应用套式PCR检测嗜肺军团杆菌的实验研究

应用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测１￣６型嗜肺军团杆菌，两轮ＰＣＲ都分别出现了９９６ｂｐ和６５０ｂｐ的特异性扩增产物；而金黄色葡萄球菌等七种细菌均未出现特异性扩增。两轮ＰＣＲ分别可以检测１０ｐｇ和１０ｆｇ的模板ＤＮＡ。８份嗜肺军团杆菌含量分别为１￣１０＾７ｃｆｕ／ｍｌ的痰感染模拟标本均出现了特异性扩增产物。提示该方法可用于临床，特别是检测含微量嗜肺军团杆菌的临床标本。     

用聚合酶链反应快速检测血液中伤寒杆菌

用聚合酶链反应检测伤寒患者血液标本中伤寒杆菌。根据伤寒杆菌鞭毛抗原基因ＤＮＡ的核苷酸序列，合成２对寡核苷酸引物，以该基因的ＤＮＡ片段作为模板，经首次ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ扩增后，产物分另为４５８ｂｐ和３４３ｂｐ的寡核苷酸片段。首次ＰＣＲ检测的敏感度可达１０条伤寒杆菌ＤＮＡ水平。     

PCR衍生技术及其应用

ＰＣＲ衍生技术及其应用生化教研室周晓霞周晓慧王鲁华关键词ＰＣＲ；扩增ＰＣＲ是近年发展起来的生物高技术，其模拟天然ＤＮＡ的复制过程，可在体外迅速、大量地扩增人工选定的一定长度的ＤＮＡ序列，使微量生物样品中的ＤＮＡ分析更加简捷、快速、灵敏。此技术自１９８...     

结核杆菌特异性重复DNA序列的PCR扩增检测

结核杆菌特异性重复ＤＮＡ序列的ＰＣＲ扩增检测徐华梅，巫绪芳，潘理明，吴竞生，王祖贻结核杆菌染色体ＤＮＡ中有一段多次重复出现的核甙酸序列，以此基因片段作为靶ＤＮＡ，利用ＰＣＲ技术进行扩增，为结核病人快速诊断，及时治疗提供依据。本文摘要报告我们的研究结果...     

应用嵌套式PCR法检测结核杆菌DNA

应用嵌套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）法检测结核菌ＤＮＡ，所用内、外两对寡核苷酸引物衍生于３７．７ｕ（３８ｋＤａ）蛋白抗原ｂ的编码（Ｐａｂ）ＤＮＡ序列。对６种抗酸分枝杆菌和１０种非分枝杆菌ＤＮＡ进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色证实，只有人型结核杆菌、牛型结核杆菌和卡介苗（ＢＣＧ）出现３２２ｂｐ特异扩增带，而其他菌种未见此种扩增。第１步和第２步ＰＣＲ分别检测到的最低限量为１０ｐｇ和１０ｆｇ的靶ＤＮＡ。采用此法检测７２份临床标本，结果显示：该技术具有特异性强、敏感性高、快速简便的优点，尤适用于肺内外结核的早期诊断。     

反转录—聚合酶链反应在呼吸道合胞病毒感染检测的应用

为呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染的临床诊断寻求敏感，特异的检测方法，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增毒培养液和急性呼吸道感染患者鼻咽分泌物中的ＲＳＶ基因，并应用地高辛标记ｃＤＮＡ探针对扩增产物进行鉴定。结果成功地提取了ＲＳＶｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，经扩增得到４７１ｂｐ左右ｃＤＮＡ区带。流感病毒Ｂ，副流感病毒２型，腺病毒７对照无扩增带，ＲＳＶ培养液１０倍连续稀释至１：１０００，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增仍可见４     

PCR循环测序法检测K—ras和HCV5‘非编码区基因变异

建立一种简单，快速，可靠的ＤＮＡ序列分析方法，并利用此方法分析了Ｋ－ｒａｓ基因和ＨＣＶ５‘非编码区基因的变异情况。方法；ＰＣＲ循环测序法是将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析相结合的一种研究方法。根据此技术原理，建立以ＰＣＲ扩增引物为测序引物，利用Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶，荧光标记的２’３‘－双脱氧核苷三磷酸直接进行ＰＣＲ扩增产物序列分析的方法。     

结核分枝杆菌耐药基因检测

目的：研究结核分枝杆菌耐药的分子机制，建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。方法：通过聚合酶链反应、ＰＣＲ－单链构象多态性、ＰＣＲ－限制性片段长度多态性分析ＭＴ临床分离株的ｒｐｏＢ、ｒｐｓＬ、ＫａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列。结果：ＰＣＲ分析耐药基因的敏感性为１－１０ｐｇＤＮＡ；除ｒｐｏＢ经物ＰＣＲ扩增为属特异性外，余耐药基因引物ＰＣＲ扩增都具有较高的种特异性。与传统药敏试验方法相比，ＰＣＲ与Ｐ     

用聚合酶链反应快速检测血液中伤寒杆菌

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测伤寒患者血液标本中伤寒杆菌。根据伤寒杆菌鞭毛抗原基因ＤＮＡ的核苷酸序列，合成２对寡核苷酸引物，以该基因的ＤＮＡ片段作为模板，经首次ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ扩增后。产物分别为４５８ｂｐ和３４３ｂｐ的寡核苷酸片段。首次ＰＣＲ检测的敏感度可达１０条伤寒杆菌ＤＮＡ水平。对１０例有伤寒临床表现、血培养有伤寒杆菌生长的患者的血液标本进行了ＰＣＲ检测，结果，首次ＰＣＲ检测９例呈阳性；嵌套式ＰＣＲ检测１０例均呈阳性。对其中３例伤寒患者的血清和白细胞分别作ＰＣＲ检测，结果均呈阳性。这些结果提示大部分伤寒患者的血清标本只需作首次ＰＣＲ检测即可呈阳性。由于作者对标本的预处理方法作了改进，于９ｈ后可获首次ＰＣＲ结果     

PCR检测结核分枝杆菌复合群IS_(986)DNA重复序列

用ＰＣＲ检测ＭＴＢＣ特异的ＩＳ９８６ＤＮＡ重复序列。ＩＳ９８６ＤＮＡ重复序列全长１３５８ｂｐ，特异地存在于ＭＴＢＣ细菌染色体ＤＮＡ中，并且多次重复出现。作者参照文献，在此序列内合成一对引物，扩增出１８８ｂｐ的ＭＴＢＣ特异的ＤＮＡ片段。实验证明具有高度的特异性和敏感性。与其它的分枝杆菌和人血细胞ＤＮＡ无交叉反应。最小检出极限为１０ｆｇＤＮＡ或１０个菌体／ｍｌ。对ＰＣＲ反应体系中有关实验条件如引物浓度、ＴａｑＤＮＡ聚合酶用量、循环程序等进行了优化选择。在临床标本细菌ＤＮＡ抽提中首次采用了简便的ＴＥ－Ｔｒｉｔｏｎ煮沸法，节省了成本，使整个检测时间缩短至６～８ｈ，适合于临床实验室对结核病病原学的检测     

环境及理化因素对牙髓组织脱氧核糖核酸聚合酶链反应性别鉴定的影响

本文报道用一对特异的Ｙ＿（１．１），Ｙ＿（１．２）引物对经温度、湿度、ｐＨ、福尔马林、乙醇和土埋处理的牙髓ＤＮＡ及室温保存的陈旧牙髓ＤＮＡ进行扩增。结果发现男性牙齿出现特异的１５４ｂｐ扩增带，女性未出现带。男性４５颗牙经环境及理化因素处理，其中经土埋、水泡和ｐＨ２各处理１０周及火烧１０分钟的牙髓ＤＮＡ未见特异的１５４ｂｐ扩增带；经６６％湿度、ｐＨ１０各处理１０周以及火烧５分钟后的牙髓ＤＮＡ扩增带较弱，其余均有１５４ｂｐ的扩增带出现；６颗高分子量ＤＮＡ和２４颗高分子量伴部分降解的ＤＮＡ经扩增能获得比较满意的结果：１１颗牙齿完全降解的ＤＮＡ除１颗ＰＣＲ扩增结果未显带外，其余都显带；４颗牙齿电泳未检出ＤＮＡ，除１颗ＰＣＲ扩增结果显带外其余皆无带，说明只要降解的ＤＮＡ中仍含有待扩增的靶ＤＮＡ序列，就可用ＰＣＲ扩增作性别鉴定。     

恙螨RAPD－PCR初步研究

通过制备恙螨的基因组ＤＮＡ，利用一组１０个碱基序列的单链随机引物，建立恙螨的随机引物ＤＮＡ多态性分析技术（ＲＡＰＤ－ＰＣＲ），为恙螨的种间、种内、种下、种群之间的分子分类、遗传特性、亲缘关系等研究打基础。本研究筛选出Ｎ０１，Ｎ０５，Ｎ０８，Ｎ１０４个随机引物，较适的缓冲液ｐＨ值，Ｍｇ￣（２＋）浓度和模板ＤＮＡ浓度，以及ＰＣＲ实验参数。     

PCR影响因素初探（一）Mg~（＋＋），dNTP等对PCR扩增结果的影响及控制方法

为进一步提高聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的特异性和敏感性，本文探索了ＰＣＲ反应体系中ＤＮＴＰ，Ｍｇ~，引物及Ｔａｑ酶等对ＤＮＡ扩增结果的影响及控制方法。结果表明上述因素对扩增结只有重要影响作用。通过实验确定上述成分的最佳浓度及采用ＤＮＡ杂支技术或序列测定技术检测ＰＣＲ产物，不仅将有助于进一步提高此反应的特异性和敏感性，而且亦将有助于扩大ＰＣＲ技术的应用范围。     

16s～23s rDNA间隔区序列RFLP分析在分枝杆菌分类鉴定中的应用

目的：通过对分枝杆菌１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列ＤＮＡ ＰＣＲ扩增和限制性酶切分析，评价其在分枝杆菌分类鉴定中的价值。方法：对２１种分枝杆菌和９种亲缘关系较远的非分枝杆菌和４种亲缘关系较近的非分枝杆菌的１６ｓ～２３ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增并对扩增产物进行限制性内切酶ＨａｅШ．Ｍｓｐ ｉ消化反应，分析不同菌种扩增 段及其限制性片段长度多态性的差异。结果：ＰＣＲ扩增结果显示：分枝     

PCR技术的新发展及新用途

ＰＣＲ技术的新发展及新用途（２１０００２）南京八一医院肿瘤中心电镜室苏长青综述乐美兆审校ＰＣＲ技术的发明，是分子生物学领域的一项里程碑，自问世以来就立即得到普遍重视。基于ＰＣＲ是模拟天然ＤＮＡ复制过程而设计的特异ＤＮＡ序列体外扩增方法，许多研究人员充...     

用聚合酶链反应技术诊断结核病

用聚合酶链反应技术对结核杆菌特异性重复序列ＩＳ６１１０部分基因１２３ｂＰ的片段进行扩增。该法检测人型结核杆菌灵敏度可达到１０ｆｇＤＮＡ，对１４９份结核患者临床标本检测结果显示ＰＣＲ总阳性率（６９．１％）明显高于直接涂片荧光镜检（１５．４％）与细菌培养（１０．１％）的阳性率（Ｐ＜０．０１）。研究表明ＰＣＲ是一种特异、敏感、快速诊断结核病的好方法，值得推广。     

中华按蚊不同地理株基因组DNA的多态性

目的：研究中华按蚊不同地理株基因组ＤＮＡ的多态性。方法：应用ＲＡＰＤ技术，用２０个随机引物（ＯＰＥ０１￣ＯＰＥ２０）对江苏，福建，海南，贵州，陕西５个省区中华按蚊的基因组ＤＮＡ进行了ＰＣＲ扩增。     

组织检材的PCR性别鉴定研究

作者用引物Ｙ３、Ｙ４通过ＰＣＲ技术对微量陈旧的组织检材进行了扩增，扩增的靶序列位于Ｙ染色体ＤＮＡ特异３．４Ｋｂ重复序列中，产物为４４６ｐｂ。检材是新鲜组织、甲醛固定组织、石蜡包埋组织和ＨＥ染色切片组织。检材的保存时间从凡小时到五年。结果表明：新鲜组织，１０％中性缓冲甲醛固定一年以下的组织和石蜡包埋３年以下的组织均可做为ＰＣＲ性别鉴定的良好检材。     

庚型肝炎病毒不同地理株5‘端非编码区序列的变异性分析

目的：为明确了解中国不同地区（广东，云南，香港）庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）株５‘端非编码区（ＮＣＲ）序列的差异。方法：采用逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，从广东省２例，云南省１例，香港３例共６例ＨＧＶ感染者血浆中扩增ＨＧＶ５’ＮＣＲ ｃＤＮＡ片段，为２３８ｂｐ，ＰＣＲ产物纯化后直接经对脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。结果：中国ＨＧＶ株间５‘ＮＣＲ相应序列的同源性介乎９２．９３％￣９７．９８     

组织检材的PCR性别鉴定研究

作者用引物Ｙ３、Ｙ４通过ＰＣＲ技术对微量陈旧的组织检材进行了扩增，扩增的靶序列位于Ｙ染色体ＤＮＡ特异３．４Ｋｂ重复序列中，产物为４４６ｐｂ。检材是新鲜组织、甲醛固定组织、石蜡包埋组织和ＨＥ染色切片组织。检材的保存时间从几小时到五年。结果表明：新鲜组织，１０％中性缓冲甲醛固定一年以下的组织和石蜡包埋３年以下的组织均可做为ＰＣＲ性别鉴定的良好检材。