一种脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)活性检验方法的评估

目的 验证一种新上市的脂蛋白磷脂酶 A2(Lp-PLA2)活性测定的方法学性能。方法 性能验证使用苏州博源公司生产的Lp-PLA2,验证该检测试剂的正确度、精密度、线性、LOQ、LOD、携带污染和参考区间,方法学验证采用上海德赛的试剂作为参比试剂,对临床样本进行评价。结果 Lp-PLA2水平1(400U/L)和水平2(800U/L)浓度校准品的相对偏倚分别为1.13%、0.93%;Lp-PLA2低(394.1U/L)、中(785.3U/L)、高(1048.7 U/L)三个浓度标本的变异系数(CV)分别为0.90%、1.90%、2.30%;线性范围为44.4U/L～1660U/L(R2=0.9997);LOQ为4.22U/L,LOD为0.89 U/L ;携带污染率绝对值＜3%;参考区间验证分别收集20例健康男性和20例健康女性血清样本,测定结果均小于670U/L。方法学比对收集病人及体检血清样本(n=40),分别使用苏州博源(实验方法,Y)与上海德赛(参考方法,X)的Lp-PLA2试剂进行检测,Deming回归方程为Y=1.016X+3.90,R2=0.975。结论 苏州博源Lp-PLA2试剂盒的正确度、精密度、线性、LOQ、LOD、携带污染率和参考区间满足性能验证要求,样本比对结果与德赛试剂具有一致性,可满足临床应用要求。     

速率法检测血清α-L-岩藻糖苷酶（AFU）改良试剂中添加烷基糖苷的实验性能评价

目的 探讨添加烷基糖苷(alkyl glycosides,APG)改良试剂速率法检测血清α-L-岩藻糖苷酶(α-L-fucosidase,AFU)的实验性能评价。方法 通过优化反应体系,对速率法检测AFU改良试剂的精密度、线性范围、干扰性、结果比对及稳定性进行实验。结果 改良试剂精密度为批内CV低中高值分别为2.10%,1.19%和0.67%;批间CV低中高分别为2.62%,1.90%和1.20%,且两组试剂结果表明差异均有统计学意义(均P<0.01)。线性实验显示方程为Y=1.0045X-0.548 5,相关系数r²=0.999 7,线性范围0～300U/L。干扰实验表明样本中抗坏血酸≤12g/L,胆红素≤550μmol/L,脂血指数≤0.5mg/L,血红蛋白≤3g/L,对改良试剂无干扰。同时与进口试剂比对实验回归方程为Y=0.9978 X+0.085 3,相关性良好(r²=0.999 8)。稳定性实验结果显示改良试剂在2～8℃存放12个月测定结果稳定,CV_低值=1.04%,CV_高值=1.1...     

感染性疾病的早期诊断及预后评估相关指标的研究进展

感染性疾病是临床常见病、多发病,若不能早期诊断并及时治疗,病情进展可导致脓毒症和多器官功能障碍综合征(MODS),甚至危及生命.感染早期的临床征象常不典型,寻找合适的实验室诊断标志物,协助临床医师早期判断患者是否存在病原微生物感染以及评估病情预后,无疑有着重要的临床意义. 下面对近年来受到高度关注的感染相关生物学标志物进行论述. 1 C-反应蛋白(CRP) C-反应蛋白( C-reactive protein,CRP)是重要的急性期时相蛋白,每当发生感染或组织炎症时,IL-6等炎症细胞因子将刺激肝细胞合成CRP,并于4～6h后开始分泌.通常正常人血清CRP中位数质量浓度低于0.8 mg/L,且99％的血清样本水平不超过10 mg,/L[1].     

改良后的长春恒晓脂蛋白相关磷脂酶A2活性检测试剂性能验证

目的评价改良后的长春恒晓脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)活性检测试剂在Beckman AU5800自动生化分析仪上的分析性能。方法收集2017年9~10月北京协和医院110例患者及40例表观健康人临床检测剩余血清,分别用于Lp-PLA2方法学比对及参考区间验证。参考CLSI相关文件,评价精密度、线性范围及常见干扰(结合胆红素、游离胆红素、血红蛋白和乳糜)。结果 Lp-PLA2活性测定试剂重复性CV(%)和实验室内不精密度CV(%)分别为1.2%~4.4%和1.5%~5.1%;线性范围为40~550U/L,相关系数(r)为0.998。低Lp-PLA2活性混合血清在试验浓度内的四种干扰物(乳糜≤1 000FTU,游离胆红素≤40mg/dl,结合胆红素≤40mg/dl,血红蛋白≤8g/L)对该试剂无干扰;高Lp-PLA2活性混合血清在试验浓度内的三种干扰物(乳糜≤3 220FTU,游离胆红素≤38.2mg/dl,结合胆红素≤38.2mg/dl)对该试剂无干扰。方法学比对中回归方程的决定系数R2为0.995,相关系数(r)为0.997。该实验室初步临床评估建立的LpPLA2活性的参考区间为68~374U/L。结论改进后的Lp-PLA2活性测定试剂的基本性能明显提高。     

C-反应蛋白质控品的制备及应关注的问题

目的制备与CRM470 C-反应蛋白（CRP）国际参考一致的CRP质控品,用作各种CRP定量检测的质量控制。方法用以CRM470 CRP为基准的进口仪器和配套试剂盒测定所配制的各种组分和状态的CRP质控品的稳定性。结果健康人血清或小牛血清为介质的CRP液态制备物稳定性最好,当CRP浓度为20 mg/L时,37℃下可以保存1个月,但CRP浓度为100 mg/L时稳定性相对较差。CRP质控品中如存在乙二胺四乙酸（EDTA）时,会影响某些CRP单抗对CRP的结合。结论CRP质控品液体状态比冻干状态稳定,CRP液体质控品以人或小牛血清作为介质的稳定性效果最好,但不能含EDTA等络合剂。     

C-反应蛋白质控品的制备及应关注的问题

目的制备与CRM470 C-反应蛋白(CRP)国际参考一致的CRP质控品,用作各种CRP定量检测的质量控制。方法用以CRM470 CRP为基准的进口仪器和配套试剂盒测定所配制的各种组分和状态的CRP质控品的稳定性。结果健康人血清或小牛血清为介质的CRP液态制备物稳定性最好,当CRP浓度为20 mg/L时,37℃下可以保存1个月,但CRP浓度为100 mg/L时稳定性相对较差。CRP质控品中如存在乙二胺四乙酸(EDTA)时,会影响某些CRP单抗对CRP的结合。结论CRP质控品液体状态比冻干状态稳定,CRP液体质控品以人或小牛血清作为介质的稳定性效果最好,但不能含EDTA等络合剂。     

便携式Celercare M1分析仪CRP检测的性能验证

目的对Celercare M1分析仪定量测定C-反应蛋白(CRP)的分析性能进行验证。方法根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)标准方案,对CRP测定方法的线性范围、精密度、准确度、干扰试验以及方法比对等方面进行验证。结果 CRP检测方法在0.5~200mg/L范围内线性良好,回归方程为Y=0.979 X+0.456。CRP低值和高值批内精密度变异系数(CV)分别为5.9%、2.0%;日间CV分别为6.3%、2.2%。准确度良好,CRP低值和高值结果的相对偏差分别为2.3%、0.7%。当血清中胆红素水平不高于340μmmol/L、三酰甘油不高于10 mmol/L和血红蛋白不高于8g/L时,对CRP水平的测定没有明显的干扰。Celercare M1分析仪(Y)和IMMAGE 800(X)测定CRP的回归方程为Y=0.944 X+0.206,r2=0.996(P0.05)。Celercare M1分析仪在CRP 3个医学决定水平(3、10、100 mg/L)的相对偏倚分别为1.0%、4.0%和5.0%,小于1/2总允许误差。结论 Celercare M1分析仪定量测定CRP的线性范围、精密度、准确度、干扰性等分析性能良好,可被临床所接受。     

干化学法测定血清C-反应蛋白

C-反应蛋白是一种急性时相反应蛋白,长期以来一直被临床看作细菌感染的炎症反应的标志物.正常人血清含量一般小于10mg/L,但其在各种急性和慢性感染、心肌梗塞、外科创伤、恶性肿瘤、组织损伤等疾病时,CRP血中浓度迅速升高[1].因此检测患者血清中CRP的含量对临床诊断有重要的参考价值.国内近年来多采用免疫比浊法对CRP进行定量分析.本文采用干化学法对50例患者血清CRP含量进行测定.报告如下.     

改良酶法肌酐测定试剂的研制

目的探讨建立一种改良酶法肌酐(Cr)测定试剂,并考察其与进口Cr测定试剂(日本东洋纺公司酶法Cr试剂)对血清测定的可比性及偏倚。方法采用酶法测定Cr反应前后吸光度的变化,探讨试剂各成分和浓度对检测性能的影响,并在同一台全自动生化分析仪上同时测定两种试剂的空白吸光度(A值)、分析灵敏度,对自主研发试剂的精密度、线性范围及方法学指标进行评价。结果自主研发试剂的空白A值为0.009,分析灵敏度的A值变化率为0.13,优于进口试剂。自主研发试剂高、低值血清测定变异系数分别为1.5%和1.1%;线性范围为0~2 850μmol/L;方法学比对回归方程为Y=0.98 X+1.15,r=0.999;估计偏倚低于允许误差。以相对偏差不小于10%作为有明显干扰的评判指标,结果显示35mmol/L肌酸、3.42mmol/L胆红素、0.03g/L维生素C、5g/L血红蛋白、1 450浊度乳糜对高、低值浓度标本检测结果均无干扰。结论自主研发的Cr测定试剂性能良好,与进口试剂之间具有良好的相关性,符合临床应用基本要求。     

血清肌红蛋白比浊法测定试剂的评价及其初步临床应用

目的通过评价肌红蛋白测定试剂的性能,建立一种用全自动生化分析仪检测肌红蛋白的免疫比浊法.方法利用标记抗体检测抗原的比浊法原理,进行精密度、线性、回收率、干扰试验.结果本法标准曲线y=7.3635+0.9739x,r=0.9997.正常人血清肌红蛋白浓度的批内CV%为0.25%,批CV%为1.49%.心肌梗塞病者的则分别人1.3%与2.23%,回收率为97.1%～104.7%.血清TG＞5.0mmol/L或Hb＞500mg/L对肌红蛋白的检测才有干扰.测定100例健康体检者血清肌红蛋白(SMb)含量为20.7～58.9μg/L.33例急性心肌梗塞(AMI)患者的SMb的含量为542±178μg/L.结论该法具有快速、灵敏、简便、准确的优点,对AMI的诊断有较高的应用价值.     

酶法尿素检测试剂的改进及性能评价

目的建立一种改良酶法尿素测定试剂,并评估其性能。方法采用酶法测定尿素反应前后吸光度(A)值的变化率并对试剂进行改良,评估其性能。同时与现有酶法试剂及进口和光试剂进行比较。结果现有试剂空白A值为1.8,空白A值变化率为-0.001 8;改良试剂空白A值为1.8,空白A值变化率为-0.001 9;和光试剂空白A值为1.6,空白A值变化率为-0.000 4。现有试剂检测限为0.035 mmol/L、改良试剂为0.014 mmol/L、和光试剂为0.075 mmol/L。分析敏感性现有试剂为-0.04,改良试剂为-0.13,和光试剂为-0.05。改良试剂对高、低值血清的批内精密度分别为0.45%和0.85%,批间精密度分别为0.38%和0.71%,线性浓度范围为0~38 mmol/L;改良试剂与和光试剂方法学比对的回归方程为Y=0.93X+0.41(r=0.999),估计偏倚低于允许误差;342μmol/L结合胆红素、342μmol/L非结合胆红素、0.03 g/L维生素C、5 g/L血红蛋白、1 450 FTU乳糜对改良试剂高、低值样本检测结果均无干扰。结论改良酶法尿素试剂具有更加优越的检测限和分析敏感性,并且自身性能良好,符合相关临床应用要求。     

Delta特定蛋白分析仪检测C-反应蛋白的性能验证

目的对Delta特定蛋白分析仪检测C-反应蛋白(CRP)的性能进行验证。方法参考美国临床和实验室标准协会(CLSI)和参考区间行业标准(WS/T)文件对Delta特定蛋白分析仪的精密度、携带污染率、准确度、功能灵敏度、临床报告范围、抗干扰能力、参考区间进行验证。结果低、高两个浓度水平样本的批内变异系数(CV)分别为2.43%和2.57%,实验室内总CV分别为3.24%和3.41%,精密度验证均通过厂家声明;携带污染率为0.65%,满足临床要求。两个不同批号仪器校准品的准确度验证相对偏差分别为6.09%和4.87%,参考物质的靶值在95%置信区间内。当功能灵敏度为1.375 mg/L;临床可报告范围为1.375~12 457 mg/L,满足临床需要。干扰试验显示含246.7μmol/L总胆红素的黄疸标本、含4.15 mmol/L三酰甘油的血脂标本和含2.50 g/L血红蛋白的溶血标本对CRP检测的影响度均5%,在可接受范围内;参考区间的验证结果均在厂家提供的范围内。结论 Delta特定蛋白分析仪采用散射免疫比浊法测定CRP的分析性能符合厂商声明的标准,满足临床检测的要求。     

胶乳增强免疫比浊法测定KL-6的方法学评价

目的对胶乳增强免疫比浊法(LEIA)检测唾液酸化糖链抗原(KL-6)进行方法学评价,判断其能否满足临床要求。方法在贝克曼库尔特AU5421全自动生化分析仪上利用LEIA法检测血清KL-6,参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)的标准化评价方案评价LEIA法检测血清KL-6的精密度、回收率、线性范围、抗干扰性、稳定性等指标。结果 LEIA法检测血清KL-6在(50~5000)U/ml范围内线性良好(y=0.9923 x-0.0776,r~2=0.9981),线性范围内偏差10%;高、低浓度样本批内不精密度评价变异系数CV分别为2.60%、2.63%,日间不精密度评价变异系数CV分别为3.13%、4.07%;平均回收率为100.4%;总胆红素≤200mg/l、血红蛋白≤6g/L、脂肪乳≤5%,对该法无明显干扰;试剂在仪器内(2~8)℃的条件下放置,至少可保存稳定29d;与化学发光法比较,回归方程为y=0.9581 x+14.3206,r~2=0.9989,两法高度相关(P0.01)。结论在全自动生化分析仪上利用LEIA法测定KL-6操作简便、快速,检测结果准确可靠、重复好、线形范围较宽,与化学发光法比较有良好的相关性,符合临床实验室要求。     

检测游离β-HCG时间分辨免疫荧光分析法的建立及临床应用

目的 建立一种快速灵敏的时间分辨免疫荧光分析法(TRFIA),用于定量检测孕妇血清中游离β人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)的浓度.方法 包被游离β-HCG单克隆抗体,铕(Eu~(3+))标记抗β-HCG单克隆抗体,建立双抗体夹心法游离β-HCG TRFIA,对该试剂的各项指标进行评价.结果 最低检测量＜0.06 ng/mL;线性检测范围为0.052～400 ng/mL;分析内和分析间变异系数分别为1.0%～6.4%、3.3%～5.1%;人黄体生成素(HLH)、人促甲状腺素(HTSH)、人促卵泡激素(HFSH)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)与本试剂的交叉反应率分别为0.04%、0.03%、0.05%和0.11%;1 043份孕妇血样用该试剂与进口同类试剂同时检测,2种试剂检测值具有显著相关性(r=0.990,P=0.000);血清样本2～8 ℃储存超过3 d,室温储存1 d或冻融2次,与新鲜样本比较,游离β-HCG浓度显著性增加(P＜0.05).结论 该试剂敏感性高、特异性强、操作简便快捷,具有良好的精密度,可以替代进口试剂用于临床样本的检测.为保证结果 的可靠性,应注意样本的保存条件. 人促卵泡激素(HFSH)和人 毛膜促性腺激素(HCG)与本试剂的交叉反应率分别为0.04%、0.03%、0.05%和0.11%;1 043份孕妇血样用该试剂与进口同类试剂同时检测,2种试剂检测值具有显著相关性(r=0.990,P=0.000);血清样本2～8 ℃储存超过3 d,室温储存1 d或冻融2次,与新鲜样本比较,游离β-HCG浓度显著性增加(P＜0.05).结论 该试剂敏感性高、特异性强、操作简便快捷,具有良好的精密度,可以替代进口试剂用于临床样本的检测.为保证结果 的可靠性,应注意样本的保存条件. 人促卵泡激素(HFSH)和人 毛膜促性腺激素(HCG)与本试剂的交叉反应率分别为0.04%、0.03%     

胱抑素C测定试剂盒的分析性能评估

目的 评价胱抑素C测定试剂盒(免疫比浊法)的各项分析性能,了解其是否满足临床要求.方法 评价胱抑素C测定试剂盒(免疫比浊法)的精密度、灵敏度、特异性、线性范围,并进行方法 学比对.结果 四川新成生物公司的胱抑素C测定试剂盒(免疫比浊法)的批内不精密度CV≤3.73%,批间不精密度CV≤4.05%;测定范围0.20～10.00mg/L;灵敏度LLD=0.20mg/L;试剂特异性好;与日本生研株式会社试剂盒比对相关性良好,y=1.0191x+0.022,R2=0.9969.结论 四川新成生物公司的胱抑素C测定试剂盒(免疫比浊法)精密度好、灵敏度高、特异性强、可测定范围广,能够满足临床实验室的需要.     

两种检测方法测定C反应蛋白的比较

目的评估速率散射比浊法和免疫透射比浊法检测C反应蛋白(CRP)的分析性能。方法分别采用速率散射比浊法(美国Siemens Healthcare Diagnostica公司BN-Ⅱ特定蛋白仪)和免疫透射比浊法(芬兰OrionDiagnostica公司CRP快速检测仪)对CRP进行测定,方法学评价指标为精密度、线性范围、抗干扰性、相关性及偏倚。结果 CRP浓度为2.0～80.0 mg/L时,BN-Ⅱ特定蛋白仪总变异系数(CV)<6%;CRP浓度为8.0～80.0 mg/L时,CRP快速检测仪总CV<7%;检测线性范围为8.0～70.0 mg/L。血红蛋白(Hb)<10 g/L、胆红素(Bil)<300 mg/L对2种方法检测干扰<10%,在可接受范围内。甘油三酯(TG)<20 mmoL/L时BN-Ⅱ特定蛋白仪不受影响(干扰<10%)。CRP快速检测仪在TG>15 mmol/L时低值血清干扰>10%,高值血清不受干扰。50份血样相关分析的结果显示2台仪器测定结果的相关性良好(r=0.98,P<0.01)。线性回归分析经Cusum检验显示2台仪器间偏倚差异无统计学意义(P>0.05),BN-Ⅱ特定蛋白仪测定结果较CRP快速检测仪结果偏低,Bland-Altman曲线显示2种方法的平均偏倚为-2.1。结论速率散射比浊法和免疫透射比浊法的精密度、抗干扰性、线性范围符合要求。虽然系统间测定结果存在一定偏倚,但也符合临床检测要求。     

临床医学实验室非配套试剂使用性能验证

目的:以AU产淀粉酶试剂(AMYX)为例,探讨临床医学实验室在使用非配套试剂前,进行多项要素性能验证的方法.方法:取低、高值两份临床新鲜血清样本,重复检测10次,计算均值、SD、CV％,评估使用AMYX试剂检测的批内重复性.检测高、低两个水平液态人基质血清质控物,1次/d共20 d,计算均值、SD、CV％,评估批间检测变异.收集在34～1 233U/L范围内的20份新鲜血清样本,使用配套试剂、AMYX分别双份检测,参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A2提供的方法进行比对,验证准确度.用高、低值临床血清样本配制6个浓度混合样本,双份检测,参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP6-A进行AMYX线性范围的评价.使用AMYX试剂检测20份来自健康人的新鲜血清样本,验证正常参考范围是否适用.结果:AU产淀粉酶试剂(AMYX)的批内检测低值样本CV为2.87％,高值样本CV为1.49％.批间检测低水平质控物CV为1.80％,高水平质控物CV为2.00％.与配套试剂比较,y=0.98x-0.62,R2=0.998,以1/4CLIA'88TEa(30％)=7.5％为可接受标准,估计误差SE=9.4U/L＜ 37.5 U/L.在31.5～1 233 U/L范围内,AMYX检测结果符合一次方程,呈线性.20份来自健康人的新鲜血清样本检测结果均在正常参考值范围内.结论:AU产淀粉酶试剂(AMYX)与仪器配套试剂(AMY)检测结果可比,其批内、批间变异符合实验室要求,线性范围与厂家提供的一致,正常值参考范围适用,AMYX可用于临床实验室日常检测.     

EDTA-K2对双抗原夹心ELISA检测HIV抗体的影响

目的探讨乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)对双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的影响。方法用HIV抗体阴性和阳性静脉血分别制备EDTA-K2浓度为1.5、2.5、5、10、15、20、25、30、35、40 mg/mL的抗凝血并留取无抗凝剂血,分别分离血浆和血清,测定各样本HIV抗体,读取吸光度(A)值,对A值与EDTA-K2浓度进行相关性分析;制备EDTA-K2最终浓度分别为1.5、2.5、5、10 mg/mL的HIV抗体阳性和阴性抗凝血各20份并留取无抗凝剂血,分别分离血浆和血清,平行测定各样本HIV抗体,血浆与血清样本进行配对t检验。结果 EDTA-K2浓度与HIV抗体阴性样本A值无相关关系(P=0.933),与HIV抗体阳性样本A值呈明显负相关(P<0.01);当EDTA-K2≥5 mg/mL时,HIV抗体阳性血浆样本A值明显低于血清样本(P<0.01),当EDTA-K2≤2.5 mg/mL时,血浆与血清样本A值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论EDTA-K2对HIV抗体阴性样本测定无干扰;血浆EDTA-K2≤2.5 mg/mL时,对HIV抗体阳性样本测定无干扰,EDTA-K2≥5 mg/mL时,对HIV抗体阳性样本测定呈明显负干扰。     

参照CLSIEP方案评价直接胆红素试剂分析性能

目的通过应用CLSIEP方案分别对国产和进口直接胆红素（DBil）试剂分析性能进行评价,了解国产直接胆红素试剂分析性能能否满足临床需要。方法在同一台全自动生化分析仪上,同时测定试剂准确度、精密度、最低检测限、线性范围、干扰试验、方法比对实验、稳定性观察等7项技术指标。结果两种试剂准确度测定,其相对偏差≤±10％;批间变异系数小于4．0％;国产DBil试剂线性范围0．2—595．0umol／L,进口试剂线性范围-0．4—595．7umol／L;国产DBil试剂的最低检测限为0．4umoL／L,进口试剂的最低检测限为0．9umol／L;方法比对实验结果Y=0．997X＋5．2467,R^2=0．9996（浓度范围0.2—595．0umol／L）;抗干扰能力无明显差异;试剂稳定性相近。结论：国产直接胆红素试剂与进口试剂的分析性能无显著性差异,能满足临床实验室的需要。     

2种进口糖化清蛋白试剂的检测性能评价

目的评价2种进口糖化清蛋白试剂的检测性能。方法选取2020年10月空军特色医学中心收治的糖尿病患者及同期体检健康者剩余血清制备混合血清。依据北京市临床检验中心对糖化清蛋白项目的管理要求、美国临床和实验室标准协会关于清蛋白项目的管理要求,对日本旭化成制药株式会社(以下简称A)及日本积水医疗株式会社(以下简称B)的糖化清蛋白试剂进行性能评价,并通过低蛋白血症病例进行临床验证。结果2种试剂测定高低值混合样本批内精密度均<1/4北京市临床检验中心允许偏差(3.75%)。2种试剂测定北京市临床检验中心糖化清蛋白室间质评样本,A、B试剂测定值与认证值的平均偏倚<1/2允许总误差(±7.50%)。糖化氨基酸对A试剂影响在可接受范围内,对B试剂有较大影响;A、B 2种试剂检测低清蛋白血症患者样本时存在显著差异。结论2种进口糖化清蛋白试剂的精密度和正确度均可满足临床使用要求。A试剂具有较好的线性和抗干扰能力,受溶血和糖化氨基酸的影响较小,且在检测低清蛋白样本时具有性能优势。