三种检测方法在疟疾诊断中的应用

目的 探讨三种检测方法在辽宁省鞍山地区疟疾诊断中的应用价值。方法 分别采用镜检、疟原虫抗原快速检测（RDT）胶体金法、巢式PCR法,对鞍山地区2016-2018年16份疟疾疑似病例血样进行检测。结果 镜检法、胶体金法、PCR法检测阳性率分别为62.50%、75.00%和68.75%,三种检测方法阳性率比较差异无统计学意义（P=0.748）。以镜检法为金标准,PCR法敏感性为100.00%,特异性为83.33%,以胶体金法为金标准,PCR法敏感性为83.33%,特异性为75.00%,胶体金法敏感性最强。结论 在鞍山地区疟疾检测中,RDT胶体金法结合PCR法和镜检法诊断疟原虫,能有效提高诊断率。     

万孚疟疾RDT胶体金法在济宁地区的应用评价

目的 通过采集2014年1月—2016年10月济宁地区的疟原虫阳性诊断数据,对RDT胶体金法在疟疾低传播区的应用进行评估。方法 本研究包括济宁地区272名输入性发热的疑似患者数据。采用广州万孚疟疾快速诊断试剂(胶体金法),进行快速而简单的检测,然后以PCR结果为标准,并与显微镜镜检结果进行比较分析。结果 272份血样采用镜检法、RDT胶体金法和PCR检测疟疾感染,阳性率分别为13.6%、15.1%和14.3%,三种检测方法阳性率差异无统计学意义(χ²=0.89,P>0.05);以PCR为标准,镜检法漏诊率5.1%,误诊率5.1%,灵敏度94.9%,特异性100.0%,阳性预测值100.0%,阴性预测值99.1%。RDT胶体金法漏诊率0,误诊率4.9%,灵敏度97.4%,特异性98.7%,阳性预测值92.7%,阴性预测值99.6%。结论 在疟疾低发病和低传播地区,疟原虫RDT胶体金法在检测输入性疟疾感染较显微镜镜检有更高的灵敏度和阴性预测值,可作为显微镜检查的辅助工具,适于在基层大规模的推广应用。     

非洲赤道几内亚儿童疟疾感染实验室检测及临床诊治分析

目的评价荧光定量PCR法和显微镜镜检法在疟疾临床检测及虫种鉴定中的应用,了解不同型别儿童疟疾病例的临床特征,指导疟疾高发地区门诊对疟疾的早期识别、快速诊断和尽早治疗。方法收集在几内亚首都马拉博医院儿科就诊的150例疑似疟疾患儿的末梢血样,应用荧光定量PCR和镜检法对样品进行同步检测,对两种检测方法进行分析评价,并根据不同型别疟疾病例的临床资料,分析不同型别疟疾病例的临床特征。结果荧光定量PCR法检出阳性率为84.00%,镜检法检出率为74.67%,差异有统计学意义(P0.05);且PCR法在疟原虫密度大于(l~5)×102copy/m L时,可对感染的疟原虫虫种做准确的鉴定,鉴别出恶性疟、三日疟、卵形疟、间日疟的例数分别为93、19、12、2,与镜检法的82、17、11、2例比较,在恶性疟虫种鉴别上差异有统计学意义(P0.05),但在其他虫种鉴别中差异无明显差异(P0.05)。该地区儿童疟疾病例以恶性疟原虫感染为主,临床主要表现为发热、贫血、咳嗽、呕吐、腹泻、抽搐等,死亡10例,其中恶性疟9例。结论在疟疾感染检测和疟原虫型别鉴定中,荧光定量PCR法较传统的镜检法在灵敏度及特异性方面更具优势,对马拉博地区疟疾病例的快速诊断及早期治疗具有重大意义。     

双重PCR用于高疟区疑似疟疾病人诊断效果评价

目的对高疟区＂三热＂疑似疟疾病人双重PCR检测与传统镜检法检测的比较,探讨双重PCR应用于临床诊断疟疾的前景。方法在高疟区门诊采集就诊的＂三热＂疑似疟疾病人末梢滤纸血,用chelex-100提取DNA模板进行双重PCR检测,同时与显微镜镜检厚血膜查找疟原虫进行比较。结果在334例疑似疟疾病例的血样中,双重PCR检测疟原虫敏感性为96.1%、漏检率为3.9%。镜检法检测疟原虫敏感性为86.1%、漏检率为13.9%。结论双重PCR在诊断疟疾上比传统镜检法敏感性高,适合于临床实验室对疟疾诊断。     

4种检测方法在用药后疟疾诊断中的应用分析

目的通过对4种检测方法的应用分析,为用药后疟疾病例准确诊断提供参考依据。方法镜检法、RDT、多重PCR法和荧光定量PCR法对55份临床疟疾病例标本进行对比分析。结果镜检疟原虫阳性39份,阳性率70.91%;RDT检测疟原虫阳性50份,阳性率90.90%;多重PCR检测疟原虫阳性42份,阳性率76.36%;荧光定量PCR检测疟原虫阳性41份,阳性率74.55%。RDT与镜检法检测结果差异有统计学意义(χ~2=10.446,P=0.0010.05);镜检法与RDT法检测结果差异无统计学意义(χ~2=0.681,P=0.4090.05);多重PCR方法、荧光定量PCR方法与镜检法检测结果差异均无统计学意义(χ~2=0.421,P=0.5160.05;χ~2=0.183,P=0.6690.05)。4种检测方法比较,多重PCR方法、荧光定量PCR方法灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值较其他两种方法高。结论 "金标准"镜检法易受客观因素影响,检出率低;RDT简单快捷,适合大范围筛查;两种PCR方法灵敏度特异性很高,荧光PCR相对多重PCR方法省时。建议不同方法相结合,以降低误检率。     

江苏省南通市疟疾诊断参比实验室病例复核结果分析

目的 分析南通市疟疾诊断参比实验室对2014—2021年国家传染病报告系统疟疾病例的实验室镜检复核结果,评价南通市疟疾诊断参比实验室疟疾诊断能力。方法 收集南通市2014—2021年国家传染病报告系统的疟疾病例的血涂片和全血样本,南通市与江苏省血吸虫病防治研究所疟疾诊断参比实验室开展市、省两级实验室复核,以省级疟疾诊断参比实验室镜检和核酸检测（PCR）复核结果一致为标准,比较分析南通市疟疾诊断参比实验室复核结果。结果 2014—2021年,南通市与江苏省两级实验室复核297例病例血涂片和血样。省级镜检和PCR复核结果一致,复核结果定性为292例阳性,5例阴性。南通市镜检复核结果与省级复核结果定性符合率100%(297/297),无错判和漏判;阳性血片虫种符合率96.23%(281/292),恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫符合率分别为99.57%(234/235)、62.50%(5/8)、89.47%(34/38)、72.73%(8/11)。经一致性检验,市、省两级实验室虫种分型Kappa值为0.89;恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫分型Kappa值分别为0...     

贵州省首例输入性卵形疟病例的鉴定

目的对1例输入性疟疾病例进行鉴定。方法采集病例外周血制作滤纸血样和血涂片。血涂片染色后镜检,同时进行疟疾快速诊断试剂盒(RDT)检测,滤纸血样进行PCR,PCR扩增片段测序后在GenBank中进行Blast分析。结果 RDT检测提示非恶性疟的疟原虫阳性,血涂片镜检可见卵形疟原虫。PCR扩增出大小为880 bp的卵形疟特异条带,Blast分析显示与卵形疟原虫wallikeri亚种的cox3部分基因序列同源性为99.4%。结论依据RDT、镜检、PCR和序列分析等实验室检测结果,结合其流行病学资料,该例输入性疟疾病例确诊为贵州省首次由境外输入的卵形疟病例,且感染的疟原虫虫种是卵形疟原虫wallikeri亚种。     

中缅边境居民疟疾感染的疟原虫抗原检测、镜检和PCR筛查

目的 了解云南省沧源县抵边村寨居民和境外周边居民疟疾感染情况，比较疟原虫抗原检测（RDT）、镜检和PCR在低疟区和消除区居民疟疾筛查效果，为预防疟疾消除后再输入提供依据。方法 2020年8月—2021年3月，在中缅边境地区云南省临沧市沧源佤族自治县班老乡、缅甸掸邦第二特区勐冒县班歪区梅不老乡、缅甸掸邦第二特区南邓特区拥摸和大岩乡3个调查点，采集调查对象指尖血，运用RDT、疟原虫显微镜检查法、荧光定量PCR与巢式PCR法检测疟原虫感染情况。结果 共采集1 040人份血样，含中国居民606人、缅甸居民434人。其中男性506人，女性534人，年龄0～<5、5～<15、15～<30、30～<45、45～<60和≥60岁分别有51、283、187、232、205和82人。经疟原虫抗原检测试剂盒法检测1 040人均为阴性，疟原虫显微镜检查法检出间日疟阳性1份，疟原虫检出率为0.10%，荧光定量PCR与巢式PCR检出间日疟阳性1份，疟原虫检出率为0.10%。其中，缅甸掸邦第二特区勐冒县班歪区梅不老乡检出间日疟1例，疟原虫检出率为0.35%，云南省临沧市沧源佤族自治县班...     

聚合酶链反应检测疟疾的研究

目的 建立能鉴别诊断恶性疟原虫间和日疟原虫的PCR检测方法。方法 根据红内期疟原虫SSUr-RNA基因序列,设计合成两对引物,采用PCR技术,检测89份门诊“四热”病人血样,并与镜检法进行比较研究。结果 恶性疟原虫血样能扩增出205bp的特异带,间日疟原虫血样能扩增出120bp的特异带,PCR检测的阳性率为74.16%,镜检法为68.54%,PCR法与镜检法的符合率为94.38%。结论 PCR检测的敏感性和特异性均优于镜检法,对于诊断恶性疟原虫和间日疟原虫以及恶性疟原虫的间日疟原虫的混合感染具有一定的应用价值。     

镜检和疟原虫抗原快速检测(RDT)胶体金法及巢式PCR法在疟疾诊断中的价值

目的 探究镜检、疟原虫抗原快速检测(RDT)胶体金法、巢式PCR法在疟疾诊断中的价值.方法 选取2019年2月至2020年2月本中心收治的疑似疟疾患者50例作为研究对象,所有患者均接受镜检、RDT胶体金法、巢式PCR法,以实验室检测结合临床特征结果为金标准,比较3种方式检测结果.结果 实验室检测结合临床特征结果显示,50例疑似疟疾患者中,阳性36例,阴性14例.经镜检法检出疟疾28例,检出率为46.67％;经RDT胶体金法检出疟疾35例,检出率为58.33％;经巢式PCR法检出疟疾30例,检出率为50.00％;RDT胶体金法准确度及灵敏度均高于镜检法、巢式PCR法,差异有统计学意义(P<0.05);3种诊断方法特异度、阳性预测值、阴性预测值比较差异无统计学意义.结论 在疟疾临床诊断中,RDT胶体金法具有较高的灵敏度及检出率,且与镜检、巢式PCR法联合诊断,可进一步提高检出率,为临床治疗提供依据.     

套式/多重PCR检测疟疾感染的应用研究

目的了解标签引物-套式/多重PCR技术在检测疟疾感染中的现场应用价值。方法随机采取我省疟疾流行区有发热症状的居民及家庭成员的耳垂血79份,同时制作厚血片和滤纸血样本各1份,用标签引物-套式/多重PCR检测所采集滤纸血样本中的疟原虫,并与镜检法进行比较。结果79份样本中,用标签引物-套式/多重PCR技术检出间日疟原虫阳性6例,镜检初检出10例间日疟原虫阳性,经复查血片后有4例排除了疟疾感染。镜检复核阳性的6例样本PCR均为阳性。以镜检复核为标准,两法阳性和阴性符合率为100%。结论标签引物-套式/多重PCR检测疟疾感染具高度敏感性和特异性,对疟疾鉴别诊断和明确诊断具有重要价值。     

疟疾快速诊断试剂盒的研制及应用

目的：建立一种快速、敏感、简便的疟疾诊断方法。方法：应用快速电泳法和快速薄层色谱法检测疟原虫乳酸脱氢酶（LDH－P）诊断疟疾，并将两检测系统制成试剂盒。检测体外培养的恶性疟原虫不同分离株和疟疾病人全血中的LDH－P，为临床安全用药提供依据。结果：应用快速电泳法和快速薄层色谱法检测体外培养的恶性疟原虫感染红细胞的敏感度分别为10－100个原虫／μl血和25－150个原虫／μl血；检测病人血样的阳性率分别为90．00％和80．00％，检测30份间日疟病人血样的阳性率分别为83．33％和76．67％；检测40份疟区非疟疾血样、非疟区40份健康人及30份其他寄生虫病人血样，仅快速电泳法检测出1份疟区非疟疾血样为阳性。结论：应用快速电泳法试剂盒和快速薄层色谱法试剂盒诊断疟疾，敏感、特异、简便快速，在临床及现场具有很好的应用前景。     

Newer versus Conventional Methods in the Diagnosis of Malaria: A Comparison

Background

This study attempts to evaluate and compare the efficacy of polymerase chain reaction (PCR) and quantitative buffy coat (QBC) assay with conventional Giemsa stained peripheral blood smear (PBS) examination in the diagnosis of malaria. Methods: The study was conducted on 50 cases of smear positive malaria (group 1), 50 cases of clinically suspected malaria (group 2) and 15 healthy controls. All were subjected to Giemsa stain slide examination both thick and thin smear, QBC assay and PCR. PBS examination by Giemsa stain was taken as gold standard.

Result

In this study the overall sensitivity and positive predictive value (PPV) of QBC assay in group 1 was 100% and that of PCR was 60% and 100% respectively. In group 2 the sensitivity, specificity, PPV and NPV of QBC assay was 100% and that of PCR was 71%, 100%, 100% and 73% respectively as compared to the gold standard. All the 15 healthy controls were negative by all the three assays showing 100% specificity.

Conclusion

QBC assay was an excellent alternative to the conventional method as it is rapid and less time consuming and can directly demonstrate the parasite. Utility of PCR lies in species-specific diagnosis of falciparum malaria especially when there is a high degree of clinical suspicion and the report is negative by the other two methods.Key Words: Malaria, Diagnosis     

聚合酶链反应用于恶性疟疾诊断初步研究

合成一对恶性疟原虫特异引物，用聚合酶链的反应（PCR）技术检测海南岛恶性疟病人滤纸血滴30例，结果28例阳性，在206bp处可见一条清晰易辨的扩增条带，2例阴性经血片复查，其中1例为间日疟原虫；同时检测间日疟病人血滴和未发现原虫的发热病人血滴各16例，均为阴性，与镜检符合率达98．4％（61／62例）。初步表明PCR法具有准确、敏感、特异、简捷等优点，采用滤纸血滴方便现场采样、保存和送检，且易批量检测，在疟疾临床诊断和流行病学调查方面，将可替代血片镜检法，逐步扩大应用。     

FQ—PCR法与IBT法在人巨细胞病毒检测中的价值比较

目的对荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）方法与免疫印迹法（IBT）检测人巨细胞病毒进行比较分析。方法分别应用FQ—PCR和IBT检测疑似人巨细胞病毒（HCMV）感染小儿和成人各42例尿HCMVDNA和血清HCMV IgM。结果42例小儿尿HCMVDNA阳性检出率为57．14％,血HCMV IgM阳性检出率为35．71％。前者的诊断阳性率高于后者（χ2=3．88,P〈0．05）,有统计学差异;42例成人尿HCMVDNA阳性检出率为14．29％,血HCMVIsM阳性检出率为71．43％。后者的诊断阳性率显著高于前者（χ2=28,P〈0．005）,有统计学差异;84例患者尿HCMVDNA阳性检出率为38．10％,血HCMVIgM阳性检出率为48．81％。2种方法检测HCMV活动性感染的差异无统计学意义（χ2=1．96,P〉0．1）。结论FQ—PCR检测HCMVDNA是早期诊断小儿HCMV感染的有效的方法;免疫印迹法检测血清HCMV IgM水平对于判断成人HCMV活动性感染具有一定意义;做人群HCMV普查时,免疫印迹法有较好的应用价值。     

聚合酶链反应检测外周血和腹水标本中结核菌的价值

目的 探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测外周血白细胞和腹水中结核分支杆菌的结核性腹膜炎诊断中的价值。方法 应用ＰＣＲ和抗菌染色镜检（镜检）对５８例结核性腹膜炎和３０例对照组外周血白细胞及腹水标本进行结核菌检测。结果 ５８例结核性腹膜炎外周血和腹水ＰＣＲ阳性率分别为７９．３％和６０．３％,外周血,腹水标本配对检测总阳性率为８８％,腹水镜检阳性率为１．７％,ＰＣＲ与镜检比较,Ｘ＾２检验,Ｐ〈０．００１     

巴尔通体实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立灵敏、特异的SYBR—Green荧光定量PCR检测巴尔通体的方法,以用于巴尔通体的实验室快速诊断和自然疫源地的流行病学研究。方法利用离心柱法抽提鼠血中巴尔通体细菌基因组DNA,在荧光定量PCR检测仪上检测基因组中枸橼酸合酶gltA的Ct含量,结合熔解曲线的Tm值进行分析,建立实时荧光定量检测法。结果检测62份阳性菌株。Ct值小于30,Tm值在81—83℃范围内;检测309份鼠血抽提的基因组DNA样品,阳性128份,阳性率为38．19％。结论建立了检测巴尔通体枸橼酸合酶gltA的SYBR—Green荧光定量PCR方法,较常规培养法更快捷、简便、敏感,适合大面积调查巴尔通体在鼠群中的分布情况,为流行病学的深入研究提供科学依据,并可作为检测巴尔通体的技术储备。