目的 探讨自体髌腱前交叉韧带重建术的供区不适的防治方法.方法 2004年10月至2009年8月,收治前交叉韧带断裂患者30例,其中采用自体髌腱移植9例,余21例使用同种异体髌腱重建,均在关节镜下行ACL重建,术后予科学的康复训练.经随访3-26月,以临床检查(前抽屉试验、Lachman实验、轴移实验)IKDC评分、Lysholm评分来评估疗效.结果 9例采用自体髌腱移植重建前交叉韧带的患者,经过术中髌腱供区植骨、与异体髌腱移植重建一致的康复训练,短、中期随访膝关节稳定性无明显差异.自体髌腱移植9例患者中出现2例膝部皮肤麻木,1例跪地疼痛,2例膝行疼痛,髌腱供区不适的发生率与文献报道相比明显降低.结论 植骨修补髌腱供区表面缺损,结合康复锻炼可减少自体髌腱移植术供区的不适症状,尤其膝部疼痛明显减少.     

同种异体肌腱移植的实验研究

采用淋巴细胞毒试验、淋巴细胞转化试验及吞噬细胞功能实验等多项细胞免疫学指标测定 ,以及组织形态学观察与生物力学测定 ,比较深低温冷冻与深低温冷冻干燥两种不同处理方式对同种异体肌腱移植的差异 ,并综合评价各种移植的效果。结果显示 :①深低温冷冻移植组及深低温冷冻干燥移植组的淋巴细胞死亡率、转化率及吞噬细胞吞噬率均低于未经处理的同种异体移植组 (P <0 .0 5) ,而与自体肌腱移植组差异无显著性 (P >0 .0 5) ;②深低温冷冻移植组、深低温冷冻干燥移植组及自体肌腱移植组肌腱无明显坏死 ,但腱周出现轻度粘连和结合部膨大 ,未经处理的同种异体肌腱移植组肌腱变性坏死 ;③光镜、电镜下未经处理的异体肌腱移植组肌腱腱束变性坏死 ,而深低温冷冻移植组与冷冻干燥移植组则无明显差别。上述结果表明 ,深低温冷冻干燥或冷冻但未经干燥的同种异体肌腱在免疫学、生物力学、形态学方面的表现与自体肌腱移植结果基本相同 ,而未经处理的异体肌腱因免疫排斥反应大 ,移植后易变性坏死     

膝关节镜下自体半腱肌移植和髌腱重建前交叉韧带对比观察

目的:观察关节镜下不同术式重建前交叉韧带的疗效,根据不同情况选择合适的手术方式.方法:采用Lysholm膝关节评分法,对行自体髌腱骨-腱-骨重建前交叉韧带和半腱肌移植重建前交叉韧带两种术式及随访资料进行分析.结果:膝关节评分自体髌腱组平均82.4±7.2,半腱肌移植组为85.3±11.6.结论:自体半腱肌移植和髌腱自体髌腱组在Lysholm评分上无明显差异,两者均为目前前交叉韧带重建的主要方法,如果复合内侧副韧带、鹅足腱等损伤出现关节内侧结构不稳,采用髌腱重建韧带.     

自体与同种异体肌腱重建前交叉韧带临床对比分析

目的:观察自体骨-髌腱-骨与同种异体移植物关节镜下重建膝关节前交叉韧带(ACL)的疗效与差异。方法:将52例ACL损伤患者分为两组:自体骨-髌腱-骨组23例,同种异体肌腱移植组29例。回顾性分析比较两组患者术前、术后一般情况,膝关节Lachman试验、中立位前抽屉试验(ADT)、Lysholm评分及IKDC评分。随访时间为6～12个月,平均8个月。结果:所有患者均获得随访,术后切口均愈合良好。自体组无明显免疫排斥反应发生,异体组有6例患者出现排斥反应,经甲强龙治疗后愈合良好。两组手术前后各项指标差异有显著性差异;术后膝关节稳定性、Lysholm评分及IKDC评分两组之间未见明显差异。结论:关节镜下自体及同种异体肌腱重建ACL都有较好的疗效,同种异体肌腱重建组无取材区并发症及手术创伤小的优点。     

二步冷冻保存同种异体骨-ACL-骨移植后排斥反应的影响

目的 :探讨新鲜异体和二步冷冻保存同种异体骨 前交叉韧带 (ACL) 骨移植后排斥反应的差异。方法 :将 6 0只新西兰兔和 6 0只日本大耳兔分别随机分成自体骨 ACL 骨移植组、新鲜异体骨 ACL 骨移植组和二步冷冻保存同种异体骨 ACL 骨移植组 ,分别于术前及术后 1周、2周、3周、4周各采血 2ml测定血清中白细胞介素 2 (IL 2 )水平 ,术后 4周、12周切取移植关节 ,作苏木精 -伊红染色。结果 :光镜下检查显示 ,自体移植组和二步冷冻保存移植组均未见明显炎性细胞浸润 ,胶原排列规则 ,分化成熟。新鲜异体移植组有大量淋巴细胞浸润 ,其IL 2水平明显高于自体移植组和二步冷冻保存同种异体移植组且高于术前水平 (P <0 .0 1)。结论 :二步冷冻减轻了同种异体骨 ACL 骨移植后排斥反应 ,移植后其组织学改变同自体移植相似     

自体腱与同种异体腱重建前交叉韧带术后体温的对照研究

目的：了解自体腱和同种异体腱重建膝关节前交叉韧带术后体温变化差异,寻求相应的护理措施。方法对30例自体腱和30例同种异体腱重建前交叉韧带的患者术前1 d、术后0 d~4 d每日4个时间点的体温进行观察。结果异体腱重建的患者术后0d~4d的体温与自体腱重建的患者体温无明显差异,对2组患者术后0d至术后4d的每日平均体温、每日体温最高值、每日体温最低值以及术后3d白细胞计数分别进行统计,仅术后2 d平均体温和术后2 d体温最低值的差异有统计学意义（P＆lt;0.05）,但二者体温均在正常值范围内,其余体温差异均无统计学意义（P＆gt;0.05）。结论应对自体腱和异体腱重建前交叉韧带术后体温变化予以同等对待,改变同种异体移植术后早期体温高于自体移植的传统观念,并根据体温变化规律,做到科学护理。     

深低温处理同种异体肌腱移植的生物力学性能实验研究

目的:探讨经深低温冷冻处理(-80℃)、未经处理同种异体肌腱和自体肌腱移植后的生物力学性能改变。方法:采用兔跟腱缺损修复模型,分为深低温冷冻处理同种异体肌腱移植组(深低温异体组)、未经处理同种异体肌腱移植组(未处理异体组)和自体肌腱移植组(自体组)。分别在移植前及移植后第3、6周时对三组跟腱进行生物力学性能测试。结果:深低温异体组移植后第3、第6周时其生物力学性能测试的各项指标均优于未处理异体组(P<0.05),而与自体组无统计学意义(P>0.05)。结论:深低温冷冻处理同种异体肌腱移植在生物力学方面的表现与自体肌腱移植结果基本相同,可替代自体肌腱应用于移植修复肌腱缺损。     

高浓度二甲基亚砜和~(60)Co辐照对韧带移植物初始力学特性和超微结构的影响

目的研究高浓度二甲基亚砜(DMSO)和60Co辐照对韧带移植物的力学特性和超微结构的影响。方法取兔髌韧带移植物,分别作新鲜冰冻和65%DMSO处理。采用0 Mrad2、.5 Mrad和5 Mrad剂量60Co分别辐照2组移植物后,作组织学、超微结构和生物力学检测。结果组织学检查未发现明显差异。超微结构中0 Mrad辐照后DMSO组髌腱移植物胶原结构与正常髌腱无明显区别而新鲜冰冻组胶原直径明显增大,胶原间隙明显增大,小直径胶原比例下降。2.5 Mrad剂量60Co辐照下两组间超微结构形态没有显著差异。5 Mrad剂量60Co辐照下2组都出现明显的胶原碎裂表现。在新鲜冰冻和65%DMSO处理组,5 Mrad辐照后移植物强度都较采用0 Mrad和2.5 Mrad辐照有显著下降。结论高剂量辐照会造成韧带移植物强度明显下降,高浓度DMSO对辐照状态下韧带基质胶原没有明显保护作用。     

气相冷冻法和液相冷冻法对人类精子运动能力、形态学及超微结构的影响

目的研究液氮蒸汽熏蒸法(简称气相冷冻法)和直接投入液氮冷冻法(简称液相冷冻法)对人类精子冷冻复苏后运动能力、形态学及超微结构的影响。方法选择25例捐精者的精液标本,按照1∶1的比例添加改良甘油-卵黄-枸橼酸钠(GYC)作为冷冻保护剂。每份精液标本等分为2份,分别进行气相法冷冻和液相法冷冻。复苏后,利用IVOS精子分析仪测定精子总活动率、前向运动精子百分率、运动参数,巴氏染色观察精子形态并计算形态正常率,透射电子显微镜观察精子超微结构。结果气相法冷冻从28℃降温到-185℃用时468 s,再经过1 h后降温到-196℃;液相法冷冻从30℃降温到-196℃用时90 s。两种方法冷冻复苏后精子总活动率、前向运动精子百分率、运动参数、形态正常率与冷冻前比较均明显降低(P<0.05)。气相法冷冻复苏后精子的复苏率、总活动率、前向运动精子百分率均高于液相法,差异有统计学意义(P<0.05);两种冷冻方法复苏后精子形态正常率、运动参数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。通过透射电子显微镜观察,使用GYC作为冷冻保护剂,两种方法冷冻复苏后,精子头部质膜和顶体膜超微结构未出现明显的损伤。结论改良GYC保护剂对精子超微结构具有保护作用;气相冷冻法冷冻人类精子的复苏结果优于液相法。     

降温方法对硫酸软骨素保存的心脏瓣膜的影响

目的观察不同降温方法对含硫酸软骨素的液氮深低温冷冻保存的同种异体心脏瓣膜的组织学结构和细胞活力的影响。方法将32只兔主动脉瓣随机分成4组,每组8只均经灭菌处理。对照组于灭菌后立即行瓣膜细胞活力测定及组织学检查;实验Ⅰ~Ⅲ组分别采用速冻法、阶梯降温法、程序控速降温法将瓣膜保存在含有硫酸软骨素的液氮深低温中1个月,复温后行瓣膜细胞活力测定、光镜及电镜检查。结果三种降温方法下冷冻保存的瓣膜均有损害,与对照组比较,实验Ⅰ组瓣膜组织学结构改变较重,细胞活力下降显著(P<0.05);实验Ⅱ组瓣膜组织学结构改变较轻,细胞活力下降显著(P<0.05),实验Ⅲ组瓣膜组织学结构改变轻微,瓣膜细胞活力下降不明显(P>0.05)。结论程序控速降温法是目前含硫酸软骨素的液氮深低温冷冻保存同种异体主动脉瓣的最佳降温方法,经此法保存的瓣膜组织学结构损伤轻微,细胞活力佳。     

逼尿肌无力尿失禁动物模型的建立

目的探讨液氮冷冻膀胱壁建立膀胱逼尿肌无力尿失禁动物模型的可行性。方法20只雌性成年未生产过的Wistar大鼠,随机分为实验组和对照组（n=10）。实验组开腹暴露膀胱后用置于-80℃液氮中的冷探针冷冻膀胱壁,对照组行假手术单纯开腹暴露膀胱。继续饲养2周后行离体逼尿肌收缩功能测试并观察膀胱壁病理变化。结果分别比较对照组和实验组的逼尿肌最大张力和收缩频率测量结果,两者差异有统计学意义（P〈0.001）。膀胱逼尿肌组织学检查比较显示实验组肌纤维细而疏松,对照组肌纤维粗而紧密。结论液氮冷冻膀胱壁可以建立膀胱逼尿肌无力尿失禁的动物模型,该模型发生率高、稳定。     

改良液氮冷冻法制备家兔股骨头坏死模型的形态学研究

目的探讨改良液氮冷冻法制备家兔股骨头坏死伴关节面塌陷动物模型的优点,揭示坏死股骨头的修复和塌陷过程。方法对10只成年新西兰大白兔,采用液氮冷冻双侧股骨头负重区,股骨头不造成脱位,分别在术后3、7 d、2、4、6、8周,进行股骨头标本的大体解剖学观察、X线观察和组织切片光镜观察。结果在术后3 d时,股骨头出现坏死,2周后出现修复现象,4周时有3例股骨头关节面出现塌陷,8周时有1例股骨头出现骨性关节炎样变化。结论液氮冷冻股骨头负重区,可制备股骨头坏死伴关节面塌陷的动物模型;但是,其成功率有待提高。     

不同冰冻条件对肌性组织标本冻存效果的影响

目的 比较不同肌性组织在三种冰冻条件下的切片效果,筛选出不同肌性组织的最优冰冻方法。 方法 采用骨骼肌（腓肠肌）、心肌、平滑肌（胸主动脉）;三种冰冻条件分别为液氮浸入法、液氮漂浮法、直接-80 ℃法。通过取材,冰冻,切片和苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色,最后在镜下观察组织结构形态。 结果 骨骼肌冰冻的最优条件是液氮浸入法,心肌冰冻的最优条件是液氮漂浮法,血管平滑肌冰冻的最优条件是液氮浸入法或液氮漂浮法。 结论 不同肌性组织最适宜的冻存条件存有差异。     

同种异体肌腱移植的实验研究

采用淋巴细胞毒试验,淋巴细胞转化试验及吞噬细胞功能实验等多项细胞免疫学指标测定,以及组织形态学观察与生物力学测定,比较深低温冷冻与深低温冷冻干燥两种不同处理方式对同种异体肌腱移植的差异,并综合评价各种移植的效果。结果显示：（１）深低温冷冻移植组及深低温冷冻干燥移植组的淋巴细胞死亡率、转人弦及吞噬细胞吞噬率均低于未经处理的同种异体移植组（Ｐ〈０．０５）,而与自体肌腱移植组差异无显著性（Ｐ〉０．０５）     

Quantitative analysis of host cells growing into canine homograft valved aortic and pulmonary artery

Background  Cryopreserved conduit valved homografts (CVH) have been widely used in surgical treatment of cardiac disease. This study aimed to determine the extent of host cell ingrowth and the durability and immunogenicity of CVH, and to compare the performance of CVH stored at 4°C and CVH cryopreserved in liquid nitrogen at –196°C.

Methods  Heterotopic transplants of canine CVH stored at 4°C (n=14) and cryopreserved in liquid nitrogen (n=14) were made onto the abdominal aorta of recipient dogs. Animals were sacrificed at 7 and 15 days and at 1, 3, 6, 9, and 12 months after transplantation to excise the implanted CVHs. Tissue DNA extraction and quantitative polymerase chain reaction (PCR) were performed to calculate the ratio of donor cells and host cells in the CVH. The tissue viability of CVH after implantation was analyzed by detecting alkaline fibroblast growth factor 2 (FGF-2) using immunohistochemical staining and by observation under transmission electron microscope and scanning electron microscope.

Results  All the animals survived and recovered well. There were few repopulating host cells (0.04%–0.83%) in the implanted CVH at 7 or 15 days. The ratio of ingrowing host cells into the CVH continued rising after implantation and reached 40%–47% in the 12th month postoperation. Histology, transmission electron microscopy and FGF-2 immunohistochemical staining indicated that fibroblasts and the host’s endothelial cells were the main cellular elements invading the CVH. There were no significant differences in results between CVH stored at 4°C and CVH cryopreserved in liquid nitrogen.

Conclusions  Host cells growing into CVH are very important for maintaining the long-term structure and function of the implanted CVH. There is no significant difference between CVH storing at 4°C or in liquid nitrogen in regard to the ingrowth of host cells or of morphologic features after CVH allografting.

     

﹣80°C冰箱长期冻存外周血造血干细胞研究

目的对外周血造血干细胞活性在深低温（-80℃）下保存3年的效果进行评价。方法对30例经MCS＋血细胞分离机采集所得的外周血造血干细胞加入细胞冻存保护剂分别予以-196℃液氮冻存和-80℃冰箱深低温冻存,并检测和比较冻存前后单个核细胞（mononuclear cells,MNC）、CD34＋细胞的计数及细胞回收率,细胞活性。结果 -80℃冰箱冻存组MNC、CD34＋细胞冻存3年与冻存前比较差异均无统计学意义冻存3年后MNC回收率与冻存1年后比较差异无统计学意义。3年后-80℃冰箱冻存组干细胞与-196℃液氮冻存组比较,差异无统计学意义。结论 -80℃冰箱深低温保存法快速、简便、安全、费用低廉,可有效用于外周血造血干细胞长期保存。     

家蝇胚胎细胞系MDEC-07114的储存方法

目的探讨家蝇胚胎细胞系(MDEC~07114)的储存方法。方法采用不同的冻存方法储存MDEC~07114,复苏后观察细胞贴壁及生长情况。结果4℃保存1~2个月内,细胞复苏后能贴壁生长。其他4种方法处理后液氮冻存的细胞,复苏后细胞生长状态均较好。结论短期储存可选用4℃保存法;长期保存细胞,用90%胎牛血清冻存液改良液氮冻存法。