回族药扎里奴思方联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经元及P-糖蛋白的影响

目的: 观察扎里奴思方联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑缺血再灌注(MCAO)模型大鼠神经元及P-糖 蛋白(P-gp)表达的影响。方法: 250只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组(扎里奴思方组)、移植组和联合组(扎里奴思方和移植组),除假手术组10只外,其余各组再分为1,3,7,14 d组,分别为15只。大鼠术前4 d 开始ig给药(14.6 g·kg^-1·d^-1, 假手术组、模型组和移植组给予等体积的生理盐水),线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs,术后24 h,BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑(2×10⁶个/200 μL);移植后1,3,7,14 d取材,观察海马CA1区神经元密度(ND)和脑组织病理损伤、免疫组化法测P-gp表达变化。结果: 模型大鼠海马CA1区ND较假手术组明显降低(P<0.01),病理损伤明显(P<0.01,P<0.05),P-gp表达明显增高(P<0.01);与模型组比较,扎方、移植组3,7,14 d及联合各组ND增加(P<0.01,P<0.05),各组病理损伤减轻,以扎方、移植、联合组7,14 d明显(P<0.01,P<0.05),扎方、移植、联合各组P-gp表达降低(P<0.01);与移植组比较,扎方组1 d ND增高(P<0.01),14 d降低(P<0.05),联合各组ND均增高(P<0.01),联合组7,14 d病理损伤减轻(P<0.05),扎方组1,3,7 d P-gp表达降低,以1 d降低明显(P<0.05),14 d P-gp表达增高(P<0.05),联合各组P-gp表达均降低(P<0.01);扎方与联合组比较,联合各组上述指标均改善(P<0.01,P<0.05);同组间比较,均以7 d变化显著,14 d有明显改善(P<0.01)。结论: 脑缺血后脑组织海马CA1区神经元密度及组织病理学均出现不同程度损伤;扎里奴思方和BMSCs移植均可不同程度改善脑缺血后脑组织神经元存活数量及状态,以二者联合作用显著,其机制可能与干预P-gp动态表达有关。     

扎里奴思方干预骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠神经轴突再生的影响

目的:观察扎里奴思方(扎方)干预骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠神经轴突再生的影响,并探讨其机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠灌胃给药(14.6 g·kg~(-1)·d~(-1)),BMSCs经颈内动脉移植入脑;移植后1,3,7,14 d取材,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测生长相关蛋白(GAP-43),神经微丝蛋白(NF~(-2)00),髓磷脂相关糖蛋白(MAG)和勿动蛋白-A(Nogo-A)蛋白表达。结果:模型组GAP-43,MAG及Nogo-A蛋白表达较假手术组明显增高(P0.01),NF~(-2)00降低(P0.01);与模型组比较,扎方3,14 d组、移植3,7,14 d组及联合各组GAP-43表达增高(P0.05,P0.01),扎方、移植及联合各组NF~(-2)00表达增高(P0.01),MAG及Nogo-A降低(P0.01);与移植组比较,扎方14 d组GAP-43,7 d组NF~(-2)00及1,3,14 d组MAG表达降低(P0.05,P0.01),3 d组Nogo-A降低(P0.01),7 d组增高(P0.05),联合各组GAP-43及1,14 d组NF~(-2)00表达增高(P0.01),MAG,Nogo-A及7 d组NF~(-2)00表达降低(P0.01);扎方与联合组比较,联合3,7,14 d组GAP-43及14 d组NF~(-2)00表达增高(P0.01),各组MAG及Nogo-A表达降低(P0.01);同组间比较,模型7 d组GAP-43及MAG表达增高(P0.05,P0.01),3 d组NF~(-2)00表达较1 d组增高(P0.01),3 d组Nogo-A达高峰(P0.01),扎方、移植及联合各14 d组GAP-43表达较7 d组增高(P0.01),扎方及移植各7 d组NF~(-2)00表达较3,14 d组增高(P0.01,P0.05),联合3 d组NF~(-2)00表达较低(P0.01),后逐渐增高(P0.05),扎方、移植及联合各组MAG及Nogo-A表达呈先增后减趋势。结论:扎方可显著促进脑缺血再灌注损伤BMSCs移植后神经轴突再生,以二者联合作用显著,其机制可能与干预损伤后GAP-43,NF~(-2)00及MAG,Nogo-A的动态表达有关。     

扎里奴思方干预骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠突触结构可塑性的影响

目的:观察扎里奴思方(扎方)干预骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠突触结构可塑性的影响,并探讨其机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠灌胃给药(14.6 g·kg~(-1)·d~(-1)),BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑;移植后1,3,7,14 d取材,透射电镜观察神经元突触超微结构,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测突触素(SYN),突触后致密蛋白-95(PSD-95)蛋白表达。结果:假手术组突触结构完整,前后膜轮廓及突触间隙清晰,可见多个突触小泡,均匀分布,模型各组突触数量减少,结构破坏,突触间隙模糊,突触小泡数量减少甚至消失。扎方组突触数量增多,结构接近正常,可见凹型及U型突触,3,7,14 d组突触小泡增多,14 d组突触间隙增宽。移植组突触超微结构变化与扎方组大致相同。联合组突触损伤明显减轻,突触数量增多,7,14 d可见多个凹型突触,突触小泡明显增多。模型各组SYN及PSD-95较假手术组减低(P0.01);与模型组比较,联合各组及扎方、移植各7 d组SYN表达增高(P0.01),扎方、移植各3,7,14 d组及联合各组PSD-95表达增高(P0.01);与移植组比较,联合各组SYN,PSD-95表达增高(P0.01,P0.05),扎方3 d组PSD-95表达减低(P0.01);扎方与联合组比较,联合各组SYN,PSD-95表达增高(P0.01);同组间比较,模型、扎方、移植及联合各3 d组SYN表达较其他组减低(P0.01),各7 d组PSD-95表达达高峰(P0.01),各14 d组PSD表达较3 d组增高(P0.01,P0.05),扎方及移植各14 d组SYN表达较7 d组减低(P0.01)。结论:扎方可显著提高脑缺血再灌注损伤BMSCs移植后神经元突触结构可塑性,以二者联合作用显著,其机制可能与干预损伤后SYN,PSD-95的动态表达有关。     

扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤后大鼠脑内NGF表达的影响

目的：观察扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤后大鼠脑内神经生长因子（NGF）表达的影响。方法：线栓法制备局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。实验动物随机分为假手术组、模型组、扎里奴思方组、尼莫地平组。取材前进行神经功能评分。术后各组分别在1,3,7,14 d各个时间点取材,HE染色法观察大鼠脑组织病理学改变;免疫组织化学法测定大鼠脑内NGF 的表达。结果：模型组大鼠神经功能评分降低,神经元数量减少,大小不均,病理损伤显著;与模型组比较,尼莫地平和扎里奴思方组神经评分增高,神经元数量增多,脑组织病理损伤减轻明显,NGF表达增高（P<0.01,P<0.05）;与尼莫地平组比较,扎里奴思方14 d组神经功能评分和NGF表达明显升高（P<0.05）。结论：扎里奴思方可对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织神经元起保护作用,扎里奴思方14天组的脑保护作用更强,其脑保护作用机制可能与调节大鼠脑组织 NGF 表达有关。     

扎里奴思方对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响

目的： 研究扎里奴思方对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响。 方法： SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、扎里奴思方组;线栓法制备大脑中动脉阻塞缺血再灌注模型;大鼠灌胃给药,于缺血再灌注后1,3,7,14 d取脑,评价神经功能积分,干湿重法测脑含水量,免疫组化法测IgG表达变化。 结果： 与假手术组比较,缺血再灌注后脑含水量、IgG表达显著增高（P < 0.01,P < 0.05）,神经功能积分明显降低（P < 0.01）;与模型组比较,尼莫地平组脑含水量、神经功能积分均有不同程度改善（P < 0.05）,IgG表达有所下降,尤以3,7 d明显（P < 0.01）;与尼莫地平组比较,扎里奴思方组脑含水量、IgG表达呈不同程度下调（P < 0.05）,神经功能积分增大,尤以3,7 d明显;扎里奴思方3,7 d组与1 d比较,IgG含量显著降低（P < 0.05）。 结论： 脑缺血再灌注损伤后1~7 d可引起血脑屏障通透性增加,7 d以后血脑屏障通透性逐渐恢复;扎里奴思方可有效降低缺血再灌注脑含水量及改善脑缺血后神经功能积分,降低IgG在脑内的表达量;其机制可能是通过调控血脑屏障的通透性,抑制有害物质进入脑内,从而发挥脑保护作用。     

扎里奴思方干预骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠黏附分子及NeuN表达的影响

目的:观察扎里奴思方(扎方)干预骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠黏附分子及神经元核抗原(Neu N)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠ig给药(14.6 g·kg~(-1)·d~(-1)),BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑;移植后1,3,7,14 d取材,评价神经功能积分(NS),逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测血管细胞间黏附分子~(-1)(VCAM~(-1))和整合素α4mRNA表达,免疫组化法测Neu N表达。结果:MCAO模型大鼠NS及Neu N表达较假手术组显著降低(P0.01),VCAM~(-1)及整合素α4mRNA表达显著增高(P0.01);与模型组比较,扎方1,3,14 d移植3,7,14 d及联合各组NS增加(P0.01,P0.05),扎方、移植及联合各组Neu N增加(P0.01),VCAM~(-1)及整合素α4mRNA降低(P0.01);与移植组比较,扎方7 d组NS减小(P0.05),联合1,3,14 d组NS增加(P0.01),扎方1,3 d组VCAM~(-1)mRNA减少(P0.01),扎方1,7,14 d组整合素α4mRNA减少(P0.01),联合各组VCAM~(-1)及整合素α4mRNA均降低(P0.01),扎方及联合各组Neu N增高(P0.01);扎方与联合组比较,联合各组NS及Neu N表达增加(P0.01),VCAM~(-1)和整合素α4mRNA表达降低(P0.01);同组间比较,各组NS,Neu N及VCAM~(-1) mRNA均以7 d组变化显著,14 d有明显改善(P0.01),整合素α4mRNA以3 d组变化显著,14 d可改善(P0.01)。结论:脑缺血后神经功能及神经元均出现不同程度损伤;扎方和BMSCs移植均可不同程度改善脑缺血后神经功能及脑组织神经元状态,以二者联合作用显著,其机制可能与干预VCAM~(-1)及整合素α4动态表达有关。     

回药扎里奴思方对急性脑梗死患者神经功能评分的影响

目的： 观察扎里奴思方对急性脑梗死患者神经功能评分的影响及其临床疗效的评估。 方法： 将84例脑梗死患者按随机数字表法随机分为试验组和对照组,内科基础治疗相同,试验组42例采用扎里奴思方,对照组42例应用尼莫地平片,疗程28 d。比较治疗前后患者临床疗效,神经功能缺损评分及日常生活能力指数的变化。 结果： 两组病例于治疗7,14,28 d后进行比较,试验组及对照组治疗前后比较差异有显著性（P < 0.05）,但试验组显效率明显优于对照组（P < 0.05）。试验组总有效率88.09%,对照组69.05%,两组比较差异有显著性;神经功能缺损评分及日常生活能力指数两组均有不同程度改善,以治疗组7,14 d作用尤为明显（P < 0.05）。 结论： 脑卒中患者给予扎里奴思方能够促进缺损神经功能的恢复,改善脑梗死后遗活动不利及日常生活能力的下降,是治疗急性脑梗死临床安全有效,值得推广应用的药物。     

回药扎里奴思方对脑缺血再灌注大鼠脑内ICAM-1与TNF-α表达的影响

目的:研究扎里奴思方对脑缺血急性期再灌注大鼠脑内细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:将180只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、扎里奴思方组,每组45只,在第1天、第3天、第7天每个时间点各15只。除假手术组外,其余各组采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,所有动物于手术前3天预防性给药,造模清醒后2 h按相应分组灌胃给药直至取材,给药剂量为尼莫地平组10.8 mg/kg,扎里奴思方组1.54 g/0.1 kg,模型组和假手术组以生理盐水灌胃,每天1次。采用ELISA法检测脑内ICAM-1和TNF-α的含量;RT-PCR法检测脑内ICAM-1 m RNA、TNF-αm RNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组ICAM-1、ICAM-1 m RNA和TNF-α、TNF-αm RNA的表达明显增高,差异均有统计学意义(P0.01);与模型组比较,尼莫地平组和扎里奴思方组ICAM-1、ICAM-1m RNA和TNF-α、TNF-αm RNA的表达均降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);与尼莫地平组比较,扎里奴思方1天、7天组ICAM-1、ICAM-1 m RNA和TNF-α、TNF-αm RNA的表达显著降低,扎里奴思方3天组ICAM-1、ICAM-1 m RNA、TNF-α的表达显著降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:扎里奴思方对脑缺血再灌注大鼠脑神经元起保护作用,其机制可能与抑制大鼠脑内ICAM-1和TNF-α的表达有关。     

清热化瘀方联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠血管新生的影响

目的观察清热化瘀方联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑缺血损伤大鼠血管新生标志物血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)及神经功能的影响。方法将80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、BMSCs组、中药+BMSCs组,每组20只。均参照改良的Longa's线栓法复制脑缺血再灌注损伤模型,假手术组线栓只插入颈内动脉9 mm,使大脑中动脉起始部不致阻塞;模型组造模后灌胃等体积的生理盐水;BMSCs组于缺血再灌注24 h后经尾静脉移植BMSCs悬浮液200μL;中药+BMSCs组造模前4 d及造模后予清热化瘀方14g/(kg·d)灌胃,于缺血再灌注24 h后经尾静脉移植BMSCs悬浮液200μL。各组大鼠分别于手术后第3天和第7天采用m NSS评分法进行神经功能评分,采用免疫组织化学染色法检测CD31及Brdu的表达情况。结果术后第3,7天,BMSCs组、中药+BMSCs组在脑缺血区域可见到Brdu阳性细胞,且中药+BMSCs组Brdu阳性细胞数均明显多于BMSCs组(P均<0.05);BMSCs组、中药+BMSCs组神经功能评分明显低于模型组(P均<0.05),CD31表达量明显高于模型组(P均<0.05),且中药+BMSCs组神经功能评分明显低于BMSCs组(P均<0.05),而CD31表达量明显高于BMSCs组(P均<0.05)。结论清热化瘀方可促进BMSCs在大鼠体内分化、增殖,该方联合BMSCs移植可改善脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能,这可能与CD31表达上调、促进血管新生有关。     

扎里奴思方对气虚血瘀型脑缺血再灌注大鼠宏观表征、血液流变学及神经细胞凋亡相关机制的影响

目的:通过建立气虚血瘀型脑缺血再灌注大鼠模型,探讨回药扎里奴思方对气虚血瘀型脑缺血再灌注大鼠宏观表征、血液流变学及神经细胞凋亡等相关机制的影响。方法:将170只SD大鼠随机分为正常组,假手术组,模型组,尼莫地平组,扎里奴思方高、中、低剂量组(29.2,14.6,7.3 g·kg-1);正常组、假手术组各10只,其余各组根据时间点分为3,7 d组,每组15只;除正常组外,其余各组均采用饥饿、疲劳、寒湿、惊恐及高脂饮食等多因素制备气虚血瘀型大鼠模型,于4周证候模型完成,给予大鼠ig给药4 d(正常组、假手术组及模型组给予等体积的生理盐水),复制局灶性脑缺血(MCAO)再灌注模型,观察各组大鼠的神经精神状况、体重、进食、舌质变化及排便情况;心脏取血进行血液流变学检测;原位末端转移酶标记法(TUNEL)法检测脑组织皮质区神经细胞凋亡情况。结果:与正常组比较,假手术组通过宏观表征的观察及血液流变学指标的检测,出现明显的气虚血瘀证候,说明证候模型复制成功;与假手术组比较,模型组在气虚血瘀的基础上出现明显的偏瘫样症状,神经功能评分显著升高(P0.01),全血黏度明显升高(P0.05,P0.01),红细胞变形性指数明显降低(P0.05)及红细胞聚集性指数和红细胞压积显著升高(P0.01),大鼠神经细胞凋亡较显著(P0.01);与模型组比较,扎里奴思方可显著改善气虚血瘀型脑缺血再灌注大鼠宏观表征,降低模型大鼠全血黏度、血红细胞压积、红细胞聚集性,提高红细胞变形性,并抑制脑组织细胞凋亡,尤以扎里奴思方高剂量7 d组作用显著(P0.05,P0.01)。结论:扎里奴思方对气虚血瘀型脑缺血再灌注大鼠损伤具有良好的保护作用,其机制可能与改善模型大鼠血液流变学、抑制脑组织神经细胞凋亡密切相关。     

经木香烃内酯诱导的骨髓间充质干细胞用于治疗脑缺血再灌注损伤的研究

目的：利用木香烃内酯（Costunolide）诱导骨髓间充质干细胞（bMSCs）向神经样细胞分化，并通过诱导后的bMSCs对脑缺血再灌注大鼠模型进行治疗，研究木香烃内酯的体内外神经保护的药理学相关机制。方法：利用木香烃内酯诱导bMSCs向神经样细胞分化。此外，采用线栓法制作大鼠右脑中动脉阻断（MiddleCerebral Artery Occlusion，MCAO）再灌注模型，实验动物随机分为假手术组、模型组、MSC组及木香烃内酯诱导MSC组（诱导组）（n = 10），根据分组在再灌注2 h后由尾静脉注射相应细胞悬液或等量PBS，术后对各组大鼠进行神经功能损伤评分，于7日后取脑，检测脑组织含水量、计算梗死体积并进行HE染色。结果：木香烃内酯可使bMSCs向神经样细胞分化，且最佳诱导条件为10 μM木香烃内酯孵育细胞24 h，诱导后的bMSCs中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、巢蛋白（Nestin）的表达量均有上调；体内实验中，诱导组大鼠脑组织含水量及梗死体积均显著低于模型组和MSC组（P＜0.05），此外，组织病理检测结果说明，诱导后的bMSCs能够促进半暗带组织结构恢复，相对于其他治疗组具有更好的疗效。结论：木香烃内酯可诱导bMSCs向神经样细胞分化，且用诱导后的bMSCs能够显著性的降低脑缺血再灌注损伤。     

中药诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化研究进展

用计算机检索中国知网、万方数据库和PubMed中近10年相关文献,检索词分别为“中药、骨髓间充质干细胞、神经样细胞、分化”和“Traditional Chinese medicine,Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,neural cells,differentiation”,检索式分别为“并”和“and”。共检索到中文文献630篇,英文文献363篇,根据文献筛选标准剔除重复及不规范的文献,共纳入39篇文献。发现中药诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）向神经样细胞分化的研究以中药复方制剂、单味中药、中药有效成分或部位的内容为多,这表明目前此方面研究为热点。中药有效成分或部位作用机制的解释更符合现代医学药理理论,而且更易结合并体现现代实验方法和技术的运用。用现代医学药理实验方法与技术研究中药诱导MSCs向神经元样细胞分化的同时,应当深化并体现传统中医药学药性法则、中药炮制方法、辨证论治理论等特色。为用中药作为诱导剂来防治缺血性脑疾病等神经系统疾病提供了一定理论依据。     

骨髓间充质干细胞与血管内皮生长因子联合移植对大鼠创伤性脑损伤修复的研究

目的探讨联合移植骨髓间充质干细胞（BMSCs）和血管内皮生长因子（VEGF）对创伤性脑损伤（TBI）大鼠脑组织中脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。方法 SD大鼠2只,取股骨骨髓体外培养BMSCs。SD大鼠40只,随机分为单独移植BMSCs组、单独应用VEGF组、联合移植BMSCs与VEGF组及对照组,每组10只。采用改良的Feeny自由落体撞击方法建造中度创伤性脑损伤模型。造模后1周,在立体定向仪下分别将等量BMSCs、VEGF、BMSCs加VEGF及PBS液注入相应大鼠的损伤脑组织周边。养育2周后处死取脑。采用HE及尼氏染色法观察脑组织病理学变化;采用免疫组化染色,应用Image pro-Plus6.0软件测量半暗带及健侧对称部位BDNF阳性表达区域的总和累积光密度,应用SPSS 11.3软件进行统计学分析。结果除BMSCs组外,其余各组对称部位BDNF含量均较半暗带高（P〈0.05）;联合移植组半暗带的BDNF含量明显高于对照组（P〈0.05）。结论联合移植BMSCs与VEGF可有效抑制TBI大鼠半暗带中BDNF含量的降低,有利于神经功能的恢复。     

中药麦冬对骨髓间充质干细胞分化心肌样细胞的诱导作用研究

目的研究为证明浙麦冬可能具有MSCs诱导作用,且其补心阴作用与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,MSCs)转化率成正比。且阐明浙麦冬对MSCs的诱导作用和机制。方法(1)流式细胞仪鉴定大鼠骨髓MSCs的表面标记分子CD73,CD90,CD45,CD34,观察药物对SD大鼠MSCs诱导分化心肌样细胞形态结构的影响。(2)免疫荧光法检测浙麦冬对SD大鼠MSCs诱导分化心肌样细胞中CTnI和CX43蛋白表达情况。(3)qPCR法检测MSCs诱导分化心肌样细胞中NKx 2.5,GATA4和β-MHC mRNA表达情况。结果(1)与空白对照组比较,给药组的心肌样细胞中肌钙蛋白I(CTnI)和连接蛋白43(CX43)的表达量明显增加,而且呈现剂量依赖性和培养时间依赖性。(2)与空白对照组比较,给药组的心肌样细胞中NKx 2.5,GATA4和β-MHC mRNA相对表达量明显增加,而且呈现剂量依赖性和培养时间依赖性。(3)与空白对照组比较,给药组的MSCs中在1周左右存活的部分细胞体积逐渐增大,呈球状、棒状或长梭形;2周以后细胞间出现连接,排列方向渐趋一致。结论补心阴中药浙麦冬能诱导MSCs分化形成心肌样细胞,而且呈现剂量依赖性。     

黄芪多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化的特性

目的观察黄芪多糖对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞、脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞分化特性的影响,为开发有效而又低毒的分化诱导剂提供依据。方法采用全骨髓贴壁筛选法分离、纯化无特定病原体级Wistar大鼠BMSCs。用噻唑蓝(MTT)法筛选出黄芪多糖的合适浓度,取F3代细胞,采用随机数字表法分为对照组和诱导组(神经诱导、成脂诱导、成骨诱导、软骨诱导),采用甲苯胺蓝染色、油红O染色、茜素红染色检测神经细胞、脂肪细胞、软骨细胞表面特异性标记物。用Western Blot技术检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、脂蛋白酯酶(LPL)、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅱ。分析黄芪多糖对F3代BMSCs向神经、脂肪、软骨和骨的诱导分化作用。结果 MTT显示,在1 g/L黄芪多糖诱导48 h下细胞增殖明显,甲苯胺蓝染色阳性,而油红O、茜素红染色阴性。Western Blot法检测显示NSE为阳性表达,LPL、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅱ均为阴性表达。结论黄芪多糖可诱导大鼠BMSCs定向分化为神经细胞,而未向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞分化。