Taxol对缺氧培养乳鼠心肌细胞Cx43蛋白表达及分布的影响

目的：观察微管稳定剂Taxol对缺氧导致的培养乳鼠心肌细胞Cx43表达和分布的影响。方法：差速贴壁梯度离心法分离培养乳大鼠心肌细胞,取培养4d细胞缺氧120min,分别以不同浓度的Taxol干预;免疫印迹法检测聚合态微管蛋白含量、心肌细胞Cx43的蛋白表达,免疫荧光染色后激光共聚焦显微镜观察Cx43的分布。结果：正常培养心肌细胞Cx43分布在核膜和细胞的闰盘处,缺氧120rain可导致心肌细胞微管解聚,Cx43蛋白表达降低,在心肌细胞间连接处分布规律散失,核膜Cx43分布减弱或消失,而均匀分布在细胞膜上;在低剂量的Taxol作用下,心肌细胞微管解聚状态缓解,Cx43蛋白表达和分布异常明显改善;随着Taxol剂量增加,这种改善作用更明显,呈现剂量依赖性。结论：缺氧引起乳鼠心肌细胞微管解聚,Cx43蛋白表达降低分布紊乱,微管稳定剂Taxol可以显著地保护缺氧导致的心肌Cx43异常,具有潜在的抗缺血性心律失常价值。     

在Hs578T乳腺癌细胞由Cx43组成的细胞缝隙连接对阿霉素细胞毒性的影响

目的探讨乳腺癌细胞Hs578T中缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)的表达,以及由其形成的缝隙连接(gapjunction,GJ)对阿霉素(adriamycin,ADM)细胞毒性的影响。方法采用Western blot检测Hs578T细胞中Cx43表达水平;细胞免疫荧光法观察Hs578T细胞膜Cx43蛋白的表达;细胞接种荧光示踪法测定Hs578T细胞荧光传递功能;MTT法检测缝隙连接功能对ADM细胞毒性的影响。结果Hs578T细胞中天然表达Cx43,10μmol·L-1维甲酸(ratinoicacid,RA)处理细胞24 h后,细胞中Cx43蛋白表达水平增高,25μmol·L-1 oleamide和10μmol·L-118-α-GA分别处理细胞24 h后,细胞中Cx43蛋白表达水平降低;Hs578T细胞膜表面有Cx43蛋白表达;10μmol·L-1RA预处理细胞24 h,细胞间荧光传递功能增强(P<0.01),25μmol·L-1oleamide和10μmol·L-118-α-GA预处理细胞1 h,细胞间荧光传递功能降低(P<0.01);在高密度接种细胞(生长融合,有GJ形成),10μmol·L-1RA增强细胞GJ功能,6μmol·L-1ADM对细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01),25μmol·L-1 oleamide或10μmol·L-1 18-α-GA抑制细胞GJ功能,6μmol·L-1ADM对细胞增殖抑制率降低(P<0.01),而在低密度接种细胞(生长未融合,无GJ形成)细胞增殖抑制率没有改变(P>0.05)。结论 Hs578T细胞天然表达Cx43蛋白,并且增强细胞间由Cx43形成的GJ功能,ADM的细胞毒性也增加;而抑制细胞GJ功能时,ADM的细胞毒性也相应降低。     

乙胺噻嗪对培养乳鼠心肌细胞电生理特性的影响

目的　探讨乙胺噻嗪抗心律失常作用是否与抑制慢反应心肌细胞有关。方法　在体外培养大白鼠乳鼠心室肌细胞 ,采用显微镜直接观察和细胞内动作电位记录方法 ,研究乙胺噻嗪对这种慢反应心肌细胞的自律性、传导性和动作电位时程等电生理参数的影响。结果　 0 1～ 5 0 μmol·L-1剂量依赖性抑制细胞自发性搏动频率 ,最大抑制率为 5 2 % ,半效抑制浓度为 0 17μmol·L-1;乙胺噻嗪作用心肌细胞后15～ 30min ,对搏动频率的抑制作用开始达稳态 ;2 5 μmol·L-1乙胺噻嗪负性频率作用达稳态时 ,部分对抗了 2mmol·L-1氯化钙和 1μmol·L-1异丙肾上腺素的正性频率作用 ,完全对抗了 0 2mg·L-1乌头碱的正性频率作用 ;0 3、0 9、2 5μmol·L-1乙胺噻嗪剂量依赖性抑制细胞动作电位参数APA、OS、Vmax、SP4和MDP ,剂量依赖性延长动作电位周期长度SCL ,0 9、2 5 μmol·L-1略延长APD90 。结论　乙胺噻嗪对慢反应心肌细胞的自律性和传导有明显抑制作用、略延长动作电位时程 ,乙胺噻嗪对慢反应心肌细胞自律性的抑制可能与抑制Ca2 + 和Na+ ,特别是Na+ 的作用有关     

Survivin在PC12细胞对抗化学性缺氧损伤中的作用

目的探讨存活素(survivin)在PC12细胞对抗氯化钴(CoCl2)诱导损伤中的作用。方法应用不同浓度的CoCl2处理PC12细胞不同时间,建立化学性缺氧诱导PC12细胞损伤的实验模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Western-blot法检测CoCl2诱导缺氧与survivin表达间的量效(200～1000μmol·L-1)和时效(0～48h)关系。结果CoCl2可明显抑制PC12细胞的存活率,且呈浓度和时间依赖性。应用不同浓度CoCl2处理PC12细胞24h,在200～600μmol·L-1浓度范围内,呈浓度依赖性地促进survivin表达,600μmol·L-1CoCl2诱导survivin表达达高峰,超过此浓度,则随着CoCl2浓度的增加,survivin表达逐渐下降,CoCl2浓度达1000μmol·L-1时,survivin基本不表达;应用600μmol·L-1CoCl2处理PC12细胞,在0～36h时间范围内,呈时间依赖性地促进PC12细胞survivin的表达,但随着处理时间的延长,survivin的表达逐渐下降;加入2μmol·L-1Hsp90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG),不仅可以降低600μmol·L-1 CoCl2诱导的survivin高表达,而且加重了600μmol·L-1 CoCl2对PC12细胞的损伤作用,使细胞存活率降低。结论survivin表达上调可能是PC12细胞对抗化学性缺氧损伤的内在防御机制之一。     

紫杉醇对兔血管内皮和平滑肌细胞增生影响的差异及意义

目的探讨紫杉醇对兔血管内皮和平滑肌增生影响的差异及意义.方法将兔血管平滑肌细胞接种于共培养体系上室、内皮细胞接种于下室建立体外内膜修复模型,观察紫杉醇对兔血管平滑肌和内皮细胞3H-TdR掺入、细胞计数和迁移率的影响,用直线回归法计算紫杉醇对平滑肌和内皮细胞增生迁移的半数有效抑制浓度IC50.结果在1 nmol·L-1～1 μmol·L-1之间,紫杉醇呈浓度依赖地抑制平滑肌细胞3H-TdR掺入、细胞计数和迁移(n=6, P＜0.01).在10 nmol·L-1～1 μmol·L-1之间,紫杉醇呈浓度依赖地抑制内皮细胞3H-TdR掺入、细胞计数和迁移(n=6, P＜0.01).1 nmol·L-1紫杉醇对内皮细胞3H-TdR掺入和细胞计数有抑制倾向,但与对照组相比无统计学差异.而1 nmol·L-1的紫杉醇却已显著抑制内皮细胞迁移(n=6, P＜0.01).紫杉醇对兔血管平滑肌细胞增生、迁移抑制的IC50分别为 10.09±0.47、9.16±0.54 nmol·L-1,对内皮细胞增生、迁移抑制的IC50分别为 19.05±0.35、5.37±0.51 nmol·L-1.10 nmol·L-1紫杉醇作用 20 min 在观察时间内能持续抑制融合内皮组平滑肌增生,而对数内皮组平滑肌增殖在10 d时明显高于对照组.结论紫杉醇在抑制兔血管平滑肌细胞增生的同时也抑制内皮增生,紫杉醇干预后平滑肌细胞增生延迟与内皮细胞再生延迟密切相关.     

6,7-二甲氧基香豆素对K562细胞红系分化的影响

摘要：目的 探讨6,7-二甲氧基香豆素(6,7-dimethoxycoumarin,6,7-DOC)对K562细胞红系分化的影响及作用机制。方法：选择K562细胞作为研究对象,用联苯苄胺染色,考察1 μmol·L-1、5 μmol·L-1、10 μmol·L-1 6,7-DOC分别于0h、24h、48h、72h对K562细胞红系定向分化的联苯苄胺阳性率的影响;采用Western Blot检测不同浓度6,7-DOC诱导后K562细胞中红系分化标志蛋白α-globin、β-globin、γ-globin的表达变化;采用CCK-8和流式细胞术检测经6,7-DOC诱导后K562细胞的增殖和细胞周期分布情况。结果：5 μmol·L-1、10 μmol·L-1 6,7-DOC组联苯胺染色阳性率显著高于对照组,且呈时间与剂量依赖性;10μmol·L-1 6,7-DOC组α-globin、β-globin、γ-globin的蛋白表达量显著高于对照组;5 μmol·L-1和10μmol·L-1 6,7-DOC组两组细胞增殖率均显著低于对照组,且呈剂量、时间依赖性,6,7-DOC使K562细胞大量阻滞于G0/G1期,S期比例减少。结论：6,7-DOC能够抑制K562细胞增殖,使红系分化标志蛋白α-globin、β-globin、γ-globin表达增加,促进K562细胞向红系定向分化。     

内皮缩血管肽A受体拮抗剂ETP-508对内皮缩血管肽1诱导的心肌细胞肥厚的作用

目的观察内皮缩血管肽(ET)A受体拮抗剂ETP-508对ET-1诱导的心肌细胞肥厚的作用。方法心肌细胞用ET-1(10nmol·L-1)或ET-1+ETP-508(10μmol·L-1)处理24h,分别采用光学显微镜、[3H]亮氨酸掺入、激光扫描共聚焦显微镜和RT-PCR技术方法观察ETP-508对心肌细胞表面积、蛋白质合成、肌原纤维肌节重新组装和基因表达的影响。结果ET-110nmol·L-1诱导心肌细胞表面积和[3H]亮氨酸掺入增加,胚胎基因心钠素和肌球蛋白轻链2的mRNA表达增加,肌原纤维节重新形成;ETP-50810μmol·L-1可显著抑制ET-1诱导的心肌细胞表面积和[3H]亮氨酸掺入增加,抑制率分别达56%和46%;并显著减弱肌原纤维节的重新形成和胚胎基因的再表达。结论ETP-508对ET-1诱导的乳大鼠心肌细胞肥厚有显著的阻断作用。     

Cl~-通道在内皮素-1引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的　研究Cl-通道在内皮素 1(endothelin 1,ET 1)引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,并探讨其可能的作用机制。方法　通过细胞计数和3H TdR参入实验 ,并结合fura 2 /AM荧光测定胞浆游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)等技术 ,观察了Cl-通道阻断剂对ET 1引起的 [Ca2 + ]i 变化及血管平滑肌细胞增殖的影响。结果　Cl-通道阻断剂DIDS可呈浓度依赖性地抑制 10nmol·L-1ET 1引起的血管平滑肌细胞增殖 ,其它Cl-通道阻断剂如IAA 94、NPPB、SITS、DPC和速尿均无此作用 ,DIDS也能抑制 10nmol·L-1ET 1引起的内流相 [Ca2 + ]i 升高 ,而对ET 1引起的Ca2 + 释放无影响 ;预先将细胞与 1μmol·L-1nifedipine作用后 ,3μmol·L-1DIDS对 10nmol·L-1ET 1引起的内流相 [Ca2 + ]i 升高及血管平滑肌细胞增殖不再有效 ,将细胞与 10 μmol·L-1SK&F96 36 5预孵后 ,DIDS却能进一步抑制ET 1的上述作用 ;3μmol·L-1DIDS对 30mmol·L-1KCl引起的胞浆[Ca2 + ]i升高无影响。结论　DIDS可通过阻断Cl-通道来抑制ET 1因促发Cl-通道开放经电压依赖性钙通道的Ca2 +内流及细胞增殖 ,DIDS敏感的Cl-通道可能在ET 1促发的Ca2 + 内流及血管平滑肌细胞增殖的调控上都起着重要的作用     

金丝桃苷对新生大鼠神经细胞缺氧/再给氧损伤的保护作用及其机制

目的探讨金丝桃苷(hyperin,Hyp)对新生大鼠脑细胞缺氧/再给氧损伤的保护作用及其机制。方法将分离的新生大鼠脑细胞缺氧30min或缺氧30min后再给氧40min造成细胞缺氧或再给氧损伤模型,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平的变化,用Fura2-AM方法测定脑细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。结果脑细胞缺氧时,细胞培养上清液中LDH从(62.0±13.0)U·L-1(Sham组)增高到(116.0±16.6)U·L-1(Control组,P<0.01),再给氧时,LDH和MDA分别从(45.6±9.2)U·L-1和(9.1±0.9)μmol·L-1(Sham组)增高到(106.0±17.4)U·L-1和(16.4±2.7)μmol·L-1(Control组,P<0.01)。Hyp在1.0～16.0μmol·L-1范围内,明显地抑制缺氧及再给氧损伤诱导的上述LDH和NO增高,并呈一定的浓度依赖性。1.0～16.0μmol·L-1的Hyp不仅可明显地抑制缺氧诱导的细胞培养上清液中NO和脑细胞内[Ca2+]i的增高(P<0.05或P<0.01),也可明显地抑制再给氧时NO和脑细胞内[Ca2+]i的升高(P<0.05或P<0.01),16.0μmol·L-1的Hyp可将再给氧时NO和[Ca2+]i分别从(34.4±6.3)μmol·L-1和(640±94)nmol·L-1(Control组)降至(25.0±5.1)μmol·L-1(P<0.05)和(331±56)nmol·L-1(P<0.01)。结论Hyp对神经细胞缺氧/再给氧损伤保护作用可能与抑制NO的释放、钙超载及自由基脂质过氧化有关。     

抗钠-钙交换体α-1_((106-145))抗体对大鼠离体心功能的影响及其机制

目的观察1～103nmol·L-1抗钠-钙交换体(NCX)α-1(106-145)肽段抗体对离体大鼠心功能的影响并分析其作用机制。方法用化学合成的NCXα-1(106-145)肽段主动免疫新西兰大耳白兔制备并纯化抗体,利用Langendorff离体灌流系统观察其对大鼠离体心功能的影响;利用全细胞膜片钳技术观察其对心肌细胞钠-钙交换电流、L-型钙电流、瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响。结果经主动免疫后兔体内抗α-1(106-145)抗血清滴度明显升高,Protein A纯化后抗体浓度为13.1 g.L-1。与对照组相比,1～10 nmol·L-1α-1抗体可使大鼠离体心脏左室发展压(LVDP)和左室压最大上升速率(+dp/dtmax)明显增加(P<0.01),并使左室压最大下降速率(-dp/dtmax)减小(P<0.01),且KB-R7943(2μmol·L-1)可使α-1抗体(1 nmol·L-1)的上述效应进一步增强。然而,102～103nmol·L-1α-1抗体则可使大鼠离体心脏LVDP、±dp/dtmax呈不同程度地下降(P<0.01)。全细胞膜片钳实验结果表明,在1～103nmol·L-1浓度范围内,抗α-1抗体对大鼠心肌细胞外向和内向Na+/Ca2+交换电流均表现出剂量依赖性的抑制效应,对瞬时外向钾电流和内向整流钾电流均无明显影响。此外,102～103nmol·L-1α-1抗体对L-型钙电流也具有抑制作用。结论低浓度α-1抗体(1～10 nmol·L-1)可明显增强心肌收缩,这一效应与其在低浓度时专一性抑制Na+/Ca2+交换电流有关;高浓度α-1抗体(102～103nmol·L-1)则可同时抑制心肌收缩和舒张,该作用与其同时抑制Na+/Ca2+交换电流和L-型钙电流有关。     

甲氨喋呤对血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的　观察甲氨喋呤 (MTX)对体外培养的血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法　体外培养兔胸主动脉血管平滑肌细胞 ,在培养基中加入不同浓度的MTX ,采用细胞计数及检测细胞周期的方法观察MTX对细胞增殖的影响 ,采用细胞刮片的方法观察MTX对细胞迁移的作用 ,采用检测DNA片断化的方法观察细胞凋亡现象。结果　①MTX在 2 5～ 10 0nmol·L-1的浓度范围内呈剂量依赖性地抑制VSMC增殖。② 2 5nmol·L-1及 5 0nmol·L-1MTX显著增加细胞周期中S期细胞的百分含量 ,减低G2 /M期细胞的百分含量 (P <0 0 5 ) ,10 0nmol·L-1MTX显著增加了G0 /G1期细胞的百分含量 (P <0 0 1)。③加入MTX的VSMC对血清刺激的迁移受到抑制。④ 10 0nmol·L-1及 2 0 0nmol·L-1的MTX作用于VSMC后 ,流式细胞仪检测亚二倍体的细胞数高于对照组 (P <0 0 1) ;DNA凝胶电泳可以见到梯形条带 ;TUNEL染色阳性细胞的百分数高于对照组 ,具有统计学差异 (P <0 0 1)。结论　甲氨喋呤能够抑制体外培养的血管平滑肌细胞增殖和迁移 ,并促进细胞凋亡。     

克罗米酚对骨髓间质干细胞增殖和向成骨细胞分化的影响

目的　在离体条件下研究克罗米酚(CLO)对小鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)增殖和向成骨细胞分化的影响。方法　在含经活性炭吸附的 10%血清的无酚红α MEM中加入β 磷酸甘油和维生素C诱导小鼠BMSCs向成骨细胞分化,同时加入 0 1nmol·L-1至 10nmol·L-1CLO处理细胞。用细胞计数来反映细胞增殖情况;测定碱性磷酸酶 (ALP)活性与钙的沉积量反映细胞向成骨细胞分化状态;用试剂盒来检测一氧化氮 (NO)的产物。结果　CLO ( 0 1 ~10nmol·L-1 )呈剂量依赖性地增加小鼠BMSCs的数目,ALP活性和钙的沉积量,同时培养基中NO代谢产物明显增加。分别加入雌激素受体 (ER)拮抗剂ICI182, 780 (0 1μmol·L-1 )及一氧化氮合酶抑制剂L NAME( 6mmol·L-1 )均可阻止CLO促进BMSCs的增殖及向成骨细胞分化的作用,并取消NO代谢产物的增加。结论　CLO在 0 1 ~10nmol·L-1剂量范围内具有雌激素样受体激活效应,可通过ER/NO途径促进小鼠骨髓间质干细胞的增殖及向成骨细胞分化。     

Taxol prevents myocardial ischemia-reperfusion injury by inducing JNK-mediated HO-1 expression

Context: Ischemia/hypoxia and reperfusion impair mitochondria and produce a large amount of reactive oxygen species (ROS), which lead to mitochondrial and brain damage. Furthermore, heme oxygenase-1 (HO-1) as a cytoprotective gene protects cells against ROS-induced cell death in ischemia–reperfusion injury. Induction of HO-1 is involved in cytoprotective effects of taxol.

Objective: We hypothesize that taxol protects cardiac myocytes possibly by preserving myocardial mitochondrial function and inducing HO-1 expression through the JNK pathway.

Materials and methods: In this project, the perfused Langendorff hearts isolated from rats were randomly divided into five groups: control, ischemic, ischemic?+?taxol (0.1?μM), ischemic?+?taxol (0.3?μM), and ischemic?+?taxol (1?μM). Briefly, following a 15?min equilibration period, the control group was subject to normoxic perfusion for 120?min; the ischemia group, normoxic reperfusion for 120?min after 30?min ischemia; the taxol groups, normoxic reperfusion for 120?min after 30-min ischemia with taxol (0.1, 0.3, or 1?μM). The microtubule disruption score, ROS levels, and the activity of mitochondrial electron transport chain complexes I and III were examined by using immunohistochemical methods and free radical detection kits. Western blot assay was employed to study the underlying mechanisms.

Results: After Taxol treatment (0.1?µM), the ischemic microtubule disruption score was reduced to 9.8?±?1.9%. The study revealed that 0.1, 0.3, and 1?μM taxol reduced the level of ROS by 33, 46 and 51%, respectively (p?<?0.05). In additional, 0.3 and 1?μM taxol dramatically increased the activity of mitochondrial electron transport chain complex I (99.11?±?2.59, 103.49?±?3.89) and mitochondrial electron transport chain complex III (877.82?±?12.08; 907.42?±?16.21; 914.73?±?19.39, *p?<?0.05). Additionally, phosphorylation levels of JNK1 were significantly increased in the taxol group. Furthermore, the expression level of HO-1 increased with taxol treatments, which could be inhibited by the specific inhibitor of JNK, SP600125.

Discussion and conclusion: Taxol stabilized microtubules and effectively reduced ROS levels during ischemia. It also preserved the activity of mitochondrial complexes I and III. Interestingly, taxol induced the expression of HO-1 via the JNK pathway in cardiac myocytes.     

阿片受体激动剂U50,488H通过Cx43介导的抗心律失常作用与抑制钙通道有关

目的研究U50,488H(选择性κ阿片受体激动剂)是否通过抑制钙通道减少外钙内流参与了κ阿片受体的抗缺血性心律失常作用。方法将30只SD大鼠完全随机设计分为5组(每组6只):对照组(Sham)、缺血组(Isc)、缺血+U50,488H组(Isc+U50)、缺血+U50,488H+钙离子通道激动剂Bay k8644组(Isc+U50+Bay)、缺血+Bay k8644组(Isc+Bay)。建立大鼠急性心肌缺血模型,施行30 min心肌缺血前应用U50,488H(1.5 mg.kg-1)及Bay k8644(66.7μg.kg-1)进行干预,观察各组心律失常发生情况及连接蛋白43(Cx43)在蛋白和基因水平表达的变化。结果①在体动物模型中,Bay k8644可以翻转U50,488H激活κ阿片受体后产生的抗心律失常作用(P<0.05)。②在蛋白表达水平,Bay k8644可以阻断U50,488H对缺血心肌Cx43的保护性上调作用(P<0.01)。③在mRNA表达水平,Bay k8644亦可翻转U50,488H激活κ阿片受体后对缺血心肌Cx43mRNA的调控作用(P<0.01)。结论 U50,488H可通过抑制钙通道减少外钙内流,参与κ阿片受体对缺血心肌Cx43的稳定性调控及抗缺血性心律失常作用。     

蜕皮甾酮对内皮细胞凋亡保护作用的研究

目的　初步探讨缺氧对培养人脐静脉内皮细胞 (HU VECs)凋亡的影响及蜕皮甾酮的干预性作用。方法　①人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定 ;②建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型 ,TUNEL法观测不同的缺氧时间 ( 0、12、2 4、4 8h)及蜕皮甾酮对内皮细胞凋亡的影响 ;③内皮细胞在常氧与缺氧状态下 ,实验组分别给于蜕皮甾酮 ( 10 0mg·L-1)刺激 ,2 4h后检测细胞中血管内皮生长因子 (VEGF)的表达。结果　随缺氧时间延长 ,HUVECs凋亡率显著升高 ;蜕皮甾酮能抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡 ;蜕皮甾酮刺激内皮细胞VEGF表达上调。结论　缺氧作为一种致病因素 ,对内皮细胞凋亡的促发作用是随缺氧时间的延长而加重的。内皮细胞的过度凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素 ,蜕皮甾酮通过抑制内皮细胞凋亡而具有内皮细胞保护作用 ,而此作用是由蜕皮甾酮刺激内皮细胞VEGF表达上调所介导的。     

虎杖苷对LPS作用下心肌细胞β-肾上腺素能受体的调节作用

目的　探讨LPS对心肌细胞 β肾上腺素能受体 (β AR)功能的影响以及虎杖苷 (PD)的防治效果。方法　体外培养心肌细胞 ,利用放射配体竞争结合法检测 β AR数量和亲和力 ,同时应用流式细胞术检测 β AR数量。 结果　正常心肌细胞膜上的 β AR最大结合容量 (Bmax)为 (4 14± 1 4 1)fmol·1× 10 5cells-1,解离常数Kd 值为 (4 0 2± 0 5 9)nmol·L-1;LPS刺激后 ,受体Bmax减小为 1 78± 0 12fmol·(1×10 5cells) -1,亲和力下降为 (2 3 88± 2 34)nmol·L-1;当用PD处理后 ,最大结合容量和亲和常数都恢复至接近正常 ,分别为 (3 37± 0 36 )fmol·(1× 10 5cells) -1和 (3 4 4± 0 4 4 )nmol·L-1;单纯用PD处理细胞Bmax和Kd 都与正常组差异无显著性 ,分别为 (2 76± 0 32 )fmol· 1× 10 5cells) -1和(4 6 3± 1 5 4 )nmol·L-1。流式细胞术检测 β AR数量变化与放射配体结合法检测结果一致。结论　LPS可直接引起心肌细胞β AR数量下调、亲和力降低 ,虎杖苷可调节 β AR的功能 ,使其维持正常水平。     

Sex differences in cardiomyocyte connexin43 expression

Decreases in cardiac connexin43 (Cx43) play a critical role in abnormal cell-to-cell communication and have been linked to the resistance of the female heart to arrhythmias. We therefore hypothesized that Cx43 expression would be greater in female cardiomyocytes than in male cardiomyocytes under pathologic conditions. Adult ventricular myocytes were isolated from male and female rats and treated with phenylephrine (PE), a well-established pathologic stimulus. Cx43 gene and protein expression was determined. The expression of micro-RNA-1 (miR-1), a micro-RNA known to control Cx43 protein expression in cardiomyocytes, was also determined. Cx43 mRNA and protein levels were significantly higher in the female cardiomyocytes than in the male cardiomyocytes (mRNA: 1.4-fold; Protein: 5-fold, both P < 0.05) under both basal and pathologic conditions. PE treatment increased Cx43 expression only in female cardiomyocytes. Cx43 phosphorylation, a marker of preserved Cx43 function, was also higher (P < 0.05), and The expression of miR-1 was lower (P < 0.05) in the female cardiomyocytes after PE treatment. The expression of miR-1 was unchanged by PE treatment in male cardiomyocytes. Thus, a sex difference in miR-1 may be responsible for the sex difference in Cx43 expression in cardiomyocytes under pathologic conditions. Taken together, our results demonstrate a sex difference in Cx43 expression and site-specific phosphorylation that favors cardioprotection in female cardiomyocytes.     

黄体酮对豚鼠结肠平滑肌及细胞膜钙依赖的钾通道电流的影响

目的　观察黄体酮 (Progesterone)对豚鼠结肠平滑肌肌条和细胞的作用 ,借此探讨肠易激综合征 (IBS)的病理生理机制。方法　急性分离豚鼠结肠平滑肌肌条和单个平滑肌细胞。采用TD 112S型等张传感器测量肌条收缩与舒张的幅值、频率 ,并用Axopatch 1 D膜片钳放大器测全细胞模式下的单个平滑肌细胞大电导的钙离子依赖钾通道电流(BKCa)。结果　 6 4 8μmol·L-1黄体酮可抑制结肠带肌条的收缩 (0 1792± 0 0 873) g(n =6 ,P <0 0 5 ) ,而低浓度黄体酮仅抑制结肠环行平滑肌肌条的收缩 (16 2pmol·L-10 2 36 0g± 0 15 78g ,n =6 ,P <0 0 5 ;1 6 2nmol·l-10 4 332 g±0 2 111g ,n =6 ,P <0 0 1;3 2 4nmol·l-1部分肌条完全抑制P <0 0 1) ,其效应呈剂量依赖的趋势。细胞实验中 12 96μmol·L-1的黄体酮可抑制BKCa的幅值约 6 0 %± 17% (n =10 ,P <0 0 1) ,而灌流液含 5 μmol·L-1尼卡地平 (nicardip ine)时抑制BKCa的作用不明显。结论　高浓度黄体酮对纵行和环行平滑肌均有抑制作用 ,而低浓度主要抑制环行平滑肌的收缩 ,作用机制与减少细胞外钙离子内流及抑制BKCa有关 ,这种作用可部分解释在临床上IBS妇女患病更普遍的现象 ,对女性IBS患者的激素治疗有一定的提示作用