人肝癌中p57kip2 mRNA及其蛋白表达研究

【目的】研究p57kip2基因在人体肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)不同阶段的mRNA和蛋白表达情况,以探讨HCC发生的分子生物学机制。【方法】运用原位分子杂交和免疫组化技术分别检测30例正常肝组织、30例癌周肝硬化和30例肝癌组织中p57kip2mRNA及P57kip2蛋白的表达情况。【结果】p57kip2mRNA表达:正常肝组织组未见表达,癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率分别为33.33%和16.67%。肝癌组分化好和分化差阳性表达率之间差异有统计学意义,相关分析呈正相关。P57kip2蛋白表达:正常肝组织组未见表达;癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率分别为56.67%和63.33%。肝癌组分化好者与分化差者阳性表达率之间差异有统计学意义,相关分析呈正相关。【结论】p57kip2基因mRNA和蛋白表达缺失或下降与HCC分化程度低呈正相关,提示p57kip2基因的失活可能是进展期HCC的晚期分子事件,并可能是一个新的预后指标。     

子痫前期患者胎盘组织PHLDA2基因印迹初步研究

目的 观察子痫前期患者胎盘组织母源性印迹基因PHLDA2印迹状态.方法 收集21例正常妊娠和19例子痫前期患者胎盘组织,抽提样本DNA,PCR扩增,选择PHLDA2基因组变异比例较高的单核苷酸多态性(SNP)位点:rs13390为外显子1中C/T多态性(PHLDA2-1),rs1056819为外显子2中G/A多态性(PHLDA2-2),直接测序筛选杂合子.将杂合子样本的RNA逆转录合成cDNA,PCR扩增直接测序判断PHLDA2基因印迹状态.结果 正常妊娠与子痫前期胎盘PHLDA2-1(外显子1)SNP位点(C/T)均未发现杂合子,全为T/T纯合子;胎盘PHLDA2-2(外显子2)SNP位点(G/A)在子痫前期有4例(4/19)、正常妊娠有5例(5/21)杂合子表达,两组杂合子表达差异无统计学意义(P＞0.05).PHLDA2-2杂合子胎盘组织PHLDA2 cDNA均只表达G单等位基因.结论 子痫前期胎盘PHLDA2(PHLDA2-1及PHLDA2-2)基因多态性与正常妊娠相似,未发现PHLDA2基因印迹丢失现象.     

细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bak mRNA在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其意义

目的:探讨细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bak mRNA在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其意义.方法:采用RT-PCR方法测定36例正常足月妊娠妇女(A组)、24例轻度子痫前期患者(B组)和17例重度子痫前期患者(C组)胎盘组织中Bcl-2、Bax、Bak mRNA表达水平.结果:(1)与B组(1.563±0.398)和A组(1.723±0.300)相比,C组Bcl-2 mRNA表达水平(0.642±0.288)明显降低(q=12.41,P＜0.05;q=15.69,P＜0.05),B组与A组之间无明显差异(q=2.6,P＞0.05).(2)与A组(0.347±0.191)相比,B、C组BaxmRNA表达水平(分别为0.745±0.260、1.335±0.308)明显升高(q=8.79,P＜0.05;q=19.54,P＜0.05),C组较B组升高更为显著(q=10.83,P＜0.05).(3)与B组(0.875±0.322)和A组(0.809±0.381)相比,C组BakmRNA表达水平(2.197±0.546)明显升高(q=14.52,P＜0.05;q=16.42,P＜0.05),B组与A组之间无明显差异(q=0.87,P＞0.05).结论:细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bak mRNA在子痫前期患者胎盘组织中的差异表达参与了子痫前期的病理生理过程.     

子痫前期患者胎盘组织中内皮分化基因2的表达

目的:探讨子痫前期患者胎盘组织中内皮分化基因(Edg)2蛋白和mRNA的表达及意义。方法:应用免疫组化SP和RT-PCR方法检测20例正常晚孕妇女、20例子痫前期轻度和20例子痫前期重度患者胎盘组织中Edg2蛋白和mRNA的表达。结果:3组胎盘绒毛滋养和蜕膜细胞中Edg2蛋白以及胎盘组织Edg2mRNA的表达差异有统计学意义(F/χ2=19.063、19.063和2232.999,P<0.001),子痫前期轻度和重度组高于正常晚孕组,子痫前期重度组高于子痫前期轻度组。结论:胎盘组织中Edg2的异常表达可能与子痫前期的发生和发展有关。     

p57kip2在膀胱癌的表达及意义

目的 :探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子 p5 7kip2 蛋白在膀胱癌的表达及临床意义。方法 :采用免疫组化技术检测p5 7kip2 蛋白和增殖细胞核抗原 (PCNA)在 5 0例膀胱癌和 14例正常膀胱黏膜中的表达。结果 :p5 7kip2 蛋白阳性表达率在膀胱癌组织中为 4 6 % (2 3/ 5 0 ) ,显著低于正常膀胱黏膜组织 78.6 % (11/ 14 ) (χ2 =4 .6 6 0 ,P <0 .0 5 ) ,并与膀胱癌组织病理分级、生存率显著相关 (χ2 =8.5 92 ,P <0 .0 5 ;χ2 =4 .5 4 6 ,P <0 .0 5 ) ,但与临床分期无关 (χ2 =0 .5 73,P >0 .0 5 )。PCNA阳性表达率在膀胱癌组织中为 6 0 % (30 / 5 0 ) ,显著高于正常膀胱黏膜组织的 0 % (0 / 14 ) (χ2 =15 .812 ,P <0 .0 1) ,并与膀胱癌组织病理分级 ,临床分期和生存率显著相关 (P <0 .0 5 )。p5 7kip2 和PCNA蛋白的表达呈负相关 (r =- 0 .4 4 3,P <0 .0 1)。结论 :p5 7kip2 的低表达与膀胱癌的发生发展密切相关 ,可以作为判断膀胱癌不良预后的参考指标。     

雌激素对人子宫内膜样癌JEC细胞中ERα、ERβ及p57kip2表达的影响

目的研究雌激素干扰人子宫内膜样癌（endometrioid carcinoma,EC）JEC细胞后雌激素受体（estrogen receptor,ER）亚型ERα、ERβ及p57^kip2在细胞中的表达变化。方法分别用含有3种不同浓度的雌二醇（β-Estradiol,E₂）(10^-6mol/L,10^-8mol/L,10^-10mol/L)的培养基进行JEC细胞的体外培养,用不含药物的培养基进行培养,作为对照,于培养24、48、72h后,用光镜及电镜观察E₂干扰后JEC细胞的形态改变,用MTT法检测JEC细胞的增殖情况,用Western Blot（WB）法检测JEC细胞中ERα、ERβ、p57^kip2蛋白的表达情况。结果形态改变及增殖情况:E₂浓度较低时可促进JEC细胞的生长（P<0.05）,高浓度的E₂则抑制JEC细胞的生长,但差异无统计学意义（P﹥0.05）;与对照组比较,E₂低浓度组JEC细胞微绒毛及胞质中分泌泡均有所减少,E₂高浓度组JEC细胞微绒毛及胞质中分泌泡均有所增多。WB结果显示,实验各组及对照组ERα均不表达,ERβ则弱表达;随着E₂作用浓度的增加、作用时间的延长,ERβ与p57^kip2蛋白的表达均呈递增趋势（P<0.05）。结论 JEC细胞中ERα表达缺失。雌激素可上调ERβ、p57^kip2在EC中的表达,具有时间依赖性和浓度依赖性;雌激素浓度较低时可以促进JEC细胞增殖,细胞的分化向较差的方向发展。     

子痫前期患者胎盘组织中MMP-2及TIMP-2的表达

目的检测子痫前期(preeclampsia,PE)患者胎盘组织中基质金属蛋白酶-2(matrix met-alloproteinases-2,MMP-2)及其抑制剂(tissueinhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)的表达,探讨其与妊娠期高血压疾病发病的关系。方法用免疫组化法对20例正常晚妊妇女和20例子痫前期晚妊妇女(其中子痫前期轻度10例、重度10例)胎盘中MMP-2及TIMP-2进行检测。结果PE患者胎盘中MMP-2的表达明显低于正常妊娠组(P<0.05);而TIMP-2的阳性表达无显著性差异(P>0.05);MMP-2/TIMP-2明显下降。结论胎盘组织中MMP-2的低表达及与TIMP-2的比例失衡与妊娠期高血压疾病的发病密切相关。     

STAT4、STAT6在子痫前期胎盘组织中的表达及意义

目的:探讨子痫前期患者胎盘组织中信号转导和转录激活因子(STAT)4以及STAT6的表达及意义.方法:采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SABC)法和Western blot法检测30名正常妊娠晚期孕妇(对照组)和50例子痫前期患者(子痫前期组,其中轻度22例、重度28例)胎盘组织中STAT4、STAT6的蛋白定位和表达.结果:STAT4主要表达于绒毛滋养细胞的胞质,胞核多数无明显着色;轻、重度子痫前期组胎盘组织中STAT4的表达均明显高于对照组(P<0.01);STAT6主要表达于绒毛滋养细胞的胞质,胞核多数无明显着色;轻度、重度子痫前期组均显著低于对照组(P<0.01),且轻、重度子痫前期组STAT4和STAT6表达水平差异均有统计学意义(P<0.01).子痫前期组和正常妊娠组绒毛组织中STAT4与STAT6的表达水平均呈负相关关系(r=-0.509,r=-0.617;P<0.01).结论:STAT4、STAT6共同参与子痫前期的病理生理改变,并与病情严重程度有一定关系.     

p27kip1的亚细胞定位对卵巢癌细胞周期的作用研究

目的 :研究卵巢癌中抑癌基因p27kip1蛋白在不同细胞周期中的亚细胞定位及表达形式,分析其对卵巢癌细胞周期调控的作用机制。方法:以人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,用血清饥饿法同步细胞周期,采用免疫荧光法测定不同细胞周期中p27kip1、p-Ser10p27kip1蛋白的表达定位情况,并用Western Blot法检测p27kip1、p-Ser10p27kip1在不同细胞生长周期的表达。结果:在G0/G1期卵巢癌细胞中,p27kip1定位表达于细胞核,发挥抑制细胞周期的活性的作用。在S期细胞中,p27kip1以p-Ser10p27kip1的形式存在于胞质中。p27kip1的表达水平随着血清释放的时间延长而逐渐减少。p-Ser10p27kip1表达水平随着血清释放的时间延长而逐渐增加。结论:p27kip1定位于卵巢癌细胞核,抑制细胞周期活化,并以磷酸化的形态转移出核,丧失抑癌活性。     

p57kip2 mRNA在肝细胞癌发生过程中的表达

目的研究p57^kip2 mRNA在人体肝细胞癌发生不同阶段的表达状况,探讨与肝癌发生发展及分化的关系.方法采用原位分子杂交技术检测正常肝组织、慢性肝炎、肝硬化、癌周肝硬化和肝细胞癌共42例标本中p57^kip2 mRNA的表达.结果正常肝组织组未见p57^kip2 mRNA表达,慢性肝炎组阳性表达率为57.14%（4/7）,肝硬化组阳性表达率为40.00%（4/10）,癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率分别为70.00%（7/10）和20.00%（2/10）.肝癌组p57^kip2 mRNA阳性表达率明显下降,与癌周肝硬化组差异有统计学意义（P〈0.05）.肝癌组分化好者与分化差者表达差异有统计学意义（P〈0.05）.结论p57^kip2 mRNA表达下降在原发性肝癌的发生发展中起着重要作用,且可能与肝癌的分化有关.     

Expression of p57kip2 and cyclinE proteins in human pancreatic cancer

Objective To investigate the effects of p57kip2 and cyclinE proteins on the genesis and progression of human pancreatic cancer. Methods The expression of p57kip2 and cyclinE proteins in tumor tissues and adjacent tissues of pancreatic cancer in 32 patients was detected by SP immunohistochemical technique. Results The p57kip2 protein positive-expression rate in tumor tissues of pancreatic cancer was 46.9%, which was lower than that in adjacent pancreatic tissue (P&lt;0.05). The p57kip2 protein positive-expression correlated significantly with tumor cell differentiation (P&lt;0.05) and did not correlate significantly with lymph node metastasis (P&gt;0.05). The cyclinE positive-expression rate in tumor tissues was 68.8%, which was higher than that in adjacent pancreatic tissues (P&lt;0.05). The cyclinE positive-expression also correlated significantly with tumor cell differentiation and lymph node metastasis (P&lt;0.05). The cyclinE protein positive-expression rate in the tumor tissues of the p57kip2 protein positive-expression group was lower than that in the p57kip2 protein negative-expression group, and there were no significant correlation between the two groups (r= -0.112, P＞0.05).Conclusion Decreased expression of the p57kip2 protein and/or over-expression of the cyclinE protein may play an important role in the genesis and progression of human pancreatic cancer.     

p57kip2在肝癌组织中的表达及其与临床病理因素、PCNA和p53的关系

目的:检测细胞周期抑制因子p57kip2在肝癌中的表达水平,探讨它与临床病理因素、增殖细胞核抗原(PCNA)、p53的关系. 方法:用免疫组织化学法检测32例肝癌组织和10例正常肝脏组织中p57kip2, PCNA和p53的表达水平. 结果:p57kip2在肝癌组织中的阳性率56.2%,显著低于正常肝脏组织(100%)(P=0.011),p57kip2的缺失表达与肝癌细胞的分化较差(P=0.007)、临床分期较晚(P=0.041)及预后较差有关(P=0.036),与年龄、AFP, 肿瘤大小及肿瘤侵犯转移无显著相关(P>0.05);PCNA在肝癌组织中阳性率为56.2%,与p57kip2的表达有关(P=0.036);p53在肝癌组织中的阳性率46.9%,与p57kip2表达在统计学上无相关性(P>0.05). 结论:肝癌组织中存在p57kip2的表达缺失、PCNA的高表达, 共同参与肝癌的发生、发展,而p57kip2和p53可能通过不同途径来诱导细胞凋亡.     

P57KIP2在子宫内膜癌及子宫内膜不同病变组织中表达的意义

目的 通过检测p57KIP2蛋白在子宫内膜癌及子宫内膜不同病变组织中的表达情况,探讨p57KIP2在子宫内膜癌发生、发展中的作用.方法 选取100例子宫内膜样腺癌( endometrioid adenocarcinoma,EA),以及子宫内膜增生期、分泌期、单纯性增生、复杂性增生组织各10例,子宫内膜上皮内瘤变(Endometrial intraepithelial neoplasia,EIN) 20例,用免疫组织化学Elivision法检测这些病变组织中p57KIP2蛋白的表达情况.结果 p57KIP2蛋白在EA、子宫内膜增生期、分泌期、单纯性增生、复杂性增生、EIN组织中的阳性表达率分别为26.00％、0.00％、60.00％、0.00％、10.00％、40.00％.p57KIP2蛋白在EA组织中的阳性表达与在分泌期组织中的阳性表达比较,在分泌期组织中的阳性表达与在复杂性增生中的阳性表达比较,差异均有显著性(P＜0.05);在EA中,p57KIP2蛋白的阳性表达与组织学分级有关(P＜0.05),与年龄大小、盆腔淋巴结有无转移等无关(P＞0.05).结论 p57KIP2参与了子宫内膜癌的发生发展过程.     

胃癌细胞 p27kip1 、cyclinE 的表达及与幽门螺杆菌感染关系

[目的]观察胃癌细胞p27^kjp1、cyclinE的表达情况，并分析幽门螺杆菌（Heticobacter pylori，Hp）感染对二者表达的影响，以探讨Hp可能的致癌机制。[方法]用免疫组织化学SP法检测59例胃癌p27^kip1、cyclinE表达情况，采用改良Giemsa快速尿素酶检验法检测HD感染。[结果]p27hp。阳性率在正常胃黏膜为84．22％，显著高于胃癌的47．46％（P〈0．05），胃癌中高中分化腺癌组为68．42％，显著高于低分化腺癌的37．5％和与胃黏液癌的31．25％（P〈0．05），但后两者间无显著性差异（P〉0．05）。cyclinE阳性率在正常胃粘膜为11．1l％，显著低于胃癌的55．93％（P〈0．05），胃癌中高中分化腺癌组为31．58％显著低于低分化腺癌的66．67％和胃黏液癌的68．75％（P〈0．05），后两者间无显著性差异（P〉0．05）。p27kjP0及cyclinE的阳性率在HD阳性和HD阴性胃癌组间无显著差异性（P〉0．05）。[结论]胃癌组织p27kipl表达下调、cyclinE表达上调，提示二者的表达失衡可能会促进胃癌的发生。但二者表达与HD感染无明显相关关系。     

宫颈癌组织中p57KIP2及p27KIP1在表达及预后的临床观察

目的探究在宫颈癌患者组织切片中P57KIP2及P27KIP1在表达及预后间的相互关系。方法截取我院2008年5月至2010年12月共50例宫颈癌组织,20例上皮内瘤变组织,20例正常组织行免疫组化结果比较分析。结果 p57KIP2、p27kip1两者正常组、瘤变组、肿瘤组阳性率分别为：95%、85%、14%;90%、85%、20%。p57KIP2、p27kip1随着患者病变处恶性程度的逐渐性升高及肿瘤直径的增大呈现降低,经统计学检验提示,P均〈0.05,差异具统计学意义。结论 p57KIP2及p27KIP1在宫颈癌病情发展及临床检测中具有重要作用。     

p57^kip2在人肝细胞癌中杂和性缺失研究

【目的】研究p57kip2基因在人肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）不同阶段的杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH）,以探讨HCC发生的分子生物学机制。【方法】运用PCR聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法对30例肝癌组织p57kip2基因位点上2个微卫星位点（TH01和D11S2359）进行LOH的检测。【结果】30例肝癌组织中有9例至少在1个微卫星位点（30.0%）表现出LOH,且分化好肝癌组织LOH率明显低于和分化差肝癌组织。【结论】p57kip2基因位点频繁的LOH在HCC发生中起重要作用。     

放射线对体外培养鼻咽癌细胞细胞周期阻滞、凋亡和抑癌基因p57kip2表达的影响

目的研究放射线对鼻咽癌CNE细胞细胞周期阻滞、凋亡和抑癌基因p57^kip2蛋白表达的影响。方法运用流式细胞术检测放射线诱导的细胞周期阻滞、凋亡；运用免疫组织化学法检测抑癌基因p57^kip2蛋白的表达。结果CNE细胞经照射后，G1期无明显阻滞，S期出现短暂堆积，G2／M期阻滞程度具剂量和时间依赖性，G2／M期阻滞在12h与24h时与照射剂量呈正相关（P〈0．01），随照射后时间延长而增强，峰值出现于12Gy24h；细胞凋亡发生率与照射剂量和照射后时间均呈正相关（P〈0．01）。照射后p57^kip2蛋白表达随照射剂量增加和照射后时间延长而上调（均P〈0．01）。结论G2／M期阻滞、细胞凋亡率和p57^kip2蛋白均能反映及预测鼻咽癌细胞的放射敏感性。