低剂量白细胞介素17A对糖尿病肾病大鼠肾功能保护作用的研究

目的 观察并探讨小剂量白细胞介素17A对糖尿病大鼠肾脏的保护作用.方法 雄性SD大鼠45只,随机分3组:正常对照组、DN组及IL-17A组.DN组及IL-17A组均以高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病肾病大鼠模型.IL-17A组给予小剂量IL-17A重组蛋白,连续给药12周后,下腔静脉取血,检测糖化血红蛋白、肌酐、尿素氮等;将大鼠放入水平代谢笼中收集各组大鼠24h尿液,测定大鼠24h尿蛋白;实时荧光定量PCR检测肾组织炎症因子表达;Western blot测定IL-17A蛋白表达情况.结果 DN组及IL-17A组尿蛋白、HbA1c、肌酐、尿素氮均显著高于正常对照组(P＜0.05);IL-17A组尿蛋白、肌酐、尿素氮均显著低于DN组(P＜0.05).DN组大鼠在注射IL-17A后促炎因子表达显著减少,抑制性炎症因子表达显著降低.糖尿病肾病模型大鼠IL-17A蛋白显著减少.结论 IL-17A具有改善糖尿病肾病大鼠肾功能作用,并有可能逆转糖尿病肾病,是治疗糖尿病肾病的有效靶点.     

山奈酚减轻人角质形成细胞氧化应激损伤

目的 探究驱虫斑鸠菊成分山奈酚(KP)在人角质形成细胞系(HaCaT)中的抗氧化作用及作用机制.方法用选择性反应/多反应监测技术定量分析驱虫斑鸠菊种子黄酮类物质.将HaCaT细胞分为对照组、模型组[用2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(AAPH)处理HaCaT细胞,构建氧化应激模型]、不同浓度山奈酚干预组;CCK...     

MiR-146a-5p对高脂饮食/链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病大鼠肾组织的保护作用

目的:探究miR-146a-5p对高脂饮食(HFD)和链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)大鼠肾的保护作用及其作用机制.方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、miR-146a-5p阴性对照组(mimic对照组)和miR-146a-5p mimic处理组(mimic处理组).测量各组大鼠体质量及最后24 h饮...     

红薯叶黄酮对糖尿病模型大鼠肾的保护作用

目的探讨红薯叶黄酮对糖尿病模型大鼠肾的保护作用及其可能机制。方法采用链脲佐菌素(STZ65mg/kg)腹腔注射复制糖尿病大鼠模型,并以不同剂量的红薯叶黄酮灌胃,给药8周后检测相关指标,光镜观察肾组织形态学变化。采用原位末端标记法检测大鼠肾细胞凋亡指数,以免疫组织化学法检测Bcl-2/Bax的表达。结果红薯叶黄酮可降低糖尿病大鼠血糖、血尿素氮、尿微量白蛋白、血肌酐、肾重/体重比值和肌酐清除率水平(P<0.01),呈剂量效应关系。与模型组相比,高剂量红薯叶黄酮组大鼠肾小球结构病理改变明显减轻,且凋亡细胞数减少、Bax表达减弱、Bcl-2表达增强、Bax/Bcl-2降低(P<0.01)。结论红薯叶黄酮可能通过调节凋亡相关基因bax和bcl-2表达而减少肾细胞凋亡,从而发挥保护肾脏作用。     

人参皂甙Rg1对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用的机制研究

观察人参皂甙Rg1对糖尿病大鼠肾脏的保护作用,采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射建立糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠模型,给药8周后处死各组大鼠,行肾功和24 h尿蛋白定量检查;高碘酸-希夫(氏)染色剂染色(periodic acid-Schiff,PAS)观察肾组织的病理变化;采用免疫散射比浊法检测血C-反应蛋白(cross reaction protein,CRP)水平;免疫放射法检测血肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)水平;免疫组织化学法检测单核/巨噬细胞表面特异性标志抗原(ectodermal dysplasia,ED-1)的表达;行酶联免疫吸附法(en-zyme-linked i mmunosorbent assay,ELISA)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测肾组织转化生长因子-β1(trans-forming growth factor-β1,TGF-β1)水平。给予人参皂甙Rg1治疗的DN大鼠肾脏病理改变明显减轻,血肌酐、24 h尿蛋白、血CRP、TNF-α、ED-1、TGF-β1较模型...     

Netrin-1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的:研究netrin-1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法:用高糖培养人肾小管上皮HK-2细胞,real-time PCR和Western blot测定细胞中netrin-1的表达水平。用过表达netrin-1慢病毒感染HK-2细胞,检测其对高糖环境下HK-2细胞中netrin-1表达的影响。流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定cleavedcaspase-3蛋白水平,2,4-二硝基苯肼法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸法检测培养液中丙二醛(MDA)含量,ELISA法测定培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果:高糖处理后的HK-2细胞中netrin-1的mRNA和蛋白水平均明显下调(P 0.05)。过表达netrin-1慢病毒能够上调高糖环境下HK-2细胞中netrin-1的表达水平(P 0.05)。高糖可促进肾小管上皮细胞分泌IL-1β和TNF-α,提高细胞培养液中LDH和MDA的水平(P 0.05),使肾小管上皮细胞的caspase-3活化并诱导细胞凋亡;上调netrin-1的HK-2细胞经高糖诱导后,细胞分泌的IL-1β和TNF-α减少,细胞中活化的caspase-3蛋白水平降低,培养液中LDH和MDA水平降低,细胞凋亡减少(P 0.05)。结论:上调netrin-1减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞氧化损伤和炎性损伤,减少细胞凋亡。     

大豆异黄酮保护糖尿病肾病大鼠肾脏炎症及氧化应激损伤的研究

目的研究大豆异黄酮(SI)保护糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏炎症及氧化应激损伤的研究。方法用链脲佐菌素腹腔内注射建立大鼠DN模型,并随机分为对照组、DN组和SI组,每组20只。模型构建8周后处死大鼠,肾脏称重计算肾体比,HE法检测各组肾脏病理改变;采用化学比色法检测血清和肾脏超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)活性、总抗氧化能力(T-AOC)和晚期氧化蛋白产物(AOPPs)水平;ELISA法测定血清和肾脏TNF-α、IL-Iβ、IL-6水平。结果苏木素-伊红(HE)染色观察到,SI可以有效缓解肾小管损伤、肾小球系膜和基底膜的增生情况,减轻肾小管上皮水肿。与DN组相比,SI组SOD活性和T-AOC水平显著升高,MDA、血清AOPPs水平降低;血清TNF-α、IL-Iβ和IL-6含量显著降低(P<0.05)。结论大豆异黄酮具有抗炎抗氧化的作用,能够有效保护糖尿病肾病大鼠的肾脏中氧化应激及炎症反应。     

左卡尼汀对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护机制研究

目的:探讨左卡尼汀(L-carnitine,LC)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏保护的分子机制。方法:对雄性Sprague-Dawley大鼠腹腔注射STZ(65 mg/kg)建立糖尿病模型,造模成功大鼠给予LC(50 mg·kg~(-1)·d~(-1)或200 mg·kg~(-1)·d~(-1))12周治疗,检测各组大鼠的肾功能、24 h尿蛋白排泄率和肾小球硬化程度;免疫组化和Western blot法分别检测炎性因子、致纤因子、核因子κB和细胞凋亡调控基因的表达。结果:LC治疗可明显减轻糖尿病大鼠肾小球硬化,保持足细胞数量,这些改变伴随着尿蛋白排泄率的减少和肾功能的改善。在分子水平上,LC可下调炎性介质和致纤因子的表达,调节细胞凋亡调控基因的表达,此作用可能与干预核因子κB信号通路有关。结论:LC对STZ诱导的DN大鼠具有抗炎、抗肾小球硬化的肾脏保护作用。     

EGFR在高糖诱导下人肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的观察EGFR信号通路对高糖诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响和机制。方法体外培养HK-2细胞,将细胞分为4组:对照组、渗透压对照组、高糖组和高糖加EGFR抑制剂AG1478组。用Western blot检测p-EGFR、total EGFR、cleaved caspase-3、BAX、BCL-2及β-actin的蛋白表达,四唑盐比色法(MTT)检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组和渗透压对照组相比,高糖组HK-2细胞EGFR活性、cleaved caspase-3表达、BAX/BCL-2比值和内质网应激(ERS)明显升高,细胞活性降低(P0.01)。EGFR抑制剂AG1478能够明显抑制高糖诱导的HK-2细胞EGFR活化和细胞凋亡(P0.05),提高细胞活性(P0.05),同时抑制内质网应激(P0.05)。结论抑制EGFR活性能够减少高糖诱导的HK-2细胞凋亡,这可能是通过减少内质网应激实现的。     

Pathobiochemical aspects of diabetic nephropathy

Summary Diabetic nephropathy develops in many diabetic patients as consequence of glomerulosclerosis. On the basis of a series of recent observations it is suggested that a combination of metabolic and hemodynamic changes is responsible for the pathogenesis of diabetic nephropathy. Since the glomerular filtration unit has been characterized to consist of collagen type IV and minor components like laminin, fibronectin and heparan sulfate proteoglycan, influence of diabetes on basement membrane (BM) components has been studied. Biochemical alterations of glomerular BM consist of an increased nonenzymatic glucosylation of type IV collagen leading to unphysiological crosslinking. This, in turn, may result in alteration of the size selective properties of the glomerular filtration unit. Changes in composition of glomerular BM have recently been described. An increased synthesis of type IV collagen with concomitant decrease of heparan sulfate proteoglycan may lead to alteration of the charge selective barrier and consequently to increased permeability of the glomerular BM. Permanently unbalanced synthesis of BM components finally results in obliteration of the capillary lumen. In late state nephropathy intrinsic basement membrane components are no longer produced. Instead, massive accumulation of PAS positive material occurs.Abbreviations BM basement membrane - AGE advanced glucosylation end products - IgG immunglobulin G - HSPG heparan sulfate proteoglycan     

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂伊贝沙坦对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂伊贝沙坦对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其相关机制。方法:将40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、伊贝沙坦组和卡托普利组4组,每组10只。12周终止实验处死大鼠,取血、尿和肾脏标本,测定尿量、体重、肾重/体重、血糖、糖化血红蛋白(HbAlc)、内生肌酐清除率(Ccr)、尿白蛋白排泄率(UAR)和尿β₂-微球蛋白(β₂-MG);测定血液、尿液和肾组织的一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)含量。结果:12周终止实验时,糖尿病各组大鼠的尿量、肾重/体重、血糖、HbAlc、UAR、β₂-MG、Ccr、血液、尿液和肾脏组织的NO和ET-1水平均明显高于或大于正常组,体重明显低于正常组(P<0.01);伊贝沙坦组和卡托普利组大鼠的血液、尿液和肾脏组织的NO和ET-1水平、UAR、β₂-MG、Ccr明显少于糖尿病组(P<0.05);血液、尿液和肾组织NO和ET-1水平与尿白蛋白排泄率、内生肌酐清除率和β₂微球蛋白呈正相关。结论:伊贝沙坦能延缓糖尿病大鼠肾脏功能损害的进展,其机制可能与伊贝沙坦不同程度地抑制糖尿病大鼠NO和ET-1的产生有关。     

阿托伐他汀对碘普罗胺引起的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

 目的：观察糖尿病大鼠造影剂急性肾损伤(CI-AKI)发病过程中肾小管上皮细胞凋亡变化,并探讨阿托伐他汀对碘普罗胺引起的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法：腹腔单剂量注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,饲养8周后糖尿病大鼠随机分为6组：空白对照组(N组)、糖尿病对照组(DM组)、糖尿病+造影剂组(DM+CM组)、糖尿病+造影剂+5 mg·kg-1·d-1阿托伐他汀组(ATO1组)、糖尿病+造影剂+10 mg·kg-1·d-1阿托伐他汀组(ATO2组)和糖尿病+造影剂+30 mg·kg-1·d-1阿托伐他汀组(ATO3组)。注入碘普罗胺注射液24 h后收集尿标本,检测尿肌酐(UCr)以及24 h尿微量白蛋白(24 h-UAlb),记录24 h尿量并计算尿微量白蛋白排泄率(24 h-UAER)。注射碘普罗胺后48 h收集血标本,检测血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN),并计算内生肌酐清除率(CCr)。处死大鼠,摘取肾脏左肾行组织病理学分析,TUNEL检测凋亡情况及免疫组织化学法检测肾髓质Bax和Bcl-2蛋白的表达,并留取右肾,采用免疫印迹技术法检测肾髓质的Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果：与N和DM组比较,DM+CM组注入造影剂后SCr、BUN和24 h-UAER水平明显升高(P＜0.05),Ccr水平明显下降,肾小管上皮细胞的凋亡明显增加,肾髓质Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降;与DM+CM组比较,ATO1、ATO2和ATO3组注入造影剂后SCr、BUN和24 h-UAER水平均有下降,CCr升高,肾小管上皮细胞的凋亡明显减少,肾髓质Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达升高,且ATO3组的变化更为明显。结论: 碘普罗胺可诱导糖尿病大鼠肾小管上皮细胞的凋亡;阿托伐他汀能改善碘普罗胺引起的糖尿病大鼠肾功能损伤,此保护作用可能与之抑制碘普罗胺诱导的肾小管上皮细胞凋亡有关,且这种保护作用有剂量依赖性。     

阿托伐他汀对糖尿病大鼠肾脏保护作用及其机制探讨

目的：探讨阿托伐他汀对糖尿病大鼠肾脏保护作用和其机制。 方法: 酶联免疫吸附（ELISA）法测定各组大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中NF-κB活性；免疫组化检测各组肾组织NF-κB、纤粘蛋白（FN）的表达。 结果:糖尿病组PBMCs中NF-κB活性、肾小球中NF-κB和FN表达高于对照组（P<0.01），阿托伐他汀明显抑制NF-κB活化，降低FN表达（P<0.05），减少24　h尿蛋白排泄（P<0.01），改善肾功能指标及肾组织病理学损害。 结论： NF-κB在糖尿病肾病发病中具有重要作用。阿托伐他汀对糖尿病肾病具有明显防治作用,抑制NF-κB的活化和降低血脂可能是他汀类药物发挥肾脏保护作用的机制。     

Beneficial effects of thiazolidinediones on diabetic nephropathy in OLETF rats

PURPOSE: Diabetic nephropathy is the most serious of complications in diabetes mellitus. Thiazolidinedione (TZD) is thought to ameliorate diabetic nephropathy; however, the mechanism underlying this effect has not been elucidated. We hypothesized that the vascular endothelial growth factor (VEGF) participates in the pathogenesis of diabetic nephropathy and that TZD may be beneficial for the treatment of diabetic nephropathy because of the effect it has on VEGF. MATERIALS AND METHODS: 23 Otsuka- Long-Evans-Tokushima-Fatty (OLETF) rats and eight control Long-Evans-Tokushima-Otsuka (LETO) rats were divided into the following four groups: LETO group, control OLETF group, pioglitazone treated group (10mg/ kg/day), and rosiglitazone treated group (3mg/kg/day). RESULTS: A progressive increase in urinary protein excretion was observed in the diabetic rats. Glomerular VEGF expression in the control OLETF rats was significantly higher than in the control LETO rats. However, there was a significant reduction in both the glomerular VEGF expression and the VEGF mRNA levels after treatment with pioglitazone and rosiglitazone. The twenty-four hour urine protein levels were significantly decreased in both groups of the treated OLETF rats. CONCLUSION: These results suggest that TZD may have beneficial effects on diabetic nephropathy by reducing the VEGF expression.     

银杏叶提取物对糖尿病大鼠睾丸损伤的作用

目的:研究银杏叶提取物(GBE)对糖尿病所致的睾丸损伤的作用及其机制。方法:用光镜及透射电镜观察链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病1个月大鼠睾丸的形态学改变,并测定睾丸组织丙二醛(MDA)、NO产物NO₂^-/NO₃^-的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)的活性。 结果:①糖尿病大鼠睾丸组织光镜下主要表现为睾丸曲细精管萎缩、变形及生精上皮脱落,透射电镜下主要见到支持细胞浆内内质网扩张、脂滴空泡形成,溶酶体明显减少,银杏叶组大鼠睾丸组织光镜、透射电镜下上述病变明显改善。②睾丸组织的MDA、NO₂^-/NO₃^-含量及tNOS和iNOS活性银杏叶组低于糖尿病组,SOD活性银杏叶组高于糖尿病组。 结论:GBE对糖尿病所致的睾丸损伤有明显的保护作用,其作用机制与提高SOD活力减少MDA产生,抑制iNOS活力减少NO产生有密切关系。     

降糖甲片联合二甲双胍治疗对糖尿病肾病发生的影响

目的:探讨降糖甲片联合二甲双胍治疗对减少糖尿病肾病发生的作用。方法:采用随机对照临床试验的方法,将入选的糖尿病患者38例随机分为降糖甲片联合二甲双胍组或单纯二甲双胍组接受治疗(n=19)。对每位病人作指标检测及记录,持续观察12个月。结果:降糖甲片联合二甲双胍治疗在减少糖尿病肾病的发生方面优于单纯二甲双胍组。结论:中西医结合治疗早期干预可减少糖尿病肾病的发生。     

糖尿病大鼠膈肌功能和形态学变化

目的:观察四氧嘧啶诱导的糖尿病4周大鼠膈肌收缩功能和形态结构的改变。方法:应用体外大鼠膈肌肌条,对其单收缩动力学、最大强直张力(P₀)、张力-频率曲线、疲劳指数(FI)的变化以及应用H.E、Heidenhain铁矾苏木素法和标准脱氢酶染色法对膈肌组织的形态学变化进行观察。结果:糖尿病大鼠膈肌最大颤搐张力(Pt)、收缩时间(CT)、半舒张时间(RT_1/2)及FI均明显低于对照组,而两组P₀无明显变化。予25、50、75、100、125Hz频率刺激膈肌时,糖尿病大鼠膈肌张力明显低于对照组。在膈肌疲劳后予氨茶碱浸浴膈肌,再予25、50、75、100和125Hz频率分别刺激膈肌,糖尿病大鼠膈肌张力均明显低于对照组。H.E及Heidenhain法染色可见糖尿病大鼠膈肌萎缩,肌横纹模糊。标准脱氢酶染色法显示糖尿病大鼠膈肌α-甘油磷酸脱氢酶呈弱阳性,光密度明显低于对照组(P＜0.01)。结论:糖尿病4周大鼠膈肌出现收缩功能减弱、易疲劳和结构破坏。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾脏组织细胞膜胰岛素受体及其底物-1蛋白表达的影响

目的:研究血管紧张素转换酶抑制剂苯那普利对糖尿病大鼠肾脏组织细胞膜胰岛素受体(IR)及其底物-1(IRS-1)蛋白表达的影响。方法:实验大鼠随机分3组:对照组(n=6);糖尿病组(n=7)及糖尿病+苯那普利治疗组(n=7)。4周后观察各组体重、肾重及肾重/体重之比的变化,应用荧光分光光度法测定血浆、肾脏组织血管紧张素转换酶(ACE)活性,Western杂交检测肾脏组织细胞膜IR及IRS-1蛋白表达。结果:苯那普利治疗4周后对糖尿病肾脏肥大有显著抑制作用,对血浆、肾脏组织ACE活性抑制分别达92.00%,88.77%。Western杂交显示糖尿病状态下肾脏组织细胞膜IR及IRS-1蛋白表达比对照组分别高2.1与1.5倍,苯那普利治疗4周可使IR及IRS-1蛋白表达分别低45.74%和47.66%。结论:糖尿病状态下肾脏组织细胞膜IR及IRS-1蛋白表达增加可能与肾脏组织糖代谢异常活跃有关,苯那普利下调IR及IRS-1蛋白表达可能是其对糖尿病肾脏保护作用的重要机制之一。