血管紧张素Ⅱ受体阻断对成年大鼠心肌成纤维细胞Col I和TIMP-1 mRNA水平的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2）在心肌成纤维细胞胶原代谢中的作用，以及AT2受体和AngⅡl型受体（AT1）作用的差异。方法差速贴壁分离及培养成年SD大鼠心肌成纤维细胞，将细胞分为4组进行药物干预：AngⅡ组、AngⅡ＋Losartan（ATl受体阻断剂）组、AngⅡ＋PD123319（AT2受体阻断剂）组、AngⅡ＋Losartan＋PDl23319组．应用半定量RT—PCR检测4组细胞中的I型胶原（Col I）、组织蛋白酶抑制因子1（TIMP-1）mRNA水平的表达。结果以β-actin作为内参照，ATl受体阻断使Col I mRNA水平降至原水平的71．8％（P〈0．05），AT2受体阻断降至81．5％（P〈0．05），共阻断降至50．9％（P〈0．05）；ATl受体阻断使71，MP-1mRNA水平降至原水平的88．1％（P〈0．05），AT2受体阻断降至75．4％（P〈0．05），共阻断后降至44．1％（P〈0．05）。结论在成年大鼠心肌成纤维细胞，AT2受体阻断下调Col I和TIMP1 mRNA水平，说明AT2受体参与胶原的合成与降解代谢，有促进心肌纤维化的作用。     

血管紧张素Ⅱ受体阻断对成年大鼠心肌成纤维细胞ColⅠ和TIMP-1 mRNA水平的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)2型受体(AT2)在心肌成纤维细胞胶原代谢中的作用,以及AT2受体和AngⅡ1型受体(AT1)作用的差异.方法 差速贴壁分离及培养成年SD大鼠心肌成纤维细胞,将细胞分为4组进行药物干预:AngⅡ组、AngⅡ Losartan(AT1受体阻断剂)组、AngⅡ PD123319(AT2受体阻断剂)组、AngⅡ Losartan PD123319组, 应用半定量RT-PCR检测4组细胞中的Ⅰ型胶原(ColⅠ)、组织蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)mRNA水平的表达.结果 以β-actin作为内参照,AT1受体阻断使ColⅠmRNA水平降至原水平的71.8%(P＜0.05 ),AT2受体阻断降至81.5%(P＜0.05 ),共阻断降至50.9%(P＜0.05 );AT1受体阻断使TIMP-1 mRNA水平降至原水平的88.1%(P＜0.05),AT2受体阻断降至75.4%(P＜0.05 ),共阻断后降至44.1%(P＜0.05 ).结论 在成年大鼠心肌成纤维细胞,AT2受体阻断下调ColⅠ和TIMP1 mRNA水平,说明AT2受体参与胶原的合成与降解代谢,有促进心肌纤维化的作用.     

心肌成纤维细胞DDR2对整合素β1调控的机制研究

目的 探究心肌成纤维细胞盘状结构域受体(discoid domain receptor 2, DDR2)对于整合素(integrin)β1表达的调控分子机制。方法 体外培养成年SD大鼠心肌成纤维细胞,使用RNA干扰和高表达载体分别下调和上调DDR2的表达,Western blot法检测血管紧张素Ⅱ(angiogensinⅡ, AngⅡ)作用细胞后其整合素β1、细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase, Erk1/2)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)的表达水平。其后使用Erk1/2的特异性抑制剂PD98059以及TGF-β1的RNA干扰阻断相应信号通路,Western blot法再次检测AngⅡ刺激细胞后整合素β1的表达变化。结果 AngⅡ可以上调心肌成纤维细胞DDR2以及整合素β1的表达水平。DDR2的RNA干扰可以阻断AngⅡ引起的心肌成纤维细胞整合素β1的升高效应,同时降低了磷酸化Erk1/2(p-Erk1/2)和TGF-β1的表达水平。使用Erk1/2的特异...     

大鼠心肌成纤维细胞合成金属硫蛋白

目的 :探讨脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)、碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)、氧化型低密度脂蛋白 (oxidizedlow densitylipoproteins ,oxLDL)及重金属物质ZnCl2 等刺激因素对大鼠心肌成纤维细胞金属硫蛋白 (metallothionein ,MT)合成的影响。方法 :用10 9Cd Hb饱和法测定细胞MT含量 ,用RT PCR法测定细胞MTmRNA含量。结果 :本实验中各种处理因素均可刺激心肌成纤维细胞MT含量的增加。 1和5mg·L-1LPS处理组成纤维细胞MT含量与对照组相比分别增加 94 %和 130 % (P <0 .0 1)。 0 .2和 1.0mg·L-1bFGF处理组分别增加 4 1%和 5 9% (P <0 .0 1)。oxLDL亦可以促进心肌成纤维细胞MT的合成 ,2和 10mg·L-1oxLDL组MT含量较对照组分别增加 2 3% (P <0 .0 5 )和 4 1% (P <0 .0 1)。 1,2 ,5mg·L-1ZnCl2 呈浓度依赖性刺激心肌成纤维细胞MT含量的增加 ,与对照组相比分别增加 6 6 %、99%和 14 9% (P <0 .0 1) ,2～ 8mg·L-1ZnCl2 诱导MT1mRNA含量增加 6 9%～ 12 9% (P <0 .0 1) ,MT2mRNA含量增加 31%～ 6 0 % (P <0 .0 1)。但 10mg·L-1ZnCl2 不能进一步增加细胞MT含量 ,仅较对照组增加 91% ,可能与高浓度ZnCl2 致细胞损伤 ,细胞存活率降低有关。结论 :LPS、bFGF、oxLDL、ZnCl2 等多     

电离辐射对成纤维细胞中透明质酸蛋白及透明质酸酶1mRNA表达水平的影响

目的:观察电离辐射对成纤维细胞中透明质酸（HA）蛋白及透明质酸酶1（HAase1） mRNA表达水平的影响,并探讨其在放射性臂丛神经损伤发病机制中的作用。方法: 成纤维细胞分别采用0.5、1.0、2.0、4.0和6.0 Gy X射线照射,作为 5个剂量组,同时设假照射对照组（0 Gy）。透射电镜观察0、2.0、4.0和6.0 Gy X射线照射后48 h成纤维细胞的形态变化。采用ELISA法和RT-PCR法检测0、0.5、1.0、2.0、4.0、和6.0 Gy X射线照射后24及48 h成纤维细胞中HA蛋白及HAase1 mRNA表达水平的变化。结果：2.0 Gy X射线照射后48 h细胞染色质凝聚,有空泡形成;4.0 Gy X射线照射后48 h细胞核凹陷、染色质断裂;6.0 Gy X射线照射后细胞核凹陷、染色质固缩、出现空泡,部分胞浆溶解。不同剂量X射线照射后24 h HA蛋白表达均明显增高,与0 Gy组比较差异有统计学意义(P<0.05);0.5～2.0 Gy X射线照射后48 h HA蛋白表达变化不明显,4.0和6.0 Gy组与 0 Gy组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。0～6.0 Gy X射线照射后24 h HAase1 mRNA水平明显增高,与0 Gy组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。1.0、4.0和6.0 Gy X射线照射后48 h HAase1 mRNA水平明显增高,与0 Gy组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：电离辐射可诱导人成纤维细胞中HA蛋白表达和HAase1 mRNA水平增高,可能对放射性臂丛神经损伤的发生发展起到一定的作用。     

精氨酸加压素及其受体对大鼠心肌成纤维细胞iNOS-NO系统活性的影响

目的:探讨精氨酸加压素(AVP)及其受体对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)诱导型一氧化氮合酶-一氧化氮(iNOS-NO)系统活性的影响. 方法:分离培养SD仔鼠CFs,采用硝酸还原酶法、分光光度法和RT-PCR观察AVP及其受体拮抗剂对CFs iNOS-NO系统活性的影响. 结果: AVP显著提高CFs iNOS-NO系统活性. V1受体拮抗剂呈剂量依赖性地抑制AVP的这一作用,其中1×10-7 mol/L V1受体拮抗剂可将AVP诱导下CFs的iNOS-NO系统活性抑制到基础状态水平. V1 V2受体拮抗剂具有与V1受体拮抗剂相似的作用. 结论:AVP干预下CFs iNOS-NO系统活性增强由V1受体介导,V1受体可望成为阻断或逆转心脏重构的新靶点.     

化学合成 microRNA-21 inhibitors 对大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响

目的：探究 microRNA-21 inhibitors 对大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响。方法应用 LipofectamineTM 2000 Reagent 向大鼠心肌成纤维细胞瞬时转染 microRNA-21 in-hibitors 24、48 h 后,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测 microRNA-21、I 型胶原前胶原 A1(Col1A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平;Western blot 法检测 Col1A1和α-SMA 的表达水平;MTT 法检测 microRNA-21 inhibitors对心肌成纤维细胞活化增殖的影响。结果转染 microR-NA-21 inhibitors 的心肌成纤维细胞中,microRNA-21表达下调,Col1A1和α-SMA 的表达下降;转染 microRNA-21 inhibi-tors 的心肌成纤维细胞增殖活性明显减弱。结论 microR-NA-21 inhibitors 可明显抑制心肌成纤维细胞增殖活性,提示microRNA-21是心肌成纤维细胞活化增殖的潜在靶向分子,有利于为干预和预防心肌纤维化的发生发展提供新思路。     

氧化低密度脂蛋白对大鼠心肌成纤维细胞胶原的影响

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对大鼠心肌成纤维细胞胶原合成的影响.方法 体外培养乳鼠心肌成纤维细胞,加入ox-LDL(10、20、50、100μg/ml)干预24 h,3H-胸腺嘧啶核苷掺人法观察细胞DNA合成,3H-脯氨酸掺入法观察胶原的合成,酶谱法测定基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,RT-PCR检测MMP-2、MMP-9的mRNA表达.结果 和对照组比较,ox-LDL作用于心肌成纤维细胞24 h后,呈浓度依赖性促进细胞DNA合成,同时抑制细胞胶原合成.ox-LDL显著增加MMP-2和MMP-9活性,但各组间作用无明显区别;同时MMP-2和MMP-9蛋白表达也显著性增加,以100μg/ml组作用最强.50μg/ml ox-LDL能显著增加MMP-2和MMP-9的mRNA表达,100μg/ml组作用更强.结论 ox-LDL作用于心肌成纤维细胞能减少胶原的合成并增加胶原的降解,提示其在心肌重构过程巾起一定的作用.     

AT2受体对心血管作用的研究进展

血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）是多功能的血管活性物质,通过组织局部的特异性受体发挥作用.根据其受体的药理学和生物学特性的不同,目前已知AngⅡ受体有4种亚型, AT1、AT2、 AT3和AT4受体,在人体内主要有两种受体亚型：AT1和AT2受体,其中AT1受体介导了AngⅡ对心血管调控的大部分作用,如收缩血管、升高血压、促进细胞增殖、参与组织修复、心梗或心脏移植后的炎症过程等,而对AT2受体则所知甚少.随着对该亚型受体不断深入的认识,了解到AT2受体所介导的生物学作用多与AT1受体相拮抗[1].本文就AT2受体在心血管中的调节作用作一介绍.     

内皮素阻断对糖尿病高血压大鼠肾脏AT1受体表达的影响

目的 观察糖尿病高血压大鼠肾脏AT1受体的改变以及内皮素受体阻断剂波生坦的影响。方法 将自发性高血压大鼠建成链脲佐菌素诱导的糖尿病模型（SHR－DM）,设柳平舒组、波生坦＋氨氯地平（络活喜）组、络活喜组和非治疗组,4 一采用免疫组织化学、Western印迹法及逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）方法检测肾脏AT1受体基因和蛋白表达。结果 与WKY大鼠对照组相比,SHR－DM大鼠存在明显的蛋白尿和肾功能减退,肾脏AngⅡ水平明显升高,ＡＴ１受体的mRNA和蛋白表达则显著下降。波生坦能使上述异常显著减轻。结论 糖尿病高血压大鼠肾脏ＡＴ１受体表达明显下调;波生坦可减轻ＳＨＲ－ＤＭ大鼠肾脏损害并防止ＡＴ１受体表达下调。     

Notch1在TGF-β1诱导心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转化中的作用

目的：研究转化生长因子β1（TGF-β1）诱导心肌成纤维细胞（CFs）向肌成纤维细胞（MFB）转分化过程中Notch1的变化情况,探讨在此转分化过程中Notch1的可能作用.方法：体外分离培养CFs,以10μg/LTGF-β1诱导CFs向MFB转分化.实验分为对照组,TGF-β1作用24,48,72h组,采用消化法测定羟脯氨酸（HYP）含量;免疫荧光、免疫印迹法测定α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;实时定量PCR、免疫印迹法测定Notch1 mRNA及蛋白表达.利用γ分泌酶抑制剂DAPT（75μmol/L）阻断Notch1受体活化.实验分对照组,DAPT作用24,48,72h组,检测SMA及胶原的表达变化.结果：TGF-β1作用后,与对照组相比较α-SMA,HYP表达量随TGF-β1诱导时间的增加呈上升趋势,而Notch1则呈下降趋势,均以72h最显著（P〈0.01）;加入DAPT后,与对照组相比较α-SMA,HYP表达量随DAPT作用时间增加呈上升趋势,以72h最显著（P〈0.01）.结论：TGF-β1可以诱导CFs向MFB转分化,Notch1在此过程中的表达呈下降趋势,而DAPT阻断Notch1活化后可以促进CFs向MFB转分化.     

原发性高血压与心脏β2、α1及AT1受体自身抗体的关系

目的探讨抗G-蛋白偶联型β2、α1及AT1受体的自身抗体在原发性高血压病程中的分布情况。方法应用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术,以细胞外第二环表位肽段的合成肽作为抗原,检测50例高血压心脏病、40例单纯高血压和40例正常人血清中抗G-蛋白偶联家族中β2、α1和AT1受体的自身抗体。结果高血压心脏病患者血清中抗G-蛋白偶联型β2、α1和AT1受体自身抗体的阳性率明显高于单纯高血压和正常组(P<0.05);高血压心脏病自身抗体阳性的平均几何滴度与单纯性高血压比较无明显差异(P>0.05),但两组阳性抗体的平均几何滴度均明显高于正常组。高血压心脏病抗β2受体自身抗体阳性患者中,81.0%同时具有α1受体的自身抗体,76.2%同时具有AT1受体的自身抗体,52.4%存在上述3种受体的自身抗体。结论抗G-蛋白偶联型β2、α1及AT1受体的自身抗体参与原发性高血压的病理生理过程,可能与心肌和血管重构有关。     

成纤维细胞生长因子受体1在大鼠各组织中的表达

目的研究成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)mRNA及蛋白在大鼠各组织中的表达。方法采用实时定量荧光聚合酶链式反应测大鼠脂肪、肝脏、心脏、血管、肾脏、肌肉等组织中FGFR1 mRNA表达;采用酶联免疫吸附法及免疫组织化学法检测各组织中FGFR1蛋白的表达。结果 FGFR1 mRNA和蛋白在大鼠脂肪、肝脏、心脏、血管、肾脏、肌肉中均有表达,主要分布于细胞膜。FGFR1 mRNA在大鼠脂肪、肝脏、心脏、血管、肾脏、肌肉中表达量分别为2.623 0±0.524 9、1.003 0±0.077 2、6.755 0±0.278 4、1.613 0±0.320 1、4.833 0±0.421 5、6.123 0±0.348 7,FGFR1蛋白在以上各组织中的表达量分别为(10.670 0±1.197 0)、(0.356 0±0.105 5)、(0.860 0±0.163 9)、(5.152 0±0.801 4)、(0.186 0±0.046 7)、(2.110 0±0.161 9)μg·g-1,FGFR1 mRNA在各组织中的表达从高至低依次为心脏、肌肉、肾脏、脂肪、血管和肝脏;FGFR1蛋白在各组织中的表达量从高至低依次为脂肪、血管、肌肉、心脏、肝脏、肾脏。FGFR1 mRNA和蛋白在各组织中的表达量比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 FGFR1在大鼠各主要组织器官中均有表达,主要分布于细胞膜,且在各组织中的表达存在一定差异。     

磷酸胆碱聚合物载AT1受体siRNA对血管内皮细胞AT1受体表达的影响

目的探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载AT1受体siRNA对血管内皮细胞AT1受体表达的影响。方法应用琼脂糖凝胶电泳表征具有不同N/P比值的MPC30-DEA70与siRNA的复合物;将不同比例的MPC30-DEA70/siRNA基因复合物转染至人脐静脉内皮细胞,应用荧光显微镜(FM)检测其细胞内分布;流式细胞术(FCM)检测转染效率及荧光强度;Western blot法和RT-PCR法检测AT1受体蛋白及mRNA的表达情况。结果不同N/P比值的基因复合物在电泳中可见不同程度的迟滞现象,随正电性增强而显著。FM观察到MPC30-DEA70/siRNA复合物分布在细胞核周围,FCM结果显示随N/P比值的增大,转染效率明显增加,荧光强度也随之增强。RT-PCR法和Western blot法显示随着N/P比值的增大,基因复合物可使AT1受体的mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 MPC30-DEA70可作为AT1受体siRNA的载体转染至血管内皮细胞,下调AT1受体的mRNA及蛋白的表达,提示阳离子磷酸胆碱聚合物可以有效负载和运输siRNA,抑制特异基因的表达,是一种有效的非病毒类转基因载体。     

芦沙坦对心脏成纤维细胞胶原Ⅰ,Ⅲ型mRNA表达水平的影响

用培养的新生鼠心肌成纤维细胞,加血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）孵育,考察引起心肌肥厚的生长因子ＡｎｇⅡ对胶原基因转录水平的影响。ＲＴ－ＰＣＲ结果显示ＡｎｇⅡ可刺激胶原Ⅰ,Ⅲ型ｍＲＮＡ表达水平显著增加,此作用可被ＡＴ,受体拮抗剂芦沙坦所抑制。     

AT2R转染表达抑制人肾间质成纤维细胞迁移活性

目的　探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体 (AT2R)基因表达对人肾间质成纤维细胞 (hRIF)迁移活性的影响。方法　构建带AT2R基因的重组复制型腺病毒载体 (AdCMV -AT2R) ,转染培养的hRIF ,用流式细胞仪检测AT2R细胞表达率 ,RT -PCR方法检测AT2RmRNA表达。用改良Boyden’s趋化小室和激光共聚焦显微镜检测hRIF迁移活性。结果　构建的AdCMV -AT2R转染培养hRIF表达率为 90 6%。改良Boyden’s趋化小室检测表明 ,迁移细胞数抑制比例最高可达 62 2 % (P <0 0 1) ,激光共聚焦显微镜检测表明 ,转染组F -actin表达明显受抑制。结论　AT2R转染表达可显著抑制hRIF迁移活性 ,这对延缓肾间质纤维化是有益的     

芦沙坦对心脏成纤维细胞胶原Ⅰ、Ⅲ型mRNA表达水平的影响

用培养的新生鼠心肌成纤维细胞, 加血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ） 孵育, 考察引起心肌肥厚的生长因子ＡｎｇⅡ对胶原基因转录水平的影响。ＲＴ－ＰＣＲ结果显示ＡｎｇⅡ可刺激胶原Ⅰ、Ⅲ型ｍ ＲＮＡ表达水平显著增加, 此作用可被ＡＴ１受体拮抗剂芦沙坦 （Ｌｏｒｓａｔａｎ） 所抑制。     

靶向沉默SIRT1对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 探究沉默信息调节因子1(SIRT1)对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响作用.方法 应用转化生长因子-β1处理乳鼠原代心肌成纤维细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测SIRT1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达水平;Western blot法检测SIRT1、α-SMA的蛋白表达水平;MTT法检测心肌成纤维细胞的细胞增殖活性;使用LipofectamineTM 2000 Reagent向乳鼠原代心肌成纤维细胞中转染siRNA-SIRT1.结果 转染siRNA-SIRT1的心肌成纤维细胞,SIRT1蛋白和mRNA 表达下降,同时α-SMA蛋白和mRNA表达下降;转染siRNA-SIRT1明显抑制心肌成纤维细胞的增殖活性.结论 siRNA-SIRT1对心肌成纤维细胞增殖活性有明显抑制作用,SIRT1可能成为心脏结构重构防治的新靶点,其调控剂的应用将为心肌纤维化的防治提供新的思路和方案.     

成纤维细胞生长因子受体2在膀胱癌中的表达及意义

目的考察成纤维细胞生长因子受体2的表达与膀胱移行细胞癌发生、进展程度关系。方法用免疫组织化学和Western blot法检测41例膀胱移行细胞癌标本中FGFR2的表达,并以RT-PCR法分别检测FGFR2Ⅲb及FGFR2Ⅲc mRNA量。结果膀胱移行细胞癌患者中FGFR2总表达率,低于正常膀胱黏膜(P<0.05),高分化的膀胱癌表达高于低分化者(P<0.05),侵袭性膀胱癌低于浅表性膀胱癌,复发者低于无复发者(P<0.05),FGFR2Ⅲb mRNA与蛋白表达情况相一致而FGFRⅢc mRNA在各组间无明显区别。结论FGFR2Ⅲb的表达量与膀胱移行细胞癌的疾病严重程度呈相反趋势,FGFR2Ⅲb与抑癌作用有关。     

苦参碱对醛固酮诱导大鼠心肌成纤维细胞细胞周期和增殖细胞核抗原表达的影响

目的 :研究苦参碱 (Mat)对醛固酮 (Ald)诱导大鼠心肌成纤维细胞 (RCFibs)增殖的影响 ,探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法 :利用体外细胞培养技术 ,建立Ald诱导RCFibs纤维化模型 ,通过四氮甲唑蓝 (MTT)比色法测定细胞增殖 ,流式细胞分析仪 (FCM)测定细胞周期及增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达、免疫荧光法测定PCNA的表达 ,研究Mat对Ald诱导RCFibs增殖的影响。结果 :Ald +Mat(0 .5mmol·L-1 、0 .2 5mmol·L-1 、0 .1 2 5mmol·L-1 )组与Ald组相比较 ,其细胞增殖抑制率分别为 9.95 6 7%、2 6 .4 6 1 0 %、4 6 .5 90 9% (P <0 .0 5 ) ,细胞周期分析显示G0 G1 期细胞数量增加 ,S期、G2 M1 期明显减少 ;免疫荧光和FCM测定表明 ,Mat抑制PCNA的表达。结论 :Mat能明显抑制Ald诱导的RCFibs增殖 ,其效应呈现剂量依赖性。