抗人脑胶质瘤细胞系SHG-44单克隆抗体的研究

自杂交瘤技术建立以来,抗各类肿瘤的单克隆抗体(McAb)陆续建立。对颅内最常见的恶性肿瘤——人脑胶质瘤McAb除国外有少量报道外,国内尚未见报道。我们采用本研究室建立的我国第一株人脑胶质瘤细胞系SHG 44为抗原,制备了抗人脑胶质瘤McAb。应用SHG-44完整细胞免疫BaLb/C小鼠,经加强免疫后,第4天取脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞系NS-1融合,96孔培养板232个孔中,93孔出现杂交瘤细胞克隆。经用酶联免疫吸附     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备与鉴定

为了建立抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ(CTnI)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。以重组表达并纯化后的CTnI免疫BalB/C小鼠,采用传统单克隆抗体技术筛选能稳定分泌抗CTnI McAb的杂交瘤细胞株。结果:建立了3株稳定分泌抗CTnI McAb的杂交瘤细胞株2E3,3D4和3E6,腹水效价分别为4×10-5,1×10-6,1×10-5,亲和常数分别为4.8×108,5.2×109,3.6×108,最低检测浓度分别为20,40,20μg/L,其中2E3和3D4可以识别CTnI的不同表位。     

大规模生产单克隆抗体的途径

随着单克隆抗体(McAb)的广泛应用,如何大量生产McAb已成为细胞工程和商业公司所共同关心的问题.目前采用大规模培养杂交瘤细胞生产McAb的方法有体内法、体外法和体内、体外结合法三类,现分别简述如下.体内法一、诱生腹腔肿瘤法将小鼠杂交瘤细胞接种到BALB/c小鼠腹腔内,经增殖后从小鼠腹水提取McAb.每只小鼠可收获1～20ml,约含10～100mg抗     

丙型肝炎病毒单克隆抗体的制备及其鉴定

目的：以基因工程表达的丙型肝炎病毒抗原蛋白（HCAg）为抗原，建立分泌单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞系．并对其分泌的McAh进行鉴定。方法：用纯化HCV基因工程表达抗原（HCAg）免疫Balb／c小鼠，取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水注射制备McAb。采用ELISA及分片断鉴定技术进行鉴定。结果：筛选出5株能稳定分泌特异性抗-HC的McAb杂交瘤细胞株，经多次复苏传代仍能稳定分泌抗体，特异性强，效价高。与不同抗原蛋白的ELISA反应呈特异性阳性反应。分片断鉴定结果显示，所获5株McAb主要为抗HCV核心蛋白和非结构蛋白NS3。结论：此5株丙肝杂交瘤细胞株分泌的抗体对丙肝抗原具有特异亲和性，为丙型肝炎病毒抗原诊断试剂的研制提供了关键技术基础。     

ATP柠檬酸裂解酶鼠源单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备ATP柠檬酸裂解酶（ACLY）鼠源单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb），并进行相关的特异性鉴定。方法：该研究采用原核表达的重组蛋白ACLY为抗原免疫6~8周龄Balb/c雌性小鼠，利用杂交瘤融合细胞技术构建稳定分泌ACLY McAb的杂交瘤细胞，用酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫荧光（IF）、Western-blot、免疫组织化学（IHC）、流式细胞术（FCM）等鉴定其生物活性，检测所得抗体的特异性。结果：复筛后获得了一株能稳定分泌ACLY McAb的杂交瘤细胞（5F8D11），Ig亚类为IgG1，轻链为κ链；Western-blot、IHC、IF分析和ELISA检测证实该株ACLY McAb与ACLY具有较高的特异性。结论：该株抗ACLY特异性的McAb的成功制备，为检测ACLY蛋白表达水平及研究ACLY在肿瘤及心血管疾病中的致病机制提供有力的工具，将有助于对肿瘤及心血管疾病患者制定多样合理的治疗方案。     

杂交瘤技术:实用方面的新进展

本文叙述有关杂交瘤的建立及其发展为大规模生产单克隆抗体(McAb)的技术进展。重点介绍提高融合效率和体外生产抗体的技术,使用化学成分明确的培养基以及尝试产生鼠类以外(特别是人类)的抗体。     

识别乙型肝炎病毒前S(2)抗原决定簇的单克隆抗体——前S(2)抗原决定簇及抗前S(2)抗体的特征

作者将小鼠骨髓瘤细胞与经乙型肝炎病毒(HBV)免疫的小鼠脾淋巴细胞融合,获得一株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,所产生的McAb能特异性地识别由HBV基因组前S(2)区编码的抗原决定簇。由这株杂交瘤细胞分泌的McAb Mo-F124能与HBV及重组HBsAg颗粒表面和前S(2)抗原决定簇反应。前S(2)抗原决定簇为前S(2)和S基因产物,即HBV包膜上的34KD糖蛋白,经金     

从除去IgG的组织培养液提纯单克隆抗体

作者报道一种方法,利用G蛋白(一种重组链球菌生物工程制品)能和免疫球蛋白G(IgG)结合的特性,将其作为配基,连接在载体琼脂糖凝胶上,经亲和层析,分离纯化杂交瘤细胞培养上清里的IgG单克隆抗体(McAb)。由于G蛋白无法将IgG McAb和培养基中小牛血清IgG区分开来,作者采用在杂交瘤细胞培养前,先通过G蛋白琼脂糖凝胶亲和层析的方法除去小牛血清IgG。     

单克隆抗体的制备、纯化和保存方法对其特异性的影响

将流感病毒NT68株所产生的血凝素作为抗原,通过杂交瘤技术获得38个亚克隆细胞株.其中各有10株分别分泌IgG_1、IgG_(2a)、IgG_(2b)、8株分泌IgM.杂交瘤细胞经组织培养或注入BALB/c小鼠腹腔制备单克隆抗体McAb.用同种病毒作血凝抑制(HI)试验测定抗体效价,用一组非同种病毒株作HI试验测定McAb的特异性和交叉反应性.McAb经以下物理处理:(1)温度:将腹水作1∶500～1∶2000系列稀释后,分别置62℃、10分钟;56℃、30分钟;37℃、1小时;20℃、16小时.并以     

肝癌组织γ-谷氨酰转移酶单克隆抗体制备及ELISA方法的建立

目的应用纯化的人肝癌组织中蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰转移酶(GGT)制备单克隆抗体(McAb),并建立ELISA检测方法。方法应用亲和色谱法纯化肝癌组织中DSA强结合的GGT;采用单克隆抗体技术获得其McAb;protein A-Sepharose亲和色谱法纯化McAb,过碘酸钠法标记HRP法后建立ELISA方法。结果获得5株能特异性识别DSA强结合GGT的McAb细胞株,其中3株细胞所分泌McAb具有较高的特异性,应用所获得McAb进行HRP标记后,建立的ELISA方法,其检测灵敏度为10μg/L,批内及批间平均变异系数为8.9%和11.5%。结论成功制备了DSA强结合的GGT McAb杂交瘤细胞系,并建立了ELISA免疫学检测方法,为临床应用打下基础。     

单克隆抗体在药理学和临床治疗中的应用

<正> 单克隆抗体(monoclonal antibo-dies,McAb)是当前免疫学领域中发展极其活跃的一个分支。淋巴细胞杂交瘤技术的成功,被誉为“免疫学上的一次技术革命”,使得人们可以按照自己的意愿去生产大量纯一的McAb,不仅为包括药理学在内的生物医学的基础理论研究提供了有效的分析手段,而且为临床应用开辟了新的途径。     

抗AFPMcAb在诊断肝癌中的应用——附三种检测方法的比较

AFP测定是目前肝癌诊断中特异性较强、敏感性较高、简便易行的一项血清学指标。为适应肝癌高发现场研究的需要,我们应用杂交瘤技术获得了一株能分泌 AFPMcAb 的杂交瘤细胞株6D_2。将此 McAb 以 ELISA 法用于肝癌的临床诊断,并与多克隆抗体放射免疫(放免法)和放射免疫火箭电泳自显影(火箭法)作比较,结果分析如下。     

单克隆抗-HBe的再检测及进一步鉴定

HBeAg在血清中的浓度很低,难以提纯定量的HBeAg免疫动物,以制备多隆抗血清用于免疫诊断试验。本文报告了将HBeAg和HBsAg阳性血浆经人抗-HBe IgG亲和层析技、Bio-Gel P2柱及蔗糖密度梯度离心,可获得高纯度HBeAg,将其免疫小鼠后经杂交瘤技术得到5H12C81和12H7C161两株杂交瘤,其分泌的单克隆抗体(McAb)均属IgG2a亚型,但结合力研究显示,12H7C161抗体与HBeAg的结合率高于5H12C81McAb和多克隆抗-HBe。作者将这两个单克隆抗-HBe与以前分离     

抗体工程——发展单克隆抗体的策略

抗体工程是指能分离出可产生某一种预定性质抗体的杂交瘤的选择工程。本文综述杂交瘤技术的进展,并阐述单克隆抗体(McAb)的体外生产及其用于诊断试剂、工业化提纯和治疗等方面的前景。杂交瘤技术的近况一、免疫免疫的目的是取得分裂活跃并能产生特异性抗体的B淋巴细胞。在免疫过程中有许多变化因素:如被激活的B淋巴细胞的来源(动物和器官的种类)和免疫程序(包括抗原量、佐剂的选择和免疫途径)等。所以,现用     

用半连续无血清无蛋白培养生产单克隆抗体-谷氨酰胺浓度与培养条件对细胞生长和抗体分泌的影响

作者曾报道,将分泌单克隆抗体(McAb)的小鼠杂交瘤细胞在转瓶中用无血清无蛋白培养基(BDM)进行半连续培养,与含血清培养基静止培养相比,McAb的分泌量可增加2.4倍。为进一步优化细胞在BDM中的生长和分泌McAb的培养条件,作者继续就BDM的成分与培养条件作了更深入的探讨。将杂交瘤细胞株7F11C7(分泌小鼠IgG1)解冻后,置于无血清无蛋白BDM(Eagle's:Ham's F12:NCTC135为5:5:1)中,在饱和湿度及10%CO_2的条件下培养,并经多     

分泌抗人α干扰素单克隆抗体杂交瘤的建株及其特性

作者的目的在于获得大量产生抗人α干扰素(HuIFN-α)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤,并利用它来分析IFN分子的结构和生物     

用单克隆抗体分析白喉毒素:Ⅰ.抗原决定簇的定位和细胞毒的中和

用白喉类毒素免疫小鼠,将其脾细胞与NS1骨髓瘤细胞融合,得到43株产生抗白喉毒素单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系.用此McAb对毒素分子的抗原决定簇定位的方法是用固相ELISA和/或Western印染法测定McAb和以下物质的反应情况:(1)分离出的毒素的A片段(Fa)和B片段(Fb);(2)提早终止的tox基因产物;(3)同CNBr结合     

黑斑双鳍电鳐烟碱受体单克隆抗体及其在重症肌无力病研究中的应用

以纯化的NAChR为抗原免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞P_3U_1融合生成杂交瘤,用间接免疫荧光法和ABC-ELISA进行筛选,建立了三株NAChR McAb杂交瘤细胞株(A_7,E_4,G_3)。三种McAhs均属IgG_1,E和G_3可与NAChR上的α亚基结合。以E_4和G_3 McAbs为探针,用ELISA检测24例MG病人血清,发现12例病人血脚中存在McAb E_4的抗独特型抗体,其中11例有McAb G_3的抗独特型抗体,提示MC病人体内可能存在共有的独特型和功能性的自身免疫网络。     

抗乙型肝炎病毒单克隆抗体的研制和应用

乙型肝炎病毒(HBV)不能在非灵长类动物体内增殖,组织培养分离病毒亦未成功,加之该病毒结构成份复杂,又常掺杂有宿主蛋白,因此各种诊断方法需要依赖高度敏感的免疫血清学试验和高度特异性的抗体.淋巴细胞杂交瘤技术能产生大量质量均一的具有高度特异性的单克隆抗体(McAb).目前,已经制成了针对HBV在血清学上可以识别的几种抗原——表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)和核心抗原(HBcAg)的McAb.本文仅就近年来国外在抗HBV各种抗原的McAb的研制和应用方面作一综述.     

天津地区抗霍乱弧菌单克隆抗体（McAb）细胞系的建立及其应用的研究

用 SP_2/0小鼠骨髓瘤细胞与 EL-Tor 霍乱弧菌免疫的 Balb/c 小鼠脾细胞,在 PEG-1000作用下进行融合,获得9株分泌抗霍乱弧菌 McAb 的杂交瘤细胞系。用 ELISA 法对其中两株分泌的 McAb 进行特异性、敏感性实验,免疫球蛋白的类型鉴定及染色体检查。并用羟基磷灰石梯度提纯的 McAb 与兰州生研所生产的多克隆抗体(PcAb),对200例临床粪便标本,用双盲法进行快速检测。结果表明,McAb 的敏感性和特异性均优于 PcAb,同时也证实 McAb 应用于霍乱病人的诊断及菌株鉴定的可行性。