人细胞色素P450 2A13基因在舌癌中的表达

目的:比较分析细胞色素P4502A13(cytochrome P450 2A13,CYP2A13)分别在舌癌组织及其对应癌旁组织中的表达水平,探讨CYP2A13与舌癌的相关性。方法:采用实时定量PCR和Western blot技术分别检测26例舌癌组织及其对应癌旁组织中CYP2A13mRNA及蛋白表达。结果:CYP2A13 mRNA及蛋白在舌癌组织中表达量均低于对应的癌旁组织(P<0.05)。结论:CYP2A13在舌癌组织中表达降低,结合CYP2A13的功能,提示CYP2A13在癌组织中的表达降低可能是舌癌发生发展过程中的自我保护效应。     

多环芳烃类物质对细胞色素P450 1A1的诱导表达

目的探讨多环芳香烃类化合物(polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs)对细胞色素P450 1A1(CYP 1A1)的诱导表达情况。方法以人肺癌细胞系A549为研究对象,选取16种含量较多的典型的PAHs暴露给药。MTT方法检测不同药物浓度下细胞的存活率以选择合适的给药浓度;在该浓度药物处理24 h后,收集各组细胞的总RNA及蛋白,用实时荧光定量(Real-Time)PCR及Western印迹法检测CYP1A mRNA和蛋白的表达。结果 MTT结果显示,PAHs浓度在0.2 mol/L时,细胞存活率为50%～60%,选用此浓度作为后续实验的给药浓度。与正常对照组相比,fluorene、2,3-benzanthracene、perylene、acenaphthylene和benzo[a]pyrene能显著诱导CYP1A1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 fluorene、2,3-benzanthracene、perylene、acenaphthylene和benzo[a]pyrene等烟草烟气内存在的化合物对细胞色素酶CYP1A1具有诱导表达作用。     

人源细胞色素P450 2E1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的: 人源细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1, CYP2E1)基因的克隆及其表达?方法:采用RT-PCR方法对我国汉族人CYP2E1基因进行了克隆,并利用pET-32a(+)原核表达载体进行了表达?结果:经过酶切与测序鉴定表明扩增的CYP2E1基因含有完整的编码序列,除该基因编码区第1 263位核苷酸发生C→T的突变(未引起氨基酸发生突变)外,其他核苷酸与氨基酸序列与GenBank中登录发表的人CYP2E1基因完全相同?SDS-PAGE分析结果显示该基因片段连接到原核表达载体pET-32a(+)后在BL21(DE3)大肠杆菌中成功表达?结论:该基因的成功表达为开展临床前药物安全性评价与药物代谢分析的后续工作打下了基础?     

细胞色素P450 2A13的基因多态性与肺癌易感性

细胞色素P4502A13(CYP2A13)是近年来新发现的具有代谢活化作用的细胞色素P450酶。该酶主要存在于呼吸系统,主要参与多种外源性药物及毒物的代谢。近年来研究发现,CYP2A13具有基因多态现象,这使该酶在不同人群的酶活性大小不同。而这可能与肿瘤发生的易感性大小有关。本文将着重对近年来该酶的多态性研究予以简要阐述。     

肝细胞色素P450 2E1在大鼠非酒精性脂肪肝发生中的作用

目的研究大鼠非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450 2E1表达变化及其在脂质过氧化反应中的作用.方法Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组和高脂饮食诱导脂肪肝组,用免疫组织化学和Western blot方法测定肝细胞色素P450 2E1表达变化,酶学测定丙二醛含量.结果脂肪肝大鼠丙二醛含量较正常对照组增高,以高脂饮食8、12周为甚(P＜0.05),肝细胞色素P450 2E1表达亦明显增强(P＜0.01).结论肝细胞色素P450 2E1表达变化与脂肪肝引起的肝脏损害以及脂质过氧化反应程度密切相关.     

中药对细胞色素P450 2E1影响的研究进展

细胞色素P450 2E1(CYP2E1)不仅参与药物代谢,还能催化许多前毒物和前致癌物的活化过程。近年发现许多中药能抑制或诱导CYP2E1活性,从而导致有益的和不利的药物相互作用。以近年国内外文献报道以及相关研究为依据,综述了中药有效成分、提取物和单复方对CYP2E1的影响,以及CYP2E1介导的中药药物相互作用,并对其影响机制进行简要介绍。以期为中药的临床合理使用,提高其有效性和安全性提供参考。     

广东汉族妇女细胞色素P450 1A1基因多态性检测分析

目的探讨广东汉族妇女细胞色素P450 1A1(CYP1A1)基因的多态性分布规律.方法采用等位基因特异性扩增和PCR-RFLP技术,对160例广东汉族正常妇女的CYP1A1基因多态性进行了检测.结果 CYP1A1基因7号外显子A4889G多态位点A,G等位基因频率分别为75.0%和25.0%.AA,AG,GG基因型分布频率分别为57.5%,35.0%,7.5%;CYP1A1基因3′端非翻译区的MspⅠ多态位点m1及m2等位基因的频率分别为65.0%及35.0%.m1m1,m1m2,m2m2基因型分布频率分别为42.5%,45.0%,12.5%.广东汉族妇女CYP1A1基因A4889G多态与MspⅠ多态存在连锁不平衡关系(χ2=23.394,P<0.005).结论广东汉族妇女CYP1A1基因多态分布与日本人相近,与欧美人不同.广东汉族妇女CYP1A1基因两位点多态存在连锁不平衡关系.     

Effect of N,N’- dinitrosopiperazine on in vitro expression of humancytochro me P450 2E1

目的：建立人细胞色素P450 2E1(CYP2E1)cDNA体外异源表达模型,观察化学致癌物二亚硝基哌嗪（N,N‘-dinitrosopiperzine,DNP）对CYPWE1表达的影响。方法：脂质体介导转染法将外源人CYP2E1cDNA导入NIH3T3细胞,PCR和Southern blot鉴定外源基因的整合,RT-PCR检测其表达;用不同浓度乙醇和DNP处理转化细胞,RT-PCR和western bloting 检测CYP2E1表达的改变。结果：获得二个具外源基因CYP2E1cDNA整合及稳定表达的细胞克隆NIH3T3-2E1-A1和NIH3T3-2E1-A8;经乙醇和DNP处理的细胞克隆CYP2E1mRNA和蛋白质水平的表达增强。结论：DNP与乙醇对CYP2E1表达的诱导可能与其mRNA转录增强有关,DNP致癌可能与CYP2E1对其原位代谢活化相关。     

稳定表达人细胞色素P450 1A2的HepG2细胞的建立及其代谢效应

目的：建立稳定表达人细胞的色素P450 1A2(CYP1A2)的HepG2细胞。方法：将所克隆的野生型CYP1A2 cDNA从重组质粒pGEM-CYP1A2中用Kpn Ⅰ／BamHⅠ双酶切，并亚克隆到哺乳动物细胞表达栽体pREP9中。再将重组质粒转化感受态大肠杆菌Top10，用氨苄青霉素抗性筛选和限制酶谱鉴定。改良的磷酸钙介导的细胞转染法将重组质粒pREP9-CYP1A2转染肝癌细胞HepG2，用RT-PCR技术对转基因细胞的CYP1A2mRNA表达作了分析，并用MTT法比较转基因细胞对黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒敏感试验。结果：与HepG2细胞相比，HepG2-CYP1A2转基因细胞表达CYP1A2 mRNA，能增强AFB1的细胞毒作用。结论：建立了稳定表达CYP1A2的转基因细胞系，可用于由CYP1A2参与的毒理学与药物代谢研究。     

细胞色素氧化酶P4504B1基因突变与膀胱癌遗传易感性的关系

目的:探讨细胞色素氧化酶P450(CYP)4B1基因突变与膀胱癌遗传易感性的关系。方法:应用PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析和直接测序分析,分别检测152例膀胱癌患者和150例非肿瘤同期住院患者CYP4B1的各个常见突变基因位点,分析基因突变对膀胱癌发病的影响。结果:膀胱癌组CYP4B1 C517T、AT881-882del+G993A+C1018T和C1123T突变基因型频率高于对照组(χ2=8.266、16.218和15.347,P<0.05);不同病理分级及临床分期膀胱癌患者间CYP4B1各突变基因型频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:携带CYP4B1C517T、AT881-882del+G993A+C1018T和C1123T突变基因型者更易患膀胱肿瘤。     

Cytotoxicity of acrylamide and its epoxide glycidamide in CHO cells expressing human cytochrome P450 2E1

Objective： To investigate whether CYP2E1 is responsible for the acrylamide metabolic activation in FIp-In CHO cell system. Methods： CYP2E1 cDNA was subcloned from the human liver full-length cDNA library and subsequently transfected into the FIp-In CHO cells to generate the stable transfectant of CYP2E1. The CYP2E1 mRNA expression was determined by RT-PCR. Acrylamide and its epoxide glycidamide induced cytotoxicity and cell cycle arrest in G2/M were conducted using MTS assay and flow cytometry, respectively. Results： In the CHO cell stably expressing CYP2E1 （CHO-2E1）, a -1.5 kb size of band was detected from the mRNA in the cells while no corresponding band in the CHO-vector cells, which indicated that CYP2E1 was successfully transfected in the CHO cells. Compared with the CHO-vector cells, acrylamide showed a concentration dependent loss of viability in the CHO-2E1 cells but no significant change of G2/M arrest was found. As expected, glycidamide induced similar profile of cytotoxicity in both of the cells, and G2/M arrest presented a concentration-dependent increased in the CHO-2E1 cells. Conclusion： The result suggested that CYP2E1 might be responsible for the acrylamide metabolism, and its metabolite glycidamide was a direct cytotoxic and genotoxic agent. It should be further considered whether acrylamide-induced toxicity is through its epoxide glycidamide in the presence of CYP2E1.     

Effect of intestinal cytochrome P450 3A on phytochemical presystemic metabolism

Orally administered drugs are at first absorbedby the gastrointestinal tract,and then travelthrough the liver,the great manufacturer in thebody,andin the end,merge into the systemic cir-cuit.Numerous kinds of drug metabolism occur-ring during this passage from the gastrointestinaltract to the systemic circuit are called the presys-temic metabolism.Although the liver has tradi-tionally been regarded as the major site for drugpresystemic metabolism,a breakthrough has beenmade withthe advent of m…     

苯并[a]芘对宫颈癌HeLa细胞细胞色素P450 1A1的诱导作用

目的 探讨苯并[a]芘（BaP）对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞色素P450 1A1（CYP1A1）表达的影响。方法 不同浓度(0、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0 μmol/L)的BaP处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测BaP对HeLa细胞增殖的影响,Western blotting和RT-PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法检测显示,各浓度BaP组光密度（D553 nm）均较对照组（0 μmol/L BaP）升高,其中7.5 μmol/L BaP组最高（P<0.05）。Western blotting和RT-PCR检测结果显示,各浓度BaP组CYP1A1 mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,其中7.5 μmol/L BaP组最高（P<0.05）。CYP1A1活性检测结果显示,各浓度BaP组HeLa细胞CYP1A1酶活力均高于对照组,以5.0 μmol/L BaP组活力最高（P<0.05）。结论 BaP可诱导HeLa细胞增殖,诱导HeLa细胞表达CYP1A1,并增加酶活性。     

苯并[a]芘对宫颈癌HeLa细胞细胞色素P450 1A1的诱导作用

目的探讨苯并[a]芘（BaP）对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞色素P450 1A1（CYP1A1）表达的影响。方法不同浓度（0、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0μmol/L）的BaP处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测BaP对HeLa细胞增殖的影响,W estern b lotting和RT-PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法检测显示,各浓度BaP组光密度（D553 nm）均较对照组（0μmol/L BaP）升高,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。W estern b lotting和RT-PCR检测结果显示,各浓度BaP组CYP1A1 mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。CYP1A1活性检测结果显示,各浓度BaP组HeLa细胞CYP1A1酶活力均高于对照组,以5.0μmol/L BaP组活力最高（P〈0.05）。结论 BaP可诱导HeLa细胞增殖,诱导HeLa细胞表达CYP1A1,并增加酶活性。 更多还原     

广东汉族妇女CYP1A1基因Msp I多态性与省子宫内膜异位症的关系

目的探讨广东汉族妇女解毒酶细胞色素P450 1A1（CYP1A1）基因 MspⅠ多态性与子宫内膜异位症（内异症）的遗传易感性的关系。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,检测76例经腹腔镜或手术证实为内异症的患者（内异症组）和80例非内异症的妇科手术患者（对照组）CYP1A1基因3’端限制性内切酶MspⅠ位点的3种基因型（m1m1、m1m2、m2m2）的分布频率并加以分析,2组检测对象均为广东籍汉族妇女。结果CYP1A1基因 MspⅠ位点基因型m2m2在内异症组和对照组中各占19.7％和12.5％,基因型m1m1在2组中分别占30.3％和42.5％,基因型m1m2在2组中分别占50.0％和45.0％,各基因型在2组中所占比例无显著性差异（P>0.05）;m1、m2等位基因频率2组间比较亦无显著性差异（P>0.05）。结论解毒酶CYP1A1基因MspⅠ多态性的单独存在可能与广东籍汉族妇女内异症的易感性无关。     

壮骨关节丸对大鼠肝微粒体P450的影响

[目的] 考察壮骨关节丸对大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响。[方法] 壮骨关节丸及其两个新工艺按含生药2.1 g/kg连续给大鼠灌胃7 d,末次药后24 h断头处死大鼠并取肝脏,用钙沉降法制备肝微粒体。在体外用含氨苯砜、非那西丁、奥美拉唑、氯唑沙宗的cocktail探针代谢来考察肝微粒体CYP3A、CYP1A2、CYP2C19、 CYP2E1的活性。[结果] cocktail探针在体外肝微粒体系统中代谢1 h后,包括壮骨关节丸及其两个新工艺的给药组剩余氯唑沙宗浓度显著高于对照组,而奥美拉唑、非那西丁、氨苯砜浓度与对照组之间差异无统计学意义。[结论] 壮骨关节丸可以抑制大鼠肝脏CYP2E1活性,但对CYP1A2、CYP3A及CYP2C19无显著影响。     

原花青素B2及黄曲霉毒素B1对人胚胎肝细胞细胞色素P450亚酶1A2、3A4活力及基因表达的影响

目的 探讨原花青素B2(PC-B2)与黄曲霉毒素B1(AFB1)对人胚胎肝细胞L-02细胞色素P450 (CYP)亚酶1A2、3A4活力及其基因表达的影响.方法 L-02细胞体外培养后分空白对照、溶剂对照、AFB1染毒、PC-B2处理和PC-B2干预共5组,其中PC-B2处理分为3个亚组,分别采用3、10、30 μg/ml PC-B2干预,PC-B2干预分为3各亚组,分别采用3、10、30 μg/ml PC-B2预处理12 h后,再加不同浓度PC-B2与AFB1干预24 h.测定各组细胞的CYP1 A2、CYP3A4酶活力以及CYP1 A2、CYP3A4基因的mRNA表达水平;测定细胞存活率,倒置荧光显微镜观察细胞形态.结果 与空白对照组相比,AFB1染毒组细胞存活率降低(P＜0.05),胞膜结构不清,漂浮细胞增多,CYP1 A2、CYP3A4酶活力及其mRNA表达水平明显升高(P＜0.05).与空白对照组相比,3、10μg/ml PC-B2处理组细胞相关指标无明显变化,但30 μg/ml PC-B2处理组的细胞存活率升高,CYP1A2、CYP3A4酶活力下降(P＜0.05).与AFB1染毒比较,30 μg/ml PC-B2干预组的细胞存活率升高(P＜0.05),各浓度PC-B2干预组的细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及基因表达均降低(P＜0.05),且干预浓度越高,CYP1A2、CYP3A4酶活力及基因表达越低(P＜0.05).结论 AFB1能明显诱导肝细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及其mRNA表达,促使肝细胞凋亡,PC-B2干预可促进肝细胞生长并抑制上述CYP二个亚酶的活力及其基因表达,提示PC-B2可能通过抑制Ⅰ相代谢酶CYP对AFB1的活化而对肝细胞有良好保护作用.     

细胞色素P450 2E1在酒精性肝损伤中的作用及研究进展

Cytochrome P450 2E1 (CYP2E1) may be a key pathway in generating oxidative stress,nitrosative stress,lipid peroxidation,and causing alcoholic liver injury by various hepatotoxins.It was found that CYP2E1 induction and liver injury occur with co-administration of ethanol and hepatotoxins.CYP2E1 inducers including alcohol and pyrazole could potentiate the hepatotoxicity caused by FAS antibody or LPS,suggesting that overexpression of CYP2E1 might contribute to the synergy and susceptibility of the liver to FAS/LPS-induced liver injury.Thus,CYP2E1 and its polymorphism have important role in liver injury caused by ethanol and are also associated with nonalcoholic steatohepatitis (NASH).Ethanol ingestion and toxin administration drive more CYP2E1 induction contributing to the more severe liver injury.Potential mechanisms involved in the potentiated toxicity include elevated oxidative stress,nitrosative stress,lipid peroxidation,apoptosis,hypoxia,TNF-α production,decreased level of antioxidants and activation of MAP kinase.Clarification of CYP2E1-dependent liver injury and interactions with other hepatotoxins will lead to a better understanding to the pathogenesis of hepatotoxicity and may help to give strategies which protect the liver from alcoholic liver injury.     

细胞色素P450 1A1基因多态性与宫颈癌的相关性

 目的 探讨细胞色素P450 1A1(cytochrome P4501A1,CYP 1A1)基因MspⅠ酶切位点多态性及Ile/Val多态性与宫颈癌遗传易感性的关系。方法 采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性分析(PCR restriction fragment length plogymorphism,PCR RFLP)和等位基因特异性PCR(allele specific PCR,as PCR)检测宫颈癌患者(病例组,n=176)和同期体检女性健康人群(对照组,n=112)CYP 1A1基因MspⅠ酶切位点多态性和Ile/Val多态性。结果 比较病例组和对照组CYP 1A1基因MspⅠ酶切位点基因型及等位基因T和C频率分布,差异无统计学意义(P=0.09);比较两组间CYP 1A1 Ile/Val多态性发现,病例组3种基因型Ile/Ile、Ile/Val、Val/Val频率分布分别为19.3%、68.8%、11.9%,等位基因Ile、Val频率分布分别为53.7%、46.3%,与对照组比较差异有统计学意义(P=0.04)。结论 细胞色素CYP 1A1基因MspⅠ位点多态性与宫颈癌发病易感性无关联性,CYP 1A1基因Ile/Val多态性与宫颈癌发病易感性有关联性。     

细胞色素P450酶1A2基因多态性与度洛西汀抗抑郁临床疗效的关系

目的 研究细胞色素P450酶1A2（CYP1A2）基因C734A及G-2964A位点多态性与度洛西汀临床疗效的关系.方法 用度洛西汀对223例抑郁症患者进行为期6周的治疗,用汉密尔顿抑郁量表（HAMD）评定疗效,聚合酶链反应扩增及限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测CYP1 A2基因C734A及G-2964A位点单核苷酸多态性,用单因素方差分析分析两者的关系.结果 （1）223例患者中,C734A突变率为63.64％,G-2964A突变率为26.82％.（2）共计220例患者完成全程治疗.两突变位点联合分析结果表明,高活性组、中间活性组及低活性组在治疗后的HAMD减分率分别为（56.05± 10.13）％、（66.36±8.66）％和（73.82±7.10）％,3组之间两两比较均差异具有统计学意义（均P＜0.01）.结论 CYP1A2基因C734A及G-2964A位点多态性与度洛西汀治疗抑郁症的临床疗效密切相关.