黄芪注射液调节一氧化氮合酶抗再灌注损伤作用

目的:研究黄芪注射液抗培养乳鼠心肌细胞再灌注损伤的作用与一氧化氮合酶(NOS)表达的关系。方法:采用培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧模型,实验分为5组:A组为正常对照组,B组、C组、D组、E组均为缺氧-复氧组。各组培养液组成:B组缺氧液,C组缺氧液加黄芪,D组缺氧液加NOS抑制剂L-NAME,E组缺氧液加黄芪加L-NAME。缺氧4 h,复氧2 h。比较缺氧-复氧后培养液中心肌酶含量,并进行心肌细胞NOS蛋白表达检测。结果:复氧2 h后,B组、C组、D组、E组与A组比较心肌酶谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)均有升高(P<0.05)。C组与B组比较GOT升高减轻(P<0.05),但无统计学意义。黄芪增强缺氧-复氧引起的心肌细胞NOS表达增加,L-NAME对黄芪引起的NOS表达增加有一定抑制作用。结论:黄芪能够减轻缺血再灌注损伤,其机制涉及了NOS信号转导途径。     

黄芪激活ERK1/2信号转导通路抗心肌细胞再灌注损伤作用

目的研究黄芪注射液调节ERK1/2信号转导通路抗培养乳鼠心肌细胞再灌注损伤的作用。方法采用培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧模型,实验分为五组：A组为正常对照组,B、C、D、E组均为缺氧/复氧组,其中各组培养液组成为：B组缺氧液,C组缺氧液加黄芪,D组缺氧液加PD98059,E组缺氧液加黄芪和PD98059。缺氧4h,复氧2 h。比较缺氧/复氧前后培养液中心肌酶含量,并进行心肌细胞外信号调节激酶（ERK）蛋白表达检测。结果缺氧/复氧后对各组细胞培养液中心肌酶含量进行比较,结果显示各缺氧组与正常对照组比较,心肌谷草转氨酶（GOT）,乳酸脱氢酶（LDH）,肌酸激酶（CK）均有升高（P〈0.05）。黄芪缺氧组与缺氧对照组比较,GOT升高减轻（P〈0.05）。ERK抑制剂PD98059对黄芪的保护作用有一定削弱,但没有统计学意义。黄芪可使缺氧/复氧引起的心肌细胞ERK表达增加,PD98059对黄芪引起的ERK表达增加没有明显抑制作用。结论黄芪能够减轻缺血再灌注损伤,其机制涉及了ERK1/2信号途径。     

EPO预处理在心肌细胞缺氧复氧损伤中的抗凋亡作用研究

目的 观察促红细胞生成素(EPO)预处理在培养心肌细胞缺氧复氧损伤中的抗凋亡效应,进一步研究其可能机制.方法 建立大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型,将细胞分为对照组、EPO组[缺氧复氧前24h培养液中加入终浓度10u/mL重组人EPO(rhEPO)]、EPO+吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)组(缺氧复氧前24h加入终浓度10u/mL rhEPO和5μg/mL PDTC)及PDTC组(缺氧复氧前24h加入终浓度5μg/mLPDTC).于缺氧复氧损伤前后观察各组心肌细胞存活率(MTT法),用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,EMSA检测缺氧复氧损伤前后各组心肌细胞NF-κB活性变化,RT-PCR检测损伤前后各组心肌细胞bcl-2 mRNA表达变化.结果 缺氧复氧损伤后各组细胞存活率较损伤前对照组显著降低(P<0.01),EPO组高于其余各组(P<0.01);损伤后各组心肌细胞凋亡率较损伤前显著升高(P<0.01),EPO组凋亡率低于其余各组(P<0.01);损伤前EPO组心肌细胞NF-κB活性显著高于其余各组(P<0.01),损伤后各组NF-κB活性较损伤前显著升高(P<0.01),EPO组低于其余各组(P<0.05);损伤前EPO组bcl-2mRNA表达水平显著高于其余各组(P<0.01),损伤后各组心肌细胞bcl-2mRNA表达水平均较损伤前显著升高(P<0.01),EPO组仍高于其余各组(P<0.01).结论 EPO预处理在培养心肌细胞缺氧复氧损伤中具有显著抗凋亡效应;EPO预处理心肌细胞抗凋亡保护作用与预处理过程中NF-κB活化有关;EPO预处理过程中NF-κB活化,通过上调抗凋亡基因bcl-2表达,产生抗凋亡效应.     

表没食子儿茶素没食子酸酯预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤保护及相关机制的研究

目的 建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤模型,探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及相关机制.方法 分离培养SD乳鼠心肌细胞,心肌细胞在培养48 h后随机分为3组(每次取18只乳鼠,每组实验重复6次):正常对照组、A/R组、EGCG预处理组(EGCG+A/R组).采用MTT比色法测定各组心肌细胞存活率,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,黄嘌呤氧化酶法测定各组心肌细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的含量,硫代巴比妥酸法测定各组心肌细胞内丙二醛(MDA)的含量,流式细胞分析仪检测各组心肌细胞内活性氧(ROS)的含量.结果 与对照组比较,A/R 组心肌细胞存活率、细胞内SOD含量均明显降低(均P<0.01),而心肌细胞内MDA、ROS以及细胞释放的LDH均明显增加(均P<0.01).与A/R组比较,EGCG+A/R组心肌细胞存活率、细胞内SOD含量均明显增加(均P<0.01),同时心肌细胞内MDA、ROS及细胞释放的LDH均明显降低(均P<0.01).结论 EGCG预处理可减轻心肌细胞A/R损伤,其机制可能为EGCG增加了细胞的内源性抗氧化剂活性,降低心肌细胞A/R后氧自由基的生成.     

还原型谷胱甘肽对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤LDH、MDA的影响

目的研究乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤后乳酸脱氧酶(LDH)及丙二醛(MDA)的变化及还原型谷胱甘肽(GSH)对其影响。方法乳鼠心肌细胞随机分为5组:A组为正常对照组;B组为A/R组(缺氧2h,复氧1h);C、D、E组为GSH处理组,即首先加入GSH,分别使其终浓度为40、80、160mg.L-1,然后进行A/R,于复氧后测定各组培养液中LDH水平及细胞内MDA含量和细胞活性。结果与正常对照组相比,A/R组LDH、MDA水平均显著升高(P<0.01),细胞活性显著降低(P<0.01)。与单纯A/R组比,D、E组上述变化均明显减轻(P<0.01)。结论GSH对乳鼠心肌细胞A/R损伤具有保护作用,并具有浓度依赖性。     

地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用的研究

目的研究地黄多糖(RPS)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法取出生3天的SD大鼠乳鼠分离心肌细胞,培养72h后分为6组:空白对照组、缺氧/复氧模型对照组、地黄多糖(10、20、40μg/ml)干预组和舒血宁注射液(SXN,100μg/ml)干预组,每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6h后,通过倒置光学显微镜观察各组细胞形态变化,通过甲基四唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率,通过流式细胞术测定细胞凋亡率;测定各组细胞培养液中心肌酶[谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)]含量;测定各组细胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)]活性和丙二醛(MDA)含量。结果与缺氧/复氧模型对照组相比,地黄多糖干预组心肌细胞形态明显好转,细胞存活率明显升高、凋亡率显著降低,培养液中AST、CPK、LDH含量显著降低,细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,其中以地黄多糖40μg/ml干预组效果最为显著,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论地黄多糖能够有效改善缺氧/复氧损伤心肌细胞形态、提高细胞存活率、降低细胞凋亡率、改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤,提示地黄多糖对缺氧/复氧损伤心肌细胞具有保护作用。     

葛花总黄酮对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 观察葛花总黄酮预处理对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法 取0～2 d SD乳鼠原代心肌细胞培养,不同剂量葛花总黄酮预处理24 h后,采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4 )诱导心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,运用MTT法测定细胞存活率,同时测定细胞培养液中肌酸激酶(CK)含量和乳酸脱氢酶(LDH)释放量.结果 心肌细胞经过缺氧/复氧损伤后心肌细胞的存活率明显降低,上清液中心肌酸激酶的释放显著增加.葛花总黄酮预处理能浓度依赖性地升高细胞的存活率,同时降低培养液中CK和LDH释放量.结论 葛花总黄酮预处理对缺氧/复氧损伤心肌细胞都具有明显的保护作用.     

大豆苷元对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的观察大豆苷元对乳鼠心肌细胞损伤的影响并探讨其机理。方法体外培养乳鼠心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型,测定细胞存活率、上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量。结果大豆苷元10~160μmol/L均能提高缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率和用MTT法测得的A570 nm值(P<0.01);抑制缺氧/复氧损伤引起心肌细胞的LDH和CK释放;减少MDA的生成,提高SOD的活性,抑制NOS活性,降低NO水平(P<0.05,P<0.01)。结论大豆苷元对乳鼠缺氧/复氧损伤的心肌细胞具有保护作用。     

乳鼠心肌细胞体外氧糖剥夺/复氧损伤模型的构建

目的为体外研究心肌缺血再灌注损伤,构建体外培养乳鼠心肌细胞氧糖剥夺/复氧损伤(H/R)细胞模型。方法原代培养新生SD大鼠心肌细胞,细胞培养至第5 d,更换无糖培养基,同时将细胞置入三气培养箱(0.5%O2,5%CO2,94.5%N2)中氧糖剥夺培养,模拟体内心肌缺血损伤。实验分组依据氧糖剥夺时间分1、2、3 h组和正常对照组(C组)。观察C组和氧糖剥夺各组复氧复糖6 h心肌细胞形态和超微结构,台盼蓝染色法测定心肌细胞存活率,应用全自动生化分析仪测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果随氧糖剥夺时间延长,心肌细胞形态损伤渐加重,从仅表面颗粒增多至细胞皱缩,间隙增大,细胞超微结构表现线粒体肿胀加重;氧糖剥夺3h组部分心肌细胞胞膜破裂,脱离贴壁生长,线粒体高度肿胀,部分膜破裂,肌丝溶解。同时随氧糖剥夺时间延长细胞存活率下降,细胞培养液LDH活性升高(P<0.05)。结论成功建立体外培养乳鼠H/R模型,氧糖剥夺2 h为较适宜的模拟体内心肌缺血损伤时间。     

五味子乙素对乳鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用及其机制

目的：探讨五味子乙素(Sch B)预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的影响,并探讨其可能机制。方法：分离培养原代乳鼠心肌细胞,将其分为对照组、模型组和10、50、250 mg/LSch B预处理组,除对照组外各组细胞采用2 mmol/L  Na2S2O4培养2 h后换用正常培养液培养18 h,造成心肌细胞H/R损伤。倒置显微镜观察各组心肌细胞形态学变化,MTT法检测各组细胞存活率,检测各组细胞中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）和超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）水平。 结果：与对照组比较,模型组细胞明显回缩、停搏或浮起,细胞存活率明显降低（P<0.01）,LDH和CK活性及MDA水平升高（P<0.01）,SOD 活性降低（P<0.01）;与模型组比较,SchB预处理各组细胞博动尚存,回缩较轻,细胞存活率明显升高（P<0.01）,LDH 和CK活性及MDA水平降低（P<0.01）,SOD 活性升高（P<0.05或P<0.01）。 结论：Sch B对乳鼠H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与其抗脂质过氧化作用有关。     

黄芪注射液抗心肌细胞再灌注损伤的作用及机制

该研究采用离体兔心缺血再灌注模型和培养心肌细胞缺氧复氧模型,从器官和细胞两个水平,运用免疫组织细胞化学、流式细胞仪、免疫印记、RT-PCR,生化学检测等多种方法,较系统地研究了黄芪注射液抗再灌注损伤的作用和机制。特别是该论文从细胞信号转导角度研究了黄芪药物作用的分子药理机制．发现该药物具有调节抗再灌注损伤的MAPK细胞信号通路的作用．而这种作用很可能是其心肌保护效应的机制之一。并且特异性抑制剂并不能减弱黄芪作用,说明黄芪可能是通过多种途径发挥作用。     

黄连素对缺血再灌注心肌细胞损伤的保护作用

目的　研究黄连素对新生大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法　取体外培养的新生大鼠心肌细胞于缺氧 2 4h复氧 1h造成缺血再灌注 ( I/ R)模型 ,观察细胞损伤情况 ;并将黄连素以 1.5× 10 - 6 m ol/ L、1.5× 10 - 5m ol/ L、1.5× 10 - 4 mol/ L 三种浓度分别加入培养基中 ,预处理 2 4h后 ,再置于上述缺氧复氧环境中培养 ,检测以上不同条件下细胞上清液中的乳酸脱氢酶 ( L DH)、丙二醛 ( MDA)、超氧化物歧化酶 ( SOD)含量 ,并检测各组细胞的凋亡率。结果　与正常对照组相比 ,缺血及再灌组细胞上清液中 L DH、MDA含量明显升高 ( P<0 .0 1) ,SOD活力则显著降低 ( P<0 .0 1) ,缺血组和再灌组凋亡率均升高明显 ( P<0 .0 1)。而用黄连素预处理后缺血及再灌组的 L DH、MDA显著低于用药前 ( P<0 .0 1) ,SOD则高于单纯缺血和再灌组 ( P<0 .0 1) ,上述作用在本实验黄连素浓度为 1.5× 10 - 6 m ol/ L～ 1.5× 10 - 4 mol/ L 范围内 ,随浓度升高而更加明显。特别是用黄连素 1.5× 10 - 5mol/ L 浓度预处理后 ,缺血组和再灌组的细胞凋亡率分别是 14.4%和 2 0 % ,分别与用药前 ( 17.4%和 41% )比较有显著性差异 ( P<0 .0 1)。结论　黄连素对缺血再灌心肌细胞有保护作用 ,其作用与浓度有一定依赖关系     

白细胞介素-2参与缺氧/复氧引起的心肌功能损害

目的 :观察在缺氧 /复氧过程中白细胞介素 - 2 (IL- 2 )对心肌的影响及其可能机制。方法 :采用放射免疫法检测心肌组织中 IL- 2的含量 ;用视频跟踪系统和细胞内双波长钙荧光系统检测心肌细胞收缩和细胞内钙的变化。结果 :在缺血再灌注心肌组织中 IL- 2明显增多 [(14 .34± 5 .99vs2 2 .2 5± 3.6 8) ng/ g心肌组织 ]。在缺氧期间加 IL-2 (2 0 0 U/ ml) ,复氧期间心肌收缩和细胞内钙各参数回复的程度与单纯复氧的细胞相比均降低。IL- 2灌流后心肌线粒体丙二醛的含量在缺氧 /复氧后明显高于对照组 [(7.75± 0 .4 1vs6 .81± 0 .5 3) nmol/ mg蛋白 ]。结论 :IL- 2参与缺氧 /复氧引起的心肌功能损害 ,其机制可能与 IL- 2加重心肌线粒体脂质过氧化有关。     

内毒素血症大鼠Clara细胞数量和形态学变化

目的目的探讨内毒素（LPS）血症对Clara细胞的影响。方法通过免疫组织化学染色、透射电镜分析，观察内毒素血症大鼠Clara细胞数量和形态学方面的变化。结果静脉注射LPS后0．5h肺开始出现急性肺损伤（ALI）病理改变，表现为肺小动脉充血，肺泡隔水肿，肺泡隔出现以中性粒细胞（PMN）为主的炎性细胞浸润，随着时间的推移，肺损伤程度逐渐加重，于6h达最重，6h后逐渐恢复。内毒素致伤后1h大鼠Clara细胞数量开始明显减少，6h达最少，24h后逐渐恢复。LPS致伤后24h，Clara细胞的超微结构明显受损。结论内毒素血症可引起Clara细胞受损，Clara细胞可能是LPS在肺内的作用靶点，Clara细胞受损可能是LPS诱导急性肺损伤的早期事件。     

黄芪注射液对正常乳鼠心肌细胞胞外信号调节激酶信号转导通路的影响

目的 研究黄芪注射液对正常心肌细胞胞外信号调节激酶(ERK)信号转导的影响.方法 心肌细胞取材Sprague Dawley大鼠.采用培养的原代正常心肌细胞进行研究.量效关系研究分为5组.细胞培养液DMEM中加入黄芪注射液,其终浓度分别为0、20、100、200、400 ml/L培养液.37℃培养2 h后取细胞进行ERK和一氧化氮合酶(NOS)蛋白表达检测.时效关系研究分为两组.A组为黄芪组,细胞培养液DMEM中加入黄芪注射液.B组为抑制剂组,细胞培养液DMEM中加入黄芪注射液和ERK抑制剂PD98059.37℃孵育,分别于0、5、15、30、60、120 min时取细胞进行Western印迹检测ERK和NOS蛋白表达.结果 量效关系研究显示黄芪注射液终浓度分别为0、20、100、200、400 ml/L培养液时心肌细胞ERK表达没有明显的变化.但NOS表达随黄芪浓度增加有减弱的趋势.时效研究显示心肌细胞加入黄芪注射液培养后,ERK和NOS的表达随时间呈增加趋势.ERK抑制剂PD98059可减弱ERK和NOS的表达.结论 黄芪注射液对心肌细胞ERK和NOS信号表达有调节作用,随时间增加呈增强趋势,但随浓度升高呈减弱趋势.     

缺血预处置对大鼠分离的心肌细胞缺氧/再给氧时磷酸肌酸的影响

本实验选用雄性Wistar大鼠体重250～300g,采用改进的Farmer法分离心肌细胞,然后将游离的心肌细胞分为6组:正常对照组(N)、缺氧20分钟组(120’)、缺氧20分钟再给氧10分钟组(120’R1O’)、缺氧40分钟组(140’)、缺氧40分钟再给氧10分钟组(140’R10’)、预处置组(PC),进行实验.用高效液相色谱法测定心肌细胞内磷酸肌酸(PCr)和肌酸(Cr)的含量,同时观察预处置的影响.实验结果显示:随着缺氧时间的延长,心肌细胞内PCr的含量逐渐下降;早期缺氧/再给氧时(120’R10’),PCr含量回升,晚期(140’R10’)则明显下降;预处置组较未经预处置组(140’R10)的PCr含量明显提高.上述结果说明,缺氧20分钟再给氧10分钟,损伤为可逆性的,缺氧40分钟再给氧10分钟,损伤为不可逆性的,即发生了较严重的再灌注损伤.预处置对缺氧心肌具有一定的保护作用.     

黄芪注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠脑内血管新生及HIF-1α/VEGF信号转导通路的影响

目的:探究黄芪注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠脑内血管新生及缺氧诱导生长因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)/血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号转导通路的影响.方法:72只大鼠随机分为对照组、模型组和黄芪注射液组,每组24只,线栓法复制脑缺血再灌注损伤大鼠模型,评价术前、术后、给药7 d后的神经功能评分,免疫组化法检测脑缺血再灌注损伤皮质微血管密度,RT-PCR 法检测脑缺血再灌注损伤皮质 HIF-1α mRNA 和 VEGF mRNA,Western Blotting法检测脑缺血再灌注损伤皮质HIF-1α和VEGF的蛋白表达.结果:给药7d后黄芪注射液组神经功能评分明显低于模型组(P<0.01),微血管密度、HIF-1α mRNA和VEGF mRNA表达水平、HIF-1α和VEGF蛋白表达水平均高于模型组(P<0.01).结论:黄芪注射液促进脑缺血再灌注损伤大鼠脑内血管新生,其作用机制可能为激活HIF-1α/VEGF信号转导通路.     

κ-阿片受体介导缺血后处理的心肌保护作用及其受体后机制

目的:探讨κ-阿片受体是否参与缺血后处理的对抗心肌缺血/复灌(I/R)损伤和心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的作用及其机制。方法:采用离体大鼠心脏Langendorff灌流模型,全心停灌30 m in、复灌120 m in复制I/R模型,测定心室力学指标和复灌各时点冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。实验结束测定心肌组织form azan含量。酶解分离的心肌细胞采用缺氧60 m in、复氧60m in复制H/R模型,测定心肌细胞存活率。结果:在离体心脏模型上,与I/R组相比,缺血后处理组心肌组织的form azan含量明显增高,复灌期间冠脉流出液中LDH含量明显降低,同时缺血后处理明显改善心室力学指标,缓解冠脉流量的减少;在分离心肌细胞模型上,缺氧后处理明显提高心肌细胞存活率。κ-阿片受体阻断剂nor-b inaltorph im ine(nor-BN I)和线粒体ATP敏感性钾通道(m itoKATP)阻断剂5-hydroxydecanoate(5-HD)在离体大鼠心脏模型和分离心肌细胞模型上均能明显减弱缺血后处理的作用。同时在心肌细胞模型上,与H/R组相比,κ-阿片受体激动剂U 50488H明显提高心肌细胞存活率,其作用可被m itoKATP阻断剂5-HD所阻断。结论:缺血后处理具有抗心肌缺血/复灌损伤的作用,这种保护作用可能与其激活κ-阿片受体和m itoKATP有关。