心理应激对大鼠氧化应激的影响及TLR4的作用

目的 观察心理应激对大鼠氧化应激和炎症反应的影响,探讨心理应激在动脉粥样硬化病变形成中的作用、机制.方法 雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(NC)、无应激组(NS)、生理应激组(PS)和心理应激组(ES),每组各10只,并制作心理应激模型.于末次应激结束后采集血标本,检测血清SOD活力和MDA含量、放免法测定血清TNF-α水平; HE染色观察大鼠主动脉形态学变化；免疫组化法测定主动脉TLR4表达.结果 (1)血清学指标显示ES组大鼠较其他三组出现了明显的氧化应激损伤(血清SOD活力明显下降而MDA含量明显升高,均P＜0.05)和炎症反应(血清TNF-α升高,P.＜0.05)；同时HE染色发现ES组大鼠主动脉出现早期动脉粥样硬化性改变；(2)ES组大鼠主动脉TLR4表达较其他三组明显上调(P＜0.05).结论 氧化应激有可能在AS形成的早期,通过激活TLR4释放TNF-α等炎性因子促进血管壁的炎症反应,进而导致AS形成.     

运动量对糖尿病动脉粥样硬化大鼠TLR2、TLR4的影响

目的:探讨不同强度的运动对糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)的影响.方法:选取健康SD大鼠100只,随机分成对照组20只及糖尿病动脉粥样硬化组80只,糖尿病动脉粥样硬化模型采用高糖高脂饮食加链脲佐菌素(STZ)(30 mg/kg)注射建立.其中糖尿病动脉粥样硬化组又分成模型组、小运动量组、中等运动量组和大运动量组(每组20只).经过估计力竭运动时间及游泳训练后,小运动量组(12 min/次),中等运动量组(21 min/次),大运动量组(30 min/次),进行6周的运动干预,1次/d,一周6次.用PCR法测定各组大鼠主动脉组织的TLR2、TLR4mRNA的表达.结果:模型组较对照组血管组织中TLR2、TLR4水平升高;运动干预后,各运动组TLR2、TLR4水平较模型组降低,以中等运动量、大运动量组下降明显.结论:糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织中TLR2、TLR4水平升高,TLR2、TLR4水平的升高可能是糖尿病动脉粥样硬化的发病机制之一,运动能够降低TLR2、TLR4的表达.     

间歇性低氧大鼠肺内TLR4的表达及影响

目的 通过慢性歇性低氧造成大鼠阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)的模型,检测TLR4在肺内的表达,探讨TLR4的表达水平对肺部炎症及其他可能发生的病变的影响。方法 将SPF级健康雄性Wistar大鼠32只采用数字表法随机分为4组(每组8只),分别为A组(常氧组)、B组(轻度低氧组,即氧浓度为15%)、C组(中度低氧组,即氧浓度为9%)和D组(重度低氧组,即氧浓度为6%)。造模35天后,取肺组织于光镜下观察大鼠肺组织形态学变化,免疫组化检测TLR4在各组大鼠肺组织中的表达水平。结果 A组肺组织未见明显异常,B、C、D这3组肺泡间隔增厚,淋巴细胞浸润,部分伴有肺气肿改变,随缺氧程度增加肺泡破坏程度加重。免疫组化结果显示,A组中无TLR4表达,B、C、D这3组TLR4呈梯度表达,D组TLR4表达最明显,差异有统计学意义(P=0.000)。结论 慢性间歇性低氧可以造成大鼠肺组织的病理损伤和炎症,且随着缺氧程度的增加,肺组织的病理损伤更严重,TLR4表达更多。     

大鼠肺巨噬细胞内毒素耐受性与TLR4 mRNA表达的变化

Ｇ- 菌感染致急性肺损伤 ,主要是由于内毒素 (Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃ ｃｈａｒｉｄｅ ,ＬＰＳ)活化炎性细胞释放大量炎症因子。不同个体感染Ｇ- 菌后临床表现轻重不一 ,说明个体对ＬＰＳ的反应性有相差 ,即对ＬＰＳ耐受性 (Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ)存在差异。研究表明ＬＰＳ耐受性与其靶细胞信号转导的跨膜受体ＴＬＲ4(Ｔｏｌｌ ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ 4)的结构与功能及表达量有关[1 ,2 ] ,但尚存争议[3] 。我们通过观察大鼠肺巨噬细胞ＬＰＳ耐受性及ＴＬＲ4ｍＲＮＡ表达的变化 ,以说明ＬＰＳ耐受性与ＴＬＲ4表达量相关的可能性。1　材料与…     

内毒素对血管内皮细胞的激活作用与动脉粥样硬化

目的：观察细菌内毒素（LPS）对人脐静脉内此细胞（HUVEC）的激活作用。探讨内皮细胞（VEC）激活在动脉粥样硬化（AS）发生发展中的意义。方法：（1）以光镜及电镜观察细胞形态。（2）测定HUVEC培养上清液中活性物质含量，以放射免疫标记技术测定内皮素（ET－1）含量，以比色法测定组织型纤溶酶原激活物（t-PA)及纤维溶酶原激 物抑制物（PAI）含量，以双抗夹心法测定因子Ⅷ相关抗原（vWF)含量。结果：（1）LPS使细胞呈长梭形，细胞收缩，间隙明显开大，细胞质水肿；（2）LPS增加培养上清液中ET－1，PAI，vWF含量（P＜0．05），对t-PA含量无明显影响（P＞0．05），结论：LPS通过影响细胞形态，促使ET－1，PAI，vWF等活性物质分泌激活VEC。激活VEC可能在AS发生，发展过程中发挥重要作用。     

灵芪蠲肝液对大鼠TLR4信号途径的影响

目的：探讨四氯化碳（CCl4）诱导大鼠肝损伤的作用机制,并观察灵芪蠲肝液对Toll样受体4（TLR4）信号传导途径的影响。方法：雄性健康Wistar大鼠,设置模型组、灵芪蠲肝组（治疗组）和空白组。用40%CCl4花生油溶液皮下注射建立慢性肝损伤模型,以灵芪蠲肝液灌胃作治疗性研究,于第8周收集血液和肝脏组织。检测肝功能ALT、AST、白蛋白（ALB）水平;检测血清内毒素、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平;分离枯否细胞（KCs）,采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测KCs TLR4 mRNA表达;肝组织HE染色,按Knodell HAI评分标准对肝脏炎症评分,免疫组化SP法检测肝组织TLR4和核因子κB（NF-κB）蛋白表达。结果：空白组除ALB高于模型组和治疗组外,其余指标均最低。模型组血清ALT、AST、内毒素、IL-1β、TNF-α水平明显高于治疗组（P〈0.001）,ALB水平明显低于治疗组（P〈0.05）,KCs TLR4 mRNA表达明显高于治疗组（P〈0.001）,肝组织炎症Knodell HAI评分、TLR4和NF-κB蛋白均高于治疗组（P〈0.001）。结论：①通过TLR4信号传导途径释放炎症介质致肝组织损伤可能为CCl4诱导慢性肝损伤的机制之一。②灵芪蠲肝液治疗慢性肝损伤的机制可能与抑制TLR4信号途径有关。     

TLR4在急性肺损伤中的作用

急性肺损伤（ALI）在临床上以顽固性低氧血症、弥漫性肺浸润和肺微血管通透性增高引起的肺水肿为主要表现,是肺部失控的炎症反应。TLR4是识别脂多糖（LPS）的受体,介导炎症反应,可以使中性粒细胞聚集,介导肺组织的损伤。TLR4表达水平决定了内毒素造成急性肺损伤的程度,以TLR4为靶点,对其转录信号的特异性抑制干扰介入治疗有望对肺损伤的预后有益。     

反义Toll样受体4表达质粒对内毒素刺激小鼠巨噬细胞的影响

目的　研究反义Toll样受体 4 (TLR4 )表达质粒对体外内毒素刺激小鼠巨噬细胞的作用。方法　反义TLR4表达质粒的构建 ,及转染入巨噬细胞株RAW 2 6 4 .7。在不同时间用不同浓度的内毒素刺激转染细胞及对照组细胞。用半定量RT PCR技术检测TLR4mRNA的变化 ,ELISA方法检测TNF α水平的变化。结果　转染细胞的TLR4mRNA水平低于对照组细胞。在体外用不同浓度内毒素及不同时间刺激的两组细胞TNF α水平低于对照组细胞。结论　反义TLR4表达质粒能够下调体外细胞TLR4mRNA的表达 ,降低细胞因子TNF α的分泌     

二草清肝汤预防小鼠内毒素性肝损伤观察及对肝脏TLR4表达的影响

目的：观察二草清肝汤对小鼠内毒素血症急性肝损伤的影响及Toll样受体4（toll-Likereceptor4 TLR4）表达的影响。方法：取BALB/c小鼠120只,随机分为正常对照组、内毒素肝损伤模型组及二草清肝汤大、小剂量组,各30只。二草清肝汤大、小剂量组分别予二草清肝汤6mg/kg、3mg/kg预防性灌胃,正常对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃,1天1次。12天后除正常对照组外,另三组给予D-氨基半乳糖（D-Gal）和LPS腹腔注射,观察注射后1、2、4、6、12、24h时各组小鼠光镜下肝组织的病理变化,采用全自动生化分析仪检测血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平,酶联免疫吸附法检测血清IL-12、TNF-α浓度,免疫组织化学法检测TLR4表达水平,RT-PCR检测肝组织TLR4 mRNA表达水平。结果：二草清肝汤大、小两个剂量组各个时间点血ALT值、血清IL-12、TNF-a水平均低于同时间点的模型组（P〈0.05或P〈0.01）,TLR4 mRNA水平也明显低于同时间点的模型组,差异均有统计学意义（P均〈0.05）。但二草清肝汤大、小剂量组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：预防性给予二草清肝汤,可抑制内毒素血症肝损伤小鼠肝脏炎症反应,其机制可能与下调LPS识别受体TLR4表达,并进而抑制下游炎症因子分泌有关。     

葛根素对大鼠心肌缺血再灌注损伤中TLR4的影响

目的：探讨葛根素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护机制。方法：24只雌性Sprague-Dawley （SD）大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和葛根素干预组,RT-PCR和Western blotting法检测心肌中TLR4 mRNA及TLR4蛋白的表达,同时四唑氮蓝染色测定心肌梗死范围。结果：大鼠心肌缺血再灌注损伤模型造模成功;葛根素干预组的心肌梗死范围明显小于缺血再灌注组（P＜0.01）,且该组大鼠TLR4 mRNA及蛋白的表达也显著低于缺血再灌注组（ P＜0.01）。结论：葛根素干预可减轻大鼠心肌缺血再灌注的损伤,其机制可能与抑制TLR4的表达相关。     

烧伤患者外周血单个核细胞TLR2和TLR4表达的变化

目的观察烧伤患者外周血单个核细胞表面TLR2、TLR4表达的变化。方法选取深II度以上烧伤30%~50%TBSA烧伤患者23例,伤后48 h取外周血20 mL,同时抽取健康献血者(设为对照组)12例,外周血20 mL。常规方法分离出单个核细胞,用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的小鼠抗人TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的小鼠抗人TLR4抗体对外周血单个核细胞进行免疫染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞率及其平均荧光强度(MFI)。结果烧伤后48 h,患者外周血单个核细胞TLR2-FITC阳性细胞数量上升,为(57.57±18.56)%,与对照组的(26.32±10.31)%相比,P<0.05;细胞表面TLR2-FITC荧光强度下降,TLR2-FITC MFI为58.5±18.76,低于对照组(69.79±23.42);TLR4-PE阳性率为(29.84±13.28)%,与对照组的(12.75±5.18)%相比,P<0.05;TLR4-PE MFI减弱,与对照组相比,P<0.05。结论烧伤患者外周血单个核细胞TLR2/4阳性数量均升高,而TLR2/4表达强度降低。     

TLR2、TLR4在实验性末端回肠炎发病过程中的变化及意义

目的 探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLRs) TLR2、TLR4在实验性末端回肠炎发病过程中的变化及意义.方法 60只雄性SD大鼠,随机均分为造模组、缝线组、对照组.造模组行末端回肠-盲肠侧侧吻合术,缝线组只在末端回肠作手术缝线,对照组只给予麻醉,不作手术.分别于2周及8周时处死大鼠,收集...     

Toll样受体4与器官移植排异

器官移植是目前治疗恶性疾病的方法之一,而移植相关并发症制约了器官移植的进一步发展.其中,移植物排斥是移植后高死亡率的主要原因.Toll样受体4(TLR4)在先天免疫和免疫耐受中是个关键分子,但在器官移植后移植物排斥中的作用目前尚不明确.文中将对TLR4信号途径在器官移植后移植物排斥中如何通过调控抗原递呈细胞( APC)成熟、活化T细胞、引发免疫攻击的分子机制作一综述.     

TLR4和DcR3在肝细胞癌中的表达及其意义

目的 研究肝细胞癌(HCC)中Toll样受体4(TLR4)、诱骗受体3(DcR3)的表达及其意义.方法 应用免疫组化方法检测60例HCC组织中及对应癌旁组织中的TLR4和DcR3蛋白表达.结果 60例HCC肿瘤组织中7例TLR4表达阳性(11.7%),对应癌旁组织中43例TLR4表达阳性(71.7%),两者比较P＜0.01.60例肿瘤组织中46例DcR3表达阳性(76.7%),对应癌旁组织中11例DcR3表达阳性(18.3%),两者比较P＜0.01.TLR4与DcR3在HCC中的表达具有负相关性.结论 TLR4与DcR3在HCC发生发展过程中起重要作用.     

子宫内膜异位症患者在位和异位内膜组织中TLR4的表达及意义

目的 检测Toll样受体4（TLR4）在正常子宫内膜、子宫内膜异位症（EMs）患者在位内膜和异位内膜中的表达情况,探讨TLR4在EMs发病中的作用.方法 选择EMs患者的卵巢异位内膜45例（EMs异位内膜组）和相对应的在位子宫内膜32例（EMs在位内膜组）,32例非EMs患者子宫内膜组织为对照组.采用免疫组织化学二步法检测各组内膜组织中TLR4的表达情况,以及TLR4在EMs不同临床分期的异位内膜组织中的表达,作半定量分析后进行组间比较.结果 EMs患者异位内膜、在位内膜及对照组子宫内膜中,TLR4蛋白均有不同程度表达,主要表达于子宫内膜腺上皮和腔上皮.TLR4蛋白在EMs患者异位内膜、在位内膜的表达均低于对照组子宫内膜,差异均有统计学意义（均P＜0.01）,但在异位内膜中表达要高于在位内膜的表达,差异有统计学意义（P＜0.01）.TLR4蛋白在Ⅰ～Ⅱ期EMs患者异位内膜的表达与Ⅲ～Ⅳ期患者异位内膜的表达比较,差异无统计学意义（P ＞0.05）.结论 EMs患者在位和异位内膜组织中的TLR4表达下降,但在异位内膜表达高于在位内膜,TLR4可能参与了EMs的发生、发展.     

ROLE OF TOLL-LIKE RECEPTOR 4 IN AIRWAY INFLAMMATION OF CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASES

Objective To confirm if pulmonary epithelial cells express Toll-like receptor 4 （TLR4） and investigate the role of TLR4 in airway inflammation of chronic obstructive pulmonary diseases （COPD）. Methods The expressions of TLR4, IL-8 mRNA and NF-KB activation stimulated by differen factors E lipopolysacharides （LPS）, interleukin-lβ, cigarette smoking extract （CSE）] in pulmonary epithelial cells were investigated. Results LPS, CSE and IL-lβ induced the production of IL-8 and activation of NF-KB. The levels of 1L-8 mRNA and NF-KB protein in E1A ＋ cell were markedly higher than E1A- cell and A549 cell （ P 〈0. 05）. The TLR4 mRNA of all the cells increased along with the increase of LPS＇ stimulated time. There was significant difference among different LPS＇ doses （ 12 h： P = O. 039 ; 24 h ： P = O. 013 ）. The TLR4 mRNA of E1A ＋ cell was higher than the other two groups （ P 〈0. 05）. IL-lβ induced all the cells expressing TLR4 mRNA. CSE had no effect on the expression of TLR4 mRNA. Conclusion Pulmonary epithelial cells express TLR4. LPS and IL-lβ up-regulate IL-8 mediated via the activation of NF-KB induced by TLR4. But CSE up-regulates IL-8 mediated via the activation of NF-KB, which has no relation to TLR4 and may have another signal transduction pathway.