补肾活血中药复方对AGEs条件下体外纯化培养视网膜Müller细胞活力的影响

目的:探讨补肾活血中药对体外糖基化终末产物(AGEs)条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法:体外纯化培养7天SD大鼠视网膜Müller细胞至P2代;中药血清药理学方法制备补肾活血中药含药血清;体外纯化培养的P2代视网膜Müller细胞置于AGEs状态下,以补肾活血中药含药血清干预,检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果:(1)低AGEs组较正常对照组LDH值有升高趋势,其差异无统计学意义(P0.05);高AGEs组较正常对照组LDH值明显升高,其差异有统计学意义(P0.05)。(2)正常中药干预组与正常对照组LDH值比较,其差异无统计学意义(P0.05)。(3)AGEs中药干预组较AGEs组LDH值明显降低,其差异有统计学意义(P0.05)。结论:AGEs条件可导致体外纯化培养的大鼠视网膜Müller细胞细胞膜稳定性下降,通透性增加,细胞活力降低,补肾活血中药含药血清可提高AGES条件下视网膜Müller细胞活力,这可能是补肾活血中药防治糖尿病性视网膜病变(DR)的药物干预途径之一。     

补肾活血中药复方对AGEs及缺氧状态下体外纯化培养视网膜Müller细胞活力的影响

目的观察补肾活血中药对体外晚期糖基化终末产物(AGEs)及缺氧条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法采用SD大鼠制备补肾活血中药含药血清和空白血清,以终浓度为1 mmol/L的连二亚硫酸钠制作细胞缺氧环境,以终浓度50 mg/L的AGEs作为低AGEs条件,终浓度100 mg/L的AGEs作为高AGEs条件,将体外纯化培养的P2代视网膜Müller细胞分为6组,分别置于加入空白血清、中药含药血清、空白血清+低AGEs+连二亚硫酸钠、空白血清+高AGEs+连二亚硫酸钠、中药含药血清+低AGEs+连二亚硫酸钠、中药含药血清+高AGEs+连二亚硫酸钠的DMEM培养基中,培养48 h后检测各组乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,比较差异。结果 (1)低AGEs+缺氧组较正常对照组LDH值有升高趋势,但差异无统计学意义(P0.05);高AGEs+缺氧组较正常对照组LDH值明显升高,其差异有统计学意义(P0.05)。(2)正常中药干预组LDH数值与正常对照组接近,差异无统计学意义(P0.05)。(3)两组不同剂量AGEs+缺氧中药干预组LDH漏出量均较对应的低、高AGEs+缺氧组明显降低,其差异有统计学意义(P0.05)。结论 AGEs及缺氧条件可导致体外纯化培养的大鼠视网膜Müller细胞细胞膜稳定性下降,通透性增加,细胞活力降低,补肾活血中药含药血清可提高AGEs及缺氧条件下视网膜Müller细胞活力,这可能是补肾活血中药防治糖尿病性视网膜病变(DR)的机制之一。     

补肾活血中药对TGF-β_2及高糖状态下体外培养的视网膜Müller细胞活力的影响

目的探讨高糖及转化生长因子-β2（Transforming growth factor,TGF-β2）和高糖同时存在条件对体外培养的Müller细胞活力的影响,以及补肾活血中药的干预作用。方法以改良酶消化法体外培养大鼠Müller细胞,将P3细胞分别置于模拟正常、高糖、TGF-β2及TGF-β2和高糖同时存在条件下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、TGF-β2组、高糖组、TGF-β2＋高糖组、正常中药干预组、TGF-β2＋高糖中药干预组;分别在试验干预12h、24h及48h后,以490型酶标仪测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的漏出量。结果 TGF-β2组和高糖组12h和24h的LDH漏出量与正常对照组比较均无明显差异（P〉0.05）,但48h的LDH漏出量均较正常对照组增多（P〈0.05）;TGF-β2组24h的LDH漏出量较高糖组增多（P〈0.05）;TGF-β2＋高糖组24h和48h的LDH漏出量均较TGF-β2组减少（P〈0.05）;TGF-β2＋高糖组48h的LDH漏出量较高糖组减少（P〈0.05）;补肾活血中药血清能降低24h时TGF-β2和高糖同时存在条件下LDH的漏出量,降低各时段正常条件下的LDH漏出量（P〈0.05）。结论 Müller细胞对短期高糖状态以及浓度为150pg/ml的TGF-β2短期干预可能有一定的耐受性,但当高糖（50mol/l）以及TGF-β2（150pg/ml）干预48h后Müller细胞活力明显降低;补肾活血中药复方含药血清能提高正常及高糖和TGF-β2同时存在条件下视网膜Müller细胞膜的稳定性、增强Müller细胞活力可能是补肾活血中药复方防治糖尿病性视网膜病变的另一药物干预途径。     

补肾活血方对AGEs条件下体外纯化培养大鼠视网膜Müller细胞HIF-1α介导缺氧信号通路的影响

目的观察在晚期糖基化终末产物(AGEs)条件下,补肾活血方含药血清对大鼠视网膜Müller细胞的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)缺氧信号通路的影响。方法采用SD大鼠制备补肾活血中药含药血清和空白血清,以终浓度50 mg/L的AGEs作为低AGEs条件,终浓度100 mg/L的AGEs作为高AGEs条件,将体外纯化培养的P2代视网膜Müller细胞分为6组,分别置于加入空白血清、中药含药血清、空白血清+低AGEs、空白血清+高AGEs、中药含药血清+低AGEs、中药含药血清+高AGEs的DMEM培养基中,培养48 h后酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞外液中HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)含量,逆转录-聚合酶链法(RT-PCR)测定各组Müller细胞HIF-1αm RNA、VEGFm RNA表达量,比较差异。结果 1.低AGEs组较正常对照组HIF-1α值有升高趋势,但差异无统计学意义(P0.05),HIF-1αm RNA值明显升高,其差异有统计学意义(P0.05),高AGEs组较正常对照组HIF-1α、HIF-1αm RNA值明显升高,其差异有统计学意义(P0.05);低、高AGEs组较正常对照组VEGF、VEGFm RNA值明显升高,其差异有统计学意义(P0.05)。2.正常中药干预组HIF-1α、VEGF、HIF-1αm RNA、VEGFm RNA值接近正常对照组,差异无统计学意义(P0.05)。3.低、高AGEs中药干预组HIF-1α、VEGF、HIF-1αm RNA、VEGFm RNA值均较对应的低、高AGEs组明显降低,其差异有统计学意义(P0.05)。结论补肾活血方含药血清可抑制视网膜Müller细胞在AGEs条件下HIF-1α介导缺氧信号通路的高表达,这可能是补肾活血方防治DR的机制之一。     

补肾活血方对AGEs/缺氧条件下视网膜Müller细胞PEDF及VEGF的影响

目的观察补肾活血方对AGEs/缺氧条件下视网膜Müller细胞血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮衍生因子(PEDF)的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法应用改进的酶消化法培养SD大鼠视网膜Müller细胞,将其分为正常对照组(NC组)、正常中药干预组(NCM组)、低AGEs组(LA组)、高AGEs组(HA组)、低AGEs中药干预组(LAM组)、高AGEs中药干预组(HAM组)、模拟缺氧组(SH组)、模拟缺氧中药干预组(SHM组),用酶联免疫吸附法(ELISA)对相关干预条件下体外培养视网膜Müller细胞上清液进行VEGF及PEDF含量的测定。结果 (1)VEGF表达量:(1)24、48、72 h时,SH组、LA组、HA组视网膜Müller细胞VEGF表达量均高于NC组,差异均有统计学意义(P0.05);HA组、SH组表达量均高于LA组,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)24 h时,SH组表达量高于HA组;48 h时,SH组表达量低于HA组,差异均有统计学意义(P0.05)。(3)除72 h NCM组VEGF表达量与NC组相比,差异无统计学意义(P0.05)外,其余时段有中药干预组的表达量均较对应无中药干预组降低,差异均有统计学意义(P0.05)。(4)SH组、LA组、HA组、LAM组、HAM组、SHM组细胞48、72 h时VEGF表达量均较前一时段增高,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)PEDF表达量:(1)SH组、LA组、HA组各个时段视网膜Müller细胞PEDF表达量较NC组降低,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)24、72 h时,HA组、SH组PEDF表达量较LA组降低,差异均有统计学意义(P0.05)。(3)24h时,SH组PEDF表达量较HA组降低,差异有统计学意义(P0.05)。(4)24、72 h NCM组、LAM组,24、48、72 h HAM组,24 h SHM组视网膜Müller细胞PEDF表达量均较对应无中药干预组增高,差异有统计学意义(P0.05)。(5)LA组、HA组、SH组、LAM组、HAM组、SHM组48、72 h时细胞PEDF表达量均较前一时段降低,差异均有统计学意义(P0.05)。(3)VEGF/PEDF比值:(1)NC组、NCM组各时段其比值几乎相同,表明视网膜Müller细胞VEGF与PEDF的量处于相对平衡的状态。(2)LA组、HA组、SH组、各时间点其比值较NC组均有不同程度的升高。(3)LA组、HA组、SH组比值均随着时间的延长而升高;LAM组、HAM组、SHM组比值均随着时间的延长而升高,但较之LA组、HA组、SH组,其升高幅度降低。结论 (1)AGEs以及缺氧均可导致视网膜Müller细胞分泌VEGF增加、PEDF减少,并且这种改变在HA组比LA组更明显。(2)在AGEs以及缺氧条件下,补肾活血中药复方含药血清可降低视网膜Müller细胞VEGF的表达,提高PEDF蛋白的表达,这可能是补肾活血法防治糖尿病视网膜病变(DR)的药物干预途径之一。(3)正常状态下视网膜Müller细胞的VEGF与PEDF呈动态平衡;AGEs以及缺氧条件下不仅使视网膜Müller细胞VEGF与PEDF的动态平衡均被打破,并且AGEs对视网膜Müller细胞VEGF与PEDF动态平衡的损害程度与AGEs浓度有关。(4)补肾活血中药含药血清可减轻在AGEs以及缺氧条件下VEGF与PEDF的不平衡,这可能是其防治DR的一个重要作用机制。     

丹参脂溶性成分对AGEs条件下视网膜Müller细胞HIF-1及谷氨酰胺合成酶表达的影响

目的:研究丹参脂溶性成分对体外纯化培养的大鼠视网膜Müller细胞在糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)条件下乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量、低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)及谷氨酰胺合成酶表达的影响。方法:以5μg/ml的丹参脂溶性成分及5μg/ml丹参酮IIA分别干预视网膜Müller细胞,以ELISA法分别测定在正常及高、低浓度AGEs(150μg/ml、75μg/ml)条件下LDH漏出量以及HIF-1、谷氨酰胺合成酶的表达情况。结果:在正常及AGEs条件下,各组Müller细胞LDH的漏出量48 h较24 h明显减少,72 h较48 h明显增多,丹参脂溶性成分及丹参酮IIA组LDH漏出量较空白对照组小;在AGEs条件下,空白对照组HIF-1表达量较正常条件下显著增高;谷氨酰胺合成酶的表达量显著低于正常条件。丹参酮IIA、丹参脂溶性成分组与空白对照组相比,均能显著抑制HIF-1表达,增加谷氨酰胺合成酶的表达。结论:各实验组Müller细胞活力均呈现先升高、后降低,在48 h时Müller细胞膜活力最高。因此选择48 h作为最佳干预时间。AGEs能明显提高大鼠视网膜Müller细胞HIF-1的表达,抑制谷氨酰胺合成酶的表达。丹参脂溶性成分及丹参酮IIA均能抑制AGEs条件下大鼠视网膜Müller细胞HIF-1的表达,增强谷氨酰胺合成酶的表达,从而降低血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的生成量以及谷氨酸(Glutamate,Glu)的浓度,研究结果为进一步探讨丹参脂溶性成分治疗糖尿病性视网膜病变作用机制提供了一定的实验依据。     

通窍活血方对体外培养的视网膜Müller细胞缺氧状态下谷氨酸摄取功能的影响

目的:观察在缺氧条件下视网膜Müller细胞谷氨酸(Glu)摄取功能的改变,以及通窍活血中药复方对这种改变的影响。方法:体外纯化培养SD大鼠视网膜Müller细胞7d至P2代,分6组,分别采用空白血清、含药血清、空白血清与不同剂量连二亚硫酸钠、含药血清与不同剂量连二亚硫酸处理,测定视网膜Müller细胞在各实验条件下谷氨酸(Glu)摄取功能。结果 :缺氧条件下Müller细胞Glu摄取功能较正常状态下明显下降(P0.05);与缺氧组比较,经通窍活血中药复方含药血清干预后缺氧条件下Müller细胞Glu摄取功能明显升高(P0.05)。结论:通窍活血中药复方含药血清可明显改善缺氧条件下Müller细胞Glu摄取功能,这可能是通窍活血复方对青光眼患者视神经保护的药物干预途径之一。     

补肾活血法对Müller细胞谷氨酸摄取功能的影响

目的 探讨补肾活血中药含药血清对高糖条件下Müller细胞谷氨酸(Glutamate,Glu)摄取功能的影响.方法 以改良酶消化法体外培养大鼠Müller细胞;根据[3H]标记的D,L- Glu摄入量判断Müller细胞的Glu摄取功能.结果 在高糖条件下Müller细胞的Glu摄取功能一过性提高,随时间推移其对Glu的摄取功能又明显下降;中药含药血清对正常条件下Müller细胞Glu摄取功能的提高在用药后24小时时段最为明显,对高糖条件下Müller细胞Glu摄取功能的提高在用药后48小时时段最为明显.结论 高糖条件所引起的Müller细胞糖酵解在短时间内旺盛可能是Müller细胞Glu摄取功能一过性提高的原因之一;Müller细胞对短期高糖条件可能有一定耐受性,持续的高糖最终会导致Müller细胞的损伤;中药含药血清可减轻高糖条件下Müller细胞Glu摄取功能的下降,这可能是补肾活血法防治糖尿病视网膜病变的干预途径之一.     

人参皂苷对糖基化终末产物条件下视网膜Müller细胞活力的影响

目的：探讨人参皂苷对糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法：以改良酶消化法培养SD大鼠视网膜Müller细胞,将纯化培养的视网膜Müller细胞分别置于低剂量AGEs（终质量浓度为75 mg·L^-1）及高剂量AGEs（终质量浓度为150 mg·L^-1）下进行培养,并分别以人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁及人参皂苷提取物干预。在干预24,48,72 h后以酶联免疫吸附法测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的漏出量,以推测Müller细胞活力。结果：低AGEs组24,48 h的LDH漏出量较正常对照组均无明显差异,但72 h的LDH漏出量较正常对照组增多（P<0.05）;高AGEs组各时段LDH漏出量均较正常对照组以及低AGEs组增多（P<0.05）;人参皂苷Rg₁,Re,Rb₁及人参皂苷提取物均能减少低AGEs组48,72 h的LDH漏出量（P<0.05）,减少高AGEs组各时段的LDH漏出量（P<0.05）。结论：AGEs能明显增加视网膜Müller细胞膜的通透性,降低细胞活力,并且与干预的时间、浓度有关;人参皂苷Rg₁,Re,Rb₁及人参皂苷提取物能降低本实验中AGEs条件下Müller细胞膜的通透性、提高Müller细胞膜稳定性,增强细胞活力,尤其以人参皂苷提取物效果显著。     

活血解毒方对糖尿病视网膜病变细胞凋亡及相关细胞因子的影响

目的观察中药复方活血解毒方(HXJD)对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡及凋亡相关因子NF-κB和Caspase-3 mRNA和蛋白表达的影响。方法采用链脲佐菌素(65 mg/kg)一次性腹腔注射的方法,建立糖尿病大鼠模型,将50只SD大鼠随机分为模型组和HXJD高剂量组(15.4 g/kg)、中剂量组(7.70 g/kg)、低剂量组(3.85 g/kg)及导升明组(0.167 g/kg),每组10只,另设10只正常对照组。造模成功后,灌胃给药,20周后处死动物。应用TUNEL法检测细胞凋亡程度,免疫组化和蛋白印迹技术检测视网膜全层中NF-κB和Caspase-3的表达;采用Real-time PCR法检测视网膜NF-κB和Caspase-3 mRNA的表达。同时,体外培养大鼠视网膜神经节细胞株(RGC-5),制备HXJD含药血清。利用55.5 mmol/L葡萄糖浓度模拟高糖环境诱导,将细胞分为5组:空白组、高糖组、含药血清低剂量组、含药血清中剂量组、含药血清高剂量组。采用CCK-8和AnnexinⅤ-FITC法检测不同血清干预高糖诱导下RGC细胞24 h增殖活性及细胞凋亡的影响。结果与正常对照组比较,模型组凋亡细胞增加,大鼠视网膜组织NF-κB和Caspase-3蛋白及mRNA的表达明显升高(P0.05);与模型组比较,活血解毒方各剂量组和导升明组视网膜细胞凋亡的程度、视网膜NF-κB和Caspase-3蛋白和mRNA的表达量均降低(P0.05)。与空白组比较,高糖组细胞活性降低,细胞凋亡比例增加(P0.05)。与高糖组比较,含药血清高、中剂量组细胞活性增高(P0.05),含药血清各剂量组细胞凋亡比例减少(P0.05,P0.01)。结论活血解毒方可能通过改善糖尿病大鼠视网膜中细胞凋亡的相关细胞因子NF-κB和Caspase-3的表达,同时调节视网膜神经节细胞活力,改善高糖条件下RGC细胞的凋亡程度。     

补肾活血中药血清对高糖条件下纯化培养的视网膜神经节细胞Glu释放量的影响

目的探讨稳定高糖及糖波动条件对体外纯化培养的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)谷氨酸(glutamate,Glu)释放量的影响,以及补肾活血中药的干预作用。方法采用抗体联合两步纯化法培养新生Sprague-Dawley(SD)大鼠RGCs,将其分别置于模拟正常条件、稳定高糖条件及糖波动条件下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、正常中药干预组,稳定高糖组、稳定高糖中药干预组、糖波动组、糖波动中药干预组;分别在试验干预24、48、72h后,用全自动氨基酸分析仪测定各组细胞外液中Glu的含量(mg/L),采用SPSS13.0软件对所得数据进行统计学分析。结果糖波动组24h时RGCs的Glu释放量[(256.33±25.73)mg/L]较同期正常对照组[(134.22±9.14)mg/L]及稳定高糖组[(141.17±22.13)mg/L]均明显增加(P0.05)。正常中药干预组的Glu释放量在24h[(124.50±10.30)mg/L]及72h[(30.17±2.97)mg/L]时段均较正常对照组降低(P0.05);稳定高糖中药干预组24h[(127.50±16.94)mg/L]、48h[(26.17±3.99)mg/L]及72h[(27.67±3.49)mg/L]时段的Glu释放量均较稳定高糖组降低(P0.05);糖波动中药干预组RGCs的Glu释放量在24h[(228.33±18.41)mg/L]、72h[(28.00±2.41)mg/L]均较糖波动组降低(P0.05)。结论糖波动条件能明显增加RGCs的Glu释放量,导致大量Glu在细胞外聚积,细胞外高浓度Glu聚积最终引发RGCs神经兴奋性毒性,加剧细胞损害;补肾活血中药能在一定程度降低稳定高糖及糖波动条件下RGCs的Glu释放量,减轻Glu神经兴奋性毒性作用对RGCs的损伤,这可能是补肾活血中药防治糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DRP)的药物干预途径之一。     

活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察中药复方活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白表达的影响。探讨中医药治疗糖尿病视网膜病变(DR)的机制。方法:采用链脲佐菌素(65mg/kg)一次性腹腔注射的方法,建立糖尿病大鼠模型,将78只SD大鼠随机分为模型组和活血解毒方高剂量组(15.4g/kg)、中剂量组(7.70g/kg)、低剂量组(3.85g/kg)及导升明组(0.167g/kg),每组13只,另设13只正常对照组。造模成功后,灌胃给药,24周后处死动物。检测血清和视网膜全层中VEGF的表达;采用Real-time PCR法检测视网膜VEGF mRNA的表达。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠血清中VEGF的含量增加(P<0.01),与模型组相比,各用药组VEGF的含量均下降,但差异无统计学意义。与正常对照组相比,模型组的视网膜全层VEGF表达增加(P<0.01),各用药组与模型组相比显著降低(P<0.01)。与正常对照组相比,模型组的VEGF mRNA表达升高,而各用药组的表达比模型组降低(P<0.01)。结论:活血解毒方可能通过降低糖尿病大鼠视网膜VEGF的表达,延缓DR的发生和发展。     

恒河猴PCO模型卵巢VEGF mRNA的表达及中药补肾活血方对其影响的实验研究

目的：探讨恒河猴PCO模型卵巢局部血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达及中药补肾活血方对其影响。方法：选择健康育龄雌性恒河猴（6只）随机分为正常对照组、模型对照组、中药组；采用皮下注射丙酸睾丸酮和绒毛膜促性腺激素建立PCO模型，分别灌胃给予生理盐水、补肾活血方，采用原住杂交技术观察其卵巢局部VEGF mRNA表达的变化。结果：在正常卵巢组织可见VEGF mRNA表达的信号；恒河猴PCO模型卵巢组织中，VEGF mRNA在卵泡膜细胞及间质细胞异常高表达；补肾活血方能降低这种异常表达。结论：恒河猴PCO模型卵巢局部VEGF mRNA异常表达，补肾活血方具有改善这种异常表达作用，可能是其促进卵巢排卵的机制之一。     

黄芪、丹参、山药及其复方对高糖所致雪旺细胞凋亡的保护作用

目的:观察中药对高葡萄糖条件下与内皮细胞(以下简称EC)共培养的雪旺细胞(以下简称SC)凋亡的干预作用。方法:建立大鼠SC与EC的共培养模型,根据存活率(形态学和MTT)筛选药物最有效作用浓度。将细胞分为正常共培养SC组、高糖共培养SC组、高糖黄芪组、高糖丹参组、高糖山药组、高糖复方组,通过凋亡率(流式细胞仪)和凋亡相关基因Bcl-2和Casepase-3的mRNA(Realtime PCR)和蛋白(Western Blot)的表达观察细胞凋亡。结果:与正常共培养组相比高糖共培养组SC凋亡率明显增高、Bcl-2mRNA和蛋白表达量明显减少,Casepase-3mRNA和蛋白表达量显著增加。加中药干预后SC凋亡率都明显降低,Bcl-2mRNA和蛋白表达量都明显增加,除高糖山药组Casepase-3mRNA减少和高糖丹参组Casepase-3蛋白减少无明显统计学意义,其余各组Casepase-3mRNA和蛋白表达量均显著减少。中药干预组之间比较,高糖复方组作用最显著。中药干预组与正常组相比,SC凋亡率无明显增高,Bcl-2mRNA和蛋白表达量明显减少,Casepase-3mRNA和蛋白表达量显著增加。结论:中药对高糖环境下与内皮细胞共培养的雪旺细胞的凋亡有保护作用,不同中药作用效果不同,复方效果最佳。     

肾络通对高糖培养足细胞VEGF和Flt-1的影响

目的:探讨肾络通对高糖培养足细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体(vascular endothelial growth factor receptor-1,VEGFR1/Flt-1)的影响。方法:将12只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组和低、中、高剂量中药组。对照组给予生理盐水,处理组给予不同剂量的肾络通中药灌胃,各组均在灌胃3 d后心脏无菌取血制备中药血清,小鼠足细胞的培养分为空白对照组、高糖组、正常鼠血清对照组和低、中、高剂量中药血清组,刺激24 h后采用免疫细胞化学(immunocytochemistry)、免疫印迹(western blot)、荧光实时定量PCR(Real-time PCR)法观察VEGF、Flt-1表达的变化。结果:VEGF、Flt-1在高糖组和正常鼠血清组小鼠足细胞均可见阳性表达,中药血清组的足细胞VEGF、Flt-1蛋白和mRNA均较高糖组和正常鼠血清组降低,差异有统计学意义。结论:肾络通可抑制高糖环境下足细胞VEGF、Flt-1的表达,减轻足细胞的损伤,保护肾功能。     

补肾活血方对大鼠骨折模型的愈合作用及对BMP-2、VEGF及TGF-β1表达的影响

目的观察补肾活血方对大鼠骨折模型的愈合作用及对骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法将60只SPF级雄性SD骨折模型大鼠随机分为模型组、中药组和阳性组,模型组给予0.9%氯化钠注射液灌胃,中药组给予补肾活血方灌胃,阳性组给予伤科接骨片灌胃。分别于2周和4周后比较各组大鼠骨组织HE染色、血液流变学指标、ELISA法检测血清炎症因子表达水平和BMP-2、VEGF及转化生长因子β1表达水平,RT-PCR检测BMP-2、VEGF及转化生长因子β1mRNA表达水平。结果模型组骨组织可见破裂、不完整的软骨、纤维性骨痂、炎性细胞浸润、血管生成增多,少量骨小梁形成,大量成骨细胞和成软骨细胞,干预后中药组和阳性组炎性细胞减少,软骨形态有所恢复,纤维性骨痂、软骨细胞减少。干预后中药组和阳性组血浆黏度、全血黏度高切和红细胞聚集指数明显低于模型组,且第4周,中药组显著低于阳性组(P 0.05)。干预后中药组和阳性组血清IL-6和TNF-α水平明显低于模型组,IL-10水平明显高于模型组,且第4周,中药组显著低于阳性组(P 0.05)。干预后中药组和阳性组血清BMP-2、VEGF和TGF-β1及其骨组织mRNA水平明显高于模型组,中药组明显高于阳性组,第4周中药组和阳性组血清BMP-2和TGF-β1及其骨组织mRNA水平明显低于第2周,血清VEGF及其骨组织mRNA水平明显高于第2周(P 0.05)。结论补肾活血方可促进大鼠骨折模型的愈合,其机制可能与改善血液流变学指标,减轻炎症反应,提高BMP-2、VEGF和TGF-β1水平表达有关。     

补肾活血中药对糖尿病大鼠视网膜胶质纤维酸性蛋白的影响

目的：探讨补肾活血复方制对糖尿病大鼠视网膜保护作用的机制。方法：以链脲佐菌素赞成大鼠糖尿病模型,免疫组化方法显示视网膜上胶质纤维酸性蛋白的表达,利用微机图像分析技术进行测定,结果：在病程6个月时,视网膜上胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的染色强度中药中剂量组明显高于正常对照组,中药高剂量组明显高于其余各实验组,结论：补肾活血中药可诱导糖病大鼠视网膜Mueller细胞发生反应性星形胶质化,提示Mueller细胞反应性星形胶质化可能对糖尿病视网膜损伤具有保护作用。     

益气养阴活血方药对高糖培养下视网膜神经节细胞生长抑制作用的影响

目的：观察益气养阴活血中药对高糖条件下大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）生长抑制作用的影响。方法：体外培养新生大鼠视网膜神经节细胞,分为正常对照组、正常中药干预组、高糖组及高糖中药干预组。应用CCK-8测定各组RGCs不同培养时间的细胞生长抑制率。结果：高糖对RGCs呈时间依赖性抑制其生长（P〈0．01）,益气养阴活血中药血清可降低高糖培养下RGCs的生长抑制率（P〈0．01）。结论：益气养阴活血中药能在一定程度上减轻高糖对视网膜神经节细胞的生长抑制作用,对高糖条件下RGCs具有保护作用。     

补肾中药复方对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠骨和肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠骨、肾组织同源异形盒基因5(Dlx5 mRNA)及蛋白表达,探讨GIOP的发病机制、补肾中药复方的疗效机制及其与健脾、活血中药复方及骨疏康颗粒的比较。方法:肌肉注射地塞米松复制GIOP大鼠模型,实验设正常组、模型组、补肾组、健脾组、活血组、阳性对照组。造模及灌胃给药9周。测定股骨骨密度,RT-PCR及Western Blot检测骨、肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组股骨骨密度明显降低(P0.01)、骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显降低(P0.01)、肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,补肾组及阳性对照组股骨骨密度明显升高(P0.01)、骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显上调(P0.01)、肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显下调(P0.01)。结论:骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达降低、肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达升高可能是GIOP的发病机制之一;补肾中药复方可能通过上调骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达、下调肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达,有效防治GIOP。     

补肾活血方干预高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞损伤的研究

目的在细胞水平探索补肾活血方干预高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞损伤的研究。方法在体外实验中采用高糖高脂刺激小鼠脑微血管内皮细胞。实验分组为:空白对照组、模型组[25 mmol/L葡萄糖(HG),200μmol/L棕榈酸(PA)]、补肾活血方30、60、120 mg/L组。CCK-8细胞增殖实验方法检测补肾活血方对高糖高脂诱导的细胞存活率的影响;采用试剂盒检测各组细胞部分氧化应激因子[活性氧(ROS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、一氧化氮(NO)、血管内皮生长因子(VEGF)]、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)和部分炎症因子[IL-6、细胞黏附因子1 (ICAM-1)、TNF-α、转化生长因子β1(TGF-β_1)]的含量变化。采用实时荧光定量PCR法检测iNOS和TNF-αmRNA表达。结果 (1)与空白对照组(100%±2.3%)比较,模型组细胞的细胞存活率显著降低(62.6%±0.5%,P0.01);与模型组比较,补肾活血方30、60、120 mg/L组细胞的存活率显著升高[(70.5%±4.0%),(76.3%±2.8%),(80.5%±2.7%),P0.05,P0.01]。(2)与空白对照组比较,模型组细胞的部分氧化应激因子(ROS、iNOS、NO、VEGF)、MMP-2、MMP-9、TIMP-1以及炎症相关因子(IL-6、ICAM-1、TNF-α、TGF-β_1)含量显著上升(P0.05,P0.01)。与模型组比较,补肾活血方30、60、120 mg/L组作用后各检测因子的表达降低(P0.05,P0.01)。(3)荧光定量PCR结果显示,与空白对照组比较,模型组iNOS和TNF-αmRNA表达均增加(P0.01),与模型组比较,BSHX 120 mg/L组iNOS mRNA表达及BSHX 60、120 mg/L组TNF-αmRNA表达均降低(P0.05,P0.01)。结论高糖高脂能够促进ROS、iNOS、NO、VEGF、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和部分炎症因子等相关指标的表达,使细胞活力降低,而补肾活血方可以改善高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞的损伤。