Wnt/β-catenin信号通路对骨关节炎关节软骨的影响研究

近年来,Wnt信号通路在骨关节炎中的研究越来越受到人们的关注。研究发现,Wnt信号通路与软骨细胞、成骨细胞、破骨细胞的生长密切相关,在骨关节炎中Wnt/β-catenin信号通路的相关分子明显表达异常,与骨关节炎病情进展密切相关,本文对Wnt/β-catenin信号通路与骨关节炎软骨关系进行综述,且讨论了基于该通路的相关疗法。     

Wnt信号通路与骨关节炎的研究进展

<正>骨关节炎(0A)是一类多见于中老年人的以关节软骨慢性退变为主、继发关节缘骨赘和滑膜慢性炎症为特征的关节疾病。女性发病率较高。其刚开始的、主要的病理表现为退行性变,软骨最先出现局部软化、糜烂,继而外露出软骨下骨,外露的软骨下骨硬化,出现囊性变,随后继发关节周围组织关节滑液、骨膜、滑膜等渐进性病理改变,肌肉组织相应出现挛缩与松弛等变化,从而破坏关节面的应力平衡,使关节形成恶性循环改变,病变逐渐加重。其发生机理与衰老、创伤、过度     

苗药验方通过Wnt/β-catenin信号通路减轻家兔骨关节炎软骨细胞的损伤

摘要:目的 观察苗药验方对家兔骨关节炎模型软骨细胞的影响,并探讨其防治骨关节炎软骨退变的作用机制。方 法 36只家兔随机分为正常对照组、模型组、苗药熏蒸组、苗药离子导入组,每组9只。除正常对照组外,其余3组家兔 右膝关节腔内注射木瓜蛋白酶制造膝骨性关节炎模型。造模成功后,苗药熏蒸组与苗药离子导入组家兔分别经苗药验 方熏蒸治疗及苗药验方离子导入治疗20d,取各组家兔软骨组织行苏木精-伊红染色,并取各组家兔血清备用。取正常 家兔软骨组织培养软骨细胞,将软骨细胞也分为4组:正常对照组、模型组、苗药薰蒸组、苗药离子导入组。除正常对照 组外,其余3组软骨细胞用10μg/L白细胞介素-1β(IL-1β)处理24h制备骨关节炎软骨细胞模型,造模期间分别用相应 组家兔血清对软骨细胞进行体外干预,酶联免疫吸附法(ELISA)检测软骨细胞上清液中β-连环蛋白(β-catenin)、肿瘤坏 死因子-α(TNF-α)的含量,免疫印迹(Westernblot)法检测软骨细胞中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、基质金属蛋白酶-3 (MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、细胞外因子-16(Wnt-16)、β-catenin蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反 应(qPCR)检测软骨细胞中 BMP-2、MMP-3、MMP-13、Wnt-16、β-cateninmRNA 表达水平。结果 与模型组比较,苗药 熏蒸组、苗药离子导入组家兔关节软骨表面纤维化及其软骨细胞结构破坏均得到不同程度改善。与模型组比较,苗药薰 蒸组软骨细胞上清液 TNF-α、β-catenin的含量显著减少(均 P<0.05),软骨细胞 BMP-2、MMP-3、β-catenin蛋白表达以 及 BMP-2、Wnt-16mRNA 表达水平显著下调(均P<0.05);与模型组比较,苗药离子导入组软骨细胞上清液中 TNF-α、 β-catenin的含量显著 减 少 (均 P<0.05),软 骨 细 胞 BMP-2、MMP-3、MMP-13、β-catenin 蛋 白 表 达 水 平 以 及 BMP-2、 MMP-3、Wnt-16mRNA 表达水平显著下调(均 P<0.05)。结论 苗药验方薰蒸疗法及离子导入疗法,可能通过调节 Wnt/β-catenin信号通路减轻骨性关节炎软骨细胞的损伤。     

Wnt信号通路在脑卒中疾病中作用的研究进展

Wnt信号通路是由配体蛋白Wnt和膜蛋白受体结合激发的一组多下游通道的信号转导途径,分为经典和非经典Wnt通路。其在多细胞生物体轴分化过程中起重要作用,参与了器官发生、大脑形成、海马回发育、生长锥重建、轴突形成,能够多环节、多靶点参与神经元的增值、分化、抑制迁移。脑卒中属急性脑血管疾病,具有高发病率、高死亡率、高复发率。Wnt通路是调控细胞生长、增殖、分化的关键途径,无论是在正常的神经发生、还是神经系统疾病形成和发展过程中,均有Wnt信号通路的参与。Wnt信号通路对神经干细胞的增殖分化发挥着决定作用,为很多脑损伤疾病提供启发与研究方向。研究Wnt通路与中枢神经系统细胞的作用可以为脑卒中在实验机制研究与临床针刺康复治疗提供新的依据与思路。     

化疗药顺铂对Wnt通路抑制因子的表达作用

目的 研究抗肿瘤药顺铂(cisplatin,Pt)对Wnt通路抑制因子FrpHE(frizzled relatd protein)和 DKK-1(dickkopf-1)表达的调节作用.方法 培养人肝癌HepG2、Hep3B、人大肠癌Lovo和人神经胶质瘤U251细胞,并分别加入5 μmol/L Pt作用24 h,以RT PCR技术检测FrpHE和DKK-1mRNA,以流式细胞术检测肿瘤细胞中Wnt通路的关键调节因子β-catenin的表达.结果 顺铂作用24 h后,FrpHE mRNA表达水平在人肝癌细胞较对照组表达水平显著增加(P<0.001).在人大肠癌细胞和人神经胶质瘤细胞中,未见FrpHE mRNA表达.DKK 1mRNA表达水平在加入Pt作用后的人肝癌细胞、人大肠癌细胞和人神经胶质瘤细胞均较对照组表达水平显著增加.β-catenin的阳性细胞百分比和平均荧光强度与对照组相比均降低(P<0.001).结论 化疗药顺铂能够诱导肝癌细胞FrpHE mRNA和人肝癌、肠癌、神经胶质瘤细胞DKK-1 mRNA的表达,抑制Wnt通路.     

Fas通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活调控肝癌细胞增殖

目的 探究肿瘤坏死因子受体超族成员6(Fas)调控肝癌细胞株增殖的潜在分子机制。方法 收集正常肝细胞LO2和肝癌细胞株Hep3B、Huh7、PLC/PRF/5、Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和SK-hep1,实时荧光定量PCR法检测Fas基因表达,运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析Fas基因表达与肝癌的关系,设计特异性靶向Fas的siRNA,敲低肝癌细胞中Fas基因的表达,通过噻唑蓝(MTT)实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,双荧光素酶实验检测β-连环蛋白(β-catenin)介导的T细胞因子(TCF)/淋巴增强子(LEF)转录活性,蛋白质印迹法检测β-catenin蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测无翅型MMTV整合位点家族成员(Wnt)/β-catenin信号通路下游靶基因八聚体结合转录因子3/4(Oct3/4);G1/S-特异性周期蛋白-D1(CCND1);血管内皮生长因子(VEGF);B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1(Bmi)的表达。结果 TCGA肝癌样品中Fas基因表达谱结果显示,肝癌组织Fas ...     

Wnt通路新调控因子R-spondin家族在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的：探讨结直肠癌及癌旁组织中R-spondin家族的表达水平及其与患者临床病理分期之间的关系。 方法：收集中南大学湘雅医院2014年1月至2014年8月行根治性手术治疗后的64例结直肠癌新鲜组织及配对的癌旁组织 标本,利用实时荧光定量PCR及免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织中R-spondin 1~4及β-链蛋白(β-catenin)的mRNA 及蛋白表达情况;分析R-spondin 1~4表达水平与结直肠癌的临床病理因素之间的关系;探讨R-spondin 1~4与β-catenin 在结直肠癌中表达的相关性。结果：与癌旁组织相比较,R-spondin 1蛋白及mRNA在结直肠癌组织中呈高表达 (P<0.05);与正常组织比较,R-spondin 2~4在结直肠癌组织中呈高表达,但与癌旁组织的表达水平比较差异无统计学 意义(P>0.05);结直肠癌组织中R-spondin 1表达水平与β-catenin的细胞核表达水平呈正相关(r=0.6307,P<0.05)。结论： 与癌旁组织相比较,R-spondin 1在结直肠癌组织中呈高表达;R-spondin 1可能通过调控Wnt信号通路下游的β-catenin活 性而发挥促癌作用。     

Wnt/β-catenin信号通路与microRNAs 在肺癌中的调控机制

微小核糖核酸(microRNAs)是一种保守性非编码小RNA,可以作为原癌基因或癌抑制基因。Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路参与肿瘤细胞更新、增殖和分化,进而影响肿瘤的发生和演变。同样,microRNAs异常表达与肿瘤形成过程有关,近年来许多研究发现,microRNAs的异常表达可以通过介导Wnt/β-catenin信号通路激活和沉默来影响肺癌的发生、转移和耐药等过程,本文主要从Wnt/β-catenin信号通路中的相关microRNAs失常对肺癌发生、发展的影响方面做一综述,以期为临床上开发肺癌治疗的新型药物提供治疗靶点。     

Wnt／β-catenin信号通路对骨关节炎发病和治疗的作用机制

Wnt/β-catenin信号通路是由一系列蛋白组成的一个复杂的蛋白网,它在肿瘤和胚胎的发育中发挥着重要作用.最近研究发现,Wnt/β-catenin信号通路激活导致软骨细胞分化成熟和软骨破坏;Wnt/β-catenin信号通路抑制导致软骨细胞凋亡和关节软骨破坏.该信号通路及其相关分子的异常改变均可能引起骨和软骨代谢的改变,导致骨关节炎的发生.本文就Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎中的发病机制和治疗研究进展进行综述.     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨阳和汤对兔膝骨关节炎的影响

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨阳和汤对兔膝骨关节炎模型的作用机制。方法将4～6月龄新西兰兔随机分为空白组、模型组、西乐葆组和阳和汤组,每组6只。除空白组外,其余各组膝关节腔内注射木瓜蛋白酶造模。造模成功后,阳和汤组予阳和汤灌胃,西乐葆组予西乐葆灌胃,空白组和模型组予生理盐水灌胃,每日1次,连续给药2周。灌胃前后分别测量4组兔膝关节皮温、周径,进行膝关节Lequesne MG评分。停药1周后采集标本,ELISA法检测关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-13含量;光镜下观察关节软骨病理改变并进行Mankin’s评分;免疫组化检测软骨组织Wnt4、β-catenin表达情况。结果与空白组比较,模型组膝关节皮温、周径和Lequesne MG评分,关节软骨病理切片Mankin’s评分及Wnt4、β-catenin表达,关节液IL-1β、TNF-α、MMP-13含量均明显升高（P<0.05）;与模型组比较,阳和汤组膝关节周径、Lequesne MG评分,软骨病理切片Mankin’s评分及Wnt4、β-catenin表达,关节液IL-1β、TNF-α、MMP-13含量均明显降低（P<0.05）。结论阳和汤能抑制骨关节炎炎症反应,修复软骨损伤,其机制可能与降低炎症因子TNF-α和IL-1β的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路和改善MMP-13有关。     

Wnt、Notch信号在骨关节炎发病机制中的研究评述

膝骨关节炎(KOA)的发病机制尚不完全清楚。本论文通过对国内外研究文献分析,探讨Wnt、Notch信号在OA骨细胞分化、增殖和凋亡,维持软骨细胞表型及基质代谢平衡方面发挥的重要作用,其信号通路异常可能是骨关节代谢失衡和KOA形成的关键因素。     

超微肿痛贴治疗膝骨陛关节炎的疗效及其对血清OPN的影响

目的观察超微肿痛贴治疗膝骨性关节炎的临床疗效及初步探讨其作用机制。方法将90例膝骨性关节炎患者随机分为3组,各30例,分别采用超微肿痛贴、传统肿痛贴及玻璃酸钠治疗,疗程3周。观察3组的临床疗效及患者治疗前后血清骨桥蛋白（OPN）的变化。结果超微肿痛贴组与玻璃酸钠组临床疗效相当,均优于传统肿痛贴组（P〈0．05）。超微肿痛贴组降低血清OPN浓度优于传统肿痛贴组（P〈0．01）及玻璃酸钠组（P〈0．05）。结论超微肿痛贴治疗膝骨性姜带器1临康疗祷拧僻鲡蝴拧特与砖璃酪钠相当．降低血涪f）PN浓席暑其作用机制之一.     

干扰CXCR4基因抑制胰腺癌经典Wnt通路活化的体外实验研究

目的观察CXCR4 shRNA转染胰腺癌细胞后经典Wnt通路的活性变化.方法构建CXCR4 shRNA表达载体转染胰腺癌CXCR4高表达细胞Miapaca-2并应用G418筛选出稳定表达株,通过Realtime-PCR、WesternBlot实验观察RNAi对CXCR4基因的抑制效率;通过PGL3-OT/OF荧光素酶检测方法观察CXCR4基因沉默后对胰腺癌Wnt/β-catenin经典通路活性的影响,并通过Realtime-PCR、Western Blot实验观察CXCR4 shRNA对Wnt/β-catenin通路下游靶基因的影响.结果特异性CXCR4基因沉默能够在基因和蛋白水平稳定、高效、特异地抑制CXCR4的表达,抑制效率达70%以上,同时,特异性CXCR4干扰后能够显著抑制PGL3-OT转染后的荧光素活性（P〈0.05）以及Wnt/β-catenin下游靶基因的mRNA及蛋白的表达.结论CXCR4基因沉默能抑制Wnt/β-catenin经典通路在胰腺癌中的活性,阻遏Wnt/β-catenin通路下游靶基因表达,为CXCR4作为胰腺癌治疗的分子靶点提供依据.     

虾青素胶囊治疗膝关节骨性关节炎疗效观察

目的观察虾青素胶囊治疗膝关节骨性关节炎的疗效。方法将60例膝关节骨性关节炎患者随机分为治疗组（30例）和对照组（30例）。治疗组给予虾青素胶囊治疗,对照组给予芬必得治疗。比较两组治疗前后膝关节功能评分,观察主要症状缓解情况和治疗效果。结果（1）治疗组的疼痛缓解持续时间较对照组缩短,而疼痛缓解时间较对照组延长（P均〈0．01）;（2）两组治疗后关节功能较治疗前均有提高（P均〈0．01）,而治疗组比对照组更优（P〈0．05）;（3）总有效率治疗组为66．67％,对照组为83．33％,两组疗效比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论虾青素胶囊治疗骨性关节炎有一定的疗效。     

Wnt/β-catenin通路关键分子在NK/T细胞淋巴瘤组织中的表达及其临床意义

目的:研究Wnt/β-catenin通路的关键分子β-catenin、c-myc和cyclinD₁在NK/T细胞淋巴瘤(NKTCL)组织中的表达,阐明其与NKTCL患者临床特征的关系。方法:采用Real-time PCR法检测人NKTCL细胞株(SNK-6和YTS)及人正常NK细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、c-myc和cyclinD₁ mRNA的表达水平;采用免疫组织化学SP法检测NKTCL组织和反应性增生的淋巴组织中β-catenin、c-myc蛋白的表达阳性率,并分析蛋白表达与患者临床特征的关系;分析NKTCL患者中β-catenin和c-myc蛋白表达的相关性;Kaplan-Meier法分析β-catenin表达与NKTCL患者中位生存期的关系。结果:细胞株SNK-6和YTS中β-catenin、c-myc和cyclinD₁ mRNA的表达阳性率明显高于正常NK细胞(P<0.05);NKTCL组织中β-catenin和c-myc蛋白表达阳性率(24%和56%)明显高于淋巴结反应性增生组织(0%和25%)(P<0.05);β-catenin表达与Ann Arbor分期有关联(P<0.05),c-myc表达与Ann Arbor分期和Ki-67水平有关联(P<0.05),NKTCL患者中β-catenin和c-myc表达呈正相关关系(r=0.770,P<0.05);β-catenin阳性表达患者中位生存期低于β-catenin阴性表达患者(P<0.05)。结论:Wnt/β-catenin信号通路中关键分子β-catenin、c-myc、cyclinD₁在NKTCL组织中高表达,并且其表达水平与NKTCL患者临床分期有关联。     

外源性神经生长因子对形觉剥夺性近视豚鼠巩膜组织的保护作用及其机制

探讨外源性神经生长因子（NGF）对形觉剥夺性近视（FDM）豚鼠的保护作用,并阐明其机制。     

Wnt／β-catenin 信号通路4个基因在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的：探讨 Wnt/β-catenin 信号通路 Wnt-7a、Frlzzled、β-catenin 和 MMP-9基因在子宫内膜异位症患者在位内膜组织、异位内膜组织和正常子宫内膜组织的表达及其意义。方法采用免疫组织化学 SP 方法和Western blot 方法分别检测子宫内膜异位症患者在位内膜组织、异位内膜组织和正常子宫内膜组织中 Wnt-7a、Fr-lzzled、β-catenin 和 MMP-9基因蛋白质表达水平;用实时定量 RT-PCR 方法检测 Wnt-7a、Frlzzled、β-catenin 和MMP-9基因的 mRNA 表达水平。结果免疫组织化学实验显示,Wnt-7a 在3种内膜组织中均无表达,3种不同组织的内膜中 Frizzled、β-catenin 和 MMP-9蛋白质在异位组织表达明显高于正常内膜组织（P ＜0．01）;在异位内膜组织表达明显高于在位内膜组织（P ＜0．05）。Western blot 实验显示 Wnt-7a、Frizzled、β-catenin 和 MMP-9在子宫内膜异位组织蛋白质表达水平高于正常子宫内膜组织和在位子宫内膜组织。Wnt-7a、Frlzzled、β-catenin 和MMP-9基因 mRNA 表达水平异位内膜组织高于在位内膜组织和正常内膜组织,Wnt-7a、Frlzzled、β-catenin 基因mRNA 表达水平在位内膜组织高于正常内膜组织,MMP-9基因 mRNA 表达水平在位内膜组织低于正常内膜组织。结论Wnt/β-catenin 信号通路 Wnt-7a、Frlzzled、β-catenin 和 MMP-9基因可能共同参与了子宫内膜异位症的发生,并且β-catenin 可能通过对上游 Wnt-7a、Frizzled 和下游信号靶基因 MMP-9mRNA 的传导调控成为子宫内膜异位症疾病发展过程中的作用机制。     

Wnt/β-catenin通路异常在卵巢癌中的研究进展

如何早期诊断早期治疗成为当今卵巢癌研究的重要课题。β-catenin作为Wnt信号通路的细胞粘附和信号转导分子,被认为在卵巢癌发生过程中起到了关键作用,被认为在卵巢癌发生过程中是早期事件。预示着β-catenin有可能成为临床发现与治疗卵巢癌的分子靶标。     

冬凌草甲素促进骨肉瘤细胞143B凋亡及其可能机制

目的 研究冬凌草甲素(oridonin,ORI)对人骨肉瘤细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用的分子机制.方法 以结晶紫染色和Western blot检测ORI对143B细胞增殖的抑制作用,Annexin V-EGFP染色法和Western blot检测ORI对143B细胞凋亡的促进作用;RT-PCR和Western blot检测ORI对143B细胞内Wnt/β-catenin信号的影响;沉默或过表达β-catenin后,结晶紫染色分析ORI对143B细胞增殖的抑制作用的变化.结果 ORI能够抑制143B细胞株增殖,并诱导其凋亡(P＜0.05);呈浓度依赖性抑制143B细胞PCNA的表达,同时促进其Caspase3、Bad的表达;能够抑制143B细胞内Wnt/β-catenin信号的表达,沉默或过表达β-catenin后则可以相应地促进或抑制143B细胞的凋亡(P＜0.05).结论 ORI能够浓度依赖性抑制143B骨肉瘤细胞株增殖并诱导其凋亡,可能与ORI能够抑制其Wnt/β-catenin信号转导有关.     

Effects of pentoxifylline on Wnt/β-catenin signaling in mice chronically exposed to cigarette smoke

Background Previous discovery that long-term administration of pentoxifylline （PTX） to mice chronically exposed to smoke led to the development of pulmonary fibrosis rather than emphysema initiated our curiosity on whether the Wnt/β-catenin pathway, a set of signaling proteins essential to organ development and lung morphogenesis in particular were activated in the pathogenesis of pulmonary fibrosis. Methods Male BALB/c mice were randomized into four study groups： Group Sm, smoke exposure and taken regular forage; Group PTX, no smoke but taken PTX-rich forage; Group Sm＋PTX, smoke exposure and taken PrX-rich forage; Group control： shamed smoke exposure and taken regular forage. Animals were sacrificed at day 120. Morphometry of the lung sections and the expressions of TGF-β1, hydroxyproline, β-catenin, cyclin D1, T cell factor 1 （Tcf-1） and lymphoid enhancer factor 1 （Lef-1） mRNA, etc, in the lung homogenate or in situ were qualitatively or quantitatively analyzed. Results As expected, smoke exposure along with PTX administration for 120 days, lungs of the mice progressed to be a fibrosis-like phenotype, with elevated fibrosis score （3.9±1.1 vs. 1.7±0.6 in Group Sm, P 〈0.05）. TGF-β1（pg/g） （1452.4±465.7 VS. 818.9±2.02.8 in Group Sm, P 〈0.05） and hydroxyproline （mg/g） （5.6±0.6, vs. 2.4±0.1 in Group Sm, P 〈0.05） were also consistently increased. The upregulation of β-catenin measured either by counting the cell with positive staining in microscopic field （17.4±7.9 vs. 9.9±2.9 in Group Sm, P 〈0.05） or by estimation of the proportion of blue-stained area by Masson＇s trichrome （11.8±5.6 vs. 4.7±4 in Group Sm） in Group SM＋PTX was much more noticeable as than those in Group Sm. The expression of β-catenin measured by positive cell counts was correlated to TGF-β1 concentration in lung tissue （r=0.758, P 〈0.001）. PTX per se caused neither fibrosis nor emphysema though expression of β-catenin and downstream gene cyclin D1 may also be altered by this medication. Conclusions PTX mediated transformation of pulmonary emphysema into pulmonary fibrosis under chronic cigarette smoke exposure is associated with upregulation of β-catenin and elevation of TGF-β1, implying that activation of Wnt/β-catenin signaling may be involved in the pathogenesis of pulmonary fibrosis.