革皮氏海参总皂苷的安全性评价研究

目的对革皮氏海参总皂苷的使用安全性进行评价,阐明其毒性及潜在的危险。方法将健康ICR小鼠随机分为正常组和革皮氏海参总皂苷不同剂量组,每组5只。根据预实验的结果灌胃剂量分别为0.464、1、2.15和4.64 g.kg-1bw,一次性灌胃后连续观察14 d,记录各组的死亡数;另取健康ICR小鼠50只,随机分为正常对照组、阳性对照组和革皮氏海参总皂苷低、中、高剂量组,每组10只,♀♂各半,取股骨骨髓细胞涂片观察骨髓嗜多染红细胞微核率的变化;大鼠30 d喂养实验中,将Wistar大鼠随机分为4组,每组♀♂各10只,给大鼠灌胃不同浓度(分别为20、50和100mg.kg-1)的革皮氏海参总皂苷30 d后,进行体重、外周血象、血糖、血脂、肝脏功能、心肌损伤、肾脏功能等指标检测,取肝、肾、睾丸、卵巢、胃、心、肺进行了组织病理学观察。结果革皮氏海参总皂苷对♂小鼠的LD50为1.08 g.kg-1,♀小鼠LD50为1.10 g.kg-1,属低毒级;骨髓细胞微核实验结果为阴性;30 d喂养实验中,不同剂量组大鼠各项检测指标与正常组相比较差异均无显著性(P>0.05),组织病理观察发现革皮氏海参总皂苷对大鼠睾丸有轻微毒性作用。结论革皮氏海参总皂苷的急性毒性级别为低毒,未发现遗传毒性,存在一定的亚急性毒性。     

儿茶素对骨髓细胞周期及造血生长因子基因表达的作用儿茶素对骨髓细胞周期及造血生长因子基因表达的作用

目的探讨中药鸡血藤Spatholobus suberectus Dunn活性成分儿茶素对小鼠骨髓细胞增殖周期及其脾细胞内造血生长因子IL-6和GM-CSF mRNA表达的影响,以初步阐明其造血调控作用机理。方法用流式细胞仪检测技术观察儿茶素对正常及骨髓抑制小鼠骨髓细胞增殖周期的影响,同时采用RT-PCR技术,检测在儿茶素刺激条件下,小鼠脾细胞内IL-6和GM-CSF mRNA表达的变化。结果儿茶素可促使正常及骨髓抑制小鼠骨髓细胞G₀/G₁期细胞比例下降,S+G₂/M期细胞比例增加,并可使正常及骨髓抑制小鼠脾细胞内IL-6 mRNA和GM-CSF mRNA表达显著上调。结论儿茶素可通过诱导脾细胞内IL-6 mRNA和GM-CSF mRNA的表达,促进正常小鼠骨髓细胞进入增殖周期,并促使骨髓抑制小鼠的骨髓细胞跳出“G₁期阻滞”,进入细胞增殖周期,从而加速造血干/祖细胞的增殖和分化。     

生存素及bcl-2基因表达在吲哚美辛抗胃癌细胞株 MGC803 增殖、诱导凋亡中的作用

目的:探讨吲哚美辛(IN)对胃癌细胞株MGC803增殖、凋亡的影响及可能的机制.方法:观察不同浓度IN(50,100,200μmoL稬-1)对MGC803细胞增殖、凋亡及抗凋亡基因生存素、bcl-2 mRNA表达的影响,MTT法检测细胞生长抑制率;荧光染色检测细胞凋亡率;流式细胞仪测定细胞周期变化;RT-PCR检测生存索、bcl-2 mRNA的表达.结果:IN对MGC803细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用,并具有浓度、时间依赖性;IN作用于细胞48 h后,细胞周期改变表现为G0/G1期比例增加,S期及G2/M期下降;细胞经200μmoL稬-1IN作用后,生存素mRNA表达逐渐减弱(P<0.05),bcl-2 mRNA表达无明显变化.结论:IN可抑制MGC803细胞增殖、诱导凋亡,干扰细胞增殖周期,生存素mRNA表达下调可能是其作用机制之一.     

消岩汤对环磷酰胺诱导Lewis肺癌小鼠骨髓抑制的造血微环境的改善研究

目的观察消岩汤对环磷酰胺诱导Lewis肺癌小鼠造血微环境的影响,探究消岩汤对Lewis肺癌小鼠骨髓抑制的造血微环境的改善作用及其作用机制。方法 SPF级Lewis肺癌小鼠随机分为对照组、模型组、重组人粒细胞刺激因子组和消岩汤组,每组各10只。对照组和模型组ig 0.02 mL/g生理盐水。人粒细胞刺激因子组在造模后sc重组人粒细胞刺激因子注射液15 ng/g,1次/d,连续给药7 d。消岩汤组在造模后ig 2.9 g/mL消岩汤,2次/d,0.2 mL/次,连续给药7 d。采用流式细胞仪分析细胞周期,通过细胞培养技术检测基质细胞分化能力,采用QRT-PCR法检测骨髓细胞Bcl-2和Bax mRNA的基因表达。结果与模型组比较,消岩汤能促进骨髓细胞从G_0/G_1期向S、G2/M期转化(P0.05);能一定程度上缓解化疗导致的成纤维细胞集落生成单位(CFU-F)形成减少(P0.05);能上调抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达((P0.05)。结论消岩汤能够促进骨髓细胞向增殖周期转化,上调Bcl-2 mRNA表达,改善造血微环境,从而缓解Lewis肺癌骨髓抑制对小鼠造血功能的影响。     

重组人白介素-18对辐射损伤小鼠细胞周期素基因及凋亡相关基因表达的调节作用

为探讨重组人白介素-18（IL-18）对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期素基因（cyclinD1）及凋亡相关基因（bel-2和bax）mRNA表达的作用，对32只小鼠分4组进行辐射损伤，第14天用原位杂交法检测小鼠骨髓单个核细胞cyclinD1、bel-2和bax mRNA的表达。结果表明，与对照组相比，重组人IL-18组骨髓细胞促凋亡基因bax mRNA表达显著减少（P〈0．01），而cyclinD1和bcl-2 mRNA的表达显著增强（P〈0．01）。结论：重组人IL-18抗辐射损伤可能是通过上调细胞周期素基因cychnD1和bcl-2的表达及降低bax mRNA的表达，促进造血细胞的增生和提高机体免疫力，从而达到保护机体的目的。     

阿司匹林对体外培养人宫颈癌细胞凋亡作用的研究

目的 探讨阿司匹林诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和bax的作用.方法 培养人宫颈癌Hela细胞,加入不同浓度阿司匹林(1.0、5.0、10.0 mmol/L)干预培养.应用流式细胞技术检测Hela细胞凋亡和细胞周期的变化;用RT-PCR 检测细胞凋亡相关基因bcl-2及bax转录水平的改变;免疫组化法检测bcl-2及bax蛋白表达的变化.结果 与对照组相比,阿司匹林干预组Hela细胞凋亡率明显增高(P<0.05); 随着阿司匹林浓度增加,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);阿司匹林干预培养后Hela细胞中bcl-2基因mRNA表达明显降低,而bax基因mRNA表达升高明显,较对照组均有统计学意义(P<0.05);阿司匹林作用48 h后,免疫组化法检测bcl-2蛋白表达下调及bax蛋白表达上调(P<0.05).结论 阿司匹林能诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,其机制与抑制bcl-2表达,上调bax表达有关.     

AKT体内外抗肝癌作用及机理的初步研究

目的：观察AKT对人肝癌细胞SMMC-7721及小鼠H22肝癌移植性肿瘤的抑制作用，并探讨以紫草总色素为主要成分，制备而成的AKT的抗肿瘤作用机制。方法：用MTT法分析AKT对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用绘制作用生长曲线；建立小鼠H22肝癌移植性实体瘤模型，通过绘制瘤块生长曲线及计算肿瘤抑制百分率评价体内抑瘤效果，流式细胞术检测不同剂量AKT作用SMMC-7721细胞48h后细胞凋亡率及细胞周期变化，并检测Bax及Bcl-2蛋白的表达情况；RT-PCR检测AKT作用SMMC-7721细胞24h后，bcl-2 mRNA及baxmRNA的表达情况。结果：（1）MTT提示AKT对SMMC-7721细胞具有显著抑制作用；（2）体内实验表明，AKT对小鼠H22肝癌移植性肿瘤有一定的抑制作用。（3）Giemsa染色后在光镜下可见AKT给药组多数细胞出现形态改变，胞体变小，胞质浓缩拉长，呈拉丝状，核质比增大，核膜完整，核固缩，染色质不均一或边集，胞浆内较多空泡的典型凋亡特征；Hoechst 33258染色后细胞核出现细胞核固缩，出现凋亡小体等明显的凋亡形态学变化；流式细胞术检测显示AKT作用SMMC-7721细胞后，中、高剂量组均检测到明显亚G1凋亡峰；给药组S期细胞明显降低，G2／M期细胞明显增多，细胞周期阻滞于G2／M期；药物处理后Bcl-2及Bax的表达均下调，且Bcl-2／Bax值降低；RT-PCR检测结果显示给药组bcl-2 mRNA及bax mRNA表达水平均出现下调，bcl-2／bax比值降低；体内实验瘤组织免疫组化结果显示给药组Bcl-2表达下调，Bax及Caspase-3表达均出现上调。结论：AKT对人肝癌SMMC-7721细胞具有明显体外抗增殖作用，对小鼠移植性肿瘤H22也呈现了明显的抑制作用。其效应机制可能与阻滞细胞周期于G2／M期，下调bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达，上调Caspase-3表达，从而诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖有关。     

刺梨汁对骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用

目的探讨刺梨汁对环磷酰胺合并60Co致骨髓抑制小鼠造血功能的影响,研究其促进血细胞上调的作用机制。方法双抗体夹心法检测外周血常规、骨髓基质中红细胞生成素（EPO）、血小板生成素（TPO）、粒细胞生长因子（GCSF）的量。结果刺梨汁能明显改善骨髓抑制小鼠外周血常规,能有效平衡微环境中TPO的量,改善EPO的表达,对骨髓抑制小鼠骨髓细胞上清中GCSF有明显的正调控作用。结论刺梨汁能提高骨髓抑制小鼠外周血血细胞和骨髓有核细胞计数,可促进骨髓抑制小鼠骨髓细胞从G0/G1期进入增殖周期,并能有效调节骨髓微环境中TPO、EPO、GCSF的表达,从而促进骨髓抑制小鼠的造血功能,可作为一种治疗贫血的辅助保健药物。     

猫爪草总皂苷体外抗人非小细胞肺癌NCI-H460细胞活性研究

目的 观察猫爪草总皂苷体外对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞活性的影响。方法 采用系统溶剂法提取猫爪草总皂苷,3H-TdR掺入法观察猫爪草总皂苷对NCI-H460细胞增殖的影响;流式细胞仪检测其对NCI-H460细胞凋亡和周期的影响。结果 猫爪草总皂苷对NCI-H460细胞增殖有较好的抑制作用,呈现较好的量效关系,可促进NCI-H460细胞的早期凋亡,细胞周期出现G0/G1期的阻滞。结论 猫爪草总皂苷能较好的抑制NCI-H460细胞增殖,其机制可能与诱导凋亡、G0/G1期阻滞有关。     

熊果酸抑制人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖的功能和机制研究

目的研究熊果酸(UA)对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法分别以不同浓度UA(12.5、25、50μmol·L~(-1))和顺铂(6μmol·L~(-1))处理对数生长期人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,药物干预24 h后,采用Hoechst染色法观察Hep-2细胞生长状况,MTT法测定细胞增殖抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期、观察细胞凋亡状况并计算凋亡率,RT-PCR法检测bcl-2 m RNA和Bax mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值,Western blot法检测降解型caspase-3蛋白表达。结果 UA各组和顺铂组Hep-2细胞较空白对照组出现明显损伤,以UA 50μmol·L~(-1)组最为显著;UA(25、50μmol·L~(-1))组和顺铂组Hep-2细胞增殖抑制率显著升高,G0/G1期显著增长、G2/M期显著缩短,细胞凋亡率显著升高,细胞中bcl-2 m RNA表达显著下调且Bax mRNA显著上调、Bax/bcl-2表达比值显著升高,降解型caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论 UA能够抑制人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖并促进其凋亡,提示UA对Hep-2细胞生长具有抑制作用,其作用机制可能与UA能够改变细胞周期以及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

人肝癌Bel7402/5-FU耐药株多药耐药与凋亡关系的研究

目的　从凋亡的角度探讨人肝癌细胞Bel74 0 2 / 5 FU多药耐药的分子机制。方法　采用SRB法检测Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药性 ,用AnnexinV FITC/PI双标流式细胞术检测Bel74 0 2细胞及其耐药株的凋亡程度 ,PI单染检测细胞周期变化 ,RT PCR方法检测凋亡相关因子bcl 2、bcl xl、bcl xs、bax、fas、p5 3和cpp32的表达情况。 结果　Bel74 0 2 / 5 FU耐药株具有多药耐药性 ;相同剂量 30 μmol·L-1及 15 0 μmol·L-15 FU处理 ,Bel74 0 2细胞凋亡明显增加 ,G0 /G1期增加 ,S期、G2 /GM减少 ,耐药株不出现凋亡增加及细胞周期改变 ;耐药株凋亡相关因子bcl xl、bcl xs和bax表达上调 ,p5 3和cpp32表达下调。 结论　人肝癌Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药性可能和凋亡减少有关 ,抗凋亡因子bcl xl表达上调 ,促凋亡因子 p5 3和cpp32表达下调可能参与Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药。     

Induction of apoptosis and inhibition of telomerase activity in human bone marrow and HL-60 p53 null cells treated with anti-cancer drugs.

Telomerase plays a key role in the maintenance of chromosomal stability in tumours, and the ability of anti-cancer agents to inhibit telomerase activity is under investigation. In this study, we evaluated the effect of etoposide and taxol, on the telomerase activity and telomere length in human leukaemia p53 null cells and human bone marrow cells, as well as apoptosis and cell cycle modulation. Results showed that after exposure to the drugs, HL-60 cells as well as the human progenitors underwent a block in G2 and subsequently apoptosis, whereas stromal cells from bone marrow did not undergo a block in G2 or enter apoptosis after etoposide exposure. Telomere length increased in stromal cells after treatment with both etoposide and taxol whereas in HL-60 cells only after etoposide treatment with. Bax, bcl-2 and bcl-x change their expression in stromal cells, whereas bcl-x was induced after drug treatment and bcl-2 down regulated in progenitor cells. Our data suggest that telomerase activity and apoptosis are correlated and they seem to be modulated by a common gene, bcl-2.     

黄酮类化合物对心肌细胞凋亡的作用

目的观察黄酮类化合物包括高良姜素(G)、山萘酚(K)、芹菜素(A)、桑色素(M)、槲皮素(Q)、杨梅素(MY)对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。方法培养新生Wistar乳鼠心肌细胞,随机分为正常组、模型组、药物组。分别用荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳法、Western blot法观察心肌细胞凋亡情况及蛋白表达的变化。结果100μmol·L-1H2O2孵育心肌细胞16 h能明显诱导心肌细胞凋亡(P<0.01),黄酮类化合物能降低细胞凋亡率,抑制DNA损伤,上调bcl-2、bcl-xl,下调bax蛋白表达。结论黄酮类化合物能抗氧化,从而抑制心肌细胞凋亡,主要是通过线粒体死亡途径调节bcl-2家族蛋白表达来发挥作用的。     

黄芪多糖对丝裂霉素C(MMC)致骨髓抑制小鼠骨髓及脾脏造血祖细胞的生成作用的影响

目的　研究黄芪多糖 (APS)对MMC致骨髓抑制小鼠的骨髓和脾造血祖细胞生长的影响。方法　d 0腹腔注射丝裂霉素C(MMC) 7mg·kg- 1 ,APS皮下注射 1 0 0mg·kg- 1·d- 1 ,给药方案分 3种 :① 0～ 4d ,共 5d ;② 0～ 1 1d ,共 1 2d ;③ 1 2d给药 ,3wk内给完 ,用造血细胞集落培养法观察APS的药理作用。结果　在d 3时 ,APS治疗组对MMC致骨髓抑制小鼠骨髓CFU C数目增加了 3倍 ,分别为 1 870±40 /股骨和 62 4 0± 1 1 0 /股骨 ,从d 3～d 1 8,APS治疗组的骨髓CFU C均高于模型组。在给MMC后d 1 4之前APS对脾CFU C的生长没有影响 ,APS在d 1 4和d 1 8时APS有刺激脾造血祖细胞增殖作用 (分别高 3倍和 2倍 )。结论　APS对MMC引起骨髓抑制小鼠有促进骨髓和脾脏造血祖细胞的增殖和成熟的作用     

Stimulation of hematopoiesis in untreated and cyclophosphamide treated mice by the inhibition of prostaglandin synthesis

Indomethacin (IN) was administered to untreated or to cyclophosphamide (CY) treated C57B1/6 mice to study the roles of prostaglandins in regulating hematopoiesis. The following hematopoietic parameters were quantitated: peripheral blood leukocyte (PBL) count; total nucleated cells per spleen; total nucleated cells per femur; and spleen weight. Assays were performed in vitro to measure the number of colony forming units (CFU) present in the bone marrow and spleen. Untreated mice administered IN had a transient rise in their PBL count. These animals also developed splenomegaly and had an increased number of nucleated cells in their spleen. All CY treated mice had a marked decrease in PBL count, spleen cellularity, bone marrow cellularity, and spleen size during the first 5 days after CY treatment. These observations were followed by hematopoietic recovery over the next 10 days. Cyclophosphamide treated mice exhibited a more rapid hematopoietic recovery when treated with IN than without IN treatment. Analysis of the CFU capacity of bone marrow and spleen cells in soft agar showed a larger number of CFU in the bone marrow and spleen of IN treated mice or of CY/IN treated mice than in animals not receiving IN. These results indicate that prostaglandins are involved in the regulation of hematopoiesis in untreated mice and that prostaglandins may limit the hematopoietic recovery of CY treated mice.     

仿刺参糖胺聚糖对骨髓抑制贫血小鼠外周血及骨髓细胞周期的影响△

目的：观察仿刺参糖胺聚糖(HGAG)对环磷酰胺诱导的骨髓抑制贫血小鼠外周血及骨髓细胞周期的影响。方法：将40只雄性昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、HGAG治疗组(1,5,15mg.kg_-1),每组8只。除正常组外其余各组腹腔注射环磷酰胺100mg.kg_-1制备贫血小鼠模型,每天1次连续3天,并于造模当日起,HGAG给药组腹腔注射不同浓度的HGAG,正常组和模型组腹腔注射生理盐水,每天1次连续7天。用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法、流式细胞术分别检测HGAG对贫血小鼠外周血、骨髓有核细胞数和骨髓细胞周期的影响。结果：HGAG低、中、高剂量组能显著升高外周血WBC和HGB,且高剂量组还能明显升高外周血RBC和PLT。HGAG三个剂量组能显著增加小鼠骨髓有核细胞数和脾脏指数,而且能够促进骨髓G₀/G₁期细胞向S期及S期细胞向G₂/M期细胞的转化,显著升高增殖指数。结论：HGAG能够解除细胞周期阻滞,促进骨髓造血细胞的增殖,增加外周血细胞、骨髓有核细胞的数量和升高脾脏指数,从而促进骨髓抑制贫血小鼠造血功能的恢复     

Zidovudine plus sulfamethoxazole-trimethoprim adversely affects B lymphocyte maturation in bone marrow of normal mice

Sulfamethoxazole-trimethoprim and zidovudine (AZT), drugs used often in combination in patients infected with HIV, were investigated for their effects on B cell development in a mouse model. BALB/c mice were randomized to receive oral doses of AZT, sulfamethoxazole-trimethoprim, or the combination via oral gavage for up to 28 days. Immune cell populations in the spleen, lung, and peripheral blood were examined, and toxicity to B lineage subtypes in the bone marrow was investigated by phenotypic analysis via flow cytometry. Pre-pro-B, pro-B, early pre-B, and late pre-B cells were assayed for apoptosis and analyzed for cell cycle profile. Total as well as B cell splenic and bone marrow cellularities were significantly decreased by using the drugs concomitantly, while B cell populations in the lungs and percentage in the peripheral blood were not affected. Combination therapy caused significant increases in apoptosis in B cells and granulocytes in the bone marrow, with the late pre-B cell population being the most depleted. The proliferative expansion and differentiation of early pre-B cells (B220+/CD43+/BP-1+/HSA+) to the late pre-B cell (B220+/CD43-/IgM-) stage was blocked, with early pre-B cells accumulating in the proliferative phases of the cell cycle. This apoptosis increase is likely due to elevated blood sulfamethoxazole concentrations that were observed in mice also receiving AZT. Concurrent sub-chronic administration of AZT and sulfamethoxazole-trimethoprim adversely affected B lymphocyte development in mouse bone marrow.