LIGHT 一个新的非CD28依赖的T细胞共刺激分子

ＬＩＧＨＴ(ｆｏｒｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｔｏｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎｓ ,ｅｘｈｉｂｉｔｓｉｎ ｄｕｃｉｂｌｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ,ａｎｄｃｏｍｐｅｔｅｓｗｉｔｈＨＳＶｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎＤｆｏｒＨＶＥＭ ,ａｒｅｃｅｐｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄｂｙＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ) 〔1〕是1998年发现的ＴＮＦ超家族成员 ,又称为ＨＶＥＭ Ｌ(ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｅｎｔｒｙｍｅｄｉａｔｏｒ ｌｉｇａｎｄ) 〔2〕 是肿瘤坏死因子超家族的第 14个成员 (ＴＮＦＳＦ14)。由于ＬＩＧＨＴ同时具有诱导肿瘤细胞凋亡和共刺激Ｔ细胞活化的…     

NF-κB调控IL-1刺激人脐静脉内皮细胞合成PGI_2

白细胞介素 １(ＩＬ １)是在炎症反应中起重要作用的细胞因子。它能激活在炎症过程中调控相关基因表达的核因子 κＢ（ＮＦ κＢ）及刺激内皮细胞分泌炎症介质ＰＧＩ２。以往研究表明 ,ＮＦ κＢ可调控ＬＰＳ刺激的Ｊ７７４巨噬细胞分泌ＰＧ２〔１〕,但其是否可调节ＩＬ １诱导内皮细胞分泌ＰＧＩ２ 目前还不清楚。因此 ,我们研究了ＮＦ κＢ活化的抑制剂Ｎ α ｔｏｓｙｌ Ｌ ｌｙｓｉｎｅｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌｋｅｔｏｎｅ（ＴＬＣＫ）对人脐静脉内皮细胞合成ＰＧＩ２ 的影响 ,讨论了ＮＦ κＢ在ＩＬ １刺激内皮细胞合成ＰＧＩ２ 中…     

全身~(18)F-FDGPET可更准确地预测乳腺癌治疗的预后

据ＶｒａｎｊｅｓｅｖｉｃＤ等报道〔ＪＮｕｃｌＭｅｄ ,2 0 0 2 ,4 3(3) :32 5 - 32 9〕18Ｆ -ＦＤＧＰＥＴ可提高预测乳腺癌治疗预后。通过与常规影像 (ＣＩ)比较 ,18Ｆ -ＦＤＧＰＥＴ评价乳腺癌治疗预后更佳。ＶｒａｎｊｅｓｅｖｉｃＤ与同事选择 6 1例女性患者 (年龄 32～ 91岁 ,平均年龄 5 4岁 )进行研究 ,最后治疗与做ＰＥＴ的平均间隔时间是0 .4年 (范围 0～ 16年 )。在做ＣＩ的 3个月内 (平均间隔 2 5天 ,范围 2～ 84天 )做ＰＥＴ。为评测ＰＥＴ对预后的意义 ,采用盲式法进行重新预测。研究的终点是疾病进展或死亡。结果表明 ,随访 …     

慢性重型肝炎患者血清LBP和BPI的水平及其临床意义

慢性重型乙型肝炎 (简称慢重肝 )患者由于肝细胞功能受损及门体分流的存在 ,来自肠道的革兰氏阴性杆菌内毒素脂多糖 (Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ,ＬＰＳ)易进入体循环 ,而产生肠源性内毒素血症 (Ｉｎｔｅｓｔｉ ｎａｌｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ,ＩＥＴＭ ) 〔1〕。近年研究表明 ,血清中内毒素结合蛋白 (Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃ ｃｈａｒｉｄｅｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ ,ＬＢＰ)、杀菌性 通透性增加蛋白 (Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｃｒｅａｓｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ ,ＢＰＩ)影响并调节ＬＰＳ的…     

PAI-1反义RNA对内皮细胞中PAI-1和血小板源生长因子的影响

纤溶酶原激活物抑制剂 1(ＰＡＩ 1)可以促进动脉粥样硬化 (ＡＳ)的发展。本实验构建ＰＡＩ 1反义ＲＮＡ重组质粒 ,将其转导入离体培养的主动脉内皮细胞(ＥＣ)中 ,观察其对ＰＡＩ 1表达的作用及对血小板源生长因子 (ＰＤＧＦ)的影响。体外培养猪主动脉内皮细胞 ,免疫组化显示ＣＤ31抗体染色阳性。取第 1～ 2代细胞进行实验。在ＰＡＩ 1基因翻译起始位点第二外显子处设计一对引物 ,进行ＰＡＩ 1特异片段扩增。ＰＣＲ纯化产物与克隆载体ｐＧＥＭ Ｔ连接。ＡｐａⅠ和ＰｓｔⅠ对ｐＧＥＭ ＰＡＩ 1重组质粒和ｐｃＤＮＡ3.1( )质粒进行双酶切。电泳…     

PCR-RFLP-SSCP及测序用于霍乱弧菌ctx-AB基因多态性的研究

建立ＰＣＲ ＲＦＬＰ ＳＳＣＰ及测序方法 ,用于分析霍乱弧菌肠毒素ＡＢ(ｃｔｘ ＡＢ)基因多态性。针对ｃｔｘ ＡＢ基因设计引物 ,扩增片段为 5 2 8ｂｐ ,包括ｃｔｘ Ｂ编码基因375ｂｐ ,引物序列为 5′ ＧＧＴＧＴＡＡＡＡＴＴＣＣＴＴＧＡＣＧ 3′和 5′ ＧＧＴＴＣＧＡＴＧＡＴＧＡＧＡＡＧＣ 3′。ＰＣＲ产物经ＲｓａⅠ酶切为317ｂｐ和 2 11ｂｐ 2个片段。对酶切产物进行单链构象多态性 (ＳＳＣＰ)分析 ,银染作者单位 :5 10 5 15广州 ,第一军医大学流行病学教研室 (芮勇宇 ,俞守义 ,王红 ) ;广东省卫生防疫站 (蔡初的 ,李建基 ,钟豪杰 )…     

人骨形成蛋白-7成熟肽cDNA的克隆和序列测定

人骨形成蛋白 7(ｈＢＭＰ 7)最早由Ｃｅｌｅｓｔｅ等〔1〕克隆并命名。同年 ,Ｏｚｋａｙｎａｔ等〔2〕从人脑ｃＤＮＡ文库中也筛选出此克隆。以后研究表明 ,ＢＭＰ 7除了诱导成骨外 ,还具有广泛的生物学活性〔3 - 6〕。由于ｈＢＭＰ 7在神经系统及造血组织中的特殊作用 ,故其在基础研究和临床应用中具有广阔的前景。我们采用自行设计合成的一对特异性引物 ,以骨肉瘤的λｇｔ11噬菌体表达文库为模板 ,通过ＰＣＲ扩增到ｈＢＭＰ 7成熟肽的ｃＤＮＡ。将其克隆入载体ｐＧＥＭ 3ｚｆ( ) ,所获序列与已发表的序列完全一致 ,为进一步对其表达和功…     

不同免疫策略获得c-erbB2单克隆抗体及其结合特性的比较

人类ｃ ｅｒｂＢ2 ＨＥＲ2原癌基因属于ＥＧＦＲ家族。将ｃ ｅｒｂＢ2真核表达载体转染ＮＩＨ3Ｔ3细胞 ,可赋予该细胞以恶性表型〔1〕;1998年由鼠源抗ｅｒｂＢ2抗体人源化改造而来的Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ(商品名 )已被美国ＦＤＡ批准用以治疗ｃ ｅｒｂＢ2高表达的转移乳腺癌 ,并已获得较好的临床治疗效果〔2〕。本工作采用不同免疫策略获得了数株ｃ ｅｒｂＢ2单抗 ,并对其与靶分子的结合特性进行了比较分析 ,提出了相对更易获得能与天然ｅｒｂＢ2结合的抗体制备策略 ,可供后续工作参考。材料和方法ｃ ｅｒｂＢ2Ｎ′末端ｃＤＮＡ的ＰＣＲ扩增…     

酵母表达的重组戊型肝炎病毒ORF2蛋白在实验感染恒河猴血清抗体检测中的应用

诊断试剂的研制和开发亦是戊型肝炎研究的重要内容 ,以Ｅ .Ｃｏｌｉ及昆虫细胞表达的重组戊型肝炎病毒 (ＨＥＶ)ＯＲＦ2蛋白作为抗原建立的免疫学检测方法已应用临床戊型肝炎的诊断、实验感染灵长类动物抗戊型肝炎病毒 (ＨＥＶ)抗体的检测以及ＨＥＶ特异性抗原的检测。这些方法包括 :Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ,ＩＦＡ、ＥＬＩＳＡ等。研究证实 ,重组ＨＥＶＯＲＦ2蛋白具有较好的抗原性〔1 3〕。我们应用巴氏毕赤酵母 (Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ)成功表达了戊型肝炎结构区蛋白ＯＲＦ2 ,制备了新型重组ＨＥＶＯＲＦ2 〔4〕,将其作为抗原建…     

shTNFR75在酵母细胞中分泌表达及表达产物的活性分析

肿瘤坏死因子受体(ＴＮＦｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＴＮＦＲ)分为ＴＮＦＲⅠ和ＴＮＦＲⅡ两类,也称ＴＮＦＲ55和ＴＮＦＲ75,两者均为跨膜糖蛋白。两种跨膜蛋白经蛋白酶作用,其胞外区可从细胞膜表面脱落形成可溶性ＴＮＦ受体(ｓＴＮＦＲ)。近年来,有实验证明ｓＴＮＦＲ在体内、体外能中和ＴＮＦ诱导的细胞毒性和免疫反应〔1〕,具有临床应用潜力。本文报道毕赤酵母系统分泌表达ｓｈＴＮＦＲ75及其表达产物的活性分析。材料和方法菌株、质粒及试剂:大肠杆菌ＤＨ5α、鼠成纤维细胞Ｌ929、酵母整合载体ｐＰＩＣＺαＡ、毕赤酵母细胞ＧＳ115(Ｈｉｓ4-)为…     

PCR法检测EB病毒BNLF1基因

目前已建立分子杂交和ＰＣＲ检测ＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ的方法。近年来研究发现ＥＢＶ致癌作用与ＬＭＰ１蛋白的表达密切相关〔１〕。为此,我们针对ＥＢＶ表达ＬＭＰ１蛋白的ＢＮＬＦ１基因片段建立ＰＣＲ检测方法。１　材料与方法１１　标准病毒和对照病毒　含有ＥＢＶ的Ｒａｊｉ细胞系和带有ＰＧＥＭＩＢＮＬＦ１的菌种有美国国立卫生研究院（ＮＩＨ）Ｊａｃｋｓｏｎ博士赠送。ＨＣＭＶＡＤ１６９、ＨＳＶⅠ、ＶＺＶ购自于上海第二医科大学。１２　主要试剂与仪器　限制性内切酶ＳｔｙＩ,Ｍａｒｋｅｒ购…     

INFLUENCE OF ION BEAM BOMBARDMENT ON SURFACE PROPERTIES OF POPYURETHANE

ＩＮＦＬＵＥＮＣＥＯＦＩＯＮＢＥＡＭＢＯＭＢＡＲＤＭＥＮＴＯＮＳＵＲＦＡＣＥＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳＯＦＰＯＰＹＵＲＥＴＨＡＮＥＧｕＨａｎｑｉｎｇ，ＬｕＭｏｚｈｕａｎｄＤｉｎｇＦｕｑｉｎｇ（ＴｉａｎｊｉｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＵｒｏｌｏｇｉｃＳｕｒｇｅｒ...     

HMGI高表达促进单核细胞PDGF-B链基因转录

血管内皮细胞与循环血细胞 ,如单核细胞之间的相互作用 ,在动脉粥样硬化等重要心血管疾病发生和发展过程中具有极其重要的意义。众多的动脉粥样硬化相关因素也同时作用于这些细胞。我们曾发现高迁移率蛋白Ⅰ (ＨＭＧⅠ )能促进ＥＣＶ30 4细胞核转录因子ＮＦ -κＢ与ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游切应力反应元件 (ＳＳＲＥ)的结合。目的 :观察在整体细胞水平 ,ＨＭＧＩ对单核细胞系Ｕ937细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因转录的影响及蛋白激酶Ｃ磷酸化的调节作用。方法 :( 1 )利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ重组技术构建正义和反义ＨＭＧＩ表达载体 ;( 2 )脂质体法将…     

乳腺癌IGF2基因的印迹状态

基因印迹 (ｇｅｎｏｍｉｃｉｍｐｒｉｎｔｉｎ)在胚胎发育、生长中起重要作用[1] 。越来越多的研究表明印迹基因异常是某些恶性肿瘤重要的分子生物学特征 ,这种基因突变的调控异常可能是癌变机制中的重要环节[2 ] 。ＩＧＦ2 (ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｉｋｅｇｒｏｗｆａｃｔｏｒⅡ )为父源等位基因表达的印迹基因 ,在除肝、脉络膜丛和软脑脊膜外的绝大多数正常组织中均表现为父源等位基因表达 ,而母源等位基因静止或表达极弱[3] 。有报道 ,ＩＧＦ2的印迹异常与儿童肿瘤如Ｗｉｌｍｓ瘤和某些成人肿瘤 ,如肾透明细胞肉瘤、卵巢癌等密切相关。ＩＧＦ2…     

Ⅱ型糖尿病人血清IGFBP-1和IGFBP-3水平改变

胰岛素生长因了（ＩＧＦ）是一类结构上与胰岛素部分同源并具有胰岛素样生长活性的多肽 ,有调节代谢和促进多种细胞分裂和增殖的作用。胰岛素生长因子结合蛋白（ＩＧＦＢＰ）是ＩＧＦ在循环中的特异性结合蛋白（包括ＩＧＦＢＰ-１～６）。它通过于ＩＧＦ结合成复合物来调节ＩＧＦ的活性 ,并且是ＩＧＦ的储存及运载蛋白。我们通过测定Ⅱ型糖尿病患者的ＩＧＦＢＰ -１和ＩＧＦＢＰ-３水平 ,以了解其变化特点。对象和方法一、对象 :全部病例均为广东省人民医院内分泌科１９９７年１月～１９９９年５月初诊住院病人。纳入标准 :符合１９８５年Ｗ…     

用染色体候选区域限定策略对诏安地区人群哮喘易感性的初步研究

目的　对福建诏安地区哮喘易感基因进行研究,以获得相关位点的资料,确定哮喘易感性与该区域的连锁关系。方法　用 Ｐ Ｃ Ｒ／ Ｒｓａ Ⅰ酶解检测位于染色体１１ｑ１３ 区的β链 Ｉｇ Ｅ 高亲和力受体基因（ Ｆｃε Ｒ Ｉβ） 非编码区的两个多态性位点;用同位素掺入的 Ｐ Ｃ Ｒ 法扩增位于染色体５ｑ３１３３ 区的 Ｄ５ Ｓ４３６ 和 Ｄ５ Ｓ３９３ 多态性标记,对３２ 个哮喘家系,共１９２ 份样品进行分析。结果　 Ｆｃ ε Ｒ Ｉβ基因第２ 内含子区 ＲｓａⅠ多态性位点 Ａ 等位片段与哮喘有显著相关性（ Ｐ＜ ０ ．０５ , Ｏ Ｒ＝ ２ ．０３９） ;血清总 Ｉｇ Ｅ 水平的差异在 Ｆｃ ε Ｒ Ｉβ基因第２ 内含子区 Ｒｓａ Ⅰ多态性位点的不同基因型之间有显著性差别（ Ｐ＜ ０ ．０５） ; Ａ 等位片段与血清总 Ｉｇ Ｅ 水平的升高有显著相关性（ Ｐ＜ ０ ．０５ , Ｒ Ｒ＝ １ ．３６１） 。 Ｆｃ ε Ｒ Ｉβ基因第７ 外显子非编码区 Ｒｓａ Ⅰ多态性位点未显示与哮喘有相关性。受累同胞配对法分析显示, Ｄ５ Ｓ４３６ 与哮喘呈连锁状态（ Ｐ＜ ０ ．０５） , Ｄ５ Ｓ３９３与哮喘无连锁关系; Ｄ５ Ｓ４３６ 和 Ｄ５ Ｓ３９３ 与高血清总 Ｉｇ Ｅ 都没有显示连锁关系。结论     

肿瘤坏死因子 α抑制小鼠Lin Sca 1~ c kit~ 造血干细胞生长的观察

本研究旨在探讨小鼠肿瘤坏死因子（ｍＴＮＦα）对小鼠早期造血祖细胞生长的影响，并利用人ＴＮＦα（ｈＴＮＦα）选择性地结合到小鼠ＴＮＦ受体Ｉ（ＴＮＦＲＩ）这一特征，分析ＴＮＦＲＩ和ＴＮＦＲⅡ在介导ＴＮＦα调控造血祖细胞体外增殖中的作用。材料与方法１．小鼠骨髓细胞悬液的制备：取６８周龄雌性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨髓，按常规法制备〔１〕。２．流式细胞仪分离Ｌｉｎ－Ｓｃａ１＋ｃｋｉｔ＋细胞：按文献报道进行〔１〕。大鼠抗小鼠ｃｋｉｔ抗体（ＡＣＫ２）由Ｓｕｄａ博士（日本）赠送，ＦＩＴＣ标记的…     

细胞内Retinoid结合蛋白mRNA水平在生精过程中的周期性变化

目的 研究大鼠睾丸细胞内视黄醇结合蛋白－Ｉ（ＣＲＢＰ－Ｉ）及细胞内视黄酸结合蛋白－Ⅱ（ＣＲＡＢＰ－Ⅱ）ｍＲＮＡ水平与曲细精管生精上皮周期的相关关系。方法 分别以地高辛标记的大鼠ＣＲＢＰ－Ｉ及ＣＲＡＢＰ－ⅡｃＤＮＡ探针在ＳＤ大鼠睾丸冰冻切片上进行原位杂交,应用激光密度扫描系统对阳性信号进行定量。结果 ＣＲＢＰ－Ｉ及ＣＲＡＢＰ－Ⅱ ｍＲＮＡ在支持细胞（ｓｅｒｔｏｌｉ ｃｅｌｌ,ＳＣ）中表达。ＣＲＢＰ－     

PCR诱导猴免疫缺陷病毒SF2、SF3位点突变和转染研究

目的研究猴免疫缺陷病毒（ｓｉｍｉａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ,ＳＩＶ）ＬＴＲ区ＳＦ２或ＳＦ３位点结构与病毒转录活性的关系。方法利用ＬＴＲ５端引物和含ＳＦ２或ＳＦ３部位双点突变的中间引物,首次用ＰＣＲ扩增长度约０．６ｋｂ的ＳＩＶｍａｃ２３９ＬＴＲ５端ＤＮＡ片段,经纯化后,作为正向引物,再次用ＰＣＲ扩增长度约１．１ｋｂ的ＬＴＲ全段（９２０９～１０２７９）并将其连接到ＰＢＳ－ＳＩＶｍａｃ２３９３端病毒的重组质粒上,后者再经ＳｐｈⅠ切点与ＳＩＶｍａｃ２３９５端病毒连接。用突变的病毒转染外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）,用ＥＬＩＳＡ法动态测定培养液中ＳＩＶ核心蛋白Ｐ２７浓度。结果与ＳＩＶｍａｃ２３９株相比,ＳＦ２或ＳＦ３突变株在转染后,其核心蛋白Ｐ２７水平无明显降低。结论两步ＰＣＲ诱导突变是一种简单有效的方法;ＳＦ２或ＳＦ３位点结构对于ＳＩＶｍａｃ２３９在外周血淋巴细胞中的转录活性可能不具重要的影响     

心肌梗塞大鼠心肌I,Ⅲ型胶原基因表达的变化

本文使用人胶原α１（Ⅰ）、α２（Ⅱ）及α１（Ⅲ）链ｃＤＮＡ探针，采用斑点杂交法动态观察了心肌梗塞（ＭＩ）大鼠心室各部位Ｉ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ比值〔Ⅰ／Ⅲ（Ｒ）〕的变化。发现心室各部位Ｉ／Ⅲ（Ｒ）表现出不同的时相变化过程。Ｉ／Ⅲ（Ｒ）的变化与ＩⅢ型胶原蛋白的比值〔Ⅰ／Ⅲ（Ｐ）〕的变化一致。本研究提示ＭＩ后心脏胶原网架的生化改变与基因表达水平的改变有关。