姜黄素通过上调PPARγ抑制糖基化终末产物诱导软骨细胞分泌TNF-α及MMP-13

目的在体外培养的家兔软骨细胞模型上,观察姜黄素(curcumin)对糖基化终末产物(AGEs)诱导的软骨细胞TNF-α和MMP-13表达的影响,并探讨其相关机制是否与姜黄素上调PPARγ有关。方法采用real-time PCR方法检测TNF-α、MMP-13、PPARγmRNA的表达量;试剂盒方法检测CAT、SOD活性及MDA水平,荧光探针法检测ROS水平;Western blot检测PPARγ蛋白含量;DNA-binding法检测PPARγ活性。结果 AGEs(100μg·mL~(-1))与软骨细胞共孵育48 h后,TNF-α及MMP-13 mRNA的表达较正常对照组明显升高(P<0.05),50μmol·L~(-1)的姜黄素与软骨细胞预孵育2 h后,可以显著抑制由AGEs诱导的TNF-α及MMP-13 mRNA增多,拮抗由AGEs所致细胞CAT、SOD活性降低及MDA、ROS水平增高(P<0.05);给予PPARγ特异性抑制剂GW9662 10μmol·L~(-1)预处理后,可以显著拮抗姜黄素对AGEs诱导软骨细胞损伤及氧化应激的保护作用;姜黄素显著上调AGEs诱导的PPARγ活性降低,伴随PPARγ相应mRNA及蛋白表达水平的升高。结论姜黄素可能通过上调PPARγ从而降低ROS水平,进而抑制由AGEs诱导的TNF-α和MMP-13表达增多,保护软骨细胞的功能。     

大鼠PPARγ shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)基因RNA干扰慢病毒载体并鉴定。方法设计针对PPARγ的小发夹RNA(shRNA)序列,应用基因重组技术插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒载体中,XbaⅠ和XhoⅠ双酶切和DNA测序鉴定重组克隆。将pLL3.7空载体(NC组)、pLL-PPAR-γsh1RNA(S1组)、pLL-PPAR-γsh2RNA(S2组)三组质粒分别与辅助包装质粒共转染人胚肾293T细胞,并测定病毒滴度;病毒感染大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞和大鼠海马神经干细胞后,分别用RT-PCR和Western blot检测PPARγmRNA和蛋白表达。结果 PPARγshRNA成功插入慢病毒载体。慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒的滴度为5×106IU/ml。与NC组相比,S1、S2组PPARγmRNA水平下降(P<0.05),且S1组PPARγ蛋白表达亦明显下降(P<0.05)。结论成功构建PPARγ基因RNA干扰慢病毒载体。     

蛇床子素可能通过上调PPARα和PPARγ的表达减轻野百合碱所致大鼠右心室重构

目的探讨蛇床子素(osthole,Ost)对野百合碱(MCT)所致大鼠右心室重构的作用及其可能的机制。方法♂SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、Ost低剂量组(10 mg·kg-1)和Ost高剂量组(20 mg·kg-1)。后3组大鼠经颈背部一次性皮下注射MCT 50 mg·kg-1建立右心室重构模型,Ost低、高剂量组于造模后d 1开始给药(ig,qd)。给药28 d后称大鼠右心室自由壁重量(RV)和左心室加室间隔重量(LV+SEP),计算右心室肥大指数(RVHI=RV/LV+SEP);通过HE染色观察右心室形态学变化;Western blot检测右心室PPARα和PPARγ蛋白的表达。结果与正常对照组相比,模型组大鼠RVHI明显升高(P<0.05);右心室心肌细胞排列紊乱,心肌细胞肥大畸形,胞质明显肿胀;PPARα和PPARγ蛋白的表达明显下调(P<0.05)。与模型组相比,Ost低、高剂量组大鼠RVHI明显降低(P<0.05);右心室心肌细胞排列较为整齐;PPARα和PPARγ蛋白的表达明显上调(P<0.05)。结论 Ost具有改善MCT所致大鼠右心室重构的作用,其机制可能至少部分与其上调PPARα和PPARγ的表达有关。     

PPARα受体亚型与新药研究

综述了过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR)中α亚型的结构、功能和配体研究的最新进展。PPAR受体是新发现的一种甾体激素类受体，PPARα作为PPAR受体的一个亚型，在脂类代谢、炎症过程、免疫反应等生理过程中发挥着巨大的作用。     

治疗高血脂症的新型PPARα激动剂Pemafibrate

Pemafibrate（Parmodia^®）是高效的过氧化物酶体增殖激活受体α（PPARα）激动剂,通过选择性结合PPARα受体调控PPARα的表达,从而增加高密度脂蛋白的含量和降低血浆中的三酰甘油水平。该药由日本兴和集团研制,并在2017年7月3日被批准上市,在日本用于治疗高血脂症。就Pemafibrate的化学性质、作用机制、药动学和临床研究等进行概述,以期为临床用药提供帮助。     

基于PPAR抗糖尿病药物的研究进展

过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR)是核受体超家族成员，在控制脂肪的贮藏和分解代谢方面起着重要作用，其中，PPARγ参与调节脂质的合成、碳水化合物的代谢及脂肪细胞的分化。基于PPARy的结构进行药物设计，开发了噻唑烷二酮(TZD)类抗糖尿病药物，该类药物中罗格列酮和吡格列酮均已上市，并获得了良好的效益。多种具有PPARα／PPARγ双重激动作用的化合物也合成出来，其中如TZD类的KRP-297，非TZD类的muraglitazar和naveglitazar等均在临床试验中表现出较好的降糖作用并具有调节血脂的作用，但此类化合物多处于临床试验阶段。另外，还开发了一些PPARγ部分激动剂和部分拮抗剂，但对此类化合物的研究还处于初期研究阶段，它们的有效性和安全性还有待进一步的考察。     

丹酚酸B通过PPARα抑制2型糖尿病小鼠心肌肥厚

目的研究丹酚酸B(Sal B)对2型糖尿病(T2DM)模型小鼠心肌肥厚的影响,并从过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)角度探讨其机制。方法采用高脂饮食喂养4周联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)单次腹腔注射法建立T2DM小鼠模型,实验小鼠分为对照组(control)、T2DM模型组、T2DM+Sal B组、Sal B组,上述条件继续饲养8周。检测各组小鼠心脏重量、胫骨长度、心肌细胞横截面积及心脏PPARα表达水平。体外采用高糖联合高胰岛素(HGI)诱导乳大鼠心肌细胞肥大,观察Sal B及PPARα抑制剂MK886对心肌细胞表面积、~3H-亮氨酸参入率、~3H-D-葡萄糖参入率及PPARα表达的影响。结果Sal B能降低T2DM模型小鼠心脏重量/胫骨长度比例、心肌细胞横截面积,并上调心脏组织PPARα表达水平。体外Sal B(10-100μmol·L^-1)能浓度依赖性地抑制HGI诱导的心肌细胞表面积、亮氨酸参入率增加及~3H-D-葡萄糖参入率、PPARα的下调,但上述效应能够被MK886所消除。结论Sal B能够抑制T2DM模型小鼠的心肌肥厚,其机制与上调PPARα表达有关。     

姜黄素通过上调PPARγ抑制糖基化终末产物诱导的软骨细胞凋亡及线粒体功能损伤

目的观察姜黄素(curcumin)对糖基化终末产物(AGEs)诱导的软骨细胞凋亡及线粒体功能损伤的作用,并探讨相关机制是否与姜黄素上调过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)相关。方法原代培养家兔膝关节软骨细胞;TUNEL染色法检测细胞凋亡;Rhodamine-123试剂盒检测线粒体跨膜电位(△Ψm);ATP试剂盒检测线粒体ATP生成;分光光度法检测caspase-3活性;Western blot检测PPARγ、细胞色素C、Bax及Bcl-2蛋白表达;real-time PCR检测PPARγmRNA含量;DNA-binding法检测PPARγ活性。结果 AGEs(200 mg·L-1)可明显诱导兔软骨细胞凋亡,同时线粒体跨膜电位(△Ψm)降低、ATP生成减少,caspase-3活性增加,细胞色素C释放增加,Bax/Bcl-2的比值增加;线粒体通透性转换孔的抑制剂环孢霉素A(Cs A,100 nmol·L-1)可以明显抑制AGEs诱导的细胞凋亡;PPARγ特异性激动剂吡格列酮及姜黄素均可明显抑制AGEs诱导的软骨细胞凋亡及线粒体功能损伤,给予PPARγ特异性抑制剂GW9662 10μmol·L-1预处理后,可以明显拮抗姜黄素的保护作用。同时,姜黄素可以明显上调AGEs诱导的PPARγ活性的降低,并伴随PPARγ相应的mRNA及蛋白表达水平的升高。结论姜黄素通过上调PPARγ,有效地保护AGEs诱导的软骨细胞线粒体损伤,从而抑制AGEs诱导的软骨细胞凋亡。     

香橙素通过PPARγ介导改善血管内皮细胞胰岛素抵抗

目的 研究鬼箭羽提取物香橙素(Aromadendrin,Aroma.)对高糖(High-Glucoes,HG)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelium cells,HUVECs)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的作用及机制.方法 实验随机分为5...     

携带人PPARα基因高效真核表达载体的构建及其意义

目的构建可以高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体(αhPPARα)的真核细胞表达载体,为筛选作用于PPARα受体的药物提供分子平台。方法将HepG2细胞总RNA经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆hPPARα全长基因,用BamHⅠ、SalⅠ双酶切后,与相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建phPPARα-IRES2-EGFP重组质粒,用酶切及基因测序鉴定重组质粒中hPPARα基因的完整性和可靠性;重组质粒转染293细胞,荧光显微镜观察EGFP报告基因表达强度,并对转染细胞的hPPARα表达进行荧光定量PCR及免疫细胞化学检测。结果经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPARα的高效表达。结论成功构建重组质粒phPPARα-IRES2-EG-FP,为基于hPPARα受体靶点的药物筛选平台的建立提供了高效表达hPPARα的重组载体。     

PPARα、PPARγ的上调参与淫羊藿苷对自发性高血压大鼠心室重构的调节

目的观察淫羊藿苷(icariin,Ica)对自发性高血压大鼠(SHR)心室重构的作用,并探讨其机制。方法 14周龄♂SHR大鼠21只随机分为模型组,Ica低、高剂量组(20、40mg·kg-1,ig,bid),14周龄♂WKY大鼠为空白对照组,空白对照组和模型组给予等体积的双蒸水灌胃。适应性喂养1周,连续灌胃12周后处死全部动物,采用双抗体夹心法测定左心羟脯氨酸的含量;Masson染色观察左心室组织病理学变化;real-time RT-PCR、Western blot分别检测PPARα、PPARγm RNA和蛋白的表达。结果与空白对照组相比,模型组出现心室重构,心肌纤维化,心肌组织羟脯氨酸含量明显上升(P<0.01),PPARα、PPARγm RNA和蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,Ica低、高剂量组心肌细胞排列较整齐,心肌纤维化减少,且心肌羟脯氨酸含量降低,PPARα、PPARγm RNA和蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论淫羊藿苷具有减轻自发性高血压大鼠心室重构的作用,其机制可能与上调PPARα、PPARγ有关。     

PPARα促进自噬流抑制脑缺血后星形胶质细胞的过度激活

目的阐明过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)在脑缺血后星形胶质细胞活化中的作用及机制。方法大脑中动脉闭塞(MCAO)建立小鼠脑缺血损伤模型,缺氧缺糖再灌注(OGD/R)建立小鼠原代培养星形胶质细胞活化模型。应用PPARαnull小鼠及PPARα激动剂,观察PPARα功能缺失或者激活后对星形胶质细胞活化的影响。进一步通过观察自噬经典标记物LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62表达变化,联合应用巴弗洛霉素或雷帕霉素观察自噬流的变化,应用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)检测自噬体和自噬溶酶体的变化,应用透射电子显微镜观察超微结构等方法,研究PPARα功能缺失或者激活后对星形胶质细胞自噬的影响。结果 PPARαnull小鼠或原代培养的PPARαnull星形胶质细胞在脑缺血损伤或OGD/R处理后,星形胶质细胞活化标记物GFAP,Neurocan等的表达较野生型对照组相比明显增加。脑缺血损伤或OGD/R处理后活化星形胶质细胞中存在自噬流障碍,自噬双标腺病毒检测及透射电子显微镜的结果均发现活化的星形胶质细胞中存在大量自噬小体的堆积,PPARαnull星形胶质细胞较野生对照组相比堆积更加明显,而PPARα激动剂可显著改善自噬流障碍,抑制星形胶质细胞的过度活化。结论 PPARα可促进脑缺血后星形胶质细胞的自噬流,抑制星形胶质细胞的过度活化。     

积雪草酸通过调节TLR4和PPAR-γ活性抑制内毒素诱导的血管平滑肌细胞炎症反应

目的观察积雪草酸(asiatic acid,AA)能否抑制内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)炎症反应,并探讨其作用机制。方法原代培养SD大鼠主动脉VSMCs;不同浓度AA干预后,采用MTT法测定VSMCs的活性;分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和real-time PCR检测IL-6、MCP-1、TNF-α蛋白及mRNA水平;Western blot和real-time PCR法测定TLR4和PPAR-γ的蛋白及mRNA的表达水平。结果当AA浓度在0~30μmol·L^-1范围内时,对VSMCs细胞活性无明显影响,当500μg·L^-1LPS刺激VSMCs后,IL-6、MCP-1、TNF-α、TLR4蛋白及mRNA水平明显升高(P<0.05),而PPAR-γ的表达明显降低(P<0.05);AA(10、20、30μmol·L^-1)对LPS诱导的VSMCs细胞IL-6、MCP-1和TNF-α蛋白及mRNA水平的降低作用呈浓度依赖性;此外,AA能浓度依赖性地抑制LPS诱导的VSMCs细胞TLR4 mR-NA和蛋白表达,且TLR4-siRNA能够起到与AA类似的抗炎作用。AA还可上调VSMCs细胞内PPAR-γmRNA和蛋白表达,而PPAR-γ拮抗剂GW9662则能够部分抵消AA的抗炎作用。结论AA能有效抑制LPS诱导的VSMCs细胞IL-6、MCP-1、TNF-αmRNA和蛋白表达,AA的抗炎作用可能与其下调TLR4表达和上调PPAR-γ活性作用相关。     

PPARγ表达上调抑制肝星状细胞增殖的实验研究

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达上调对肝星状细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养HSC—T6细胞至对数生长期,以不同浓度的PPARγ激动剂15d—PGJ2作用24h后应用RT—PCR的方法观察分析各组肝星状细胞PPARγmRNA的表达,MTT检测HSC增殖情况,流式细胞仪分析HSC—T6细胞凋亡情况。结果15d—PGJ2处理的HSC—T6细胞中PPARγmRNA表达比例上调;凋亡细胞数明显增多。不同浓度的15d—PGJ2均可抑制HSC—T6细胞的增殖,以2μmol／L组最为显著。结论PPARγ表达上调能够抑制HSC—T6增殖并诱导其凋亡。     

EPA、DHA对脂多糖诱导大鼠系膜细胞增殖及PPARγ表达的影响

目的 观察二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）对脂多糖（LPS）诱导大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖及过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达的影响。方法 用脂多糖(15 mg·L^-1)刺激大鼠肾小球系膜细胞,二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸(10、100 μmol·L^-1)分别培养48 h后,采用噻唑蓝（MTT）方法检测肾小球系膜细胞的增殖情况;采用实时定量PCR方法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ mRNA的表达;采用Western Blot方法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ 蛋白的表达。结果 二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸显著抑制脂多糖诱导的肾小球系膜细胞增殖,增加过氧化物酶体增殖物激活受体γ mRNA和蛋白的表达。结论 二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸对受损肾小球系膜细胞的保护作用可能与抑制肾小球系膜细胞增殖,激活潜在的抗炎因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ有关。     

Adiporedoxin抑制TNF-α诱导的血管内皮细胞与单核细胞粘附

脂过氧化物酶(adiporedoxin,Adrx)是过氧化物酶-2(peroxiredoxin-2)家族的新成员,目前对其生物学功能知之甚少。Adrx分子结构与过氧化物酶(peroxiredoxins,PRDXs)和硫氧还蛋白家族(thioredoxins,TRXs)相似[1]。PRDXs和TRXs调节血管内皮细胞炎症反应,抑制动脉粥样硬化斑块进展[2-3]。本实验研究Adrx对TNF-α诱导内皮细胞粘附分子表达的影响,证实它在调节血管内皮细胞与单核细胞粘附中的作用。     

宫颈癌中PPARγ的表达及其意义

目的研究宫颈癌组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ的表达及其意义。方法采用免疫组织化学SABC法,检测40例宫颈癌组织、10例宫颈炎组织和10例非典型增生宫颈组织切片中的PPARγ的表达,结合病理学分型、临床分期、放疗敏感性探讨其意义。结果 PPARγ在3组中均有一定程度的表达,但宫颈癌组织中PPARγ的表达明显高于宫颈炎组织及非典型增生宫颈组织,差异有统计学意义(P<0.05);PPARγ分别与宫颈癌临床分期、放疗敏感性和骨、肺、肝等远处转移和5年生存期有关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌组织中PPARγ的表达均显著增高,对判断宫颈癌预后及指导临床治疗有重要的参考意义。     

PPAR的结构及其与疾病的关系

过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator—activatived receptors，PPAR）是由配体激活的转录因子，属于核激素受体超家族。PPAR的激活对调节体内的多种代谢过程有重要的作用。对于多种人体的疾病，以PPAR作为治疗靶点可以取得明显的效果。本文对PPAR的结构及其与疾病的关系作一综述。     

PPAR及其激动剂与脂肪酸代谢及胰岛素抵抗

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)在脂肪细胞分化、脂肪酸代谢中起重要作用,PPAR及其所调控基因的激活可促进脂肪细胞分化、减少脂质产生、增加脂肪酸氧化,从而减少脂质的异位沉积,进一步改善损伤的胰岛素信号转导通路,逆转胰岛素抵抗。针对脂肪酸合成及氧化的关键调控点的药物可能是今后治疗胰岛素抵抗引发的一系列代谢异常的新的靶点。     

妊娠不同阶段PPARα和炎症因子IL-1β在子宫肌层动态表达及相关性

目的 探讨妊娠期不同阶段子宫肌层组织中过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)与白细胞介素-1β(IL-1β)表达变化及其相关性.方法 选取本院收集的20例未孕妇女(未孕组)、未足月未临产组20例妇女(未足月组)、足月未临产组20例妇女(未临产组)、足月临产组20例妇女(临产组)的子宫平滑肌组织,检测各组标本中PPARα、IL-1β mRNA及蛋白表达情况并进行相关性分析.结果 未足月组的PPARα mRNA显著高于未孕组(P<0.05),临产组的PPARα mRNA显著低于未孕组、未足月组和未临产组(P<0.05);未足月组的IL-1β mRNA显著的低于未孕组(P<0.05),临产组的IL-1β mRNA显著高于未孕组、未足月组和未临产组(P<0.05);未足月组的PPARα 蛋白显著高于未孕组(P<0.05),临产组的PPARα 蛋白显著低于未孕组、未足月组和未临产组(P<0.05);未足月组、未临产组、临产组的IL-1β 蛋白显著高于未孕组(P<0.05),临产组的IL-1β 蛋白显著高于未孕组、未足月组和未临产组(P<0.05);PPARα mRNA与IL-1β mRNA呈显著的负相关性(r=-0.672,P<0.001);PPARα 蛋白与IL-1β蛋白呈显著的负相关性(r=-0.644,P<0.001). 结论 妊娠期不同阶段子宫肌层组织中PPARα与白IL-1β表达水平显著的发生改变,可能与促进分娩具有一定的关系.