大黄素联合吉西他滨抑制体内外胰腺癌生长及其机制研究

目的探讨大黄素联合吉西他滨对体内外胰腺癌生长的影响及其机制。方法采用吉西他滨(20μmol/L)、大黄素(40μmol/L)单独及联合作用胰腺癌细胞株SW1990后,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Westernblot检测Bax及Bcl-2蛋白表达。建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予大黄素、吉西他滨单独及联合用药,监测移植瘤体积变化;免疫组化法检测移植瘤组织中Ki-67、Bax及Bcl-2表达。结果与吉西他滨组及大黄素组比较,联合用药组显著降低SW1990细胞存活率,提高细胞凋亡率(P<0.05);与对照组比较,大黄素组及联合用药组明显上调SW1990细胞中Bax蛋白表达水平,抑制Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。与对照组比较,大黄素组及联合用药组可显著抑制裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长,提高Bax在肿瘤组织中阳性表达,明显降低Ki-67和Bcl-2的阳性表达(P<0.05),以联合用药组作用最佳(P<0.05)。结论大黄素可能通过上调Bax表达和下调Bcl-2表达增强吉西他滨对体内外胰腺癌的抑制作用。     

NF-κB在大黄素联合吉西他滨治疗裸鼠胰腺癌肝转移中的作用

目的：观察大黄素联合吉西他滨对裸鼠胰腺癌肝转移模型的影响及其可能机制。方法：建立裸鼠胰腺癌肝转移模型,随机（随机数字法）分为对照组、大黄素组、吉西他滨组和联合用药组（n=10）,观察各组荷瘤裸鼠肝转移瘤生长情况;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67和CD-34的表达;Tunel法检测肿瘤组织细胞凋亡;凝胶电泳迁移率实验（EMSA）检测肿瘤细胞中NF-κB活性;Western blotting法检测肿瘤组织中Survivin、Caspase-3、VEGF和MMP-9的表达。结果：相对吉西他滨组,吉西他滨联合大黄素可显著抑制胰腺癌肝转移瘤生长;与吉西他滨组相比较,大黄素单独或联合吉西他滨可抑制体内胰腺癌肝转移瘤中Ki-67和CD34的阳性表达,并降低NF-κB活性以及Survivin、VEGF和MMP-9的表达水平,同时上调Caspase-3的表达。结论：大黄素可增强吉西他滨对体内外胰腺癌肝转移瘤的增殖抑制和诱导凋亡作用,该作用可能通过下调NF-κB及其调控蛋白而实现。     

大黄素联合吉西他滨抑制体外人胰腺癌Panc-1细胞增殖及最佳用药时机选择

目的:探讨大黄素(emodin)联合吉西他滨(gemcitabine)对人胰腺癌细胞株Panc-1的增殖抑制作用及大黄素联合吉西他滨的最佳时机。方法:人胰腺癌细胞株Panc-1经大黄素10,20,40,80,160μmol·L-1分别作用24,48,72 h;以及在吉西他滨20μmol·L-1作用前24 h,0 h,后24,48,72 h分别联合大黄素20μmol·L-1作用24 h。应用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖;镜下观察细胞形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:大黄素对Panc-1细胞的增殖抑制作用呈明显浓度和时间依赖性;大黄素单独或联合吉西他滨可显著诱导胰腺癌细胞凋亡;大黄素在吉西他滨作用前24,0 h,后24,48,72 h加入联合作用24 h后胰腺癌Panc-1细胞的生长抑制率分别为54.13%,49.58%,48.72%,40.74%,44.16%,大黄素作用吉西他滨前24 h组与其他各组相比较,均有统计学意义(P<0.05)。结论:大黄素可显著抑制人胰腺癌Panc-1细胞生长,大黄素可增强吉西他滨对人胰腺癌Panc-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,大黄素联合吉西他滨的最佳时机可能是在吉西他滨作用前24 h加入。     

绿原酸联合吉西他滨对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨绿原酸联合吉西他滨对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法:以绿原酸、吉西他滨单独用药作用于体外培养的PANC-1细胞,采用细胞毒实验(MTT)法检测细胞半抑制浓度(IC50),确定药物给药浓度;以绿原酸(3μmol/L)、吉西他滨(0.2μmol/L)单独及联合作用于PANC-1细胞,采用台盼蓝染色法检测细胞存活率,PI染色检测细胞凋亡;采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力;采用Western blot检测P-JNK、Bcl-2、IL-6、PSTAT3、NF-κB、COX-2蛋白表达。结果:与对照组比较,联合用药组的细胞凋亡率显著升高,存活率显著降低(P<0.01)。细胞划痕实验表明,联合用药组细胞迁移能力显著低于对照组(P<0.01)。Western blot结果表明,联合用药组显著下调COX-2、Bcl-2、IL-6、P-STAT3蛋白的表达,上调P-JNK蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:绿原酸和吉西他滨联合应用能增强对胰腺癌细胞系PANC-1的增殖抑制和促凋亡作用。     

青蒿素联合吉西他滨对结肠癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的评价青蒿素联合吉西他滨对结肠癌细胞株(LOVO、HT29)增殖和凋亡的影响。方法 WST-1法检测联合用药对LOVO、HT29细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染法检测联合用药对细胞凋亡的影响,JC-1法检测联合用药对细胞线粒体势能改变的影响,Western blot法检测联合用药对细胞内p-ERK1/2蛋白表达的影响。结果青蒿素、吉西他滨在体外显著抑制LOVO、HT29细胞增殖,具有浓度依赖性;两者联合能产生协同抑制作用,通过激活线粒体途径介导细胞凋亡;p-ERK1/2蛋白在2种细胞中的表达水平显著高于在结肠正常上皮细胞FHC中;青蒿素可下调p-ERK1/2、bcl-2、线粒体内细胞色素C蛋白表达,并上调bax、胞浆内细胞色素C及Caspase-3表达。结论青蒿素、吉西他滨可通过抑制ERK1/2信号通路激活来诱导结肠癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,两者联合应用有望成为结肠癌新型治疗方案。     

吉西他滨对人膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡及自噬相关蛋白表达的影响

目的观察吉西他滨对人膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡及自噬相关基因表达的影响。方法将T24细胞分为阳性对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组和空白对照组;阳性对照组用10~(-8) mol/L紫杉醇处理,低、中、高剂量实验组以1×10~(-7),1×10~(-8),1×10~(-9) mol/L吉西他滨处理,空白对照组不做任何处理。药物干预24,48 h后采用溴化四唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中自噬相关蛋白表达情况,透射电镜扫描细胞中自噬小体的形成情况。结果与阳性对照组比较,低、中剂量实验组培养24,48 h增殖抑制率(PIR)均明显降低(P均0.05);实验组T24细胞PIR均随着药物浓度的增加和培养时间的延长而增高(P均0.05)。阳性对照组和低、中、高剂量实验组细胞凋亡率均显著高于空白对照组(P均0.05)。随着培养时间的延长,中剂量实验组自噬相关蛋白蛋白表达量呈逐渐升高趋势(P0.05),P62蛋白表达量呈逐渐减低趋势(P0.05)。培养4 h后,中剂量实验组细胞中出现了较多的自噬小体。结论吉西他滨可抑制T24细胞增殖,并促其凋亡,具有一定时间-剂量依赖性;同时其还可诱导细胞自噬的发生。     

吉西他滨动脉给药联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌

目的观察吉西他滨动脉给药联合卡培他滨口服给药治疗晚期胰腺癌的疗效及安全性。方法对22例晚期胰腺癌患者行经肝动脉及肠系膜上动脉灌注吉西他滨1 000mg/m2第1,8天,卡培他滨2 500 mg/m2口服2次/d第1—14天,21 d为1个周期,2个周期后评疗效。结果PR 2例,MR 5例,SD 9例,PD 6例,PR+MR占32%(7/22),PR+MR+SD占73%(16/22),参照CBR综合指标,CBR率为77%(17/22),主要毒副反应为骨髓抑制及消化道反应。结论吉西他滨口服动脉给药联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌,具有一定的肿瘤客观缓解率,临床受益反应率高,毒副反应能耐受。     

大黄素增强吉西他滨对裸鼠SW1990细胞移植瘤的抑瘤作用

目的:探讨大黄素增强吉西他滨对裸鼠SW1990细胞移植瘤的抑瘤作用及其机制。方法:在裸鼠SW1990细胞移植瘤的动物模型上,分为生理盐水组(N组),大黄素组(E组,40 mg.kg-1),吉西他滨组(G组,125 mg.kg-1),联合用药组(E+G组,大黄素40 mg.kg-1+吉西他滨80 mg.kg-1)。各组均采取腹腔注射药物,3 d 1次,前后共11次。观察各组用药过程中肿瘤体积、瘤重、体重的变化。末次用药后1周处死裸鼠取肿瘤组织。采用Tunel法检测各组肿瘤组织凋亡情况。采用免疫组织化学染色法和Western blot法检测肿瘤组织凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2和Cytochrome C的表达变化。结果:末次用药后1周E+G组肿瘤体积和瘤重明显小于其他各组;Tunel法显示E+G组肿瘤细胞凋亡比其余各组显著增多;免疫组织化学染色和Western blot法显示E+G组的Bax,Cytochrome C的表达比其他各组显著增多,而Bcl-2的表达比其余各组明显降低,经计算Bcl-2/Bax显著下降。结论:大黄素能显著增强吉西他滨对裸鼠体内人胰腺癌SW1990细胞移植瘤的抑瘤效果,其机制可能是大黄素通过促进胰腺癌SW1990细胞中Bax的表达和抑制Bcl-2的表达,降低Bcl-2/Bax,继而促进线粒体Cytochrome C释放,从而增强吉西他滨对胰腺癌SW1990细胞移植瘤的促凋亡作用,达到增强吉西他滨在体内的抑瘤效果。     

吉西他滨联合氟尿嘧啶治疗晚期胰腺癌32例疗效观察

目的:观察国产吉西他滨(泽菲)联合氟尿嘧啶治疗晚期胰腺癌的临床疗效及安全性。方法:32例中晚期胰腺癌患者,予以国产吉西他滨(1 000mg/m2)联合氟尿嘧啶治疗,21天为1个疗程,接受2个疗程的化疗后,按照WHO标准进行评价。结果:32例均可评价疗效,中位生存7.3个月,临床有效率40.6%(13/32),临床受益率(CBR)65.6%(21/32),胃肠道反应37.5%(12/32),骨髓抑制40.6%(13/32),无治疗相关性死亡病例。结论:西他滨联合氟尿嘧啶治疗晚期胰腺癌疗效较好,可明显提高患者的生存质量,不良反应可耐受。     

吉西他滨联合替吉奥治疗胰腺癌30例临床观察

目的:探讨吉西他滨联合替吉奥治疗胰腺癌的疗效及药物安全性。方法:选取胰腺癌患者60例为研究对象,随机分为观察组和对照组,每组30例。观察组实施吉西他滨联合替吉奥治疗;对照组实施吉西他滨联合顺铂治疗。结果:观察组患者的总有效率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组药物副作用对比,差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:吉西他滨联合替吉奥治疗胰腺癌临床疗效较好,患者耐受性好,值得临床推广。     

芦荟大黄素联用顺铂对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨芦荟大黄素(AE)单用或联用顺铂(CP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。方法:以MDA-MB-231细胞为研究对象,用5,10,20,30,40,50μmol·L-1AE,2,4,8,12,24,36μmol·L-1CP,或不同浓度AE联用CP处理乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h,另设空白组,MTT法检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染和流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;Western blot分析Bcl-2相关X蛋白(Bax),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-x L蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,AE单用显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖,半数抑制浓度(IC50)为22.21μmol·L-1,与CP联用时IC50为9.51μmol·L-1。联用指数CI501,表明两药物有协同作用;AE单用使细胞周期阻滞在G1期,并诱导细胞凋亡,联用CP则增强阻滞,凋亡率明显增加;两药联用显著抑制Bcl-2和Bcl-x L的表达,并上调Bax的表达,与空白组比较均具有明显的统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:芦荟大黄素抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞在G1期,并通过上调促凋亡蛋白和下调抗凋亡蛋白,诱导凋亡。与顺铂联用能增强其促凋亡作用,两药存在协同作用。     

复方中药紫龙金对前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用

目的 探讨复方中药紫龙金(简称紫龙金)对雄激素依赖型人前列腺癌细胞系LNcaP的体外作用机制。方法 应用MTT法、流式细胞术和显微荧光术测定紫龙金对LNCaP的增殖、细胞周期分布和诱导凋亡的影响,应用RT-PCR方法检测前列腺特异性抗原基因(PSA)和雄激素受体(AR),凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响;应用western blot方法测定对bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果紫龙金对LNCaP细胞具有时间和剂量依赖性增殖抑制、G1/G1期阻滞和诱导凋亡作用,作用72h时IC50为0．79mg／ml;紫龙金可以下调前列腺特异性标志基因PSA、AR和凋亡相关基因bcl-2的表达,降低bcl～2蛋白表达,对bax蛋白表达无明显作用。结论紫龙金可以通过抑制LNCaP细胞增殖、G0／G1期阻滞、诱导凋亡、下调PSA、AR和bcl-2基因表达,降低bcl-2蛋白表达等作用机制发挥抗肿瘤作用。     

中药复方肠胃清含药血清对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响

目的观察中药复方肠胃清含药血清对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法将人胃癌SGC7901细胞分为6组：空白对照组及肠胃清药物血清低、中、高剂量组和5-氟尿嘧啶（5-FU）组、5-FU联合肠胃清中剂量组。用MTT法观察肠胃清药物血清对SGC7901细胞增殖活性的影响;用流式细胞术检测肠胃清药物血清对细胞凋亡的影响;用Western blot检测方法测定细胞P53、Bax与Bcl-2蛋白表达水平;RT-PCR方法检测肿瘤细胞P53、Bax及Bcl-2基因表达。结果肠胃清药物血清能抑制胃癌SGC7901细胞增殖,并诱导细胞凋亡,同时明显抑制Bcl-2蛋白和基因的表达（P〈0.05或P〈0.01）,增强P53、Bax蛋白和基因表达水平（P〈0.05或P〈0.01）。结论中药复方肠胃清能抑制胃癌SGC7901细胞增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与促进P53、Bax基因及抑制Bcl-2基因蛋白表达有关。     

桦褐孔菌醇诱导人卵巢癌SKOV3细胞株凋亡及其分子机制研究简

 目的 研究桦褐孔菌醇(inotodiol)诱导人卵巢癌细胞SKOV3凋亡及其对相关蛋白Bcl-2、 Bax和caspase-3表达的影响。方法 选用人卵巢癌SKOV3细胞株进行体外培养, 四甲基偶氮唑蓝法检测桦褐孔菌醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响;应用透射电镜观察细胞形态学变化;通过TUNEL染色测定凋亡率;通过免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2, Bax和caspase-3的表达。结果 桦褐孔菌醇抑制人卵巢癌细胞增殖, 呈时间-剂量依赖性;形态学检测出现典型的细胞凋亡改变。50 mg·L^-1桦褐孔菌醇作用人卵巢癌SKOV3细胞24、48 h的凋亡率分别为(21.91±2.84)%和(43.83±3.22)%, 肿瘤细胞凋亡率(AR)随药物作用时间的延长而上升, 显示明显的时效关系(P<0.05)。免疫细胞化学法染色显示, 桦褐孔菌醇组人卵巢癌SKOV₃细胞Bcl-2基因蛋白的阳性表达率明显降低, 而Bax、caspase-3基因蛋白阳性表达率明显升高。结论 桦褐孔菌醇对人卵巢癌SKOV3细胞株有抗增殖和诱导凋亡作用, 该药可能是通过下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达和上调促进凋亡基因Bax的表达及启动caspase凋亡信号而发挥抗癌作用。     

三物白散对胃癌SGC-7901细胞凋亡及survivin基因表达的影响

目的观察三物白散药物血清对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及survivin mRNA表达的影响。方法选择人胃癌细胞株SGC-7901,分为空白对照组、阳性对照组及三物白散低、中、高剂量组。三物白散药物血清干预SGC-7901细胞后,采用荧光染色法检测胃癌细胞的凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果不同剂量组的三物白散药物血清干预SGC-7901细胞后,与空白对照组比较,各组细胞的凋亡率升高,且细胞凋亡率随药物血清浓度的增大、干预时间的延长逐渐升高;三物白散各剂量组survivin mRNA的表达均有不同程度的下降,与空白对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）,且survivin mRNA表达随三物白散含药血清浓度的增大、干预时间的延长逐渐下降。结论三物白散可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,抑制survivin mRNA的表达。     

五味汤联合吉西他滨顺铂对非小细胞肺癌术后辅助化疗的影响

目的:探讨中药五味汤联合吉西他滨、顺铂在非小细胞肺癌术后辅助化疗的治疗效果。方法:将84例行手术治疗的非小细胞肺癌患者按照随机分组原则分成治疗组与对照组,每组42例,两组均采取吉西他滨、顺铂方案进行术后辅助化疗,28 d为1个周期,共4个周期,治疗组联合中药五味汤治疗,每日1剂,疗程4个月。化疗结束后观察两组患者近期疗效及药物毒性反应。结果:治疗组客观缓解率及中医证候总有效率均优于对照组(P<0.05),药物毒性反应明显低于对照组(P<0.05)。结论:中药五味汤联合吉西他滨、顺铂用于非小细胞肺癌术后辅助化疗,可显著增强化疗疗效,降低药物毒性反应。     

姜黄素与5-FU联用对胃癌MGC-803细胞的生长抑制与凋亡诱导作用的研究

目的：探索姜黄素与中低剂量化疗药5-氟尿嘧啶（5-FU）联用对胃癌MGC-803细胞生长、细胞凋亡和细胞周期的影响,为临床上应用姜黄素作为胃癌化疗药5-FU的增效剂,以减少5-FU使用剂量、降低其毒副作用提供实验依据。方法：应用MTT检测法检测药物作用对MGC-803细胞的抑制作用;应用基于AO/EB双染的荧光显微观察法和FITC/PI双染的流式细胞技术检测药物作用对MGC-803细胞凋亡的影响;应用基于PI单染的流式细胞技术检测药物作用对MGC-803细胞周期的影响。结果：姜黄素（25 μmol·L^-1）分别与低剂量（2.4 μmol·L^-1）和中剂量（4.8 μmol·L^-1）的5-FU联合作用能有效地抑制MGC-803细胞的生长,诱导细胞凋亡并将细胞周期阻滞在S期,并呈剂量-时间的依赖关系。姜黄素与低剂量5-FU联用组的效果显著优于中剂量（4.8 μmol·L^-1）5-FU单用组（P < 0.01）,而姜黄素与中剂量5-FU联用组的效果显著优于高剂量（9.6 μmol·L^-1）5-FU单用组（P< 0.01）,提示姜黄素能显著增强5-FU抗胃癌MGC-803细胞的作用,并呈剂量-时间的依赖关系。结论：本研究为临床上应用姜黄素作为5-FU治疗胃癌的辅助用药,以减少5-FU的使用剂量,从而降低其毒副作用提供了初步的实验依据。     

柴胡皂苷D对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖与凋亡的影响

目的:探讨柴胡皂苷D对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖与凋亡的影响。方法:设置对照组、150 mg·L^-1柴胡皂苷D组、100 mg·L^-1柴胡皂苷D组、50 mg·L^-1柴胡皂苷D组和25 mg·L^-1柴胡皂苷D组,采用CCK-8实验方法检测柴胡皂苷D对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖的影响;采用流式细胞术检测柴胡皂苷D对人乳腺癌细胞株SK-BR-3的细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:柴胡皂苷D各浓度组细胞存活率分别为(85.3±4.13)%、(68.85±3.85)%、(45.28±3.25)%、(23.51±2.23)%,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。柴胡皂苷D各浓度组G1期细胞比例分别为(58.23±2.21)%、(55.51±2.34)%、(45.67±3.23)%、(33.55±4.12)%,S期细胞的比例分别为(12.67±2.32)%、(10.34±2.45)%、(8.23±3.12)%、(7.34±3.98)%,G2期细胞所占的比例分别为(29.10±2....