GFP,TH双基因在NIH-3T3细胞及帕金森病大鼠脑内的表达

目的以绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）作为一个标记,观察ＧＦＰ标记的ＨＴＨ１基因修饰的ＮＩＨ－３Ｔ３细胞在体外及植入脑内后的生长情况,判断ＧＦＰ基因能否作为一种新的筛选标记基因。方法构建同时表达ＧＦＰ和ＨＴＨ１双基因的多基因表达载体ＧＣ－ＧＦＰ－Ｐ－ＨＴＨ１－ＳＮ。并转染ＮＩＨ－３Ｔ３细胞,且移植入Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ病模型大鼠纹状体内。结果用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫组化、ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ等方法均检测到ＧＦＰ、ＨＴＨ１在体外和脑内的表达。结论ＧＦＰ可作为一个筛选标记基因,可对目的基因或植入细胞的其他功能性产物的表达进行观察和检测。     

许旺细胞的IGF—I基因转染及其mRNA和蛋白表达

为探索类胰岛素生长因子－Ⅰ（ＩＧＦ－Ⅰ）基因转染旺细胞的可能性，采用体外培养许旺细胞（ＳＣｓ），构建ＩＧＦ－Ⅰ逆转录病毒载体，利用基因转梁技术将ＩＧＦ－Ⅰ基因转入ＳＣｓ，核酸分子杂交及细胞免疫组化检测ＳＣｓ表达ＩＧＦ－Ⅰ ｍＲＮＡ及其蛋白水平，辅以正常ＳＣｓ作对照。结果：ｐＬＸＳＮ－ＩＧＦ－Ⅰ转染的ＳＣｓ在体外相同培养条件下较正常ＳＣｓ表达ＩＧＦⅠ ｍＲＮＡ及其蛋白水平能力分别增强４．８和３．２倍     

许旺细胞的IGF-Ⅰ基因转染及其mRNA和蛋白表达

为探索类胰岛素生长因子Ⅰ（ＩＧＦⅠ）基因转染许旺细胞的可能性,采用体外培养许旺细胞（ＳＣｓ）,构建ＩＧＦⅠ逆转录病毒载体,利用基因转染技术将ＩＧＦⅠ基因转入ＳＣｓ,核酸分子杂交及细胞免疫组化检测ＳＣｓ 表达ＩＧＦⅠｍ ＲＮＡ及其蛋白水平,辅以正常ＳＣｓ作对照。结果：ｐＬＸＳＮＩＧＦⅠ转染的ＳＣｓ在体外相同培养条件下较正常ＳＣｓ 表达ＩＧＦⅠｍ ＲＮＡ 及其蛋白水平能力分别增强４８ 和３２ 倍,均有显著意义。研究表明,利用基因转染技术可将外源性ＩＧＦⅠ基因转入ＳＣｓ,提高ＳＣｓ中的ＩＧＦⅠ的含量和活性     

基因治疗帕金森病的实验研究

本研究把Ⅰ型人酪氨酸羟化酶(human tyrosine hydroxylase type Ⅰ;HTH_1)cDNA连接到逆转录病毒载体LNSX上,构建成真核表达载体 LNSHTH_1,然后通过in vivo途径转染帕金森病模型鼠的纹状体细胞。外源的HTH_1基因在宿主脑内得到了表达,并使其病理行为改善约70％。这种新的基因治疗帕金森病的方式,有其独特的优越性。     

1998年上海市神经科学学会年会论文摘要

ＭＰＴＰ诱导褐鼠黑质的胰岛素原样α肽同源ＥＳＴ的差异表达徐磊１吕立夏１杨秀丽２刘振国２李学礼１陈生弟２王尧１（１上海铁道大学生化教研室；２上海第二医科大学附属瑞金医院神经内科）帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）是一种以震颤、强直、运动...     

白血病抑制因子在人胶质母细胞瘤内的表达和产生

白血病抑制因子在人胶质母细胞瘤内的表达和产生刘佳李宏Ｊｅａｎ－ＬｕｃＴａｕｐｉｎＪｅａｎ－ＦｒａｎｃｉｏｓＭｏｒｅａｕ一、材料与方法１．实验样本：选取１０例胶质母细胞瘤手术切除标本和九株胶质母细胞系，ＬＮ－１８，－１１８，－２１５，－２２９，－２３５...     

左旋千金藤啶碱治疗帕金森病

目的:验证左旋千金藤啶碱(ＳＰＤ)治疗帕金森病,方法:１９例帕金森病患者口服ＳＰＤ片剂(每片２５ｍｇ),每日３次,每次１片,１周后加量到２片,每日３次。用改良Ｗｅｂｓｔｅｒ评分法评价治疗６周的疗效。结果:１９例患者治疗后评分改善,其中行动时上肢摆动、震颤、面容、言语等症状均有改善。结论:ＳＰＤ未达到卫生部新药评价的有效要求,故单用ＳＰＤ治疗ＰＤ无效。     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体SZ39单链抗体的构建及初步表达

目的：研究人脑胶质瘤基因工程单抗。方法：采用基因重组技术分别将抗人脑胶质瘤单抗ＳＺ３９重链和轻链可变区基因片段连接，构建表达载体，并在大肠杆菌中表达。结果：表达的ＳｃＦｖ抗体为可溶性，ＥＬＩＳＡ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测证实能特异性地与人脑胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４表面抗原结合，其表达量为２２０μｇ／Ｌ。结论：成功地构建了抗人脑胶质瘤单抗ＳＺ３９ＳｃＦｖ表达质粒，并得到了与胶质瘤细胞表面抗原相结合的单链抗体。     

帕金宁控释片治疗帕金森病

帕金宁控释片治疗帕金森病田新良，管兴志，贾兰，刘斌１９９３年３月以来由美国默沙东药厂提供的帕金宁控释片（ＳｉｎｅｍｅｔＣＲ）治疗１０例轻至中度帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）患者。经严格筛选适合病例，全部由美多巴（Ｍａｄｏｐａｒ...     

中脑腹侧区细胞移植对帕金森病鼠纹状体多巴胺受体敏感 …

大鼠纹状体中多巴胺受体介导的ｃ－ｆｏｓ基因的表达与多巴胺Ｄ１受体的超敏现象有关。本实验将鼠胚胎中脑腹侧区细胞植入帕金森病大鼠模型纹状体后第１２周，用免疫组化法检测阿朴吗啡诱发的ｃ－ｆｏｓ蛋白，同时取相邻切片进行酪氨酸羟化酶检测。     

GFP标记的TH基因在帕金森病大鼠脑内的表达

目的:探讨HTH_1基因治疗帕金森病的可能性。方法:以绿色荧光蛋白(GFP)作为标记,观察HTH_1基因在体外和脑内的表达。结果:构建同时表达GFP和HTH_1双基因的多基因表达载体GC-GFP-P-HTH_1-SN,并转染L-6TG细胞,移植入帕金森病模型大鼠纹状体内,用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫组化、Western blotting等方法检测GFP、THT_1在体外和脑内均有表达。结论:本实验为外源基因表达产物的检测提供一个新方法。     

人酪氨酸羟化酶基因真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达

用限制性内切酶EcoRI从pKS(-)HTH_1切下全长为1.9 kb的人酪氨酸羟化酶基因,在T_4DNA连接酶的作用下连接在真核表达载体pCDNA_3的EcoR Ⅰ位点,构建成重组质粒pcD-NA_3HTH_1,该质粒转染COS-7细胞,免疫荧光组织化学染色证实酪氨酸羟化酶在其中的表达。     

TH基因修饰的神经干细胞移植治疗帕金森病的实验研究

目的 探讨TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对帕金森病(PD)的治疗作用。方法 构建pN：ATH逆转录病毒载体质粒，用PA317细胞包装，G418筛选阳性克隆，病毒上清感染神经干细胞，将表达TH的神经干细胞植入：PD大鼠纹状体内，测定：PD大鼠旋转行为改善，DA和DOPAC含量变化，以及TH在纹状体的表达。结果 TH基因修饰的神经干细胞移植8周时能显著降低PD大鼠旋转行为，增加纹状体DA和DOPAC含量，TH在纹状体内的表达增加，疗效好于单纯神经干细胞移植组。结论 TH基因修饰的神经干细胞移植对PD大鼠有明显的治疗作用，可望为PD治疗提供新的途径。     

基因修饰骨髓源性神经元样干细胞治疗帕金森大鼠的研究

目的 观察大鼠酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH)修饰的骨髓基质源性神经元样干细胞(neuronoid stem cells derived from bone marrow stem cells,NdSCs-D-BMSCs)在脑室移植途径下对帕金森病(Parkinson disease,PD)大鼠的治疗作用.方法 将酶切鉴定后的新构建质粒pEGFP-C2-TH经电穿孔法转染培养第8天NdSCs-D-BMSCs,注射到PD大鼠模型右侧脑室,观察大鼠行为学变化,移植细胞在大鼠脑组织内的迁移,以及高效液相方法检测脑内DA含量.结果 质粒pEGFP-C2-TH转染NdSCs-D-BMSCs移植后10周,PD大鼠症状显著改善,DA恢复至正常水平33.0%,移植细胞可以在PD大鼠脑内存活,并出现远处迁移.结论 TH修饰的大鼠NdSCs-D-BMSCs经脑室移植对PD大鼠具有明显的治疗作用,为临床中腰椎穿刺干细胞移植的应用提供实验依据.     

MPTP对褐鼠黑质纤连蛋白基因表达的影响

目的研究腹腔注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)对褐鼠黑质纤连蛋白基因表达的影响，初步探讨其参与注射MPTP后的免疫机制。方法通过腹腔注射MPTP建立帕金森病(PD)褐鼠模型，采用逆转录(RT)．聚合酶链反应(PCR)方法研究纤连蛋白在黑质的表达情况。结果经MPTP腹腔注射后褐鼠模型出现典型PD症状，黑质酪氨酸羟化酶表达水平明显降低，黑质纤连蛋白基因表达明显上调。结论纤连蛋白在PD鼠黑质高表达可能促使T淋巴细胞透过血．脑屏障(BBB)进入脑组织，参与PD鼠的免疫反应。     

Effects of pcDNA3-β-NGF Gene-modified BMSC on the Rat Model of Parkinson’s Disease

This study determined the effects of pcDNA3-beta-nerve growth factor (NGF) gene-modified bone marrow stromal cells (BMSC) on the rat model of Parkinson's disease (PD). The recombinant plasmid pcDNA3-beta-NGF was transfected into BMSC, and NGF expression and its biological activity in vitro were detected. BMSC modified by the NGF gene were then grafted into the corpus striatum of PD rats, and the rotation behavior was evaluated at 1, 2, 4, and 6 weeks post-transplantation. A significant improvement in rotation behavior was observed in PD rats subjected to cell transplantation, especially in PD rats receiving NGF-modified BMSC. The genetically modified BMSC survived and expressed beta-NGF but did not differentiate into tyrosine hydroxylase-positive cells in vivo. The present findings suggested that genetically modified BMSC could be effective for PD treatment, and the mechanisms might involve the neuroprotective effects of beta-NGF.     

TH基因修饰细胞脑内移植治疗猴帕金森病的实验研究

目的 评价包囊化酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroylase,TH）基因修饰的基因工程细胞脑内移植治疗帕金森病的疗效。方法 将pcDNA3/hTH质粒转染人神经母细胞瘤细胞系SYTY细胞，筛选出阳性克隆，微包囊化处理后的含有TH基因修饰细胞植入PD猴模型脑内，观察其行为、CSF中DA含量的变化，用免疫组化法检查移植细胞的存活情况。结果 （1）pcDNA3/hTH基因经亚克隆，提取纯化的质粒，经ECORI酶切后产生1.9Kb和5.5Kb的片段。转基因后的SY5Y细胞免疫细胞化学染色显示TH染色强阳性；（2）移植后PD猴症状明显改善，脑脊液中DA含量升高；（3）SABC免疫组化发现移植区存在大量TH阳／性细胞。结论 构建的TH基因工程细胞体外和体内均表达人类TH基因；微包囊化处理后的基因工程细胞在PD猴脑内存活并发挥治疗作用。