BRCA1基因在散发性乳腺癌中的表达及异常甲基化

目的：通过检测乳腺癌易感基因1（BRCA1）基因在散发性乳腺癌中的表达情况及其启动子甲基化状态,探讨BRCA1基因与散发性乳腺癌的关系。方法应用实时荧光定量PCR的方法和免疫组织化学方法分别检测BRCA1 mRNA和蛋白在60例散发性乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织及30例乳腺良性病变组织中的表达情况;应用重亚硫酸盐测序PCR（BPS）联合TA克隆测序方法检测上述组织中BRCA1启动子CpG岛的甲基化状态,分析BRCA1基因表达和启动子甲基化相关性。结果BRCA1 mRNA和蛋白在散发性乳腺癌组织中的相对表达水平分别低于癌旁正常组织及乳腺良性病变组织,差异有统计学意义（P＜0．001）。乳腺癌组织中BRCA1蛋白的表达率为51．7％（31／60）,明显低于癌旁正常乳腺组织的71．7％（43／60）及乳腺良性病变组织的66．7％（20／30）,差异有统计学意义（P＜0．001）;散发性乳腺癌组织中BRCA1启动子甲基化率为31．7％（19／60）,癌旁正常乳腺组织及乳腺良性病变组织均未检测出甲基化,差异有统计学意义（P＝0．000）;BRCA1蛋白表达与其启动子甲基化呈负相关（r＝－0．345,P＝0．007）。结论乳腺癌易感基因BRCA1启动子区CpG岛甲基化导致BRCA1基因表达显著下调,可能参与散发性乳腺癌的发生、发展。     

散发性三阴乳腺癌中BRCA1启动子甲基化与蛋白表达

目的：通过检测散发性三阴乳腺癌（TNBC）中乳腺癌易感基因（breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1）启动子甲基化和蛋白表达,探讨BRCA1与散发性TNBC的关系.方法：应用重亚硫酸盐测序PCR（bisulfite sequencing PCR,BSP）法检测50例散发性TNBC组织及配对癌旁组织中BRCA1启动子甲基化状态,用免疫组织化学方法检测上述组织中BRCA1蛋白的表达情况,分析BRCA1启动子甲基化与蛋白表达的相关性.结果：散发性TNBC组织中BRCA1启动子甲基化率为42.0％（21/50）,癌旁组织未检测出甲基化,两者比较差异有统计学意义（P=0.000）.BRCA1蛋白在散发性TNBC癌组织中的表达率为32.0％（16/50）,明显低于癌旁组织68.0％ （34/50）（P＜0.05）.散发性TNBC癌组织中BRCA1蛋白表达与启动子甲基化呈负相关（r=-0.323,P=0.022）.结论：BRCA1启动子的高甲基化引起BRCA1蛋白表达下降或缺失,可能是散发性TNBC重要的发病机制之一.     

乳腺癌组织中GSTP1和BRCA1及MGMT基因甲基化状态及其与临床病理特征的关系研究

目的　分析乳腺癌组织中胱甘肽S转移酶P1（GSTP1）、乳腺癌易感基因1（BRCA1）、O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）基因甲基化状态及其与临床病理特征的关系。方法　选取2015年1月—2016年6月海南医学院第二附属医院收治的符合纳入标准的乳腺癌患者100例为研究对象,采用甲基化特异性PCR法检测乳腺癌及癌旁组织中GSTP1、BRCA1、MGMT基因甲基化情况,并分析其与临床病理特征的关系,采用Cox回归分析分析GSTP1、BRCA1、MGMT基因甲基化状态与乳腺癌患者预后的关系。结果　乳腺癌组织中GSTP1、BRCA1、MGMT基因甲基化的发生率均高于癌旁组织（P<0.05）。每例患者乳腺癌组织甲基化基因数高于癌旁组织（P<0.05）。不同肿瘤分期、淋巴结转移情况的乳腺癌组织中甲基化基因数比较,差异有统计学意义（P<0.05）;癌组织直径≥20 mm、有淋巴结转移乳腺癌组织的GSTP1基因甲基化阳性率高于癌组织直径<20 mm、无淋巴结转移乳腺癌组织（P<0.05）;年龄<50岁、雌激素受体阴性乳腺癌组织BRCA1基因甲基化性阳率高于年龄≥50岁、雌激素受体阳性乳腺癌组织（P<0.05）;组织学Ⅲ级、乳腺癌Ⅱ~Ⅳ期、有淋巴结转移乳腺癌组织MGMT基因甲基化阳性率高于组织学Ⅰ~Ⅱ级、乳腺癌Ⅰ期、无淋巴结转移乳腺癌组织（P<0.05）。Cox回归分析结果显示,GSTP1、BRCA1、MGMT基因甲基化阳性是乳腺癌患者预后的影响因素（P<0.05）。结论　乳腺癌组织中GSTP1、BRCA1、MGMT基因甲基化基因数目高于高于癌旁组织,而且其异常甲基化与乳腺癌临床病理特征有关,能影响乳腺癌病情进展。     

乳腺癌组织与血清BRCA1基因异常甲基化的临床意义

目的:探讨乳腺癌BRCA1基因启动子异常甲基化状况及其在乳腺癌早期诊断中的价值。方法:用甲基化特异PCR方法对乳腺癌患者癌组织、癌旁组织及对应血浆进行BRCA1异常甲基化检测。结果:乳腺癌组织中BRCA1启动子异常甲基化检出频率为35/102(34%),血浆的检出率为32/102(32%),而癌旁组织中没有检出BRCA1异常甲基化。根据不同病理特征将35例散发性乳腺癌按组织类型、不同分级、有无淋巴结转移和年龄进行分类分析。结果显示,MSP法检测肿瘤组织与对应血浆BRCA1异常甲基化有很好的一致性(P>0.05)。102例患者的组织与血清中甲基化检出率的一致性良好(Kappa=0.765)。BRCA1基因甲基化结合病理特征表明,BRCA1基因在原位癌中甲基化检出率明显低于浸润性癌(P<0.05),有淋巴结转移相应标本BRCA1基因甲基化检出率也明显高于无淋巴结转移的标本(P<0.05),而BRCA1基因甲基化与否与肿瘤分级及年龄(绝经前后)无明显关联(P>0.05)。结论:BRCA1基因异常甲基化在乳腺癌组织与血清有相似的甲基化模式,且在乳腺癌的组织分型与转移方面有一定的鉴别诊断价值。     

乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’CpG岛甲基化状态研究

目的：检测乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’端CpG岛启动子区域的甲基化状况。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应（Methylation-specific PCR,MSP）方法对乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’端CpG岛启动子区域甲基化状况进行研究。结果：乳腺肿瘤组织中PTEN基因甲基化率为31.5%（29/92）,显著高于癌旁组织和正常组织（P〈0.05）,而癌旁组织和正常乳腺组织中甲基化率均比较低,分别为8.3%（2/24）、6.2%（1/16）,两者差异无统计学意义（P〉0.05）;PTEN基因甲基化与肿瘤组织学类型、年龄及肿瘤大小均无相关性,但与淋巴结转移相关（P〈0.05）,淋巴结转移组PTEN基因甲基化率显著高于无淋巴结转移组。结论：PTEN基因5’端CpG岛启动子区域甲基化可能是散发性乳腺癌PTEN基因失活的主要机制,参与了乳腺癌的发生发展过程;PTEN基因甲基化可能是乳腺癌发生发展过程中的晚期事件,提示可以考虑将PTEN基因甲基化作为评价乳腺癌肿瘤细胞转移潜能的分子标记。     

结直肠癌组织miR34a启动子区甲基化状态的临床意义探讨

目的探讨结直肠癌组织miR34a启动子区甲基化状态的临床意义。方法收集48例行根治性切除术的结直肠癌患者的癌组织及癌旁正常组织,采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测miR-34a启动子区CpG岛甲基化状态,分析其与患者临床特征及预后的关系。结果结直肠癌组织与癌旁正常组织中miR-34a启动子区甲基化率分别为47.9%、43.8%,差异无统计学意义（P＞0.05）。结直肠癌组织miR-34a启动子区甲基化状态与患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤最大直径、远处转移等均无关（均P＞0.05）;与淋巴结转移、TNM分期等均有关（均P＜0.05）。结直肠癌组织miR-34a启动子区甲基化患者总生存率、无病生存率均低于非甲基化患者（均P＜0.05）。远处转移是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素（P＜0.05）,但miR-34a启动子区甲基化状态不是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素（P＞0.05）。结论结直肠癌组织miR-34a启动子区甲基化状态与患者淋巴结转移、TNM分期及预后有关,可能参与肿瘤进展转移过程的调控。     

胃癌DAPK1基因启动子甲基化状况及表达的研究

目的对DAPK1基因甲基化状态、表达进行研究,探讨基因甲基化在胃癌发病中的作用。方法用半定量RT-PCR方法研究胃癌及癌旁组织中DAPK1基因的表达,用甲基化特异性PCR（MSP）对胃癌及癌旁组织中DAPK1基因启动子区甲基化情况进行研究。结果 DAPK1有16例表达下调,6例表达上调,基因在癌旁组织的mRNA表达明显高于癌组织,具有统计学意义（P=0.465）。DAPK1在胃癌组织及癌旁组织中甲基化率均为100%,无统计学意义（P〉0.05）。结论胃癌组织中DAPK1基因表达下降与该基因甲基化无明确相关性。     

Runx3基因启动子甲基化及其蛋白表达与喉癌的关系

目的探讨Runx3基因启动子甲基化状态及其蛋白表达与喉癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测55例喉癌组织及癌旁正常黏膜组织中Runx3DNA的表达,并用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果55例喉癌组织标本中Runx3基因蛋白的表达较癌旁正常组织中表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;癌旁正常黏膜组织中无Runx3基因启动子的甲基化,喉癌组织中有32例（58.2%）检测到Runx3基因启动子的甲基化,2者比较差异有统计学意义（P〈0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化及Runx3蛋白的表达与性别、临床分型及分级、有无淋巴结转移均无关（均P〉0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化与Runx3蛋白表达呈负相关（r=-0.7092,P〈0.01）。结论Runx3基因启动子甲基化是其基因失活的可能机制之一,在喉癌的发生中起重要作用。     

青年乳腺癌中同源异型盒基因A5表达的研究

目的：探讨青年乳腺癌组织中同源异型盒基因（HOX）A5mRNA及其蛋白表达,研究乳腺癌肿瘤组织临床病理参数与其关联性.方法：运用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（Real-time RT-PCR）技术检测120例青年乳腺癌（其中96例浸润性导管癌,原位癌16例、腺癌4例、硬癌4例）和96例青年乳腺良性病变中HOXA5mRNA表达,分析HOXA5基因表达强度与乳腺癌肿瘤原发灶组织临床病理参数间的相关性.结果：HOXA5 mRNA在乳腺癌肿瘤组织中相对表达量0.82 ～ 189.06,平均为20.69±29.15,乳腺良性病变中相对表达量5.84～80.72,平均为31.05±17.06;乳腺癌HOXA5mRNA表达显著低于乳腺良性病变（P＜0.01）.乳腺癌伴腋窝淋巴结转移阳性患者HOXA5mRNA表达强度较淋巴结未转移者显著降低（P＜0.01）.HOXA5mRNA表达与乳腺癌肿瘤原发灶大小、临床分期、组织学分型未见相关性（均P＞0.05）.结论：青年乳腺癌肿瘤原发灶组织细胞中HOXA5mRNA表达强度较乳腺良性病变组织显著下降.HOXA5mRNA表达明显降低与乳腺癌腋窝淋巴结癌转移关联性较大.     

48例散发性乳腺癌BRCA1蛋白失表达参数分析

目的探讨在散发性乳腺癌中影响易感基因（BRCA1）蛋白表达的因素及其与临床指征的关系。方法运用免疫组织化学SP法检测10例乳腺导管内乳头状瘤和48例乳腺癌组织中BRCA1的表达。结果在10例乳腺导管内乳头状瘤病例中,BRCA1蛋白阳性位于细胞核,阳性表达率为100%（10/10）;48例乳腺癌组织中BRCA1蛋白阳性表达位于细胞核或细胞核和胞浆,阳性率为56.3%（27/48）,二者差异有统计学意义（P〈0.01）;BRCA1的失表达率在〉40岁的发病年龄组高于≤40岁的发病年龄组（P〈0.05）;BRCA1在伴有腋窝淋巴结转移组的失表达率高于无淋巴结转移组（P〈0.01）;而在不同的病理学类型、组织学分级、临床分期以及肿瘤大小等方面差别无统计学意义。结论在散发性乳腺癌中,BRCA1的失表达与高发病年龄、伴有腋窝淋巴结转移等因素相关,BRCA1基因表型的改变为乳腺癌的预后判断提供了新依据。     

乳腺癌中α-1,6岩藻糖基转移酶表达的相关性研究及其临床意义

目的探讨乳腺癌组织中α-1,6岩藻糖基转移酶mRNA和蛋白的表达水平及其临床意义。方法应用蛋白免疫印迹法、实时荧光定量PCR法检测40例乳腺癌患者术后的癌组织、癌旁组织以及40名健康者的正常乳腺组织中α-1,6岩藻糖基转移酶在的表达情况,并分析其与乳腺癌之间的关系。结果 FUT8 mRNA和蛋白在乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织和正常乳腺组织,差异有统计学意义（P〈0.05）;Ⅲ期乳腺癌组织中FUT8蛋白表达水平明显高于Ⅰ-Ⅱ期,差异有统计学意义（P〈0.001）;有淋巴结转移的乳腺癌组织中FUT8蛋白表达水平明显高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义（P〈0.001）。结论高FUT8蛋白的表达与乳腺癌密切相关,其可能的调控机制及生物学效应有待进一步研究。     

乳腺浸润性导管癌中CDH1基因甲基化状态及其临床意义

目的 探讨CDH1启动子基因甲基化在乳腺浸润性导管癌中的意义.方法 采用甲基特异性PCR和免疫组织化学染色方法分别检测乳腺癌组织、癌旁组织和乳腺正常组织中CDH1基因启动子甲基化状况及上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达情况.收集相关临床病理资料(遗传背景、年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移情况、肿瘤细胞分级、临床分期和分子亚型),分析CDH1基因甲基化在乳腺癌中的意义.结果 250例乳腺癌患者共发现113例CDH1基因启动子甲基化,甲基化率为45.20％,CDH1基因启动子甲基化组和非甲基化组相比E-cadherin蛋白表达水平明显减低,差异有统计学意义(x2 =21.360,P＜0.01).单因素分析结果显示,CDH1基因甲基化组和非甲基化组在腋窝淋巴结转移(x2=19.086,P＜0.01)、肿瘤组织学分级(x2=8.487,P=0.014)、人表皮生长因子受体2(CerbB-2)表达(x2=9.475,P=0.002)和分子分型(x2 =25.482,P＜0.01)比较,差异有统计学意义.COX回归分析显示,CDH1基因启动子甲基化和非甲基化组5年生存率比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CDH1基因启动子甲基化引起基因mRNA表达下降,CDH1基因甲基化与乳腺癌的腋窝淋巴结转移相关,提示CDH1基因启动子甲基化在乳腺癌疾病进程中发挥了一定作用.     

核基质结合区结合蛋白质1在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨核基质结合区结合蛋白质1（SATB1）在乳腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法用免疫组织化学sP法和qRT—PCR技术检测39例乳腺癌组织、19例对应癌旁组织、13例乳腺良性病变组织中SATB1蛋白及其mRNA的表达情况,分析SATB1及其mRNA表达与临床病理特征的关系。结果乳腺癌组织中SATB1阳性表达率为71．8％,明显高于乳腺良性病变的38．5％和癌旁组织的15．8％（P〈0．01）;SATB1mRNA在乳腺癌组织中的表达量分别为乳腺良性病变组织和癌旁乳腺组织的4．5倍;SATB1及mRNA在乳腺良性病变组织和癌旁乳腺组织之间的差异均无统计学意义（P〉0．05）。SATB1及其mRNA在肿瘤体积大、腋窝淋巴结转移数多、分期晚的乳腺癌组织中表达水平显著增高（P〈0．05）;而在不同年龄,不同组织学分级,不同人表皮生长因子受体-2（Herb-2）、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）表达的乳腺癌组织中,SATB1及其mRNA表达的差异无统计学意义（P〉0．05）。SATB1与SATB1mRNA表达呈正相关（P〈0．01）。结论SATB1及SATB1mRNA表达水平增高与乳腺癌的发生、侵袭和转移密切相关,有望成为判断乳腺癌预后的一个重要指标。