没食子儿茶素没食子酸酯对Cr~(6+)诱导的Vero及786-0肾细胞凋亡的影响

目的　探讨没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肾脏受活性氧应激损伤的保护作用。方法　以Cr6 +应激诱导Vero和 786 0肾细胞凋亡为实验模型 ,用吖啶橙染色、流式细胞仪检测和DNA凝胶电泳等方法研究了EGCG对两种肾细胞凋亡的影响。结果　Cr6 +浓度依赖地降低Vero和 786 0细胞存活率 ,IC50 分别为 9.8和 8.6mg·L- 1;其中 4 0 0mg·L- 1/2hCr6 +处理可诱导Vero和 786 0细胞凋亡。2 0～ 6 0mg·L- 1EGCG有效抑制Cr6 +引起的Vero活细胞数下降 ,且 4 0mg·L- 1EGCG显著抑制该细胞凋亡 ;但EGCG对 786 0细胞没有相应的保护作用 ,相反促进 786 0细胞凋亡。结论　EGCG对正常肾细胞的氧化应激损伤有保护作用 ,但对肿瘤细胞的氧化损伤没有保护作用。EGCG对正常肾细胞和肿瘤肾细胞的选择性作用具有积极意义     

氯化两面针碱体外对人口腔鳞癌多药耐药细胞KBV200的抗癌活性

目的探讨氯化两面针碱对多药耐药癌细胞的抗癌作用。方法应用MTT比色法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞周期,Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡,酶联免疫吸附法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)含量。结果氯化两面针碱(0.75,1.5,3,6和12mg·L-1)浓度依赖性地降低人口腔鳞癌多药耐药细胞KBV200的存活率,作用48h时IC50值为(2.43±0.19)mg·L-1;氯化两面针碱(0,3,6和9mg·L-1)与KBV200细胞作用48h,细胞凋亡率依次为(1.6±0.4)%,(2.3±0.7)%,(14.0±2.5)%和(8.3±2.2)%;氯化两面针碱6mg.L-1可使KBV200细胞caspase3含量升高,3mg·L-1作用12,24和48h可增加KBV200细胞G2/M期细胞比例。结论氯化两面针碱对多药耐药KBV200细胞具有抑制生长、促进凋亡和阻滞细胞周期的作用,可能是对多药耐药癌细胞敏感的一种中药活性成分。     

聚酯型儿茶素对小鼠淋巴细胞增殖和凋亡的影响

目的 :研究聚酯型儿茶素 (theasinesin ,TS)对小鼠淋巴细胞增殖和凋亡的影响。方法 :采用MTT法研究TS对小鼠脾细胞增殖的影响 ,采用形态学检测、DNA琼脂糖凝胶电泳及FACS分析方法研究TS对小鼠胸腺细胞自发凋亡及地塞米松诱导脾细胞凋亡的影响。结果 :5 0、15 0、5 0 0mg·L- 1TS对小鼠脾淋巴细胞增殖有明显促进作用。小鼠胸腺细胞体外培养 2 0后 ,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNAlad der,FACS图上出现典型的亚二倍体凋亡峰。 5 0、15 0、5 0 0mg·L- 1TS作用后 ,随药物剂量增加DNAladder减弱 ,凋亡峰减小 ,细胞凋亡率从 19.87%分别减为 12 .14%、9.4 9%、6 .71%。但不同浓度TS对地塞米松诱导的小鼠脾细胞凋亡无明显影响。结论 :聚酯型儿茶素可明显促进小鼠脾淋巴细胞增殖 ,同时可抑制小鼠胸腺细胞自发凋亡 ,两者总的效应是一致的。     

高三尖杉酯碱对鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的　探讨高三尖杉酯碱 (homoharringtonine,HHT)对鼻咽癌细胞CNE 2Z的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法　采用MTT法检测增殖抑制率和IC50 ,流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和Hoechst 3 3 2 5 8/PI荧光染色分析细胞凋亡。结果　不同浓度的HHT分别处理CNE 2Z细胞 2 4、48和 72h ,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增高 ,其IC50 分别为(0 62 9± 0 0 3 9)、(0 483± 0 0 2 7)、(0 3 89± 0 0 2 7)mg·L-1,各IC50 间差异有统计学意义 (P <0 0 1)。 1、0 5mg·L-1HHT处理细胞 8h ,流式细胞术观察到凋亡峰 ,荧光染色可见凋亡形态学改变 ,流式细胞术和荧光染色检出的凋亡率均高于对照组 (P <0 0 1) ;1mg·L-1HHT处理细胞 8h ,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。结论　HHT对CNE 2Z细胞具有增殖抑制作用 ,此抑制作用具有剂量和时间依赖性 ;HHT可诱导CNE 2Z细胞凋亡     

紫杉醇诱导食管癌细胞的细胞周期阻断与细胞凋亡

目的研究紫杉醇对食管癌细胞的细胞周期阻断及诱导凋亡的作用。方法应用形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法对紫杉醇诱导的食管癌细胞系Eca109进行了检测和观察。结果紫杉醇可将食管癌细胞阻断于G0／G1期及G2／M期并诱导其凋亡，凋亡细胞具有典型的凋亡形态特征，流式细胞仪检测有凋亡峰出现，琼脂糖凝胶电泳显示3nmol·L-1紫杉醇作用72h便可见明显的DNA梯带。100nmol·L-1和1000nmol·L-1浓度的紫杉醇作用于细胞，在形态变化与细胞周期变化上有很大差别。紫杉醇作用短时间（＜2h）去除后再培养比持续性作用更早促使细胞凋亡。结论紫杉醇不仅可以阻断食管癌细胞的分裂，而且对于间期细胞也有很大作用。细胞周期阻断并不直接诱导细胞凋亡，甚至可能抑制细胞凋亡的进程。食管癌细胞中存在多条凋亡途径。     

小檗碱对人胃癌MGC-803细胞生长抑制及诱导凋亡的作用

目的　研究小檗碱对胃癌细胞株生长抑制、诱导凋亡作用 ,及其作用浓度、时间与细胞数目、凋亡程度的关系。方法　苔盼蓝细胞计数 ,MTT染色 ,甲基绿 派诺宁染色观察凋亡特征及计数 ,流式细胞仪技术 ,琼脂糖电泳技术分析药物对DNA作用。结果　小檗碱能抑制胃癌细胞MGC 80 3的生长。 8mg·L-1、4mg·L-1、2mg·L-1、1mg·L-1小檗碱 72h的抑制率分别为 10 0 %、80 4%、5 1 5 %、8 5 %。小檗碱作用细胞后 ,细胞表现出较为典型的细胞凋亡形态 :细胞核固缩 ,染色质凝集断裂 ,颗粒含量增加等 ;72h死亡的细胞中抗拒苔盼蓝染色者 ,仍高达 6 0 %～ 82 % ,胞膜完整 ;流式细胞仪DNA直方图上出现典型亚二倍体峰 ;琼脂糖凝胶电泳分析表明 :小檗碱可使染色质断裂 ,且发生于细胞膜结构被破坏之前 ,DNA形成大片段 ,但不形成小片段。结论　小檗碱体外能抑制胃癌MGC 80 3细胞增殖和诱导细胞凋亡 ,其细胞毒性 (致细胞坏死作用 )较弱     

EGCG诱导鼻咽癌细胞凋亡的cDNA阵列分析

目的　探讨茶中多酚类物质EGCG介导鼻咽癌细胞凋亡的机制以及对EB病毒潜伏膜蛋白 (LMP1)诱导凋亡的干预作用。方法　采用已建立的受四环素调控的LMP1表达的鼻咽癌细胞系 (pTet on LMP1HNE2 ) ,经 0 6mg·L-1Dox和 10 0mg·L-1EGCG处理 2 4h后 ,抽提RNA ,分别与含有细胞凋亡相关基因为主的AtlasapoptosiscDNAexpres sionarray膜杂交。结果　EGCG上调或下调某些与鼻咽癌细胞凋亡相关基因表达。结论　EGCG诱导肿瘤细胞凋亡的作用是多个基因及多条信号转导通路作用的结果 ,并对LMP1诱导鼻咽癌细胞凋亡相关基因表达有一定的干预作用     

甲基莲心碱对长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡的影响

目的　观察甲基莲心碱 (Nef)在体外对长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡的影响。方法　采用MTT比色法检测药物的细胞毒性作用 ,并用流式细胞术、AO/EB双重荧光染色法和TUNEL法测定甲基莲心碱对长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡率的影响。结果　 2 5、5、1 0 μmol·L- 1 Nef能增强长春新碱对人胃癌细胞 (SGC790 1 )增殖的抑制作用 ;1 0 μmol·L- 1 Nef能增强长春新碱 (0 1、0 5、2、4mg·L- 1 )诱导SGC790 1细胞凋亡。结论　甲基莲心碱能增强长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡 ,推测其为一种低毒高效的化疗增敏剂。     

拓扑替康对肺癌细胞生长周期的影响及诱导凋亡的作用机制

目的　研究拓扑替康 (topotecan ,TPT)对人肺癌SPC A 1细胞生长周期的影响及诱导凋亡的作用 ,并探讨Caspase 3及Bcl 2在此过程中的作用。 方法　体外培养肺癌细胞 ,分为对照组 (未处理组 )、TPT(5、10、15和 2 0mg·L-1)组、半胱天冬酶 3 (Caspase 3 )特异性拮抗剂Ac DEVD CHO +TPT组 ,加药后培养 2 4h ,TUNEL法观察肺癌细胞凋亡形态学特征 ;流式细胞仪观察细胞生长周期变化并检测凋亡率和肺癌细胞Bcl 2蛋白的表达。结果　TPT (5mg·L-1)处理细胞 2 4h ,流式细胞仪未检测到凋亡峰 ,随着TPT浓度增大 ,凋亡率显著增高 ,各浓度组间差异具有显著性 (P<0 0 1) ;TUNEL及透射电镜检测到典型的凋亡细胞形态学特征 ,凋亡细胞DNA呈梯状电泳 ;流式细胞仪检测到细胞周期发生改变 ,G1期细胞较对照组增多 (P <0 0 1) ,S期细胞减少 (P <0 0 1) ;TPT(2 0mg·L-1)处理细胞后肺癌细胞凋亡率为 11 9%± 2 6% ,高于对照组细胞 (P <0 0 1) ;Bcl 2蛋白阳性表达细胞率为 7 9%± 1 2 % ,较对照组 (44 7%±7 1% )降低 (P <0 0 1) ;Ac EDVD CHO (5 0 μmol·L-1)和TPT(2 0mg·L-1)共同处理细胞 2 4h其凋亡率为 6 1%±1 8% ,较单纯TPT作用组降低 (P <0 0 1) ;Bcl 2蛋白阳性表达率为 3 3 4%± 5 2 % ,较单纯TPT作用组增高     

大黄素对抗顺铂引起的WI-38细胞凋亡

目的　从细胞水平研究大黄素对顺铂引起WI 38细胞凋亡的影响。方法　采用MTT法检测细胞毒性 ,用形态学观察、DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果　WI 38细胞经大黄素和顺铂同时处理 2 2h后 ,30mg·L- 1大黄素可明显减轻顺铂引起的细胞毒性 ,其IC50 值由 (16± 3)mg·L- 1增加至 (34± 6 )mg·L- 1;可明显抑制顺铂引起的细胞形态学改变、核异染色质边集和DNA片段化 ,使顺铂 10和 30mg·L- 1导致的细胞凋亡率由 35 .5 6 %和33.99%降至 9.2 1%和 10 .2 5 % ,S期细胞百分数由6 2 .6 6 %和 4 8.4 6 %降至 4 8.6 7%和 36 .18%。结论　大黄素可对抗顺铂所致WI 38细胞凋亡 ,可能与其对细胞周期的影响有关     

Study on the pharmacokinetics of tea polyphenols injection in rat plasma

Objective To study pharmacokinetics of the main active ingredients(-)Epigallocatechin-3-gallate(EGCG)and(-)Epicatechin-3-gallate(ECG)of tea polyphenols(TP)injection in rats.Methods EGCG and ECG in rat plasma were analyzed by reversed-phase HPLC,by which EGCG and ECG were eluted from a Kromasil C18 column with a linear gradient mobile phase consisting of CH3CN-0.1% citric acid at a gradient flow rate of 1.0-1.5 mL·min-1 and monitored at a wavelength of 280 nm.Fifteen rats were randomly divided into 3 groups of 5 animals receiving iv administration of TP injection,formulated with catechins-containing extract from green tea,at doses of 150,100 and 50 mg·kg-1,respectively.Blood samples were collected pre-dosing and 2,5,10,20,40,60,90,120,180,240,300 min postdosing.Aliquots of obtained plasma(200 μL)were cleaned up by liquid-liquid extraction with double volumes of EtoAc and were reconstituted with 100 μL of 10% CH3CN aqueous solution before injecting to chromatograph.Results The time course of EGCG and ECG concentrations in rat plasma decayed in a biexponential fashion.Their iv pharmacokinetics could be described by the two-compartment model and first-order kinetics with t1/2β 112.39-145.20 min and 46.63-61.48 min,Vd 6.28-7.96 L·kg-1 and 0.90-1.22 L·kg-1,CL 0.034-0.044 L·kg-1·min-1 and 0.010-0.015 L·kg-1·min-1 for EGCG and ECG,respectively.Conclusions The EGCG and ECG in plasma of rats administered i.v.TP injection pharmacokinetically behaved with linear kinetics over dose range studied.The two catechin derivatives undergo rapid elimination from rat body.As compared with ECG,EGCG eliminates at a relatively slow rate,and is distributed very widely with a Vd greatly exceeding the volume of total body water,suggesting that EGCG is likely to enter the tissue cells or strongly bind to some tissues to exert its potent antioxidant effects.The aforementioned characteristics of EGCG may be due to its high lipophilicity.     

苦参碱与3种抗肿瘤药物联合作用对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响

目的:探讨苦参碱分别与3种常用抗肿瘤药物长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)合用对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响。方法:将培养后的KBV耐药细胞分为对照组、抗肿瘤药物组及其与苦参碱合用组,采用流式细胞仪检测、分析各组细胞周期的变化及凋亡情况。结果:与抗肿瘤药物单用组比较,苦参碱与VCR、ADM合用组细胞处于不同周期的细胞比例及凋亡数均无明显变化;苦参碱与DDP合用组G0~G1期细胞数下降、G2~M期细胞数升高。结论:推测苦参碱逆转KBV200细胞对VCR和ADM的耐药作用可能与细胞周期及凋亡无关;苦参碱能轻度增强DDP的细胞毒作用。     

灵芝多糖肽对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮产生的影响

目的　研究灵芝多糖肽 (GLPP)对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮产生的影响并探讨其作用机制。方法　以Griess法 ,观察GLPP对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)产生的影响 ;以免疫组化法检测诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)的表达 ,观察GLPP对iNOS的影响。结果　GLPP(2 5～ 2 0 0mg·kg-1)灌胃给药 5d或体外给药 (3 12 5～ 2 0 0mg·L-1)均可促进巨噬细胞NO释放 ,但对LPS刺激NO的释放影响不大 ;GLPP(10 0mg·kg-1)灌胃给药 5d或体外给药 (10mg·L-1)均可使巨噬细胞iNOS含量增加。结论　GLPP可增加小鼠腹腔巨噬细胞NO产生 ,其机制可能与其促进巨噬细胞iNOS合成有关。     

野生型p53基因促进长春新碱诱导的细胞凋亡

为探讨VCR与p53介导的细胞凋亡的关系,将野生型p53基因导入一个内源性p53基因重组的多药耐药细胞系 KB_V200,经抗性筛选和杂交鉴定获得外源性p53基因稳定表达的转染细胞系KB_V200-p53。VCR处理细胞后,经电镜及荧光显微镜观察表明KB_V200-p53细胞呈现凋亡的典型形态学特征;而流式细胞术结果显示经600nmol·L^-1的VCR作用24h,KB_V200-p53细胞和KB_V200细胞的凋亡百分数分别为42.4%和8.4%。结果提示野生型p53基因能促进VCR诱导的细胞凋亡,肿瘤细胞对VCR的耐药性可能与细胞内p53基因失活有关。     

A reversed-phase HPLC-UV assay for simultaneous analysis of EGCG and ECG of tea polyphenols in rat plasma

Objective To develop a simple and specific reversed-phase HPLC-UV method for simultaneous determination of(-)Epigallocatechin-3-gallate(EGCG)and(-)Epicatechin-3-gallate(ECG),the main active ingredients of tea polyphenols(TP),in rat plasma.Methods EGCG and ECG were eluted on a Kromasil C18 analytical column(150 mm×4.6 mm,5 μm)protected by a C18 pre-column(4.6 mm×20 mm,10 μm)with a linear gradient mobile phase composed of CH3CN(A)-0.1% citric acid(B),which was run from initial 14% A and 86% B to 20% A and 80% B at a flow rate of 1.0 mL·min-1 in 14 min,then changed to 14% A and 86% B at a gradient flow rate of 1.0-1.5 mL·min-1 during 14-18 min,and then maintained until 22 min at a gradient flow rate of 1.5-1.0 mL·min-1.The UV detector was set at 280 nm.Plasma samples(200 μL each)were prepared by liquid-liquid extraction procedure with double volumes of EtoAc and then evaporation of organic phase under N2 stream to dry,followed by reconstitution with 100 μL of 20% CH3CN aqueous solution.The peak area ratios of analytes to vanillin as internal standard vs concentration of analytes to construct calibration curves.Results The HPLC resulted in base-line separation of vanillin,EGCG,ECG and other components;there was no interference from blank plasma.The linear range was 0.5-300 μg·mL-1 for EGCG(r=0.9999)and 0.1-60 μg·mL-1 for ECG(r=0.9999).The intra-and inter-day precision(RSD)was better than 6.1% and 12.6%,respectively,and the average accuracy was between 86.25%-103.14%.The extraction recovery of EGCG and ECG was 79.80%-84.64% and 75.22%-91.39%,respectively.The plasma samples were stable for at least 30 days at-20 ℃ and 8 h at room temperature;EGCG,ECG and IS stock solutions 2 months at-20 ℃,and the EtoAc-extracted plasma samples 24 h at 4 ℃.Application of the method to the determination of EGCG and ECG in plasma of rats receiving iv 100 mg·kg-1 of TP showed that these 2 compounds pharmacokinetically behaved as the two-compartment model and first-order kinetics,with t1/2β 122.9 min and 59.2 min,Vd 7.96 L·kg-1 and 1.22 L·kg-1,CL 0.044 L·kg-1·min-1 and 0.015 L·kg-1·min-1 for EGCG and ECG,respectively.Conclusions The method developed in the present study is highly specific,precise,accurate,and suitable for the non-clinical pharmacokinetic study of the TP in rats.     

西洋参有效部位对K562细胞凋亡诱导的实验研究

目的利用人的白血病细胞K562对西洋参有效部位(Panaxquinquefolium’effectiveparts,PQEP)的抗癌作用机制进行研究。方法K562细胞进行常规培养后,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法进行PQEP(6.25～400mg·L-1)的细胞毒性测试;利用倒置相差显微镜和荧光显微镜(DAPI染色)来观察细胞形态学改变;凝胶电泳法观察细胞凋亡;通过流式细胞仪分析DNA含量和细胞周期分布。结果PQEP对K562细胞有明显细胞毒性,呈时间和剂量依赖关系;PQEP能明显诱导细胞皱缩,膜膨胀和核染色质固缩和碎裂,形成大约为180～200bp或其多聚体组成的寡核苷酸片断;流式细胞仪观察显示PQEP剂量依赖性地提高凋亡细胞DNA含量,阻止细胞在G1期。结论PQEP能够诱导K562细胞发生凋亡。     

马钱子碱对小鼠淋巴细胞功能的影响

目的　观察镇痛剂量的马钱子碱（ Ｂｒｕ） 对小鼠淋巴细胞功能的影响。方法　测定绵羊红细胞（ Ｓ Ｒ Ｂ Ｃ） 致敏小鼠血清溶血素及脾抗体分泌细胞（ Ａ Ｆ Ｃ） 水平, 二硝基氯苯（ Ｄ Ｎ Ｃ Ｂ） 所致小鼠迟发性超敏反应（ Ｄ Ｔ Ｈ） ,以及丝裂原诱导小鼠脾淋巴细胞增殖和产生 Ｉ Ｌ ２ 能力。结果　 Ｂｒｕ（１０ 及２０ ｍｇ·ｋｇ － １ ,ｉｐ 显著增强小鼠对 Ｄ Ｎ Ｃ Ｂ 的特异性细胞免疫反应,但５ ,１０ 及２０ ｍｇ·ｋｇ － １ 不影响对 Ｓ Ｒ Ｂ Ｃ 的特异性体液免疫反应。对环磷酰胺（ Ｃｙｃ） 降低的上述反应,３ 个剂量的 Ｂｒｕ均有显著恢复作用（ Ｐ＜ ００５ ～００１） 。 Ｂｒｕ １０ ｍｇ·ｋｇ－ １ ｉｐ增强 Ｃｏｎ Ａ 及 Ｌ Ｐ Ｓ 诱导的脾淋巴细胞增殖（ Ｐ＜ ００５） ,对 Ｃｙｃ 所降低的脾淋巴细胞尤其 Ｔ 细胞增殖反应, Ｂｒｕ ５ ～２０ｍｇ·ｋｇ － １ 范围内均使其恢复（ Ｐ＜ ００５ ～００１） 。 Ｂｒｕ ０１ ～１００ ｍｇ· Ｌ－ １ 在体外对丝裂原诱导小鼠脾淋巴细胞产生 Ｉ Ｌ ２能力无明显影响。结论　镇痛有效剂量的 Ｂｒｕ 对小鼠淋巴细胞具有功能依赖性的免疫调节作用     

蜕皮甾酮对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的：研究一种植物成分——蜕皮甾酮（ＥＤＳ）是否能影响人脐静脉血管内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）增殖。方法：采用血管内皮细胞（ＶＥＣ）体外培养的方法，以ＭＴＴ法及流式细胞术观察细胞增殖的情况。结果：（１）ＤＥＳ能够影响ＨＵＶＥＣ代谢ＭＴＴ；（２）ＤＥＳ的浓度对ＨＵＶＥＣ的ＭＴＴ代谢物—ｆｏｒｍａｚａｎ的生成量有影响：在２５～４００ｍｇ·Ｌ－１，ＥＤＳ促进线粒体代谢ＭＴＴ、形成ｆｏｒｍａｚａｎ，并且在２００ｍｇ·Ｌ－１时可使ｆｏｒｍａｚａｎ的形成量达到最高值；在８００ｍｇ·Ｌ－１以上浓度时，ｆｏｒｍａｚａｎ的形成量减少，并低于正常培养的ＨＵＶＥＣ的ｆｏｒｍａｚａｎ的形成量。（３）在２００ｍｇ·Ｌ－１时，流式细胞术显示，ＥＤＳ能够影响ＨＵＶＥＣ的细胞周期：ＥＤＳ可促进ＨＵＶＥＣ由静止期和（或）ＤＮＡ合成前期进入ＤＮＡ合成期、由ＤＮＡ合成期进入ＤＮＡ合成后期和（或）分裂期。结论：ＥＤＳ能够刺激ＶＥＣ分裂、增殖，并且ＶＥＣ的增殖状况与ＥＤＳ的浓度有关。